全 文 ：收稿日期：２０１１－０１－０７
作者简介：张慧玲（１９８５－），女，硕士研究生，主要从事抗肿瘤药物与药物
毒理研究。
＊通讯作者：刘华钢，女，教授，博士生导师，主要从事药物毒理学与抗
肿瘤药物研究。Ｅ－ｍａｉｌ：ｌｈｇ＠ｇｘｆｄａ．ｇｏｖ．ｃｎ。
广西科学Ｇｕａｎｇｘｉ　Ｓｃｉｅｎｃｅｓ　２０１３，２０（１）：８２～８４
二去水卫矛醇对四种肿瘤细胞的体外抑制作用
Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ　Ｅｆｆｅｃｔ　ｏｆ　１，２：５，６?ｄｉａｎｈｙｄｒｏｇａｌａｃｔｉｔｏｌ　ｏｎ
Ｆｏｕｒ　Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　Ｋｉｎｄｓ　ｏｆ　Ｔｕｍｏｒ　Ｃｅｌｓ　ｉｎ　Ｖｉｔｒｏ
张慧玲１，王稼农２，梁　霜１，刘华钢１＊
ＺＨＡＮＧ　Ｈｕｉ－ｌｉｎｇ１，ＷＡＮＧ　Ｊｉａ－ｎｏｎｇ２，ＬＩＡＮＧ　Ｓｈｕａｎｇ１，ＬＩＵ　Ｈｕａ－ｇａｎｇ１
（１．广西医科大学药学院，广西南宁　５３００２１；２．广西食品药品检验所，广西南宁　５３００２１）
（１．Ｐｈａｒｍａｃｙ　Ｃｏｌｅｇｅ，Ｇｕａｎｇｘｉ　Ｍｅｄｉｃａｌ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｎａｎｎｉｎｇ，Ｇｕａｎｇｘｉ，５３００２１，Ｃｈｉｎａ；
２．Ｇｕａｎｇｘｉ　Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ　ｆｏｒ　Ｆｏｏｄ　ａｎｄ　Ｄｒｕｇ　Ｃｏｎｔｒｏｌ，Ｎａｎｎｉｎｇ，Ｇｕａｎｇｘｉ，５３００２１，Ｃｈｉｎａ）
摘要：采用噻唑蓝（ＭＴＴ）比色法检测不同浓度二去水卫矛醇（ＤＡＧ）对人胃癌细胞ＳＧＣ－７９０１、人肺癌细胞
Ｈ４６０、人鼻咽癌细胞ＣＮＥ和人肝癌细胞ＢＥＬ－７４０４的抑制率研究ＤＡＴ对４种肿瘤细胞的体外抑制作用。结果
表明，ＤＡＧ对４种癌细胞：ＣＮＥ、Ｈ４６０、ＳＧＣ－７９０１和ＢＥＬ－７４０４有较强的抑制作用，作用７２ｈ后半数抑制浓度
（７２ｈ－ＩＣ５０）分别为４．１２μｇ·ｍｌ
－１，１５．９８μｇ·ｍｌ
－１，１６．００μｇ·ｍｌ
－１和１６．７３μｇ·ｍｌ
－１。显微镜下可见经药物作
用后细胞圆缩、胞质浓缩、胞浆内颗粒集中边缘化甚至细胞溶解等损伤现象。ＤＡＧ在体外对上述４种癌细胞有
明显的抑制生长作用。
关键词：二去水卫矛醇　肿瘤细胞　ＭＴＴ试验　生长抑制
中图法分类号：Ｒ９６５．１，Ｒ７３－３５＋４，Ｑ２－３３　　文献标识码：Ａ　　文章编号：１００５－９１６４（２０１３）０１－００８２－０３
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｔｈｅ　ｍｅｔｈｙｌ　ｔｈｉａｚｏｌｙｌ　ｔｅｔｒａｚｏｌｉｕｍ （ＭＴＴ）ｃｏｌｏｒｉｍｅｔｒｙ　ｅｓｓａｙ　ｗａｓ　ａｄｏｐｔｅｄ　ｔｏ　ｔｅｓｔ　ｔｈｅ
ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ　ｅｆｆｅｃｔｓ　ｏｆ　１，２：５，６－ｄｉａｎｈｙｄｒｏｇａｌａｃｔｉｔｏｌ（ＤＡＧ）ｏｎ　ｈｕｍａｎ　ｇａｓｔｒｉｃ　ｔｕｍｏｒ　ＳＧＣ－７９０１，
ｌｕｎｇ　ｔｕｍｏｒ　ｃｅｌ　Ｈ４６０，ｎａｓｏｐｈａｒｙｎｇｅａｌ　ｃａｒｃｉｎｏｍａ　ｃｅｌ　ＣＮＥ　ａｎｄ　ｌｉｖｅｒ　ｃａｎｃｅｒ　ＢＥＬ－７４０４，ｗｈｉｃｈ
ｗｅｒｅ　ｅｘｐｏｓｅｄ　ｔｏ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ　ｏｆ　ＤＡＧ．Ｔｈｅ　ｒｅｓｕｌｔｓ　ｓｈｏｗｅｄ　ｔｈａｔ　ＤＡＧ　ｈａｄ　ｐｏｔｅｎｔｉａｌ
ａｎｔｉｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｖｅ　ａｃｔｉｖｉｔｙ　ｏｎ　ｔｈｅｓｅ　４ｔｙｐｅｓ　ｏｆ　ｈｕｍａｎ　ｔｕｍｏｒ　ｃｅｌｓ，ｔｈｅ　ＩＣ５０ｖａｌｕｅ　ｏｆ　ＤＡＧ　ｔｒｅａｔｍｅｎｔ
ｆｏｒ　７２ｈｗａｓ　４．１２μｇ·ｍｌ
－１，１５．９８μｇ·ｍｌ
－１，１６．００μｇ·ｍｌ
－１　ａｎｄ　１６．７３μｇ·ｍｌ
－１ｆｏｒ　ＣＮＥ
ｃｅｌｓ，Ｈ４６０ｃｅｌｓ，ＳＧＣ－７９０１ｃｅｌｓ　ａｎｄ　ＢＥＬ－７４０４ｃｅｌｓ，ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．Ｔｈｅ　ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｉｃ　ｏｂｓｅｒｖａｔｉｏｎ
ｓｈｏｗｅｄ　ｔｈｅ　ｃｅｌ　ｄａｍａｇｅｓ　ｓｕｃｈ　ａｓ　ｃｅｌｓ　ｃｉｒｃｕｌａｒ　ｒｅｔｒａｃｔｅｄ，ｃｅｌ　ｍａｔｒｉｘ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｅｄ，ｇｒａｎｕｌｅｓ　ｏｆ　ｉｎ－
ｎｅｒ　ｃｅｌｕｌａｒ　ｇａｔｈｅｒｅｄ　ａｎｄ　ｍａｒｇｉｎａｌｉｚｅｄ　ｅｖｅｎ　ｃｙｔｏｌｙｓｉｓ　ａｆｔｅｒ　ｔｈｅ　ｄｒｕｇ　ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ．ＤＡＧ　ｈａｓ
ｐｏｔｅｎｔｉａｌ　ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ　ｅｆｆｅｃｔ　ｏｎ　ｔｈｅ　ｆｏｕｒ　ｋｉｎｄｓ　ｏｆ　ｔｕｍｏｒ　ｃｅｌｓ　ａｂｏｖｅ－ｍｅｎｔｉｏｎｅｄ　ｉｎ　ｖｉｔｒｏ．
Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ：１，２：５，６－ｄｉａｃｅｔｙｌｇａｌａｃｔｉｔｏｌ，ｔｕｍｏｒ　ｃｅｌｓ，ＭＴＴ　ｅｓｓａｙ，ａｎｔｉｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｖｅ　ａｃｔｉｖｉｔｙ
　　二去水卫矛醇（１，２：５，６–ｄｉａｎｈｙｄｒｏｇａｌａｃｔｉｔｏｌ，
ＤＡＧ）是以主产于广西的卫矛科植物蜜花美登木
（Ｍａｙｔｅｎｕｓ　ｃｏｎｆｅｒｔｉｆｌｏｒｕｓ　Ｊ．Ｙ．Ｌａｏ　ｅｘ　Ｘ．Ｘ．Ｃｈｅｎ）
中分离出的卫矛醇（ｄｕｌｃｉｔｏｌ）［１］为原料，经溴化、消除
反应而制得的１，６－二溴卫矛醇（１，６－ｄｉｂｒｏｍｉｄｕｌｃｉ－
ｔｏｌ）的双环氧化物，具有易溶于水，抗肿瘤活性高等
优点［２］，是新型的植物生物碱类抗肿瘤药。ＤＡＧ对
慢性粒细胞白血病有较好的近期疗效，对肺癌、胃肠
道肿瘤、原发性脑瘤等也有一定疗效［３］。关于ＤＡＧ
的文献报道，对其前体药物卫矛醇及相关衍生物的报
道比较少而且多集中在对血液肿瘤的研究［４～１０］，对
ＤＡＧ其他可能的抗肿瘤作用以及分子机制研究在国
内外尚未见详尽报道。近年来大量研究表明生物碱
抗肿瘤作用机制的研究有助于发现靶向制剂，如靶向
作用于细胞周期、细胞凋亡、微管、多药耐药等方
面［１１］，同时，也能给联合用药提供理论基础。为此，
本研究采用噻唑蓝（ＭＴＴ）比色法检测ＤＡＧ体外抗
肿瘤活性，为扩大其抗瘤谱并进一步做结构改造和进
２８ Ｇｕａｎｇｘｉ　Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｖｏｌ．２０Ｎｏ．１，Ｆｅｂｒｕａｒｙ　２０１３
DOI:10.13656/j.cnki.gxkx.2013.01.013
行分子机制研究提供依据。
１　材料与方法
１．１　药物与细胞株
　　二去水卫矛醇由广西梧州制药（集团）股份有限
公司提供，批号：１２０３０２；临用前用完全培养基液配成
所需浓度。ＲＰＭＩ　１６４０培养基是赛默飞世尔生物化
学制品（北京）有限公司产品，批号：ＮＸＡ０５４７。胎牛
血清是赛默飞世尔生物化学制品（北京）有限公司产
品，批号：ＮＶＡ０２２７。０．２５％胰蛋白酶（１×）溶液是
赛默飞世尔生物化学制品（北京）有限公司产品，批
号：ＮＷＧ０４４７。磷酸盐缓冲液（ＰＢＳ，０．０１ｍｏｌ·Ｌ－１）
是福州迈新生物技术开发有限公司产品，批号：
１１１１０８０１０１。青链霉素混合液（１００×）是北京索莱宝
科技有限公司产品，批号：２０１２０３２１。噻唑蓝（ＭＴＴ）
是北京索莱宝科技有限公司产品，批号：Ｍ８１８０。
　　人胃癌细胞ＳＧＣ－７９０１、人鼻咽癌细胞ＣＮＥ、人
肝癌细胞ＢＥＬ－７４０４和人肺癌细胞 Ｈ４６０购自中科
院上海细胞库。
１．２　主要仪器设备
　　倒置显微镜：重庆光学仪器厂出品，型号 ＸＤＳ－
１Ｂ。ＣＯ２培养箱：Ｔｈｅｒｍｏ　Ｆｉｓｈｅｒ　ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，ＵＳＡ，型
号３１１。酶标仪：Ｔｅｃａｎ　Ａｕｓｔｒｉａ　ＧｍｂＨ，型号Ｓｕｎ－
ｒｉｓｅ。
１．３　细胞培养方法
　　将细胞用含１０％胎牛血清和青链霉素混合液
（终浓度为青霉素１００ＩＵ·ｍｌ－１，链霉素１００μｇ·
ｍｌ－１）的 ＲＰＭＩ１６４０完全培养液培养在３７℃，５％
ＣＯ２培养箱中，隔天换液，待细胞长至覆盖培养瓶
８０％左右用０．２５％胰蛋白酶溶液消化传代。取生长
至对数生长期的细胞用于实验。
１．４　ＭＴＴ试验方法
　　取对数生长期的ＳＧＣ－７９０１、ＣＮＥ、ＢＥＬ－７４０４和
Ｈ４６０细胞，分别以每孔６×１０３、５×１０３、７×１０３和６
×１０３个细胞接种于９６孔板，置于ＣＯ２培养箱中，（３７
±１）℃、５％ＣＯ２条件下培养２４ｈ。弃去培养液，在上
述各细胞中分别加入０．５μｇ·ｍｌ
－１，１．０μｇ·ｍｌ
－１，２．
０μｇ·ｍｌ
－１，４．０μｇ·ｍｌ
－１，８．０μｇ·ｍｌ
－１，１２．０μｇ·
ｍｌ－１，１６．０μｇ·ｍｌ
－１，２０．０μｇ·ｍｌ
－１，２４．０μｇ·ｍｌ
－１
ＤＡＧ完全培养液，同时设空白对照组，每组设５个复
孔，其余边缘孔以灭菌ＰＢＳ填充满，置于ＣＯ２培养箱
中继续培养７２ｈ。倒置显微镜下观察细胞形态，并
于每孔中加入 ＭＴＴ溶液２０μｌ，继续置于培养箱中，
４ｈ后终止培养。倾去培养液，每孔加入 ＤＭＳＯ
２００μｌ显色，置振荡器适度水平振荡１０ｍｉｎ，使孔内溶
液颜色均匀。用酶标仪测定吸光度值 （ＯＤ），采用双
波长测定，测定波长为５７０ｎｍ，参比波长为６３０ｎｍ。
按下式计算７２ｈ抑制率：
　　抑制率＝（１－实验组平均ＯＤ 值÷对照组平均
ＯＤ 值）×１００％，计算细胞生长抑制达５０％的ＤＡＧ
浓度，以７２ｈ－ＩＣ５０ 表示。在倒置显微镜下观察细胞
形态的变化。
２　结果与分析
２．１　ＩＣ５０测定结果
　　不同浓度的ＤＡＧ对ＳＧＣ－７９０１，ＣＮＥ，ＢＥＬ－７４０４
及 Ｈ４６０细胞作用７２ｈ的ＯＤ 值及细胞增殖抑制率
见表１。表１结果显示，经不同浓度ＤＡＧ作用７２ｈ
后，上述肿瘤细胞的ＯＤ 值与对照组相比均呈下降趋
势，且有明显的浓度－效应关系。
表１　不同ＤＡＧ浓度下ＣＮＥ，Ｈ４６０，ＳＧＣ?７９０１，ＢＥＬ?７４０４细胞的ＯＤ值及细胞生长抑制率（ｎ＝５）
Ｆｉｇ．１　ＯＤ　ｖａｌｕｅ　ａｎｄ　ｃｅｌ　ｇｒｏｗｔｈ　ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ　ｒａｔｅ　ｏｆ　ＣＮＥ，Ｈ４６０，ＳＧＣ?７９０１ａｎｄ　ＢＥＬ?７４０４ｃｅｌｓ　ｉｎ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ＤＡＧ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ
ＣＮＥ　 Ｈ４６０ ＳＧＣ－７９０１ ＢＥＬ－７４０４
ＤＡＧ
（μｇ·ｍｌ－１） ＯＤ（珚ｘ±ｓ）
抑制率
Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ
ｒａｔｅ（％）
ＯＤ（珚ｘ±ｓ）
抑制率
Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ
ｒａｔｅ（％）
ＯＤ（珚ｘ±ｓ）
抑制率
Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ
ｒａｔｅ（％）
ＯＤ（珚ｘ±ｓ）
抑制率
Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ
ｒａｔｅ（％）
０．０　 １．３９８±０．１９ ／ １．７６０±０．２６ ／ １．７３３±０．１１ ／ １．８４３±０．２５ ／
０．５　 １．１８３±０．１１　 １５．３８
１．０　 １．０２３±０．０９　 ２６．８４
２．０　 ０．８８０±０．１１　 ３７．０６　 ０．９９８±０．０６　 ４３．３０　 １．３６７±０．１０　 ２１．１４　 １．５４４±０．１９　 １６．２４
４．０　 ０．６６２±０．０７　 ５２．６３　 ０．９０９±０．０６　 ４８．３８　 １．１９５±０．１０　 ３１．０１　 １．４７５±０．２０　 １９．９４
８．０　 ０．３６４±０．０７　 ７３．９５　 ０．８２７±０．０４　 ５３．０４　 １．１４９±０．１２　 ３３．６８　 １．３３７±０．１３　 ２７．４４
１２．０　 ０．２３７±０．０６　 ８３．０６　 ０．７００±０．０４　 ６０．２４　 １．１６７±０．１５　 ３６．６７
１６．０　 ０．１９６±０．０５　 ８５．９５　 ０．４８７±０．０６　 ７２．３６　 ０．７０８±０．０７　 ５９．１６　 ０．８７５±０．１５　 ５２．５１
２０．０　 ０．３４９±０．０２　 ７９．８８　 ０．４９３±０．１１　 ７３．２４
２４．０　 ０．２６５±０．０４　 ８４．６８　 ０．２１９±０．０８　 ８８．１０
３８广西科学　２０１３年２月　第２０卷第１期
　　用ｓｐｓｓ１３．０软件正规几率单位法计算ＤＡＧ对
４种细胞的ＩＣ５０ 值。鼻咽癌细胞ＣＮＥ的７２ｈ－ＩＣ５０
值为４．１２μｇ·ｍｌ
－１（９５％置信区间为２．１８～５．７３μｇ
·ｍｌ－１），提示鼻咽癌细胞ＣＮＥ对ＤＡＧ较为敏感，
即较低浓度的药物就可以使该细胞的生长抑制率达
到５０％；而肺癌细胞Ｈ４６０，胃癌细胞ＳＧＣ－７９０１和肝
癌细胞 ＢＥＬ－７４０４的７２ｈ－ＩＣ５０分别为１５．９８μｇ·
ｍｌ－１（９５％置信区间为１２．１３～１８．５４μｇ·ｍｌ
－１），１６．
００μｇ·ｍｌ
－１（９５％置信区间为１２．１８～１７．９４μｇ·
ｍｌ－１）和１６．７３μｇ·ｍｌ
－１（９５％置信区间为１４．８５～
１８．０７μｇ·ｍｌ
－１），提示这３种肿瘤细胞对该ＤＡＧ的
敏感性相对较低。
２．２　细胞形态观察结果
　　ＤＡＧ 作用于 ＳＧＣ－７９０１、ＣＮＥ、ＢＥＬ－７４０４和
Ｈ４６０细胞７２ｈ后，在倒置显微镜下观察，各给药组
细胞均不同程度出现贴壁能力减弱、细胞圆缩、胞质
浓缩、胞浆内颗粒集中边缘化甚至细胞溶解等损伤现
象，而各对照组细胞均生长良好，细胞形态完整，胞质
透亮。
３　结论
　　本研究初步探讨了 ＤＡＧ对ＳＧＣ－７９０１、ＣＮＥ、
ＢＥＬ－７４０４及 Ｈ４６０四种肿瘤细胞的体外抑制作用。
结果表明，经不同浓度ＤＡＧ作用７２ｈ后，四种肿瘤
细胞的ＯＤ 值与对照组相比均呈下降趋势，且有明显
的浓度－效应关系。ＤＡＧ作用于 Ｈ４６０细胞的７２ｈ
?ＩＣ５０ 为１５．９８μｇ·ｍｌ
－１；作用于ＳＧＣ－７９０１细胞的
７２ｈ－ＩＣ５０ 为１６．００μｇ·ｍｌ
－１；作用于ＢＥＬ－７４０４的
７２ｈ－ＩＣ５０ 为１６．７３μｇ·ｍｌ
－１；而ＣＮＥ细胞对ＤＡＧ
较为敏感，７２ｈ－ＩＣ５０为４．１２μｇ·ｍｌ
－１，即较低浓度的
药物就可以使该细胞的生长抑制率达到５０％。镜下
观察显示，ＤＡＧ给药组细胞不同程度出现细胞圆缩、
胞质浓缩、胞浆内颗粒集中边缘化甚至细胞溶解等损
伤现象。本研究结果提示ＤＡＧ对胃癌、鼻咽癌、肝
癌及肺癌等有潜在治疗价值。ＤＡＧ对胃癌、鼻咽癌、
肝癌及肺癌等的作用机制有待于下一步深入研究，以
便于发现新的作用靶点，对其进行相应的结构改造，
开发抗肿瘤靶向制剂。
参考文献：
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（责任编辑：邓大玉）　　
４８ Ｇｕａｎｇｘｉ　Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｖｏｌ．２０Ｎｏ．１，Ｆｅｂｒｕａｒｙ　２０１３