全 文 ：2015，Vol．18 No．4Journal of Guangxi University of Chinese Medicine
二去水卫矛醇（1，2：5，6－dianhydroga－lactitol，DAG）是以
从卫矛科植物蜜花美登木（Maytenus confertiflorus J．Y．Lao ex
X．X．Chen）中分离出的卫矛醇［1］（dulcitol）为原料，经溴化、消
除反应而制得的 1，6－二溴卫矛醇（1，6－dibromidulcitol）的双
环氧化物，是新型的植物生物碱类抗肿瘤药，它与烷化剂形成
交叉耐药，结构上可归为烷化剂类，为广谱抗肿瘤药物，具有
毒性小、易溶于水、抗肿瘤活性高等优点。早期临床试验表明，
DAG对慢性粒细胞白血病、肺癌、原发性脑瘤、人胃癌细胞、
人鼻咽癌细胞、人肺癌细胞、肾上腺肿瘤、膀胱癌、胃肠道肿瘤
实体瘤等均有抑制作用［2－7］。另外，还有研究表明 DAG是周
期非特异性药物，它可以与某些周期特异性药产生协同作
用［8］。而 DAG对人卵巢癌抑制作用及分子机制的研究在国
内外尚未见详尽报道。为此，本实验通过噻唑蓝（MTT）比色法
和 CCK－8法检测 DAG对人卵巢癌的体外抗肿瘤活性，为扩
大其抗瘤谱及进一步进行结构改造、分子机制研究提供依据。
1 材料与方法
1．1 药物与细胞株 二去水卫矛醇由广西梧州制药（集团）
股份有限公司提供，临用前用完全培养基液配成所需浓度；
RPMI 1640、胎牛血清（FBS）、0．25％胰蛋白酶溶液均购于赛默
飞世尔生物化学制品（北京）有限公司；磷酸盐缓冲液（PBS，
0．01 mol ／ L）是福州迈新生物技术开发有限公司产品；青链
霉素混合液（100 U ／ ml）和噻唑蓝（MTT）均是北京索莱宝科技
有限公司产品；CCK－8溶液是上海尚宝科技有限公司产品；
人卵巢癌细胞 A2780和 SKOV3购自中科院上海细胞库。
1．2 主要仪器设备 CO2培养箱（Thermo Fisher scientific，
USA）；酶标仪（Tecan Austria GmbH）；倒置显微镜（重庆光学
仪器厂出品）。
1．3 细胞的培养 先配好含 10％胎牛血清和青链霉素混合
液（终浓度为青霉素 100 IU ／ ml，链霉素 100 μg ／ ml）的 RPMI
1640完全培养液，然后用此完全培养液于 37 ℃、5％ CO2培
养箱中培养人卵巢癌细胞 A2780和 SKOV3，细胞贴壁生长，
隔天换液，待细胞长至覆盖瓶底的 80％左右时，用 0．25％胰蛋
白酶溶液消化传代。取状态良好的长至对数生长期的细胞用
于后续细胞增殖抑制实验。
1．4 MTT试验方法 收集对数生长期的 A2780和 SKOV3细
胞，调整细胞密度，以每孔 100 μl、5×103 个细胞接种于96
孔板里，置于 37 ℃、5％ CO2 培养箱中培养 24 h，以细胞
培养基为空白对照，A2780、SKOV3 细胞的其他组分别加
入6 μg ／ ml、12 μg ／ ml、24 μg ／ ml、48 μg ／ ml、96 μg ／ ml DAG
完全培养液 100 μl，同时每组设 5个复孔，处理完后置于 37 ℃、
5％ CO2培养箱中继续培养 72 h后，倒置显微镜下观察细胞
形态，并于每孔中加入 20 μl的 MTT溶液，放入 CO2培养箱
中继续培养 4 h，弃去培养液，每孔加入 150 μl DMSO溶液显
色，振荡10 min，使孔内溶液颜色均匀，于 570 nm波长酶标仪
测定吸光度值（OD）。实验重复 3次，取平均值为最终结果。按
下式计算细胞增殖抑制率：
细胞增殖抑制率＝1－实验组平均 OD值 ／空白对照组平均
OD 值×100％，计算细胞生长抑制达 50％的 DAG 浓度，以
72 h－IC50表示。
1．5 CCK－8试验方法 细胞处理情况与 MTT法相似，待培
养细胞，给药处理 72 h后，同样于倒置显微镜下观察细胞形
态，将每孔培养液混合均匀，吸出 100 μl弃去，并于每孔中加
入 10 μl的 CCK－8溶液，放入 CO2培养箱中继续培养，待 1．5 h
后观察显色情况，于 450 nm波长酶标仪测定吸光度值（OD）。
实验重复 3次，取平均值为最终结果，计算细胞增殖抑制率。
2 结果与分析
2．1 两种方法测定结果 MTT 法测定不同浓度 DAG 对
A2780及 SKOV3细胞作用 72 h后的 OD值及细胞增殖抑制
率见表 1，CCK－8法测定不同浓度 DAG对 A2780及 SKOV3
细胞作用 72 h后的 OD值及细胞增殖抑制率见表 2。通过
收稿日期：2015－10－22
二去水卫矛醇对人卵巢癌细胞的体外抑制作用
周 莹 1，刘华钢 1，苏桂玉 2，彭晓丽 2
（1．广西医科大学，广西 南宁 530022；2．广西中医药大学，广西 南宁 530001）
摘 要：［目的］研究二去水卫矛醇（1，2：5，6－dianhydroga－lactitol，DAG）对人卵巢癌细胞 A2780和 SKOV3增殖的抑制作
用。［方法］采用噻唑蓝（MTT）比色法和 CCK－8（cell counting kit－8）法检测不同浓度 DAG对人卵巢癌细胞 A2780和 SKOV3的
体外抑制作用，观察 DAG的半数抑制浓度。［结果］MTT法检测结果显示，DAG对人卵巢癌细胞 A2780、SKOV3作用 72 h后半
数抑制浓度（72 h－IC50）分别为 19．97 μg／ml、22．57 μg／ml；而 CCK－8法检测结果显示，DAG对人卵巢癌细胞 A2780、SKOV3作用
72 h后 72 h－IC50分别为 15．15 μg／ml、16．15 μg／ml。显微镜下可见 DAG 72 h作用后细胞圆缩、胞质浓缩、胞浆内颗粒集中边缘化
甚至细胞溶解等损伤现象。［结论］DAG在体外对人卵巢癌细胞 A2780和 SKOV3均有抑制生长作用。
关键词：二去水卫矛醇；人卵巢癌细胞；噻唑蓝试验；CCK－8法；半数抑制浓度
中图分类号：R285．5 文献标识码：A 文章编号：2095－4441（2015）04－0066－02
66· ·
2015年 第 18卷 第 4期 广西中医药大学学报
SPSS19．0 软件计算 DAG 对两种细胞的半数抑制浓度（IC50）
值。表 1、表 2结果看出，经不同浓度 DAG作用 72 h后，上述
实验组的 OD值与空白对照组相比均呈下降趋势，且有明显
的浓度－效应关系。说明 DAG对以上两株人卵巢癌细胞均有
抑制生长作用。两种测定方法的结果显示，CCK－8法的灵敏
度和准确度较高，且重复性优于 MTT法。
2．2 细胞形态观察结果 DAG 作用于 A2780 和 SKOV3 细
胞 72 h后，在倒置显微镜下观察，各实验组细胞均不同程度
出现贴壁能力减弱、细胞圆缩、胞质浓缩、胞浆内颗粒集中边
缘化甚至细胞溶解等损伤现象，而空白对照组细胞均生长良
好，细胞形态完整，胞质透亮。
3 结 论
本文初步探讨了 DAG对人卵巢癌细胞的体外抑制作用，
结果表明，DAG对 A2780、SKOV3两株人卵巢癌细胞均有抑
制生长作用，且具有明显的浓度－效应关系。但 DAG诱导人
卵巢癌细胞凋亡所发生的基因、蛋白表达谱变化，体内抑制人
卵巢癌效果等有待于下一步深入研究，以便于发现新的作用
靶点，对其进行相应的结构改造，开发抗肿瘤靶向制剂。
参考文献
［1］Shirota O，Morita H，Takeya K，et al．Isolation of antitumor
substance，dulcitol，from Maytenus eben lia［J］． Natural
Medicines，1998，52（2）：184－186．
［2］樊亦军，韦焕营，邢邦华，等．1，2：5，6－二去水卫矛醇抗肿
瘤作用及毒性［J］．华西药学杂志，1987，2（3）：161－165．
［3］ Lin B J，Tao R F． New druds of dianhydrogalactitol to
chronic granulocyte leukemia［J］．New Medicine，1980，11
（12）：619－620．
［4］Eagan R T，Ingle J N，Frytak S，et al．Platinum－based poly－
chenmotherapy versus dianhydrogalactitol in advanced non－
small cell lung cancer［J］．Cancer Treat Rep，1977，61（7）：
1339－1345．
［5］Robert T，Eagan，Edward T，et al．PhaseII Studies of dianhy－
drogalactitol－based combination chemotherapy for recurrent
brain tumors［J］．Oncology，1981，38（1）：4－6．
［6］Zhang H L，Wang J N，Liang S，et al．Inhibition effect of
1，2：5，6－dianhydrogalctitol on four different kinds of tumor
cells in vitro［J］．Guangxi Scienses，2013，20（1）：82－84．
［7］曹林枝，滕少康，廖志红，等．双脱水二乙酰卫矛醇对 3种
肝癌细胞生长的影响［J］． 广西医科大学学报，2007，24
（4）：572－574．
［8］Fan Y J，Zhou J，Li M，et al．Experimental study of 1，2：
5，6－dianhydrogalactitol and maytenus on combinations［J］．
Acta Pharmaceutica Sinica，1983，18（9）：648－652．
（编辑 陈明伟）
6 1．02±0．03 0．24 1．23±0．03 0．23
12 0．89±0．04 0．34 19．97 1．19±0．02 0．26 22．57
24 0．65±0．03 0．51 0．94±0．02 0．41
48 0．24±0．03 0．82 0．50±0．03 0．69
96 0．01±0．01 0．99 0．09±0．02 0．94
0 1．35±0．02 0．00 1．60±0．04 0．00
OD
抑制率
（％）
72 h－IC50
（μg／ml）
OD
抑制率
（％）
72 h－IC50
（μg／ml）
DAG
（μg／ml）
A2780 SKOV3
表 1 MTT法测定不同 DAG浓度对人卵巢癌细胞 A2780、SKOV3细胞增殖的影响 （x±s，n＝5）
6 0．66±0．01 0．25 0．85±0．00 0．22
12 0．46±0．02 0．47 15．15 0．64±0．01 0．41 16．15
24 0．25±0．01 0．71 0．40±0．01 0．63
48 0．12±0．02 0．86 0．20±0．02 0．81
96 0．03±0．01 0．96 0．12±0．01 0．89
0 0．88±0．01 0．00 1．09±0．01 0．00
OD
抑制率
（％）
72 h－IC50
（μg／ml）
OD
（μg／ml）
抑制率
（％）
72 h－IC50
（μg／ml）
A2780 SKOV3
DAG
（μg／ml）
表 2 CCK－8法测定不同 DAG浓度对人卵巢癌细胞 A2780、SKOV3细胞增殖的影响 （x±s，n＝5）
67· ·