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不同采摘时期合苞橐吾的降血糖作用



全 文 :[收稿日期] 20140925(004)
[第一作者] 赵玉娟,在读硕士,主要从事长白山野生植物资源开发与利用研究,Tel:15043079980,E-mail:yujuan9988@ 126. com
[通讯作者] * 沈明浩,博士,教授,主要从事食品毒理与安全、胚胎毒理研究,Tel:13844168593,E-mail:shenmh2003@ 163. com
不同采摘时期合苞橐吾的降血糖作用
赵玉娟,李倩竹,刘乔,张梦莹,沈明浩*
(吉林农业大学 食品科学与工程学院,长春 130118)
[摘要] 目的:以不同采摘时期的长白山野生合苞橐吾为研究对象,通过测定小鼠的空腹血糖值、血清胰岛素含量、肝糖
原含量、肌糖原含量及糖耐量来研究其对小鼠的降血糖作用。方法:昆明种小鼠随机分为正常组、模型组、盐酸二甲双胍组
(125 mg·kg -1)、不同采摘时期合苞橐吾 1. 25 g·kg -1组(包括 5 月 15 日组,5 月 30 日组,6 月 15 日组,6 月 30 日组,7 月 15 日
组,7 月 30 日组,8 月 15 日组),每组 10 只,除正常组外,其余各组选用 200 mg·kg -1剂量对小鼠 ip灭菌生理盐水配制的 1%四
氧嘧啶溶液进行造模,造模 72 h,造模后以 0. 01 mL·g -1给药体积 ig,采用试剂盒测定小鼠空腹血糖、血清胰岛素、肝糖原、肌
糖原含量及糖耐量。结果:与正常组比较,模型组不同时间的小鼠空腹血糖值明显升高,胰岛素、肝糖原、肌糖原含量明显降
低,均具有明显统计学差异(P < 0. 05);与模型组比较,不同采摘时期的合苞橐吾能不同程度降低糖尿病小鼠的空腹血糖值,
增加肝糖原及肌糖原含量,并可在一定程度上缓解四氧嘧啶对小鼠胰岛 β细胞的损害作用(P < 0. 05)。另外,与正常组比较,
不同采摘时期的合苞橐吾可在不同程度上改善正常小鼠的糖耐量,其中以 6 月份采摘的合苞橐吾降血糖效果最为显著(P <
0. 05),给予 6 月 30 日合苞橐吾水煮液的小鼠血糖降低幅度高达 35. 66%。结论:说明不同采摘时期合苞橐吾对糖尿病小鼠
及正常小鼠均具有降血糖作用。
[关键词] 合苞橐吾;空腹血糖;胰岛素;肝糖原;肌糖原;糖耐量
[中图分类号] R285. 5 [文献标识码] A [文章编号] 1005-9903(2015)16-0157-05
[doi] 10. 13422 / j. cnki. syfjx. 2015160157
Hypoglycemic Effect of Ligularia schmidtii Picked at Different Times ZHAO Yu-juan,LI Qian-zhu,
LIU Qiao,ZHANG Meng-ying,SHEN Ming-hao* (College of Food Science and Engineering,Jilin Agriculture
University,Changchun 130118,China)
[Abstract] Objective:To study the hypoglycemic effect of wild Ligularia schmidtii (LS) picked in
Changbai Mountain at different times by detecting the fasting blood glucose,insulin,liver glycogen,muscle
glycogen and glucose tolerance in mice. Method:Totally 100 Kunming mice were randomly divided into the
normal group,the model group,the metformin hydrochloride group (125 mg·kg -1)and LSMM groups (1. 25 g·
kg -1)picked at different times (including plants picked on May 15,May 30,June 15,June 30,July 15,July 30,
August 15),with 10 mice in each group. Except for the normal group,all of the rest groups were intraperitoneally
injected with 200 mg·kg -1 sterilized saline water and 1% alloxan solution for 72 h to establish the model. After the
modeling,they were orally administered with drugs (0. 01 mL·g -1). The fasting blood glucose value,serum
insulin content,liver glycogen content,muscle glycogen content and glucose tolerance of mice were measured with
Appropriate kits. Result:Compared with the normal group,the model group showed significant increase in the
fasting blood glucose and decreases in insulin,liver glycogen and muscle glycogen content in mice at different time
points,all with significant statistical differences (P < 0. 05). Compared with the normal group,LS picked at
different times could decrease the fasting blood glucose and increase liver glycogen and muscle glycogen content in
diabetic mice to varying degrees and alleviate the damaging effect of alloxan on pancreatic islet β cells in mice to
some extent. Besides,compared with the normal group,it could also enhance glucose tolerance in normal mice to
varying degrees,with the most significant hypoglycemic effect in LS picked in June (P < 0. 05)as evidenced by its
blood glucose decrease by 35. 66% in LS picked on June 30. Conclusion:LS picked at different times have the
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hypoglycemic effect on both diabetic mice and normal mice.
[Key words] Ligularia schmidtii; fasting blood glucose; insulin; liver glycogen;muscle glycogen;
glucose tolerance
随着社会的发展和人们生活方式的改变,高血
脂、高血糖、高血压的人群比例越来越大,心血管疾
病和糖尿病成为威胁人类健康、引起死亡的两大杀
手。据报道,中国血脂异常人群达到 1. 6 亿,而与此
同时,高血糖、高血压患者比例也达到人口总数的
1 /4 之高[1]。常规的药物及技术治疗虽然能在一定
程度上控制患者病情的发展,但是这些化学药物及
技术所带来的副作用也无可避免,考虑到这种情况,
像橐吾这种药食同用的野生绿色蔬菜无疑受到人们
青睐。
橐吾属植物为菊科多年生草本植物,全世界约
129 种,中国约有 112 种,集中分布于秦岭—大巴
山—横断山—喜马拉雅山区域,长白山区是橐吾属
植物的次生分布中心之一[2]。部分橐吾属植物还
是延边地区著名的出口野菜和饲料植物,具有典型
的民族地域特色,同时也是朝鲜族及吉林省民间草
药,其根及根茎可入药,具有止咳化痰、祛风除湿等
功效[3]。合苞橐吾为橐吾属的一种,生于山坡草
地,稀疏的榨林下,灌丛间的湿地。近年来国内外对
橐吾属的分布、化学成分及药理作用等方面有不少
的研究报道,但就合苞橐吾而言,只有董然等[4-5]对
合苞橐吾光合生理变化及其光响应特征有所研究,
关于合苞橐吾的功效成分及功能性作用尚未见报
道。近期李诗语等[6]、孟庆海等[7]分别对不同采摘
时期蒲公英和不同种类的桑叶进行了降血糖作用的
研究,发现蒲公英跟桑叶都有不同效果的降血糖作
用,但均存在考察指标单一问题,本文以此为思路,
通过测定小鼠的空腹血糖值、血清胰岛素含量、肝糖
原含量、肌糖原含量及糖耐量来研究不同采摘时期
合苞橐吾对小鼠的降血糖作用,旨在为众多的高血
糖患者提供一种可食之材,为很好地预防和治疗糖
尿病提供依据。
1 材料
1. 1 动物 健康昆明种小鼠,体重 18 ~ 22 g,雌雄
各半,吉林大学实验动物中心提供,动物合格证号
SCXK(吉)2003-0001。
1. 2 药物及试剂 不同采摘时期(2013 年 5 月
15 日,2013 年 5 月 30 日,2013 年 6 月 15 日,2013
年 6 月 30 日,2013 年 7 月 15 日,2013 年 7 月 30
日,2013 年 8 月 15 日)的长白山野生合苞橐吾。
吉林农业大学园艺学院董然教授鉴定为合苞橐吾
Ligularia schmidtii的全草。四氧嘧啶(北京拜尔迪
生物公司,批号 Sigma7413),氯化钠(北京化工厂,
分析纯,批号 20130107),盐酸二甲双胍(中美上
海施贵宝制药有限公司,批号 14830732),葡萄糖
试剂盒(批号 20131207147),小鼠胰岛素(INS)试
剂盒(批号 20140601A),肝 /肌糖原试剂盒(批号
20140113),以上试剂盒均为南京建成生物工程研
究所产品。
1. 3 仪器 WD-2102A型自动酶标仪(北京市六一
仪器厂),722E 型分光光度计(上海色谱仪器有限
公司),EYELA A-1000S 型抽滤机(JAPAN),ZNHW
型智能恒温电热套(巩义市矛华仪器有限责任公
司),RE52-98 型旋转蒸发仪(上海亚荣生化仪器
厂)。
2 方法
2. 1 不同采摘时期合苞橐吾水煮液的制备[8] 将
不同采摘时期合苞橐吾阴干,超微粉碎,准确称取
10 g,加入蒸馏水 70 mL浸泡 0. 5 h,大火煮沸,转为
文火煮 0. 5 h,放冷过滤,残渣继续加蒸馏水 70 mL
浸泡,循环 3 次,合并滤液,旋转蒸发浓缩至 80 mL,
得到含生药 12. 5%的水煮液。
2. 2 不同采摘时期合苞橐吾水煮液对糖尿病小鼠
的降血糖作用
2. 2. 1 小鼠的分组及处理方法 取小鼠 100 只,放
入动物室内喂饲基础饲料观察 7 d,然后将其随机分
为正常组、模型组、盐酸二甲双胍组(125 mg·kg -1)、
实验组[包括 5 月 15 日采摘(5. 15)组,5 月 30 日采
摘(5. 30)组,6 月 15 日采摘(6. 15)组,6 月 30 日采
摘(6. 30)组,7 月 15 日采摘(7. 15)组,7 月 30 日采
摘(7. 30)组,8 月 15 日采摘(8. 15)组]。从建模成
功开始连续 ig 20 d,ig剂量为 1. 25 g·kg -1,ig 体积
为 0. 01 mL·g -1[9],正常组和模型组 ig 同等剂量的
蒸馏水,盐酸二甲双胍组 ig 同等剂量的盐酸二甲双
胍,实验组 ig对应采摘时期的样品。
2. 2. 2 糖尿病小鼠模型的建立[6-12] 除空白组外,
其他组均根据预实验要求,选用 200 mg·kg -1剂量
对小鼠 ip 灭菌生理盐水配制的 1%四氧嘧啶溶液。
72 h后,尾静脉采血,测定禁食 12 h 后小鼠的空腹
血糖值,取血糖值 > 6. 11 mmol·L -1的小鼠为模型
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小鼠。
2. 2. 3 指标的测定 从 ig开始,每 5 d测定一次血
糖值,ig第 20 天眼球取血后颈椎脱臼处死小鼠,摘
取肝脏和少量肌肉供肝糖原和肌糖原测定用。所取
血样 3 000 r·min -1离心 15 min,取上清测定胰岛素。
肝糖原、肌糖原及胰岛素的测定均采取试剂盒方法。
2. 3 不同采摘时期合苞橐吾水煮液对正常小鼠糖
耐量的影响 另取 80 只小鼠,随机分为正常组和实
验组(包括 5. 15 组,5. 30 组,6. 15 组,6. 30 组,7. 15
组,7. 30 组,8. 15 组),雌雄各半。在测定各组小鼠
的空腹血糖值后,实验组分别 ig 对应采摘时期的水
煮液,ig剂量 0. 01 mL·g -1,正常组 ig同等剂量的蒸
馏水。15 min后经口给予葡萄糖溶液 2. 0 g·kg -1,
给予葡萄糖后 0,0. 5,1,2 h 分别测定各组小鼠的血
糖值,观察模型组与实验组在给予葡萄糖后各时间
点血糖曲线下面积的变化[13]。
血糖曲线下面积 = 0. 25 ×(0 h 血糖值 + 4 × 0. 5 h 血糖
值 + 3 × 2 h血糖值)
2. 4 统计学分析 采用 SPSS 18. 0 统计软件进行
方差分析,计量资料用珋x ± s表示,组间差异采用 t检
验,以 P < 0. 05 为差异有统计学意义。
3 结果
3. 1 对糖尿病模型小鼠空腹血糖值的影响 在灌
胃给药阶段,正常组小鼠的空腹血糖值基本处于平
稳状态;模型组小鼠空腹血糖值在 0 ~ 15 d 呈现平
缓递增趋势,到 20 d 时有所降低;与同时间正常组
比较,模型组空腹血糖值明显升高(P < 0. 05);与同
时间模型组比较,不同采摘时期合苞橐吾水煮液组
及盐酸二甲双胍组明显降低小鼠空腹血糖值(P <
0. 05);不同采摘时期合苞橐吾水煮液组降低血糖
程度明显大于盐酸二甲双胍组。见表 1。血糖降低
率见图 1。
表 1 不同采摘时期合苞橐吾水煮液对糖尿病模型小鼠空腹血糖值的影响(珋x ± s,n = 10)
Table 1 Effects of decoction of Ligularia schmidtii in different picking periods on fasting blood sugar of diabetic mice (珋x ± s,n = 10)
组别 剂量 / g·kg -1
血糖 /mmol·L -1
0 d 5 d 10 d 15 d 20 d
正常 - 5. 63 ± 0. 29 5. 93 ± 0. 44 5. 76 ± 0. 43 6. 80 ± 0. 16 4. 95 ± 0. 42
模型 - 12. 34 ± 0. 421) 15. 79 ± 0. 831) 17. 42 ± 0. 591) 18. 08 ± 0. 561) 16. 25 ± 0. 171)
盐酸二甲双胍 0. 125 12. 36 ± 0. 102) 11. 86 ± 0. 382) 11. 65 ± 0. 442) 10. 86 ± 0. 532) 8. 75 ± 1. 022)
5. 15 组 1. 25 8. 96 ± 0. 682) 8. 90 ± 0. 652) 9. 24 ± 0. 362) 9. 07 ± 0. 292) 7. 51 ± 0. 352)
5. 30 组 1. 25 22. 26 ± 0. 382) 22. 16 ± 0. 382) 21. 43 ± 0. 462) 21. 35 ± 0. 412) 18. 62 ± 0. 522)
6. 15 组 1. 25 11. 70 ± 0. 452) 11. 48 ± 0. 402) 10. 00 ± 0. 442) 10. 67 ± 0. 692) 9. 15 ± 0. 952)
6. 30 组 1. 25 12. 62 ± 0. 252) 13. 15 ± 1. 222) 10. 16 ± 0. 262) 7. 34 ± 0. 672) 8. 12 ± 0. 812)
7. 15 组 1. 25 9. 52 ± 0. 282) 9. 40 ± 0. 282) 7. 86 ± 0. 622) 7. 90 ± 0. 412) 7. 35 ± 0. 422)
7. 30 组 1. 25 8. 45 ± 0. 362) 8. 33 ± 0. 412) 7. 41 ± 0. 222) 6. 83 ± 0. 772) 6. 87 ± 0. 982)
8. 15 组 1. 25 11. 89 ± 0. 242) 11. 70 ± 0. 232) 11. 62 ± 0. 682) 11. 30 ± 1. 262) 9. 62 ± 0. 422)
注:与同时间正常组比较1)P < 0. 05;与同时间模型组比较2)P < 0. 05(表 2 ~ 3 同)。
与正常组比较1)P < 0. 05;与模型组比较2)P < 0. 05
图 1 不同采摘时期合苞橐吾水煮液对小鼠血糖变化率的影响
(珋x ± s,n = 10)
Fig. 1 Effects of decoction of Ligularia schmidtiiin different picking
periods on change rate of blood sugar in mice (珋x ± s,n = 10)
3. 2 对糖尿病模型小鼠肝糖原、肌糖原和胰岛素含
量的影响 灌胃给药 20 d 后,与正常组比较,模型
组肝糖原含量、肌糖原含量、胰岛素含量明显降低
(P < 0. 05);与模型组比较,各给药组小鼠的肝糖原
含量均无显著性差异,6. 15 组,6. 30 组,7. 15 组的
小鼠肝糖原含量都有所增加,6. 30 组肝糖原含量的
增高程度普遍高于其他给药组,5. 30 组,8. 15 组的
小鼠肝糖原含量略有增加,但程度不明显。综上,
6 ~ 7 月份的合苞橐吾水煮液对肝糖原的增加效果
尤其明显,但与盐酸二甲双胍组相比还有一定差距。
与模型组比较,各给药组的肌糖原含量均有微量变
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化,其中 6 月份采摘的合苞橐吾水煮液总体上对小
鼠肌糖原的增加效果比较明显(P < 0. 05)。与模型
组比较,5 月 30 日,6 月 30 日采摘的合苞橐吾水煮
液明显增高糖尿病小鼠胰岛素含量(P < 0. 05)。但
升高小鼠的肝糖原、肌糖原及胰岛素含量不同采摘
时期合苞橐吾水煮液与盐酸二甲双胍组相比还有一
定差距。见表 2。
3. 3 对正常小鼠糖耐量的影响 给予不同采摘时
期合苞橐吾水煮液的各组小鼠的血糖曲线下面积均
明显低于模型组,这表明不同采摘时期的合苞橐吾
水煮液具有不同程度的降血糖作用,并在不同程度
上起到改善小鼠糖耐量的作用,其中以 6 月 30 日,7
月 15 日采摘的合苞橐吾水煮液对小鼠糖耐量的改
善最为明显。见表 3。
表 2 不同采摘时期合苞橐吾水煮液对糖尿病模型小鼠肝糖原、肌糖原和胰岛素含量的影响(珋x ± s,n = 10)
Table 2 Effects of decoction of Ligularia schmidtii in different picking periods on content of liver glycogen,muscle glycogen and serum insulin
of diabetic mice (珋x ± s,n = 10)
组别 剂量 / g·kg -1 肝糖原 /mg·g - 1 肌糖原 /mg·g - 1 胰岛素 /mU·L -1
正常 - 16. 27 ± 0. 52 6. 51 ± 1. 50 23. 80 ± 0. 44
模型 - 7. 74 ± 1. 501) 3. 48 ± 0. 611) 17. 58 ± 0. 721)
盐酸二甲双胍 0. 125 16. 28 ± 2. 242) 6. 27 ± 1. 012) 23. 10 ± 1. 012)
5. 15 组 1. 25 7. 44 ± 0. 30 3. 47 ± 0. 04 19. 57 ± 0. 422)
5. 30 组 1. 25 7. 78 ± 0. 55 4. 17 ± 0. 432) 23. 42 ± 0. 322)
6. 15 组 1. 25 8. 11 ± 0. 69 4. 65 ± 0. 612) 21. 86 ± 0. 312)
6. 30 组 1. 25 9. 00 ± 0. 46 4. 76 ± 0. 462) 23. 11 ± 0. 362)
7. 15 组 1. 25 8. 01 ± 1. 09 4. 04 ± 0. 002) 21. 14 ± 0. 59
7. 30 组 1. 25 7. 56 ± 0. 29 3. 22 ± 0. 22 21. 55 ± 0. 982)
8. 15 组 1. 25 7. 87 ± 0. 59 3. 73 ± 0. 29 18. 95 ± 0. 982)
表 3 不同采摘时期合苞橐吾水煮液对正常小鼠糖耐量的影响(珋x ± s,n = 10)
Table 3 Effects of decoction of Ligularia schmidtii in different picking periods on concentration of serum insulin of normal mice (珋x ± s,n = 10)
组别
剂量
/ g·kg -1
血糖 /mmol·L -1
空腹 0 h 0. 5 h 1 h 2 h
血糖曲线下面积
/mm2
正常 - 4. 74 ± 0. 08 6. 83 ± 0. 58 11. 38 ± 0. 52 8. 72 ± 0. 21 6. 01 ± 0. 36 17. 60 ± 1. 12
5. 15 组 1. 25 4. 45 ± 0. 28 8. 36 ± 1. 59 8. 25 ± 0. 171) 7. 34 ± 0. 441) 6. 10 ± 0. 94 14. 94 ± 1. 701)
5. 30 组 1. 25 4. 22 ± 0. 70 5. 32 ± 0. 82 7. 65 ± 0. 331) 6. 82 ± 0. 391) 5. 93 ± 0. 25 13. 40 ± 0. 741)
6. 15 组 1. 25 3. 77 ± 0. 16 5. 96 ± 0. 41 9. 16 ± 0. 481) 7. 19 ± 0. 151) 5. 52 ± 0. 48 14. 60 ± 0. 431)
6. 30 组 1. 25 3. 39 ± 0. 241) 5. 73 ± 0. 59 7. 77 ± 0. 331) 6. 10 ± 0. 321) 5. 14 ± 0. 21 12. 99 ± 0. 101)
7. 15 组 1. 25 3. 82 ± 0. 31 5. 91 ± 0. 15 7. 15 ± 0. 481) 6. 45 ± 0. 341) 4. 83 ± 0. 33 12. 42 ± 1. 011)
7. 30 组 1. 25 3. 89 ± 0. 68 6. 29 ± 0. 82 9. 95 ± 0. 361) 6. 80 ± 0. 441) 5. 13 ± 0. 41 14. 92 ± 1. 411)
8. 15 组 1. 25 3. 83 ± 0. 11 6. 12 ± 0. 23 9. 65 ± 0. 141) 7. 62 ± 0. 071) 6. 27 ± 0. 19 15. 88 ± 0. 431)
4 讨论
依据实验结果,不同采摘时期合苞橐吾水煮液
能不同程度降低糖尿病小鼠的空腹血糖值,增加其
肝糖原及肌糖原含量,并在一定程度上缓解四氧嘧
啶对小鼠胰岛 β细胞的损害作用;还可改善正常小
鼠的糖耐量。其中 6 月 30 日采摘的合苞橐吾的降
血糖水平达到了 35. 66%,比盐酸二甲双胍组盐酸
二甲双胍片的降糖作用还要明显;而在对肝糖原、肌
糖原及胰岛素含量的影响上,6 月 30 日采摘的合苞
橐吾水煮液对肝糖原、肌糖原及胰岛素含量的影响
均高与其他实验组,该组的肝糖原增高了 16. 27%,
肌糖原增高了 36. 78%,胰岛素增高了 31. 46%。由
图 1 血糖降低率曲线可以看出,在 5 月 15 日采摘的
合苞橐吾到 6 月 30 日采摘的合苞橐吾降血糖水平
呈递增趋势,到 6 月 30 日采摘的合苞橐吾降血糖水
平达到最大值 35. 66%,而后采摘的合苞橐吾降血
糖水平开始缓慢下降。出现这种结果,与前期研究
不同采摘时期合苞橐吾功效成分含量变化规律研究
相对应,前期研究发现,6 月份的合苞橐吾中黄酮类
物质含量、皂苷含量及多糖含量都相对其他月份的
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这些功效成分含量较高,这种情况与长白山气候及
合苞橐吾本身的生长规律密切相关,长白山地区属
于温带大陆性山地气候,冬季漫长,大概从 5 月份植
物开始冒尖发芽生长直至 8 月份逐渐开始凋谢,每
年的 6,7 月份日照相对较强,5,8 月日照强度较低,
而合苞橐吾适宜栽培于 50%遮阴环境下[5],故 6 月
份其因长势最旺,各种功效成分的蓄积性达到最高;
5 月中旬合苞橐吾还处于幼叶期,而 7,8 月份以后
其开始渐渐变老,叶片组织开始纤维化,幼叶和老叶
中的功效成分含量都比较低。由此笔者可以得出,6
月份的合苞橐吾功效成分含量高,适宜采摘。而又
有文献证明黄酮类物质、皂苷、多糖等物质都有降血
糖功效[6,14-19],推测合苞橐吾水煮液之所以具有降
血糖作用是因为这三类物质在发挥作用,具体成分
的单独降血糖作用及联合降血糖作用有待进一步
研究。
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[责任编辑 周冰冰]
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第 21 卷第 16 期
2015 年 8 月
中国实验方剂学杂志
Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae
Vol. 21,No. 16
Aug,2015