全 文 ：再生有直接关系的重要激酶，它可逆地催化肌酸与 ATP之间的
转磷酰基反应。干姜组总胆红素减少有显著性差异，而肉桂组
和附子组在这个指标上亦呈减少趋势;血清中的胆红素大部分
来源于衰老红细胞被破坏后产生出来的血红蛋白衍化而成，在
肝内经过葡萄糖醛酸化的叫做直接胆红素，未在肝内经过葡萄
糖醛酸化的叫做间接胆红素，二者之和就是总胆红素。本实验
表明肉桂、附子、干姜导致大鼠的热性证候时对肝脏、心脏、肌
肉、脑等靶器官组织的作用影响较大，可通过胆汁分泌、组织细
胞内激酶等因素来调控。
温里药导致热性证候的作用机制的研究可更进一步从舌、
鼻、唇、胃等组织病理方面来了解其微观变化，给药后 9d解剖时
用肉眼观察计数胃出血溃疡点，病理制片后用组织病理图像数
据自动定量分析管理系统在设定视野定量测定舌乳头密度、舌
角质层均数、舌上皮层均数、舌粘膜厚度均数、鼻上皮质层均数、
唇上皮层均数、胃上皮层均数、胃粘膜层均数，各给药组与正常
对照组比较，结果同等大剂量下三种温里药均导致显著的胃出
血溃疡点，其严重增加程度表现依次为干姜、肉桂、附子;三种温
里药的大鼠舌、鼻、唇、胃组织病理的测定在舌乳头密度、舌角质
层均数、舌上皮层均数、舌粘膜厚度均数的指标变化上无明显
差异;鼻上皮质层均数、唇上皮层均数、胃上皮层均数、胃粘膜层
均数有增加趋势，其中肉桂组胃粘膜层均数增加显著。本实验
病理测定表明肉桂、附子、干姜导致大鼠的热性证候时对舌、鼻、
唇、胃等脏器经络开窍部位的粘膜组织的作用影响较大，而干
姜、肉桂为日常生活中常用的调味食品，通过该指标的警示，我
们要提出的是正常或实热体质的人群要少量和慎用，以免引起
气血妄行的血热病证，小则粘膜上火感冒，大则损伤胃肠及内
脏。
参考文献
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南赤瓟对宫颈癌 HeLa细胞的作用*
金家红1，颜为红1，石孟琼1＊＊，刘 雄2，周继刚2，罗 涛2，周 创2
(1 三峡大学医学院，2三峡大学中医临床医学院，宜昌 443001)
摘 要 目的:观察南赤瓟醇提物对宫颈癌 HeLa 细胞增殖与凋亡作用的影响，并探讨其可能的作用机制。方法:以 0． 05 ～ 1．
00 mg /ml南赤瓟醇提物分别处理人宫颈癌 HeLa细胞 24、48、72 h后，以四甲基偶氮唑蓝比色法测定南赤瓟醇提物对 HeLa细胞的生
长抑制作用，并在倒置相差显微镜下进行一般形态学观察;用 0． 20 和 0． 50mg /ml 的南赤瓟提物处理 HeLa 细胞 48h 后，Annexin V-
FITC /PI染色测定细胞凋亡率，Hoechst33258 染色观察细胞形态变化，荧光定量 PCＲ 法检测凋亡相关基因 Bcl-2、Bax、Caspase-9、
Caspase-3mＲNA的表达。结果:不同浓度( 0． 05 ～ 1． 00 mg /ml) 的南赤瓟醇提物具有抑制宫颈癌 HeLa 细胞增殖、促进细胞凋亡的作
用，呈明显的时间-剂量依赖性; 南赤瓟醇提物( 0． 20 和 0． 5mg /ml) 处理能显著抑制 HeLa 细胞增殖，促进其凋亡( P ＜ 0． 01) ;上调
Bax，Caspase-9 和 Caspase-3 mＲNA表达，下调 Bcl-2 mＲNA表达和 Bcl-2 与 Bax的比值( P ＜ 0． 05 或 P ＜ 0． 01) 。结论:南赤瓟醇提物
可抑制宫颈癌 HeLa细胞增殖，促进细胞凋亡，其机制可能与上调 Bax、Caspase-9、Caspase-3 和下调 Bcl-2 凋亡相关基因表达有关。
关键词 南赤瓟;宫颈癌;HeLa细胞;凋亡
当前从民族民间药物中寻找疗效确切、且副作用小的抗肿
瘤药已成为国内外肿瘤研究学者研究重点。越来越多的研究
表明除了许多中药具有很好的抗肿瘤外，很多民族民间药物如
开口箭、吉祥草、七叶一枝花等具有良好的诱导肿瘤细胞凋亡
作用［1 ～ 3］。随着鬼臼毒素、长春新碱、紫杉醇、三尖杉酯碱等系
列天然抗肿瘤新药及制剂成功开发及作为临床一线抗肿瘤药
物的推广应用，更激发了广大学者的研究热情。南赤瓟(Thldi-
antha nudiflora Hemsl)为葫芦科赤瓟属草本植物，具有清热解
毒，理气活血，泻热祛淤，消肿散结，止痢通乳之功效［4］。在鄂
西和神农架林区广大的民族地区，民间用其治疗痈肿、肠炎、痢
疾、毒蛇咬伤，通乳及妇科疾病的治疗等。化学成分研究表明，
南赤瓟含有 β-胡萝卜素、脂肪酸、氨基酸、番茄烃(Lycopene)豆
甾烯-7-(Stigmast-7-en-3B-ol)和 α-菠菜甾醇(α-Spi-nasterol)、胆
碱、叶含山奈甙等多种成分［5］。南赤瓟的药理活性研究表明，
南赤瓟具有较广泛的生物活性，比如抗菌、抗炎、溶血、黄疸、经
闭，乳汁滞少等。在前期研究时，我们发现其水提物对宫颈癌
HeLa细胞的增殖具有显著地抑制作用 ［6］。本实验旨在此基础
上，观察南赤瓟醇提物对宫颈癌 HeLa 细胞增殖与凋亡作用的
影响，并探讨其可能的作用机制。
721中药药理与临床 2013;29(3)
* 湖北省卫生厅中医药中西医结合科研项目南赤瓟活性成分分离纯化工艺及诱导人宫颈癌 HeLa细胞凋亡的实验研究，项目编号: 2010Z －
Y09 ＊＊通讯作者
DOI:10.13412/j.cnki.zyyl.2013.03.048
1 材料与方法
1． 1 试验药物 南赤瓟药材购自神农架聚能药业有限公司，
产自神龙架林区，批号:20111001。经天然产物研究与利用湖北
省重点实验室(三峡大学)汪鋆植教授鉴定为葫芦科赤瓟属草
本植物南赤瓟(Thldiantha nudiflora Hemsl)的干燥草质茎。取南
赤瓟药材烘干称重 500g，粉碎成粗粉，加 10 倍量 70%的乙醇溶
液，浸泡 2 小时后，加热回流提取 3 次，每次 3 小时，合并滤液，
3500rpm离心 20min，回收乙醇，得南赤瓟醇提物干浸膏 41． 19g，
用二甲基亚枫(DMSO)溶解浸膏样品，配制成浓度为 10mg /ml
醇提物药液，再以细胞培养液稀释成所需浓度，经过 0． 22μm孔
径滤膜过滤除菌后，4℃保存备用。
1． 2 细胞 宫颈癌 HeLa细胞株由中科院上海细胞生物研究
所细胞库提供。
1． 3 试剂 ＲPMI1640 细胞培养基、小牛血清、胰酶、DMSO
(Gibco公司) ;碘化丙啶(PI)、四甲基偶氮唑盐(MTT) (Sigma公
司) ;Hoechst33258(凯基生物) ;Annexin V /FITC(晶美生物) ;
Bcl-2、Bax、Caspase-9、Caspase-3 和 GAPDH(上海生工合成，具体
引物序列见表 1) ;Trizol 和 DEPC(上海生工) ;Prime ScriptTM
ＲT reagent Kit、Taq DNA 聚合酶 (大连宝生物) ;其他试剂均为
市售分析纯。
表 1 荧光定量 PCＲ引物序列:
基因名称
上游引物
序列
下游引物
序列
基因片段长度
(bp)
Bcl-2 5-TGTGGCCTTCTTTGAGTTCG-3 5-TCACTTGTGGCTCAGATAGG-3 280
Bax 5-GCGTCCACCAAGAAGCTGAG-3 5-ACCACCCTGGTCTTGGATCC-3 311
Caspase-3 5-TTTGTTTGTGTGCTTCTGAGCC-3 5-GATGTTCTGGAGAGCCCCG-3 400
Caspase-9 5-CCCACACAGATGCTGTTTACCAT-3 5-GCACAACAAAGCACTTCATCCTC-3 154
GAPDH 5-GGGAGCCAAAAGGGTCATCTC-3 5-CCATGCCAGTGAGCTTCCGTTC-3 353
1． 4 仪器 GENios酶标仪(瑞士 Tecan公司) ，EPICS XL-4 流
式细胞仪、荧光检测仪(美国 Backman Coulter 公司) ;CKX41 倒
置相差显微镜(日本，奥林巴斯) ;NU-4750E 型 CO2 培养箱(Nu
Aire公司) ;CDF-3220 多元定量 PCＲ 仪(美国 MJ Ｒesearch 公
司)。
1． 5 方法 HeLa 细胞培养于含 10%新生小牛血清、105U /L
青霉素、100mg /L 链霉素的 ＲPMI-1640 培养基中，置于 37℃、
CO2 体积分数为 5%的饱和湿度条件下培养，待 HeLa细胞贴壁
生长，取对数生长期细胞用于实验。
1． 5． 1 一般形态学观察 光学显微镜观察经作用后的细胞的
形态学变化。
1． 5． 2 MTT 法检测细胞生长抑制率 取对数期生长的 Hela
细胞配制成细胞密度为 1 × 105 个 /ml的细胞悬浮液，接种于 96
孔板中，每孔 100μl，5% CO2、37℃孵育，待细胞贴壁后，更换培
养液，实验组分为不同浓度的南赤瓟醇提物组，由低至高依次
加入不同质量浓度的南赤瓟醇提物(0． 05、0． 10、0． 20、0． 50、1．
00 mg /ml)100μl，每组设 4 个复孔。将培养板移入 CO2孵箱中
继续培养，分别于 24、48 和 72 h 后取出培养板，每次加入新配
制的 5 mg /ml MTT液 20μl，37℃避光孵育 4 h，终止培养。吸去
上清液，每孔加入 DMSO 150 μl，置摇床上低速振荡 10min 后，
用酶标仪于 490 nm 处测量各孔的吸光度值(OD490nm)根据公
式:细胞抑制率 = (1 － 给药组 OD 值 /空白对照组 OD 值)×
100%。
1． 5． 3 流式细胞仪检测细胞凋亡 空白对照组和南赤瓟醇
提取物组(0． 20 和 0． 50mg /ml)Hela 细胞分别用相应浓度的药
物处理，于培养箱内继续培养 48h后，收集细胞，制备细胞悬液，
1000 rpm 离心 7min，弃上清液，PBS 洗涤，收集细胞，在冰水浴
中进行下述操作:用 Annexin V-FITC 试剂盒中 binding buffer 悬
浮细胞，调节细胞浓度为 1 × 106 /ml，取 100μl上述细胞，分别按
试剂盒说明加入 PI和 AnnexinⅤ-FITC，混匀后室温避光 15 min
后，用流式细胞仪检测细胞凋亡。
1． 5． 4 Hoechst33258 检测凋亡细胞形态 将处理过的细胞
用 0． 125 %胰蛋白酶消化后收集，用 37 ℃的 PBS 冲洗 24 孔板
2 次，加入 1 ml的 4%的多聚甲醛于 4 ℃固定 10 min，自然晾干，
每孔加入终浓度为 10mg / l 的 Hoechst33258 染液 100μl，室温避
光染色 10min，水冲净晾干，激发光波长 450 nm，发射光波长 490
nm。荧光显微镜下观察凋亡细胞形态学变化。
1． 5． 5 实时定量 PCＲ检测 用 Trizol试剂提取 HeLa细胞总
ＲNA，按说明书操作。总 ＲNA 经紫外分光光度计测定 260nm
与 280nm处光密度比值 (D260 /D280 )为 1． 8 ～ 2． 0。将提取的
ＲNA反转录为 cDNA(按照反转录试剂盒严格操作) ;在 ＲNase
Free处理过的反应管中加入 SYBＲ Premix Ex TaqTM II (2X)
12． 5μl，PCＲ Forward Primer(10μM) )1μl，PCＲ Ｒeverse Primer
(10μM)1μl，DNA 模板 2μl，dH2O(灭菌蒸馏水)8． 5μl，最终反
应体系为 25μl。将样品放入实时定量 PCＲ 扩增仪中按 95℃预
变性 30s、95℃变性 5s、退火 30s、72℃延伸 20s 条件扩增 30 次。
利用 PCＲ仪汇出扩增曲线，进行结果分析。
1． 5． 6 统计学处理 每项试验至少重复 3 次，所有实验结果
的数据以均数 ±标准差(x ± s)表示，所有数据分析在 SPSS13． 0
统计软件包上进行单因素方差分析及 LSD-t 检验，P ＜ 0． 05 认
为差异有统计学差异。
2 结果
2． 1 一般形态学观察 各处理组细胞经南赤瓟醇提物分别
处理 24、48、72h 后，肉眼均可见有细胞由贴壁脱落，有的甚至圆
缩成悬浮细胞(胞浆凝缩、胞体缩小变圆、核固缩深染) ，细胞数
量明显少于空白对照组，如图 1 所示。
图 1 南赤瓟醇提物对宫颈癌 HeLa细胞的影响
A: 正常的 HeLa细胞，B: 南赤瓟醇提物作用后的 HeLa细胞
2． 2 南赤瓟醇提物对宫颈癌 HeLa 细胞增殖抑制作用 南赤
瓟醇提物(0． 05、0． 10、0． 20、0． 50、1． 00 mg /ml)对细胞增殖均有
明显的抑制作用，且随着南赤瓟醇提物对宫颈癌 HeLa 细胞增
殖抑制作用呈明显的时间-剂量依赖性。统计分析结果显示不
同时间之间具有显著差异性，各浓度之间也存在显著差异性，见
表 2。根据此实验结果，我们选定南赤瓟醇提物作用时间 48h、
浓度为 0． 20 和 0． 50mg /ml进行后续实验研究。
821 中药药理与临床 2013;29(3)
表 2 MTT法检测南赤瓟醇提物对宫颈癌 HeLa 细胞活性的影响
(珋x ± s，n = 4)
浓度
(mg /ml)
作用不同时间的抑制率(%)
24h 48h 72h
0． 00 0． 00 ± 0． 00 0． 00 ± 0． 00 0． 00 ± 0． 00
0． 05 13． 90 ± 4． 05 △△ 17． 03 ± 2． 60 △△ 22． 15 ± 3． 42△△#
0． 10 20． 88 ± 4． 22 △△ 28． 95 ± 1． 45 △△# 34． 58 ± 3． 55△△##
0． 20 38． 48 ± 3． 33 △△ 45． 05 ± 3． 75△△# 52． 08 ± 3． 75△△##
0． 50 55． 80 ± 3． 65 △△ 61． 10 ± 2． 60 △△# 66． 25 ± 3． 47△△##
1． 00 60． 70 ± 3． 71 △△ 67． 30 ± 1． 99 △△# 71． 48 ± 1． 71△△##
△ P ＜ 0． 05，△△ P ＜ 0． 01与同一时间点的空白对照组比较;# P ＜ 0． 05，## P ＜ 0． 01 与同
一浓度南赤瓟醇提物作用 24h组比较
2． 3 南赤瓟醇提物对宫颈癌 HeLa 细胞凋亡的影响 HeLa
细胞经南赤瓟醇提物(0． 20 和 0． 50 mg /ml)处理 48h 后出现了
明显的凋亡，而且随着南赤瓟醇提物浓度增加凋亡率提高，与
空白对照组比较，具有显著性差异，见表 3。实验表明，南赤瓟
醇提物能诱导 HeLa细胞发生凋亡。
表 3 南赤瓟醇提物对宫颈癌 HeLa细胞凋亡率的影响(珋x ± s，n = 5)
组别 剂量(mg /ml) 凋亡率(%)
空白对照 2． 45 ± 0． 65
南赤瓟醇提物 0． 20 23． 54 ± 2． 90 △△
南赤瓟醇提物 0． 50 32． 01 ± 2． 46 △△
与空白对照组比较 △ P ＜ 0． 05，△△ P ＜ 0． 01(下同)
2． 4 南赤瓟醇提物对人宫颈癌 HeLa 细胞凋亡形态学特征观
察 用 Hoechst33258 对 HeLa细胞进行了荧光染色。在荧光显
微镜下，可见空白对照组的 HeLa细胞膜完整、胞核圆形或椭圆
形，核形态饱满，核质着色深，密度均匀一致(如图 2A所示) ;用
南赤瓟醇提物(0． 20 和 0． 50mg /ml)处理后，可看到典型的凋亡
细胞在形态特征上的变化，包括细胞皱缩、核染色质浓缩及形
似块状的细胞碎片(如图 2B 所示) ，同时也可见凋亡小体的形
成(如图 2C所示) ，其中以 0． 50 mg /ml南赤瓟醇提物组更为显
著。
图 2 南赤瓟醇提物对宫颈癌 HeLa细胞形态的影响
A: 空白对照组，B: 0． 20 mg /ml南赤瓟醇提物组，C: 0． 50 mg /ml南赤瓟醇提物组
2． 5 南赤瓟醇提物对人宫颈癌 Hela细胞 Bcl-2、Bax mＲNA 表
达影响 如表 4 所示，HeLa 细胞经南赤瓟提取物(0． 20 和 0．
50 mg /ml)处理后可使 Bcl-2 mＲNA 表达量降低，Bax mＲNA 表
达量升高，Bcl-2 /Bax的比值降低，与空白对照组比较具有显著
性差异，且随着南赤瓟醇提物浓度升高而增强。
表 4 南赤瓟醇提物对人宫颈癌 Hela 细胞 Bcl-2、Bax mＲNA 表达
的影响(珋x ± s，n = 3)
组别
剂量
(mg /ml)
Bcl-2 /GAPDH Bax /GAPDH Bcl-2 /Bax
空白对照 0． 63 ± 0． 06 0． 46 ± 0． 05 1． 37 ± 0． 17
南赤瓟醇提物 0． 20 0． 51 ± 0． 03△ 0． 60 ± 0． 04△ 0． 85 ± 0． 06△△
南赤瓟醇提物 0． 50 0． 40 ± 0． 02△△ 0． 64 ± 0． 03△△ 0． 63 ± 0． 03△△
2． 6 南赤瓟醇提物对人宫颈癌 HeLa细胞 Caspase-3、Caspase-9
mＲNA表达的影响 HeLa细胞经南赤瓟醇提物(0． 20 和 0． 50
mg /ml)处理后可使细胞中 Caspase-3、Caspase-9 mＲNA 表达量
升高，与空白对照组比较具有显著性差异，且随着南赤瓟醇提
物浓度升高而增强，见表 5。
表 5 南赤瓟醇提物对人宫颈癌 HeLa细胞 Caspase-3、-9 mＲNA表
达的影响(珋x ± s，n = 3)
组别
剂量
(mg /ml)
Caspase-3 /GAPDH Caspase-9 /GAPDH
空白对照 0． 42 ± 0． 07 0． 34 ± 0． 04
南赤瓟醇提物 0． 20 0． 64 ± 0． 10△ 0． 55 ± 0． 03△△
南赤瓟醇提物 0． 50 0． 87 ± 0． 09△△ 0． 79 ± 0． 08△△
3 讨论
宫颈癌是危害妇女健康的主要恶性肿瘤之一，仅次于乳腺
癌而居于第二位，宫颈癌目前已成为全球性的公共卫生问
题［7］。WHO统计数据显示全球每年宫颈癌新增病例有 55． 51
万，其中我国就达 13． 15 万;在全世界每年死于宫颈癌的 30． 98
万人中，仅我国就有 2 ～ 3 万［8，9］。目前，随着我国社会发展进
程加快和经济的飞速发展，宫颈癌的发病率不但不降，反而上
升，更为严峻的是发病年龄呈现明显的低龄化倾向，因而使得我
国的宫颈癌防治工作显得较为艰巨［10］。近年来，来源于传统民
族民间的天然药物，由于其抗癌疗效确切、毒副作用小、民间临
床用药历史悠久等多方面综合优势，再次成为治疗癌症的活性
先导化合物的宝库［11］。南赤瓟作为土家族民间草药，土家药匠
历来有它来治疗痈肿、肠炎、痢疾、毒蛇咬伤，通乳及妇科疾病的
传统。我们前期发现其水提物对宫颈癌 HeLa 细胞的生长具有
显著的抑制作用，而且证实其作用机制与降低 Hela细胞线粒体
膜电位及其诱导细胞凋亡作用的线粒体途径密切相关 ［6］。本
研究拟在此基础上，观察南赤瓟醇提物对宫颈癌 HeLa 细胞增
殖与凋亡作用的影响，并探讨其可能的作用机制，为此我们进行
了本实验。实验结果表明南赤瓟醇提物对宫颈癌 HeLa 细胞的
增殖具有显著的抑制作用，而且呈时间-剂量依赖性;光学显微
镜下，HeLa细胞经南赤瓟醇提物处理后，肉眼均可见有细胞由
贴壁脱落，胞浆凝缩，胞体缩小变圆，核固缩深染，而且细胞数量
明显少于空白对照组;同时在荧光显微镜下可观察到 HeLa 细
921中药药理与临床 2013;29(3)
胞皱缩、核染色质浓缩及凋亡小体等细胞凋亡的形态学改变。
细胞凋亡是机体细胞在正常生理或病理状态下发生的一
种自发的、程序化的死亡过程，它的发生受到机体的严密调控。
肿瘤多是由于细胞增殖和凋亡异常而导致细胞无限增殖所致，
因此抑制肿瘤细胞异常增殖成为评价抗癌药物疗效的重要指
标［12，13］。在细胞凋亡的诸多控因素中，Bcl-2 家族基因(Bcl-2、
Bax等)备受瞩目。Bcl-2 在细胞凋亡的上游发挥调控作用，通
常它和 Bax结合形成异源二聚体，抑制 Bax 的促凋亡作用;当
Bax表达升高时，Bax 同源二聚体形成增多，细胞凋亡加速;当
Bcl-2 表达升高时，Bax同源二聚体解离，形成 Bcl-2 /Bax 异源二
聚体，发挥抑制异源二聚体诱导的细胞凋亡作用，因此 Bcl-2 /
Bax的比例是细胞凋亡发生与否的关键因素［14 ～ 16］。本研究中，
我们发现南赤瓟醇提物可显著地升高 HeLa 细胞中 Bax mＲNA
表达，降低 Bcl-2 mＲNA表达和 Bcl-2 与 Bax的比值。实验结果
表明，南赤瓟醇提物对 HeLa 细胞凋亡促进作用可能与其调节
Bcl-2 和 Bax基因表达水平有关。
细胞凋亡除了存在细胞核外，细胞质也是细胞凋亡病理改
变的重要部位，其中 Caspase 蛋白激酶家族在这一过程扮演了
重要角色，研究发现，细胞的死亡是依赖 Caspase的激活［17］。细
胞在凋亡过程中，Bcl-2 家族在细胞凋亡的上游过程发挥作用，
而 Caspase蛋白激酶家族则在下游发挥作用，在这一过程中有
多种促凋亡和抗凋亡的蛋白相互博弈来细胞命运。若 Bcl-2 家
族基因表达异常或 Bcl-2 /Bax 比例失调，均可导致线粒体膜电
位下降，引起膜质子转运异常，通透性增加，使细胞色素 C 从线
粒体中释放到胞浆中，与凋亡蛋白酶活化因子-1、Caspase-9 前
体结合形成凋亡小体，进而激活 Caspase-9，再酶解 Caspase-3 前
体，释放出 C末端小肽片段，从而活化 Caspase-3，然后瀑布式激
活 Caspase-2，6，8，10 等。最终激活脱氧核糖核酸酶，水解核酸
和细胞骨架蛋白，导致细胞凋亡［18 ～ 20］。因此，激活 Caspase-9 及
Caspase-3 是细胞凋亡的必经之路。本研究中，我们发现南赤瓟
醇提物可显著升高 HeLa 细胞中 Caspase-9 及 Caspase-3 的 mＲ-
NA表达水平，其实验结果与一般形态学和凋亡形态学实验结
果一致。
综上所述，由于南赤瓟醇提取物是一个相对复杂的提取
物，其中有很多单体化合物及一些杂质组成，加之细胞凋亡是
一个多阶段、多系统参与的极其复杂的过程，本实验仅探讨了
南赤瓟醇提取物在体外对人宫颈癌 HeLa 细胞株凋亡的影响，
证实其醇提物可显著地抑制宫颈癌 HeLa 细胞增殖，促进细胞
凋亡，而且呈明显的时间-剂量依赖性，初步明确了其促进宫颈
癌 HeLa细胞凋亡可能与上调 Bax、Caspase-9、Caspase-3 和下调
Bcl-2 凋亡相关基因表达有关。然而南赤瓟诱导细胞发生凋亡
的机制还有待进一步研究;由于醇提物中有很多单体化合物及
杂质组成，而其单体化合物亦具有多方面的药理作用，因此进
一步分离、纯化其单体化合物，并进行更深层次的研究，将为寻
找疗效好、副作用小的南赤瓟成分提供理论支持。
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031 中药药理与临床 2013;29(3)
Effect of alcohol extraction from Thldiantha nudiflora Hemsl on cervical cancer HeLa cells
Jin Jiahong1，Yan Weihong1，Shi Mengqiong1，Liu Xiong2，Zhou Jigang2，Luo Tao2，Zhou Chang2
(1 Medical Science college;2 Traditional Chinese Medicine Clinical Hospital，China Three Gorges University，Yichang 443002)
Objective:To investigate the effect of alcohol extraction from Thldiantha nudiflora Hemsl on proliferation and apoptosis of cervix cancer
HeLa cells，and to explore the possible mechanism． Methods:HeLa cells were treated with different concentration of alcohol extraction from
Thldiantha nudiflora Hemsl (0． 05 ～ 1． 00mg /ml)at different times (24，48，72 h) ，Cell viability was determined by MTT assay，and mor-
phological changes of HeLa cells were visualized under reversal phase microscope;After HeLa cells were treated with alcohol extraction from
Thldiantha nudiflora Hemsl (0． 20 and 0． 50 mg /ml) ，Cell morphology was examined by hoechst33258 through fluorescence microscope;An-
nexin V /PI double-staining was performed to detect apoptosis of Hela cells by flow cytometry;The Expressions of Bcl-2，Bax，Caspase-9 and
Caspase-3 mＲNA were detected by Ｒeal-time PCＲ，and Bcl-2 /Bax ratio was analyzed． Ｒesults:Alcohol extraction from Thldiantha nudiflora
Hemsl inhibited the proliferation and induced apoptosis of HeLa cells on dose-and time-depending manner，and the differences among differ-
ent concentration and time groups were significant (P ＜ 0． 05，P ＜ 0． 01，respectively) ;Alcohol extraction from Thldiantha nudiflora Hemsl
(0． 20 and 0． 50 mg /ml)might significantly inhibit proliferation，promote apoptosis(P ＜ 0． 05，P ＜ 0． 01，respectively) ;up-regulate the
mＲNA expression levels of Bax，Caspase-9 and Caspase-3，down-regulate expression level of Bcl-2 and Bcl-2 /Bax ratio compared with the
control group(P ＜ 0． 05，P ＜ 0． 01，respectively)． Conclusion:Alcohol extraction from Thldiantha nudiflora Hemsl could effectively inhibit
proliferation and induce apoptosis in cervical cancer HeLa cells． The mechanism may be related to regulating the expressions of the apoptosis-
related genes Bcl-2，Bax and Caspase-9，Caspase-3．
Key words Thldiantha nudiflora Hemsl(南赤瓟) ;cervical cancer;HeLa cells;apoptosis
两种黔产淫羊藿总黄酮对Ⅱ型糖尿病小鼠糖代谢的影响*
张 静，林亚梅，邓 炜＊＊
(贵阳中医学院药理教研室，贵阳 550002)
摘 要 目的:观察黔产粗毛淫羊藿与黔岭淫羊藿总黄酮对Ⅱ型糖尿病模型小鼠的糖代谢的影响。方法:联用高脂饲料及四
氧嘧啶建立Ⅱ型糖尿病小鼠模型，黔产两种淫羊藿总黄酮分别按剂量 100、50mg /kg，灌胃给药 14d，检测空腹血糖( FBG) 、糖耐量
( OGTT) 、胰岛素( INS) 含量。结果:粗毛淫羊藿总黄酮高剂量( 100mg /kg) 能降低Ⅱ型糖尿病小鼠 FBG，改善其 OGTT 异常，降低血
清 INS水平。结论:高剂量粗毛淫羊藿总黄酮通过降低Ⅱ型糖尿病小鼠 FBG，改善 OGTT异常，增敏 INS，能改善Ⅱ型糖尿病小鼠的
糖代谢;黔岭淫羊藿总黄酮则效果不明显。
关键词 粗毛淫羊藿;黔岭淫羊藿;总黄酮;Ⅱ型糖尿病模型;糖代谢
黔产淫羊藿种类繁多，其中粗毛淫羊藿、黔岭淫羊藿为《贵
州省中药材质量标准》(1988 年版)收载品种，其产量较大，应用
较多［1］。研究发现淫羊藿总黄酮是淫羊藿的主要有效成分之
一，而淫羊藿苷(ICA)则是淫羊藿总黄酮中的主要物质基础［2］。
徐文芬等人研究发现黔岭淫羊藿总黄酮中 ICA含量甚低(小于
0． 1%)［3］，远低于中国药典(2010 年版)标准(0． 5%) ;其药效
差异未见报道。本课题组在前期药效研究中对黔岭淫羊藿、粗
毛淫羊藿总黄酮益智、增强免疫、抗骨质疏松等作用进行了探
讨，发现两者存在药效差别［4 ～ 6］。黄酮类物质具有良好的降糖
作用［7］，本研究以Ⅱ型糖尿病小鼠模型，通过检测 FBG、OGTT、
INS含量，探讨两种淫羊藿总黄酮对糖代谢等相关指标影响，综
合评价其疗效。
1 材料与方法
1． 1 试验药物 淫羊藿药材分别采自贵州贵阳市乌当区，贵
阳市军区后山，经贵阳中医学院何顺志教授鉴定为粗毛淫羊藿
Epimedium acuminatum Franch、黔 岭 淫 羊 藿 E． leptorrhizum
Stearn。上述药材经适当干燥后粉碎过筛成粗粉，用 18 倍 80%
乙醇回流提取 3 次，每次 2h，合并药液，浓缩成浸膏［8］。经 UV
法测定浸膏中总黄酮含量(以 ICA 计)分别为 38． 4%和 11．
4%，分别用生理盐水稀释后供实验用药。盐酸二甲双胍片，贵
州天安药业股份有限公司，批号:20110702。
1． 2 动物 清洁级昆明种小鼠，雄性，体重 22 ～ 28g，由重庆
131中药药理与临床 2013;29(3)
* 基金项目:贵州省中医药管理局中药民族药科研项目 QZYY2010 － 004 ＊＊通讯作者