全 文 ：书黔产千里光提取物总生物碱的含量测定及抗菌作用研究
饶 海1，周 镁2，秦拴梅2，黄秀平2，覃容贵2*
(1．贵阳市云岩区人民医院，贵州贵阳 550003;2．贵阳医学院药学院，贵州贵阳 550004)
摘要 ［目的］比较黔产千里光不同溶剂提取物总生物碱的含量及其抗菌作用。［方法］采用紫外可见分光光度法测定千里光中总生物
碱的含量，并采用牛津杯法观察各提取物的抗菌作用。［结果］采用紫外可见分光光度法测定千里光中总生物碱浓度在 0． 011 0 ～
0． 055 0 mg /ml范围内与吸光度的线性关系良好，回归方程为 Y =23． 654X +0． 021，平均回收率为 99． 2%，R =0． 999 9。千里光浓度 60%
醇提液总生物碱含量为 38． 71 mg /g，浓度 95%醇提液生物碱含量为 52． 25 mg /g，水煎液总生物碱含量为 60． 50 mg /g。浓度 60%乙醇提
取液对肺炎链球菌、金黄色葡萄球菌和大肠杆菌抑制作用较强; 水提液对大肠杆菌抑制作用较强;浓度 95%乙醇提取液抗菌作用较弱，
对绿脓杆菌无抑制作用。［结论］该方法准确、简便、重复性好，可用于黔产千里光中生物碱的含量测定;千里光提取物总生物碱的含量
与其抗菌作用无正相关关系。
关键词 千里光( Climbing Groundsel Herb) ;总生物碱;紫外可见分光光度法;抗菌作用
中图分类号 S567 文献标识码 A 文章编号 0517 －6611( 2013) 14 －06207 －03
Study on Determination of Content of Total Alkaloids in Different Extractive of Climbing groundsel Herb from Guizhou and Its Anti-
bacterial Action
RAO Hai et al ( Guiyang People’s Hospital of Yunyan District，Guiyang，Guizhou 550003)
Abstract ［Objective］To compare content of total alkaloids in different extractive of Climbing groundsel Herb from Guizhou and its antibacteri-
al action．［Method］The content of total alkaloids was measured by UV spectrophotometer． Oxford cup method was applied to observe the antibac-
terial action．［Result］The absorbance of total1 alkaloids was measured by UV spectrophotometer，the concentration of total alkaloids was linear in
the range of 0． 011 0-0． 0548 mg /ml，its regression equation was Y =23． 654X +0． 021，and its average recovery rate and correlation coefficient R
were 99． 2% and 0． 999 7． The contents of total alkaloids in 60%，95% alcohol and water extractive were 38． 71 mg /g，52． 25 mg /g and 60． 50
mg /g respectively． The extractive of 60% alcohol had strong antibacterial action on Streptococcus pneumoniae，Staphylococcus aureus and Escherich-
ia coli． The water extractive had strong antibacterial action on Escherichia coli． The antibacterial action was weak in extractive of 95% alcohol．
［Conclusion］This method is simple，accurate and reliable，which can be used for assaying of total alkaloids in Climbing groundsel Herb． There is
no positive correlation between the contents of total alkaloids in different extractive of Climbing groundsel Herb and their antibacterial activities．
Key words Climbing groundsel Herb; Total alkaloids; Ultraviolet spectrophotometry; Antibacterial action
基金项目 贵州省卫生厅县级医院临床科研能力建设项目 gzwxky2011
－ 1 － 022。
作者简介 饶海( 1968 － ) ，男，贵州贵阳人，副主任医师，硕士，从事中
医针灸临床研究，E-mail: raohairaohai@ 163． com。* 通讯作
者，教授，博士，从事中药资源及药理研究，E-mail: qinronggui
@ hotmail． com。
收稿日期 2013-04-17
千里光(Climbing Groundsel Herb)为菊科植物千里光
(Senecio scandens Buch． － Ham．)的干燥地上部分，性味苦、
寒，归肺、肝经，具有清热解毒、明目、利湿的功效，主治痈肿
疮毒、感冒发热、目赤肿痛、泄泻痢疾和皮肤湿疹等［1］。千里
光属植物中普遍含肝毒成分——— 吡咯里西啶类生物碱
(PAs) ，国外已有多篇文献报道因服用含 PAs的该属植物引
起肝损伤并出现死亡的临床案例［2］。我国千里光属中草药
品种的毒理学研究开展得很少，尚没有足够的研究数据来估
计相关品种的无毒剂量。为了保证用药安全，需要加强千里
光属植物的安全评价和毒理学基础研究。课题组前期研究
发现，黔产千里光不同溶剂提取物的毒性有较大差异。为明
确产生差异的原因，笔者对黔产千里光不同溶剂提取物的总
生物碱含量进行测定，以期为千里光的安全用药提供理论
依据。
1 材料与方法
1． 1 材料
1． 1． 1 研究对象。千里光药材，购自贵州同仁堂医药公司，
经贵阳医学院药学院药用植物学与生药学教研室覃容贵教
授鉴定为药典收载的千里光正品。
1． 1． 2 主要仪器。FA2004 电子天平，购自福州华志科上海
舜宇恒平学仪器有限公司;UV-2401 紫外可见分光光度计，
购自日本岛津公司。
1． 1． 3 主要试剂。苦参碱对照品，购自中国食品药品检定
研究院，批号 110805-200507;其他试剂均为分析纯，市售。
1． 2 方法
1． 2． 1 对照品的选择［3］。在预试验的基础上，选择苦参碱
为标准品。以无水甲醇为空白，作苦参碱标准品及千里光的
吸收曲线，结果发现千里光吸收曲线与苦参碱标准品的吸收
曲线相近，所以试验选择苦参碱为对照品，测定波长为
207 nm。
1． 2． 2 对照品溶液制备。精密称取苦参碱对照品 10． 95
mg，置 50 ml容量瓶中，用蒸馏水溶解，并稀释至刻度，即得
浓度为 0． 219 mg /ml的苦参碱标准品溶液，备用。
1． 2． 3 样品溶液的制备。(1)含量测定用样品溶液的制备。
精密称取适量黔产千里光样品置圆底烧瓶中，分别加入 30
ml浓度 60%乙醇、浓度 95%乙醇、水进行回流提取，收集提
取液，用旋转蒸发仪回收溶剂，挥干溶剂得到生物碱粗提物
浸膏，称量圆底烧瓶与浸膏的总重，计算出浸膏的量，然后用
无水甲醇溶解浸膏转移至 50 ml 容量瓶中，并用无水甲醇定
容。(2)抗菌作用检测用样品溶液的制备。称取适量黔产千
里光样品置圆底烧瓶中，分别加入 30 ml 浓度 60%乙醇、浓
度 95%乙醇、水进行回流提取，收集提取液，用旋转蒸发仪回
安徽农业科学，Journal of Anhui Agri． Sci． 2013，41(14):6207 － 6209 责任编辑 石金友 责任校对 卢瑶
DOI:10.13989/j.cnki.0517-6611.2013.14.079
收溶剂至无醇味，浓缩至 1 g /ml。
1． 2． 4 测定波长的选择。生物碱类化合物在 200 ～ 400 nm
区域内存在主要吸收峰，峰带 200 ～ 280 nm。将浓度 95%的
乙醇提取液用紫外可见分光光度计 200 ～ 400 nm 区域内扫
描，制作吸收图谱进行测定。取 1． 0 和 0． 5 ml 浓度为 0． 219
mg /ml的苦参碱标准品，在 190 ～400 nm扫描，选择最佳测定
波长。
1． 2． 5 方法学考察。(1)线性关系的考察。精密量取 0． 50、
1． 00、1． 50、2． 00和2． 50 ml苦参碱标准品溶液于10． 00 ml容
量瓶中，配制成浓度为 0． 011 0、0． 022 0、0． 033 0、0． 044 0 和
0． 055 0的系列梯度溶液，在 207 nm 波长处测定，以吸光度
(Y)对浓度(X)作图，计算回归方程。(2)精密度试验。于
50 ml容量瓶中精密量取 0． 4 ml 浓度 95%乙醇提取样品溶
液，置于 25 ml容量瓶中，并用无水甲醇定容，在同一条件下
重复测定 6次，计算 RSD。(3)稳定性试验。于 50 ml容量瓶
中精密量取 0． 4 ml浓度 95%乙醇提取样品溶液，置于 25 ml
容量瓶中，并用无水甲醇定容，于 1 h内测定其稳定性，计算
RSD。(4)重复性试验。精密称取 1． 000 g 千里光药材 5份，
按照“1． 2． 3”项下方法，制备 5 份浓度 95%乙醇提取样品溶
液，分别于 50 ml容量瓶中精密量取 0． 4 ml 置于 25 ml 容量
瓶中，并用无水甲醇定容，测定吸光度值，每份测定 3 次，并
计算 RSD。(5)加样回收试验。取已知总生物碱含量的千里
光药材0． 500 g，再精密加入105 ℃干燥至恒重的苦参碱对照
品适量，按“1． 2． 2”的方法制备供试品浓度 95%乙醇提取溶
液，共 9份，在 207 nm处测定，由回归方程计算回收率，并计
算 RSD。
1． 2． 6 千里光不同溶剂提取物样品测定。精密称取适量黔
产千里光样品置圆底烧瓶中，分别加入 30 ml 浓度 60%乙
醇、浓度 95%乙醇和水进行回流提取，依法测定不同溶剂提
取物总生物碱含量。
1． 2． 7 千里光不同溶剂提取物抗菌作用。吸取经熔化的营
养琼脂 20． 0 ml加到无菌平皿中，用水平放置使其凝固，作为
底层，取细菌营养肉汤培养物1． 0 ml，加入到50 ml冷却至50
℃的营养琼脂培养基内，迅速摇匀，取 4． 0 ml 覆盖底层培养
基，使其均匀分布，作为菌层，平放凝固后备用。在制作好的
含菌平板底部作好标记，在无菌操作下用灭菌镊子取牛津
杯，放置在相应的标记位置，使牛津杯底部与培养基表面紧
密接触。用无菌吸管分别吸取 290 μl 药液(浓度 60%乙醇
提取液、浓度95%乙醇提取液和水提液)注入各牛津杯，盖上
平皿盖，静置数分钟后，置 37 ℃培养箱内培养 16 ～ 18 h后，
观察试验结果。
2 结果与分析
2． 1 最佳波长的测定 图 1表明，千里光生物碱在波长 205
nm左右有最大吸收，而浓度 95%的乙醇提取液在波长 207
nm有最大吸收，故选择最佳测定波长为 207 nm。
2． 2 方法学考察 (1)线性关系的考察。计算得线性回归
方程为:Y =23． 654X +0． 021，R =0． 999 9。试验结果表明，千
里光中总生物碱浓度在 0． 011 0 ～0． 055 0 mg /ml范围内与吸
光度的线性关系良好。(2)精密度试验。计算得生物碱吸光
度的 RSD为 0． 72%(n =6) ，表明精密度良好。(3)稳定性试
验。计算得生物碱吸光度的 RSD为 2． 37%，表明供试品在 1
h内稳定。(4)重复性试验。计算得生物碱吸光度的 RSD为
1． 14%，表明重复性良好。(5)加样回收试验。由表 1可知，
平均回收率为 99． 2%，RSD 为 2． 78%，表明该方法准确、简
便、重复性好，可用于黔产千里光中生物碱的含量测定。
图 1 千里光生物碱的最大吸收图谱
表 1 加样回收试验结果
样品中总
生物碱的
含量∥mg
对照品
加入含量
mg
测得量
mg
回收率
%
平均回
收率
%
RSD
%
26． 13 20． 92 47． 11 100． 2 99． 2 2． 78
25． 79 20． 85 45． 87 96． 3
26． 33 20． 57 47． 62 103． 5
26． 88 26． 22 52． 41 97． 4
26． 75 26． 79 52． 72 97． 0
26． 22 26． 82 52． 77 99． 0
25． 99 31． 36 58． 28 103． 0
26． 45 31． 98 58． 62 101． 0
26． 92 31． 57 57． 32 96． 3
2． 3 千里光不同溶剂提取物的含量测定 由表 2 可知，水
提液中生物碱的含量最高，为 60． 50 mg /g;其次是浓度 95%
乙醇提取液中生物碱的含量，为 52． 25 mg /g;浓度 60%乙醇
提取液中的最低，为 38． 71 mg /g。
表 2 不同溶剂提取物含量测定结果(n =3)
样品
吸光度值
1 2 3
平均总生物
碱含量∥mg /g
浓度 60%乙醇提取液 0． 313 5 0． 312 0 0． 313 1 38． 71
浓度 95%乙醇提取液 0． 415 4 0． 418 1 0． 418 4 52． 25
水提液 0． 476 7 0． 479 8 0． 480 1 60． 50
2． 4 千里光不同溶剂提取物抗菌作用 由表 3 可知，浓度
60%乙醇提取液对肺炎链球菌、金黄色葡萄球菌和大肠杆菌
抑制作用较强;水提液对大肠杆菌抑制作用较强;浓度 95%
乙醇提取液抗菌作用较弱，对绿脓杆菌无抑制作用。
3 结论与讨论
(1)试验采用紫外可见分光光度法测定千里光中总生物
碱的含量，不加显色剂直接测定，λmax = 207 nm，测得生物碱
浓度在 0． 011 0 ～0． 055 0 mg /ml范围内与吸光度的线性关系
良好，回归方程为 Y = 23． 654X + 0． 021，平均回收率为
8026 安徽农业科学 2013 年
99． 2%，R =0． 999 7。该方法灵敏度高，结果准确、简便、重复 性好，可用于测定千里光中生物碱的含量。
表 3 千里光不同溶剂提取物抗菌作用(珚X ± S，n =3)
样品
抑菌圈直径∥mm
肺炎链球菌 大肠杆菌 金黄色葡萄球菌 绿脓杆菌
浓度 60%乙醇提取液 16． 5 ±0． 23 17． 5 ±0． 28 20． 5 ±0． 24 12． 2 ± ． 022
浓度 95%乙醇提取液 14． 2 ±0． 31 16． 8 ±0． 33 17． 6 ±0． 17 －
水提液 14． 8 ±0． 14 18． 5 ±0． 56 17． 7 ±0． 54 11． 5 ±0． 18
研究中黔产千里光样品溶液紫外最大吸收峰为 207 nm，
而高淑云等报道的麻叶千里光中生物碱样品紫外最大吸收
峰为 243 nm，提取试剂均为无水甲醇，试验采用回流提取，报
道采用的是索氏提取、微波 －超声波协同提取法，二者紫外
吸收峰的较大差异说明同属不同种的千里光所含生物碱可
能存在差异，含量测定方法应有所区别。
(2)由千里光不同溶剂提取物样品测定结果可知，总生
物碱含量的大小顺序为:水提液 ＞浓度 95%乙醇提取液 ＞浓
度 60%乙醇提取液;由千里光不同溶剂提取物抗菌作用结果
可知，抗菌作用的大小顺序为:浓度 60%乙醇提取液 ＞水提
液 ＞浓度 95%乙醇提取液。说明千里光抗菌作用与其总生
物碱含量不成正相关关系。陈进军等的体外抗菌试验结果
表明，千里光全草水煎剂及黄酮类提取物均有很强的抗菌作
用，黄酮类化合物是千里光的主要有效成分，生物碱可能也
是其有效成分之一［4 －5］。李华等的研究结果表明，黄酮类物
质和生物碱为千里光的主要有效成分，且千里光浓度 60%乙
醇提取物中未检出 PAs，可进一步提高千里光的安全性［6］。
试验结果显示，千里光浓度 60%乙醇提取液抗菌作用较强，
而生物碱含量较低，亦说明生物碱只是其抗菌作用有效成分
之一，而非主要有效成分，在抗菌作用中不占主导地位。
目前临床上以千里光组方的中成药品种数量较多，应用
较广。已经获得我国国家食品药品管理局批准的以千里光
组方的中成药品种有 27 种，其中内服制剂 19 种，已经被批
准为 OTC药物的品种有 12 种［2］。赵雍等研究表明，千里光
单味药及其复方均具有一定程度的胚胎毒性，主要表现为骨
骼发育异常等［7］。建议含千里光的复方制剂中千里光以浓
度 60%醇提物或水提物入药，可能增强复方制剂的抗菌
作用。
(3)谭道鹏等的研究结果表明，千里光中除吡咯里西啶
类生物碱外尚含有其他不同类型生物碱，其中分离得到的生
物碱类化合物可归为 3 类，分别为吡咯烷类生物碱(包含肝
毒性成分吡咯里西啶类生物碱)、有机胺类生物碱和异喹啉
类生物碱［8］。虽然千里光生物碱被认为是目前已知的最重
要的植物性肝毒成分，但临床和动物研究均发现其有一定的
抗肿瘤活性。尤其是其中的全缘千里光碱(Integerrimine) ，
其结构与临床治疗皮肤癌、宫颈癌、食道癌等的野百合碱
(Monocrotaline)及美国已进入临床研究的主要治疗白血病、
黑素瘤及胃肠道癌症的 N －氧 －去甲天荠菜碱(Indicine-N-
oxide)具相似性。研究表明，其对鳞状上皮癌有一定的抗癌
作用［9］。因此，如何提取千里光中具有抗肿瘤活性的生物
碱，除掉或降低提取物中肝毒性成分吡咯里西啶类生物碱值
得研究。试验结果表明，千里光浓度 60%乙醇提取液抗菌作
用较强，而生物碱含量较低支持李华等的研究结论，并可以
排除千里光中的 PAs，进一步提高千里光的安全性。试验比
较了千里光不同溶剂提取液的抗菌作用，对研究千里光提取
抗肿瘤活性生物碱除去肝毒性生物碱方法有一定参考价值。
同时，也提示仅以生物碱含量为指标研究千里光生物碱的提
取工艺是不完善的［3，9］，还应考虑生物碱中 PAs限量。
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902641卷 14期 饶 海等 黔产千里光提取物总生物碱的含量测定及抗菌作用研究