全 文 ：·药　理·
橐吾中倍半萜对二氢吡啶类受体的作用研究
王银叶　陈宏明　陈洁　陆建安　李长龄 (北京 100083 北京医科大学药学院药理教研室)
摘要　目的:观察 8 个倍半萜类化合物对二氢吡啶类受体结合的作用和对离体血管张力的影响。方法:用[ 3 H] -尼
群地平对猪心室肌微粒体膜受体结合方法和家兔离体血管条实验对化合物的体外作用进行研究。 结果:化合物
Ⅰ 、Ⅱ 、Ⅲ对尼群地平与受体结合有明显抑制作用 ,其 IC50分别为 2.0×10-5 mol·L-1 , 2.7×10-5 mol·L-1和 3.9×
10-5 mol·L-1 , 其余化合物作用较弱。这些化合物抑制受体结合的作用强度与结构中母核与取代基的改变有关 ,
而取代基的变化对活性的影响更重要。化合物Ⅱ 、Ⅲ对高 K +引起的兔胸主动脉收缩有剂量依赖性的抑制作用。
结论:这类化合物有钙拮抗作用 , 作用机制可能与影响二氢吡啶类受体有关;它们作用有量效关系和构效关系 , 提
示有以此为先导进行深入结构改造和构效关系研究的价值。
关键词　橐吾;倍半萜类;受体结合;血管张力;钙拮抗剂
Study of effects on dihydropiridine receptor of furanosequiterpenes from Ligularia virgaurea
Wang Yinye (Wang YY), Chen Hongming (Chen HM), Chen Jie (Chen J), et al (Department of
Pharmacology , School of Pharmaceutical Sciences , Beijing Medical University , Beijing 100083)
ABSTRACT　OBJECTIVE:To study the effects of eight sesquiterpenes on dihydropiridines receptor binding and iso lated
vascular tension.METHODS:[ 3 H]-Nitrendipine receptor binding assay and rabbit isolated thoracic ar tery tension
experiment.RESULTS:Compound Ⅰ , Ⅱ and Ⅲ significantly inhibited the binding o f [ 3 H] -nitrendipine to pig heart
membranes with IC50 of 2.0×10-5 mol·L-1 , 2.7×10-1 mol·L-1 and 3.9×10-1 mol·L-1 , respectively.Inhibitory
effects of these compounds were related to bo th substitutes in the central benzofuran and benzofuran itself , but the
substitutes affected biological activity in more ex tensively than central benzofuran.Compound Ⅰ and Ⅱ inhibited the
contraction of isolated rabbit ar terial strips induced by K+ in a dose-dependent mannel.CONCLUSION:These compounds
are possessed of calcium antagonistic proper ties.The mechanism of the effect may be due to dihydropiridine calcium
channel receptor.
KEY WORDS　L igularia virgaure , sesquiterpenes , receptor binding , vascular tension , calcium antagonist
　　橐吾属植物在我国分布于西北 、西南 、华北
和东北 ,民间主要用于清热解毒 、消炎杀菌和活
血止痛等 ,其根 、茎 、叶皆可入药。60年代国外
开始对其化学成分进行研究 ,并对其中的生物
碱作过生物活性测定 ,证明其有致癌作用 。80
年代中期 ,国内开始对其化学成分进行研究 。
为了减小毒性 、增强疗效 ,国内分离纯化了其中
的化学成分 ,我们对这类化合物进行了研究。
1　材料与方法
1.1　药品与试剂
倍半萜类化合物由北京医科大学药学院有
机教研室分离纯化。尼群地平粉末为兴华制药
厂产品 。[ 3 H]-尼群地平购自美国 NEN 公司 。
1.2　方法
1.2.1　猪心室肌二氢吡啶微粒体膜受体的制
备　参照 Janis 等 [ Janis RA , Sarmiento JG ,
Muere SC , et al .Characteristics of the binding
of [ 3 H ]-nitrendiping to rabbit vent ricular
memb-ranes:modification by other Ca2+channal
agonist Bay K8644.J Pharmacol E xp Ther ,
·19·中国药学杂志 1998年 1月第 33卷第 1期　　　　　　　　　　Chin Pharm J ,1998 January , Vol.33 No.1
1984 , 231:8.] 的方法稍加修改:猪颈动脉放
血 ,立刻取出仍在跳动的心脏 ,迅速剪取左心室
用冰冷的 Tris缓冲液(50 mmol·L-1 ,pH 7.4)
洗净 ,剪碎 ,加入适量 Tri缓冲液 ,置冰浴中 ,用
SDT-1810型(德国)组织切碎机匀浆(set 6 ,重
复 6 次 ,每次 30 s , 间隔 30 s)。在 3 300 r·
min-1 ,4 ℃离心 20 min ,取上清液在 9 200 r·
min
-1离心 10 min ,取上清液在 20 000 r·min-1
离心 45 min(Beckman JA20),最后的沉淀 20
mmol·L-1 Hepes 缓冲液(pH 7.4)悬浮 , 用
Tef lon玻璃匀浆器匀浆 8次 ,混匀 ,分装 ,保存
于-70 ℃备用 。
1.2.2　受体配基结合实验　反应在 Tris缓冲
液中进行 ,总体积为 0.5 ml ,其中[ 3 H]-尼群地
平浓度为 9×10-10 mol·L-1 ,膜蛋白为290μg 。
样品管含有已知浓度的待测化合物 ,非特异结
合管中含有 7×10-6 mol·L-1的未标记尼群地
平 ,反应在玻璃容器和避光条件下进行[ 2] 。反
应混合物在 25 ℃振摇温育 1 h ,经多头细胞收
集器(ZT -Ⅱ型 ,浙江东浦)过滤 ,分离结合与
游离的[ 3 H] -尼群地平 ,与受体结合的标记配
基被滤于玻璃纤维滤纸上(49型 ,上海虹光),
滤纸用冰冷的 Tris缓冲液洗 3遍 ,烘干后放入
闪烁液中 ,在液闪仪(LS-1701 Beckman)中计
数。蛋白含量测定用 Bradford的方法 。
1.2.3　兔胸主动脉条张力实验　猛击家兔头
部致昏 ,迅速开胸取出胸主动脉 ,放入通氧的生
理液中(mmol·L-1:NaCl 120;KCl 5.5;CaCl2
2.5;MgCl2 1.2;NaH2PO4 1.2;NaHCO3 20;
EDTA 0.03;葡萄糖 10)。剥离血管周围其它
组织 ,剪成 3 mm ～ 4 mm 宽 ,1 cm 长的螺旋条 ,
放入盛有 37 ℃生理液的浴槽中 ,血管条下端固
定 ,上端连接于张力换能器(JZ -BK 贝科)上 ,
前负荷为 2 g ,每隔 15 min换生理液 1次 ,平衡
约1 h ,待血管条静息收缩平稳后 ,累次加入
KCl溶液(22 mmol·L-1 ～ 200 mmol·L-1),至
最大收缩 。用二导生理记录仪(LMS -2B型 ,
成都)记录血管张力变化 。用生理液洗涤组织 ,
使静息张力恢复至基线 ,加入待测样品 ,温育
15 min后 ,连续加入 KCl溶液至最大收缩。每
个血管标本仅用来测定一个样品 ,每个动物只
取一个血管标本 。
2　结果与讨论
受体配基结合实验结果显示:在一系列倍
半萜结构类似物中 ,化合物 Ⅰ 、Ⅱ、Ⅲ对[ 3 H]尼
群地平与受体的结合有中等强度的抑制作用 ,
其余结构作用较弱。苯骈呋喃母核上取代基的
变化可影响化合物对受体配基结合的抑制作
用:①1 位上取代基空间位阻变大时 , 活性下
降 ,如表 1结构 V Ⅰ 。 ②7 位上引入取代基时
活性下降或消失 ,如结构 V 和 V Ⅱ。 ③2位上
的 3-戊烯基是活性必需基团 ,如改变则活性降
低或消失 ,如结构 V 和 V Ⅲ。 ④母核中苯环 1 ,
4位氧化为 C=O ,也会减弱受体结合活性 ,如
结构 V Ⅰ 。离体血管张力实验结果显示:化合
物Ⅰ , Ⅱ对高 K+引起的兔胸主动脉收缩有明
显的 、剂量依赖性的抑制作用(见图 1 ,2),说明
这些化合物可能是钙通道拮抗剂 ,它们通过影
响二氢吡啶受体而抑制钙内流。
表 1　呋喃倍半萜类对[ 3 H] -尼群地平与猪心微粒体
结合抑制作用的构效关系
·20· Chin Pharm J , 1998 January , Vol.33 No.1　　　　　　　　　　　中国药学杂志 1998年 1月第 33卷第 1期
图 1　化合物Ⅰ 对高 K+引起的兔主动脉张力反应的
抑制作用 , ◆-◆-对照;■-■-1.56×10-4 mol·L-1;
○-○-3.21×10-4 mol·L-1;×-×-6.25×10-4 mol·
L-1(n=3)
　　实验结果说明:橐吾倍半萜类化合物作为
钙拮抗剂作用较弱 ,但它们是新的结构类型 ,有
明显的构效关系和量效关系 ,而且在牛舌橐吾
中含量相当高(0.2%～ 0.3%),提示以它们为
图 2　化合物Ⅱ对高 K+引起的兔主动脉张力反应的
抑制作用 , ◆-◆-对照;■-■-1.56×10-4 mol·L-1;
○-○-3.21×10-4 mol·L-1;×-×-6.25×10-4 mol·
L -1(n =3)
先导化合物进行深入构效关系研究将会有应用
价值 ,在整体动物水平的药理研究和对二氢吡
啶受体结合的性质的研究正在进行。
(收稿:1997-01-04)
庆大霉素毫微球的体内抗菌活性研究
张强　廖工铁1　张淑华2(北京 100083 北京医科大学药学院药剂教研室;1成都 610041 华西医科大学药学院;2成都
610051 四川抗生素工业研究所药理室)
摘要　目的:观察庆大霉素与聚氰基丙烯酸正丁酯毫微球结合以后 , 其体内抗菌活性(特别是对细胞内感染)是否
有所增加。方法:以鼠伤寒沙门杆菌感染的 C57BL/6j小鼠为细胞内感染的动物模型 ,以小鼠存活率和器官组织中
的活菌计数为指标 ,对庆大霉素聚氰基丙烯酸正丁酯毫微球的体内抗菌活性进行评价。结果:从存活率评价其治
疗指数提高了 10 倍。肝 、脾 、肾中活菌计数最低可降至庆大霉素溶液组的 1/ 426 , 1/141 和 1/ 30。结论:与庆大霉
素溶液相比 ,庆大霉素毫微球明显提高了对伤寒沙门杆菌感染小鼠的治疗效果。
关键词　庆大霉素;毫微球;体内抗菌活性;细胞内感染
In vivo antimicrobial activity of gentamicin polybutylcyanoacrylate nanoparticles
Zhang Qiang (Zhang Q), Liao Gong tie (Liao GT), Zhang Shuhua (Zhang SH)(School of
Pharmaceutical Sciences , Beijing Medical University , Beijing 100083)
ABSTRACT　OBJECTIVE:To observe whether the in vivo antimicrobial activity of gentamicin (specially in the
intracellular infected animals)could be improved after associting with polybuty lcy anoacrylate nanoparticles.METHOD:
S .typhim urium infected C57BL/ 6j mice w ere chosen as the animal model of the intracellular infection , then the
antimicrobial activity of gentamicin polycyano-eacrylate nanoparticles(GM-NP)was evaluated by the mouse survival and
the bacterial counts.RESULTS:By comparison w ith gentamicin solution (GM-So l), the therapeutic index of GM-NP
based on mouse mo rtality w as incrased by 10 fold , and the bacterial counts on liver , spleen and kidney could be as low as
·21·中国药学杂志 1998年 1月第 33卷第 1期　　　　　　　　　　Chin Pharm J ,1998 January , Vol.33 No.1