全 文 ：第 21卷 第 6期 中　　国　　兽　　医　　学　　报 Vo l. 21, No. 6
2 0 0 1年 11月 Chinese　 Journal　 of　 Veterinary　 Science 　　　 Nov . 2 0 0 1
改良千里光注射液的体内外抗菌作用及安全性
陈进军 ,王建华 ,周景明　 (西北农林科技大学 动物科学与动物医学学院 ,陕西 杨凌 712100)
摘要: 分别用 3种不同浓度乙醇进行醇提水沉法渗漉 ,制备了千里光原液。然后经高浓度乙醇法除去蛋白质、醇溶液调
p H值法除去鞣质以及乙醚脱色等步骤进行除杂脱色 ,制备改良千里光注射液。对改良千里光注射液进行安全性检验、
体外抑菌和体内抗感染试验 ,结果表明 ,用 78%乙醇提取、制备的改良千里光注射液对肠炎沙门氏菌、大肠埃希氏菌、
金黄色葡萄球菌、溶血性链球菌均有明显的抑制作用 ,体内抗感染作用显著 ,而且具有很好的澄明度和安全性。
关键词: 改良千里光注射液 ;抑菌作用 ;安全性 ;小鼠 ;长白兔
中图分类号: R392; S859　　　文献标识码: A　　　文章编号: 1005-4545( 2001) 06-0608-02
　　收稿日期: 2000-11-04
　　基金项目:西北农林科技大学中兽医药研究所基金资助项目 ( 97-
2-01)
　　作者简介:陈进军 ( 1967～ ) ,男 ,讲师 ,博士。
　　千里光 ( Senecio scandens Buch. -Ham. )是一种临床疗效
显著、毒副作用小的广谱抗菌中草药 [1, 2]。 按照千里光注射液
的生产操作规程 [3 ]制备千里光注射液 ,工艺繁琐 ,所需仪器、
试剂要求高。本试验对千里光注射液的制备工艺进行了改良 ,
并作了体内、外抗菌试验和安全性检验。
1　材料与方法
1. 1　千里光　采自陕西周至县后珍子森林保护区 ,经中科院
西北植物研究所鉴定 ,阴干备用。
1. 2　菌种和动物　肠炎沙门氏菌、大肠埃希氏菌、金黄色葡
萄球菌和溶血性链球菌 ,本校微生物实验室提供。 昆明种小
鼠 ,购自第四军医大学实验动物中心 ;长白兔 ,本校动物房提
供。
1. 3　改良千里光注射液制备　称取千里光粉末 3份 ,每份
250 g,分别用适量的 78% 、 85% 、 90%乙醇浸湿 (分别编号为
Ⅰ 、Ⅱ 、Ⅲ ) ,然后装入渗漉缸 ,再分别加入以上浓度乙醇至
1 800 m L,浸渍 48 h,分别收集渗漉液。 将渗漉液过滤 ,各加
50 m L无水乙醇。 过滤 ,调 pH至 8,再过滤 ,调 p H至 6. 0～
6. 5。 55℃ 0. 075 M Pa减压回收乙醇 ,得到提取液。分别向提
取液Ⅰ 、Ⅱ 和Ⅲ中加入 1 /3提取液体积的乙醚 ,萃取 3次 (提
取液脱色素 )。将萃取液用注射用水稀释 0. 5倍 , 4℃冷藏 6 h,
过滤 ,如此重复 3次 ,然后调 pH至 8,浓缩至稀释前 1 /2体
积 ,过滤 ,调 pH至 6. 0～ 6. 5,得到浓缩液。 按硅胶 G薄板层
析法监测乙醚萃取液中的黄酮类物质及生物碱。
按 2. 5%的比例分别给浓缩液加注射用葡萄糖 ,用注射
用水稀释至适当体积 , 65℃水浴上搅拌 ,使充分溶解 ,过滤。按
1. 2% 比例分别加入活性炭 ,搅拌 ,放置 30～ 40 min,过滤 ,定
容至适当体积 ,流通蒸气灭菌 30～ 40 min,无菌分装 (每支 5
m L) ,即得改良千里光注射液Ⅰ 、Ⅱ和Ⅲ 。
1. 4　改良千里光注射液安全性检查
1. 4. 1　 p H值　用精密 p H值试纸测试。
1. 4. 2　对红细胞的影响 [4 ]　取改良千里光注射液Ⅰ 、Ⅱ 、Ⅲ
各 1 mL ,分别用生理盐水稀释至 10 mL ,摇匀。 取试管 4支 ,
分别加入 2%兔血生理盐水混悬液 2 mL ,前 3管再加入稀释
的注射液Ⅰ 、Ⅱ 、Ⅲ 各 2 m L,第 4管加入生理盐水 2 m L ,摇
匀 , 37℃静置 1 h,观察有无溶血和凝血现象。
1. 4. 3　蛋白质和鞣质的检查　 30%磺基水杨酸钠法检查蛋
白质 ,氯化钠明胶法检查鞣质。
1. 4. 4　澄明度检查　 30 W荧光灯下 ,以白色为背景 ,距 20
cm处观察有无异物。
1. 4. 5　刺激性试验　 6只健康家兔等分为 3组 ,左眼分别滴
加千里光注射Ⅰ 、Ⅱ 、Ⅲ各 2滴 ,右眼各滴加生理盐水 2滴 ,每
15 min观察 1次 ,观察 4次后 ,每 1 h观察 1次 ,共观察 6 h。
1. 4. 6　尾静脉注射试验　将小鼠 15只等分为 3组 ,尾静脉
分别注射千里光注射液Ⅰ 、Ⅱ 、Ⅲ各 0. 1 mL ,观察 72 h。
1. 5　改良千里光注射液体外抑菌和体内抗感染试验
1. 5. 1　体外抑菌试验　将直径 6 mm干燥滤纸片分别用适
量改良千里光注射液Ⅰ 、Ⅱ 、Ⅲ 浸透 ,置于 37℃温箱过夜备
用。 取菌种接种于 5 m L营养肉汤试管中 , 37℃培养 20 h,将
肉汤连续稀释至 10- 2,吸取 0. 1 mL滴入营养琼脂平板 ,涂布
均匀 ,再放入药片 ,置 37℃ 24 h,测量抑菌圈大小。
1. 5. 2　体内抗感染试验 [5]　菌株致死量估计: 取健康小鼠
24只 ,等分为 8组 ,每只小鼠腹腔注射已培养 24 h的含菌肉
汤 (表 1)。 观察 96 h ,根据小鼠存活情况 ,确定菌株致死量。
　　注射液Ⅰ 、Ⅱ体内抗感染试验:取小鼠 130只 ,等分为 26
组 ,分别为菌汤+ 注射液组 ( 16个小组 ,表 2)、菌汤组 ( 4个小
组 ,表 3)和注射液组 ( 6个小组 ,改良千里光注射液Ⅰ 和Ⅱ分
别按每只 0. 4、 0. 6和 0. 8 m L给 3个小组小鼠腹腔注射 )。观
察 96 h,记录各组小鼠存活情况。
表 1　菌株致死量的估计方法 m L /只
菌　　种 大剂量 小剂量
肠炎沙门氏菌 0. 4 0. 2
大肠埃希氏菌 0. 5 0. 3
溶血性链球菌 0. 7 0. 5
金黄色葡萄球菌 0. 6 0. 4
表 2　菌汤+ 注射液组的抗感染试验方法 m L /只
　菌　　种 改良千里光注射液Ⅰ 改良千里光注射液Ⅱ
肠炎沙门氏菌 0. 4 0. 6 0. 4 0. 8 0. 4 0. 4 0. 4 0. 6
大肠埃希氏菌 0. 5 0. 5 0. 5 0. 7 0. 5 0. 3 0. 5 0. 5
溶血性链球菌 0. 7 0. 4 0. 7 0. 6 0. 7 0. 2 0. 7 0. 4
金黄色葡萄球菌 0. 6 0. 5 0. 6 0. 7 0. 6 0. 3 0. 6 0. 5
DOI : 10. 16303 /j . cnki . 1005 -4545. 2001. 06. 045
表 3　菌汤组小鼠腹腔注射菌液方法 m L /只
　菌　　种 菌汤 生理盐水
肠炎沙门氏菌 0. 4 0. 6
大肠埃希氏菌 0. 5 0. 5
溶血性链球菌 0. 7 0. 3
金黄色葡萄球菌 0. 6 0. 4
2　结果
2. 1　改良千里光注射液的理化特性　改良千里光注射液Ⅰ
呈浅咖啡色 ,Ⅱ为桔黄色 ,Ⅲ为淡黄色。均透明、均一、稳定 ,无
白块、纤维或色块出现。 pH值均在 6. 0～ 6. 5之间。
黄酮类物质的监测: 在紫外灯下 ,改良千里光注射液Ⅰ 荧
光强 ,斑点大 ,改良千里光注射液Ⅱ和Ⅲ分列其后。
生物碱的监测: 喷显色剂 (改良碘化铋钾 )以后 ,改良千里
光注射液Ⅲ呈现大而深的棕色斑点 ,Ⅱ和Ⅰ 分列其后。
2. 2　改良千里光注射液的安全性检查　红细胞检查 ,均未观
察到溶血和凝血现象 ;蛋白质检查 ,均未见混浊出现 ;鞣质检
查 ,均没有浑浊或沉淀形成。 刺激性试验时 ,改良千里光注射
液Ⅰ 使 1只供试兔左眼眼结膜轻度充血 , 1 h后症状消失 ;注
射液Ⅱ和Ⅲ分别使 1只供试兔左眼眼结膜充血 , 1. 5 h后症状
消失 ;其余供试兔均未见眼结膜红肿 ,角膜透明。 尾静脉注射
试验时 ,在 72 h内 ,供试小鼠均未见异常表现。
2. 3　改良千里光注射液的体外抑菌和体内抗感染试验
2. 3. 1　体外抑菌试验　结果见表 4。 由表 4可见 ,注射液Ⅰ
的体外抑菌作用最强 ,Ⅱ次之 ,Ⅲ最弱。
表 4　改良千里光注射液体外抑菌试验结果
　菌　　种 注射液Ⅰ 注射液Ⅱ 注射液Ⅲ
肠炎沙门氏菌 + + + +
大肠埃希氏菌 + + -
溶血性链球菌 + + +
金黄色葡萄球菌 + + + -
　　注:抑菌圈直径 < 10 mm为抗药 ( - ) ,直径 10. 1～ 15 mm为中度
敏感 (+ ) ,直径 15. 1～ 20 mm为高度敏感 (+ + )
2. 3. 2　体内抗感染试验　肠炎沙门氏菌的致死量为 0. 4
m L,大肠埃希氏菌为 0. 5 m L,金黄色葡萄球菌为 0. 6 m L,溶
血性链球菌为 0. 7 m L。 由表 5可见 ,改良千里光注射液Ⅰ 的
体内抗感染效果最好。 另外 ,注射液组供试鼠全部存活 ,且未
见任何毒性反应。
表 5　菌汤组及菌汤+ 注射液组小鼠死亡数 只
菌　　种 改良千里光注射液Ⅰ小剂量组 大剂量组
改良千里光注射液Ⅱ
小剂量组 大剂量组 菌汤组
肠炎沙门氏菌 2 1 3 2 4
大肠埃希氏菌 1 0 3 1 3
溶血性链球菌 2 1 3 0 4
金黄色葡萄球菌 2 0 4 1 5
3　讨论
　　黄酮类化合物是千里光的有效成分 ,生物碱可能也是其
有效成分之一 [5]。本试验在制备改良千里光注射液的过程中 ,
以获取黄酮类物质为主 ,兼顾生物碱。黄酮类物质的适宜乙醇
提取体积分数为 60% ～ 70% , p H值为 8;生物碱适宜的乙醇
提取体积分数为 95% , p H值为 3～ 5[6]。鞣质、蛋白质、色素等
杂质会造成中草药注射液澄明度差、稳定性弱 ,在存放期间出
现浑浊、沉淀 ,注射部位出现结块、红肿、疼痛、甚至坏死 ,以及
静脉注射造成 DIC等 ,因而尽可能除去这些杂质是注射液制
备过程中的重要一环。
由于改良千里光注射液Ⅰ 的体外抑菌作用最强 ,Ⅱ次之 ,
Ⅲ最弱 ,所以在体内抗感染试验中未将改良千里光注射液Ⅲ
列入。
参考文献:
[ 1 ]　全国中草药汇编编写组 .全国中草药汇编 (上册 ) [M ].北京:人
民卫生出版社 , 1975. 112～ 123.
[ 2 ]　浙江千里光协作组 .千里光抗菌作用的试验研究及临床疗效观
察 [ J ].中华医学杂志 , 1973, 10: 628～ 632.
[ 3]　杭州中药厂 ,浙江省药品检查所 .千里光注射液的标准规格和生
产操作规程 [ J] .中草药通讯 , 1971, 2: 23.
[ 4]　钱百炎 .中草药注射剂 [M ] .上海:上海科学技术出版社 , 1981.
[ 5]　陈进军 ,王建华 ,耿果霞 ,等 .千里光化学成分鉴定及体外抗菌试
验 [ J ].动物医学进展 , 1999, 20( 4): 35～ 37.
[ 6]　肖崇厚 .中药提取原理 [M ] .上海:上海科学技术出版社 , 1986. 7
～ 31.
Antibacterial Effects and Safety Assessment of Modified Injection from Senecio
scandens Buch. -Ham.
CHEN Jin-jun,W ANG Jian-hua, ZHO U Jing-ming　 (College of Aminal Science and
　Veterinary Medicine ,North western Science and Technology University of Agricul ture
　and Forestry ,Yangl ing , Shaanx i 712100,China )
　　 Abstract: Th ree kinds o f ethanol solutions o f Senecio scandens Buch. -Ham. w ere prepared. The high er content of e thano l
solution, regula ting acidity in ethano l solution and excluding pigment with ethy le the r w er e utilized and 3 kinds of modified injec-
tions w ere produced, respec tiv ely. The safety a ssessment as well as the antibacterial tests bo th in vivo and in v itro o f the modi-
fied injec tions w ere conducted. It w as found tha t the modified injections, especially th ose prepar ed with 78% ethano l solution
had the significant antibacte rial functions against Staphy lococcus aureus, Escherichia coli , Salmonella enteritidis and Streptococcus
hemolyticus bo th in vivo and in v itro w ithout any to xic and by-effects.
　　 Key words: modified injection fr om Senecio scandens Buch. -Ham. ; antibac teria l effects; safe ty; mouse; rabbit
609第 6期 陈进军等: 改良千里光注射液的体内外抗菌作用及安全性