全 文 ：鸡树条荚蒾果实提取物抑菌作用研究
弥春霞 1 ,陈 欢1 ,任玉兰 2 ,祝 捷 2
(1.牡丹江师范学院生命科学与技术学院 ,黑龙江牡丹江 157012;2.牡丹江师范学院化学化工学院 ,黑龙江牡丹江 157012)
摘要　[目的]研究鸡树条荚蒾果实提取物的抑菌作用 ,为其开发应用提供理论依据。 [方法 ]制备鸡树条荚蒾果实的水提液和醇提液 ,
使用药敏纸片法和 2倍稀释法测定了提取物对金黄色葡萄球菌 、枯草芽孢杆菌、大肠杆菌、普通变形杆菌 、啤酒酵母 5种供试菌的抑菌
效果。 [结果]鸡树条荚蒾果实的 70%乙醇提取物和水提取物对供试的金黄色葡萄球菌、枯草杆菌、普通变形杆菌和大肠杆菌都具有抑
菌效果 ,其中乙醇提取物的最低抑菌浓度分别为 15.63、15.63、31.30和 125.00mg/ml;水提取物的抑菌效果和 70%乙醇提取物对细菌的
抑菌效果差别不大 ,水提物和醇提物对啤酒酵母都无抑菌效果。 [结论] 鸡树条荚蒾果实的水提物和醇提物都具有较好的抑制细菌作
用 ,无抑制酵母菌的作用 ,水提取物的抑菌效果和 70%乙醇提取物对细菌的抑菌效果差别不大 ,具有一定的应用价值。
关键词　鸡树条荚蒾;抑菌作用;果实提取物;药敏纸片法;最低抑菌浓度
中图分类号　R284.1　　文献标识码　A　　文章编号　0517-6611(2010)22-11767-02
StudyontheAntibacterialEffectofViburnumsargentiKoehneFruitExtract
MIChun-xiaetal　(ColegeofLifeScienceandTechnology, MudanjiangNormalColege, Mudanjiang, Heilongjiang157012)
Abstract　[ Objective] TheresearchaimedtostudytheantibacterialactivityofViburnumsargentiKoehnefruitextractandprovidethetheoret-
icalbasesofitsdevelopment.[ Method] UsingdrugsensitiveslipsmethodandDilutionmethod, theantibacterialactivityofViburnumsargenti
KoehnefruitextractwhichisextractedbywaterorethanolwasmeasuredbyanalyzingtheinhibitoryefectagainstStaphylococcusaureus, Bacil-
lussubtilis, Escherichiacoli, Proteusvulgaris, Saccharomycescerevisiae.[ Result] ViburnumsargentiKoehneextractwhichViburnumsargenti
Koehnewasextractedby70%ethanolandwatercouldevidentlyinhibitthegrowthofStaphylococcusaureus, Bacillussubtilis, Escherichiacoli,
Proteusvulgaris.Thelowestinhibitoryconcentration(MIC)of70%ethanolextractwere:Staphylococcusaureusof15.63 mg/ml, Bacillus
subtilisof15.63mg/ml, Proteusvulgarisof31.3mg/mlandEscherichiacoliof125mg/ml.Antimicrobialefectofwaterand70%ethanolex-
tractontheantibacterialefectofbacteriawerealmostthesame.TheyhadnoinhibitoryefectagainstSaccharomycescerevisiae.[ Conclusion]
ThewaterextractandalcoholextractofViburnumsargentiKoehnefruithadgoodinhibitorybacterialefect, withoutinhibitingtheroleof
yeasts.Antimicrobialefectofwaterand70%ethanolextractontheantibacterialefectofbacteriawerealmostthesame, hascertainapplica-
blevalue.
Keywords　ViburnumsargentiKoehne;Antibacterialefect;Fruitextract;Drugsensitiveslipsmethod;MlC
基金项目　黑龙江省教育厅科技项目(10541236);牡丹江市科学技术
计划项目(G20090063)。
作者简介　弥春霞(1973-),女 , 黑龙江牡丹江人 , 硕士 ,讲师 ,从事微
生物学与食品化学研究。
收稿日期　2010-04-26
　　鸡树条荚蒾(ViburnumsargentiKoehne),又名鸡树条子 、
鸡屎条子(东北)、佛头花(华北),为忍冬科(Caprifoliaceae)
荚蒾属(ViburnumLinn.)植物。系落叶灌木 ,高 2 ～ 3m;树皮
灰褐色 ,纵条状开裂;小枝黄褐色至淡褐色 ,具明显条棱 ,有
毛或无;单叶对生;伞形聚伞花序顶生 ,紧密多花;核果球形 ,
鲜红色 ,有臭味;种子圆形 ,扁平。花期 5 ～ 6月 ,果期 8 ～ 9
月。分布于辽宁 、吉林 、黑龙江 、内蒙古 、华北和西北各省区 ,
朝鲜 、日本 、前苏联也有分布 [ 1] 。鸡树条荚蒾花中含山奈酚 -
3-葡萄糖苷 ,山奈酚-3, 7-二葡萄糖苷和牡丹花苷 [ 2] ,种子中
含有脂肪油 26.27%[ 1] ,叶和果实均含黄酮 ,果实中另含绿原
酸 、异绿原酸 [ 3-5] ,果实中还含有丰富的糖 、VC、VB,以及 16
种氨基酸和大量的 K、Mg、P、Fe等微量元素 ,有很高的营养
价值 [ 5-6] 。鸡树条荚蒾叶 、嫩枝均可入药 ,叶主治疮疥 、皮肤
瘙痒等症;嫩枝主治风湿性关节炎 、腰酸腿疼 、跌打损伤等
症 [ 1] ;枝叶具有收缩子宫 ,增强子宫的紧张度 ,治疗子宫出血
的作用 [ 2] ;果实有止咳的功效 ,治疗慢性支气管炎 、咳嗽痰喘
疗效较好 [ 7] 。关于鸡树条荚蒾果实抗菌特性的研究尚未见
报道 ,为此 ,笔者研究了鸡树条荚蒾果实提取物对常见菌种
大肠杆菌 、枯草杆菌 、普通变形杆菌 、金黄色葡萄球菌及啤酒
酵母 5种供试菌的抑制作用 ,旨在为鸡树条荚蒾果实的进一
步开发利用提供试验依据。
1　材料与方法
1.1　材料　植物材料为鸡树条荚蒾果实 ,采集于牡丹江师范
学院校园 ,经生命科学与技术学院植物教研室鉴定为鸡树条荚
蒾的果实;供试菌种为大肠杆菌(Escherichiacoli),金黄色葡萄
球菌(Staphylococcusaureus),普通变形杆菌(Proteusvulgaris),
枯草芽孢杆菌(Bacilussubtilis),啤酒酵母(Sacharomycescere-
visiae),皆由牡丹江师范学院生命科学与技术学院微生物学实
验室提供。
1.2　方法
1.2.1　鸡树条荚蒾果实提取物的制备。将采摘的鸡树条荚蒾
果去掉霉变的果粒 ,清洗干净 ,阴处晾干 ,在 50 ℃下烘干 ,粉
碎 ,过 40目筛后保存备用。准确称取 2份 30 g荚蒾果粉末 ,
按 1∶10的料液比各加入蒸馏水 、70%乙醇 ,分别置 100、80 ℃
恒温水浴中回流提取 3h,过滤去渣 ,滤渣按 1∶8比例加入相
应提取剂 ,同等条件下提取 1 h,过滤 ,合并 2次滤液。将滤
液于旋转蒸发器浓缩定容至 30 ml,使荚蒾果提取物相当于
干物质的含量为 1 000 mg/ml,灭菌后置于冰箱中保藏备用。
1.2.2　培养基的配制。LB培养基和PDA培养基为常规配制 [ 8] 。
1.2.3　菌液的制备。在无菌室中将供试菌种移接入相对应
的试管斜面培养基上 ,进行活化 ,细菌放在 37 ℃培养箱中培
养 24 h,酵母菌放在 28℃培养箱中培养 48 h,用无菌水配制
成 1×107 ～ 1×108 CFU/ml的菌液 。
1.2.4　抑菌试验(滤纸片扩散法)[ 9] 。用打孔器将滤纸打成
直径为 10 mm的圆纸片 , 121℃灭菌 30min,将无菌滤纸片分
别浸入荚蒾果的水提取物和醇提取物中 ,充分浸泡后取出 、
晾干 ,备用 。在超净工作台上将灭菌后的固体培养基倒入无
安徽农业科学 , JournalofAnhuiAgri.Sci.2010, 38(22):11767-11768, 11782 责任编辑　郑丹丹　责任校对　李岩
DOI :10.13989/j.cnki.0517-6611.2010.22.171
菌培养皿中 ,每皿 20 ml左右。待冷却凝固后 ,加入制备好的
菌悬液各 0.1ml,用涂布棒将菌液涂布均匀。用无菌镊子夹
取含药物的滤纸片贴在培养基表面 。每皿贴 3片 ,每个菌种
3次重复;细菌放在 37 ℃培养箱中培养 24 h,酵母菌放在 28
℃培养箱中培养 48 h,用游标卡尺测定其抑菌圈直径。以
70%乙醇和无菌水为对照 。
1.2.5　2倍稀释法测定药物的最低抑菌浓度(MIC值)[10] 。
取灭菌试管若干支 ,按每组 9支进行分组。向每组的第 1支试
管中加入 2ml2倍浓度的 LB液体培养基 ,第 2 ～7支试管中各
加入 2mlLB液体培养基;向每组的第 1支试管中加入 2 ml提
取液 ,混匀后吸出 2 ml加至第 2号试管中 ,如此稀释至第 7
管 ,从第 7管中吸出 2 ml弃去 ,使各管药液浓度分别为
500.00、250.00、125.00、62.50、31.25、15.63、7.82 mg/ml。之
后 ,于各管中加入 0.1ml的菌液 ,第 8支试管中加入 2 mlLB
液体培养基不加提取液作为阳性对照 ,第 9支试管中加入提
取液但不加菌悬液作为阴性对照。若菌种为啤酒酵母 ,培养
基则为 PDA液体培养基。适温培养 24h,观察抑菌效果。试
验重复 3次。液体培养基透明为无菌生长 ,混浊为有菌生
长。以无菌生长的最低药物浓度作为最低抑菌浓度(MIC)。
对药液颜色较深 、肉眼不宜判定有无细菌生长者 ,在营养琼
脂平板上划线接种 , 37 ℃恒温培养 24 h后取出 ,以无细菌生
长平板内药物的最小浓度为此药物对该菌株的 MIC。
2　结果与分析
2.1　滤纸片扩散法测定鸡树条荚蒾果实提取物的抑菌效
果　采用滤纸片扩散法测定鸡树条荚蒾果水提取物和 70%
乙醇提取物对供试菌的抑菌效果。由表 1可知 ,鸡树条荚蒾
果的水提物和 70%乙醇提取液对枯草杆菌 、大肠杆菌 、金黄
色葡萄球菌 、变形杆菌都具有一定的抑菌效果 ,但是对啤酒
酵母几乎无抑制效果。水提取物和 70%乙醇提取物对细菌
的抑制效果相同 ,皆为金黄色葡萄球菌 >枯草杆菌 >变形
杆菌 >大肠杆菌。而就单一供试菌来说 , 70%乙醇提取物的
抑菌效果稍好于水提取物的抑菌效果 ,但差别不大。 2种提
取物对革兰氏阳性和革兰氏阴性菌都有一定的抑制作用 。
表 1　鸡树条荚蒾果实提取物滤纸片法的抑菌结果
Table1　BacteriostasisresultoftheextractfromViburnumsargenti
Koehnebydrugsensitiveslipsmethod
试验菌
Testingstrain
抑菌圈直径 Diameterofbacteriostasis∥mm
70%乙醇 70%ethanol 水 Water
金黄色葡萄球菌 Staphylococcusaureus 31.4 31.2变形杆菌Proteusvulgaris 14.6 14.2枯草杆菌Bacilussubtilis 28.7 27.3大肠杆菌Escherichiacoli 11.8 11.5啤酒酵母Saccharomycescerevisiae - -
　注:-表示无抑菌作用。
　Note:-standsfornoinhibitoryefect.
2.2　鸡树条荚蒾果实不同提取物对供试菌的最低抑菌浓
度　鸡树条荚蒾果的水提物和 70%乙醇提取物对供试菌的
MIC见表 2、3。由表 2可知 ,荚蒾果水提物对金黄色葡萄球
菌的抑菌作用最强 ,其 MIC为 15.63mg/ml,其次是枯草杆菌
和变形杆菌 , MIC皆为 31.25 mg/ml,对大肠杆菌抑菌作用最
弱 ,为 125.00 mg/ml。由表 3可知 ,荚蒾果 70%乙醇提取物
对金黄色葡萄球菌和枯草杆菌的抑菌作用最强 ,其 MIC皆为
15.63 mg/ml,其次是变形杆菌 ,其 MIC为 31.25mg/ml,对大
肠杆菌抑菌作用最弱 , MIC为 125.00mg/ml。而水提物和乙
醇提取物对啤酒酵母皆不表现抑菌作用。由表 2、3可知 ,鸡
树条荚蒾果实的水提物和 70%乙醇提取物对金黄色葡萄球
菌 、大肠杆菌 、变形杆菌具有相同的 MIC;枯草杆菌的 70%乙
醇提取物的 MIC为 15.63mg/ml,而其水提液的 MIC为 31.25
mg/ml,略好于水提液的抑菌效果 。总体上 ,鸡树条荚蒾果的
2种提取液对供试细菌皆表现出良好的抑菌效果 ,对啤酒酵
母不表现抑菌效果。
表 2　鸡树条荚蒾水提取物对供试菌的最小抑菌浓度
Table2　MICofthewaterextractsfromViburnumsaygentiKoehneagainsttestedstrains
试验菌
Testingstrain
对照 CK
阳性Positive 阴性Negative
粗提物浓度 Concentrationofextract∥mg/ml
500.00 250.00 125.00 62.50 31.25 15.63 7.82
金黄色葡萄球菌 Staphylococcusaureus +++ - - - - - - - +
变形杆菌 Proteusvulgaris +++ - - - - - - + ++枯草杆菌 Bacilussubtilis +++ - - - - - - + ++大肠杆菌 Escherichiacoli +++ - - - - + + + +++ +++啤酒酵母 Saccharomycescerevisiae +++ - ++ ++ +++ +++ +++ +++ +++
　注:“ -”表示溶液清澈无菌生长;“ +”表示有少量细菌生长;“ ++”表示有较多细菌生长;“ +++”表示溶液浑浊,细菌正常生长, 无抑菌作用。
下表同。
　Note:-meansthesolutionisclearandnogrowinggerm;+meansthesolutionisgrowingalitleofgerm;++meansthesolutionisgrowingmoregerm;
+++meansthesolutionisregularlygrowinggermandnoinhibitionaction.Thesameasbelow.
表 3　鸡树条荚蒾 70%乙醇提取物对供试菌的最小抑菌浓度
Table3　MICof70%ethanolextractsfromViburnumsaygentiKoehneagainsttestedstrains
试验菌
Testingstrain
对照 CK
阳性positive 阴性Negative
粗提物浓度 Concentrationofextract∥mg/ml
500.00 250.00 125.00 62.50 31.25 15.63 7.82
金黄色葡萄球菌 Staphylococcusaureus +++ - - - - - - - +变形杆菌 Proteusvulgaris +++ - - - - - - + ++枯草杆菌 Bacilussubtilis +++ - - - - - - - ++大肠杆菌 Escherichiacoli +++ - - - - + + + +++ +++
啤酒酵母 Saccharomycescerevisiae +++ - ++ ++ +++ + ++ +++ +++ +++
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11768 　　　　　　　　　　安徽农业科学　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　2010年
预防动脉硬化 、脑血栓和脑溢血的功能;α-亚麻酸也是人体
必需的脂肪酸 ,除具有上述功效外 ,还具有降血糖 、抗炎症 、
抗过敏的作用 ,对于婴幼儿的大脑及视神经发育也有促进作
用 [ 12-13] 。另外 ,桔梗脂肪油中还有一些重要的饱和脂肪酸 ,
其中硬脂酸可通过降低肠道胆固醇的吸收进而降低血清和
肝脏中胆固醇的含量;棕榈酸亦有降低血清胆固醇的功能 ,
并对胰岛素有一定的保护作用 [ 14] 。
桔梗中脂肪酸种类丰富 ,含量较高 ,具有较高的营养价
值和医疗保健功效 ,该试验结果为更好地开发利用桔梗资源
提供了科学依据。
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(上接第 11768页)
3　结论与讨论
(1)采用鸡树条荚蒾的果实为试验材料 ,制备其水提液
和 70%乙醇提取液 ,以啤酒酵母 、枯草杆菌 、金黄色葡萄球
菌 、大肠杆菌 、变形杆菌为试验菌进行了抑菌效果研究。纸
片扩散法试验结果表明 ,水提取物和 70%乙醇提取物对细菌
的抑制效果相同 ,皆为金黄色葡萄球菌 >枯草杆菌 >变形杆
菌 >大肠杆菌。而就单一供试菌来说 ,水提取物和 70%乙醇
提取物具有相当的抑菌效果 ,抑菌效果差别不大。鸡树条荚
蒾果提取物对细菌的抑制效果很明显 ,抑菌作用广泛 ,具有
一定的开发价值。
(2)鸡树条荚蒾果的水提取物和 70%乙醇提取物对供
试菌的抑菌效果差别不大 ,说明利用水作为提取剂能很好的
将荚蒾果中有效抑菌成分提取出来。有资料表明 ,鸡树条荚
蒾的叶和果实均含黄酮 ,果实中另含绿原酸 、异绿原酸 [ 3-5] ,
这些都是抑菌的主要成分。水提物不但抑菌效果好 ,且其提
取方法步骤简单 、仪器设备价格低 ,综合考虑采用水提取的
方法在生产上比较实用。
(3)植物源农药具有取之自然 ,用之自然 ,低毒 、低残
留 、不易产生抗药性 ,可降低或避免化学农药带来的 “农药
公害 ”等优点 [ 9] 。鸡树条荚蒾为开发天然植物源杀菌剂增
加了新的选择。
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