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1
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2 : 5
,
6
一二去水卫矛醇抗肿瘤作用及毒性
樊亦军 韦焕英 邢邦华 . 何绍雄 ”
赵朝省 周 军 李 茂 罗 斌
(广西中医药研究所 南宁 )
提共 D A G对体外培养 s 」80 细胞及体内W 2 5 6 , L 1 2 1 0等 10 种瘤株均有不同程度活性 , 对 L 1 2 1。 的
治疗指数为 5 . 4 , 分别与阿糖胞普和甲氨喋吟合用有一定的协 同 作 用 , 1次 iP , 小 鼠 L D 。 。 为 9 . 9 士
。 . 6m g/ k g , 家兔亚急性毒性主要表现为W B C减少。 大剂量 D A G可使犬急性血压 、 心率及 呼吸出现轻
度可逆性改变 。
关健词 1 . :2 5 , 6 一二去水卫矛醇抗肿瘤作用 联合用药 毒性
i , 2 : 5 , 6一二去水卫矛醇 ( 1 , 2 : 5 , 6一 d i a 二 h -
y d r o g a l a e t i t o l
, 以下简称 D A G ) 系二澳卫矛
醇的转化产物 , 具有易溶于水 、 杭肿瘤活性高等
优点 。 临床试验表明 , 该药对慢性粒细胞性白
血病及肺癌等有一定疗效〔 1 , ’己〕 , 现广西梧州
药厂 已正式投产 , 而 国外尚无商品 。 本文报告
了 D A G的部分抗肿瘤作 用及毒性实验结封孔
实 验 部 分
一 、 实验材料
D A G 为本所化学室供给 , 白色结晶 , 以生
理盐水溶解配成所需浓度 , 4 “ C 保 存不超过 7
天 。 阿糖胞昔 ( A r a 一 C , 北京 医学院 药 厂 生
产 ) 及甲氨喋吟 ( M T X ,上 海 十二药厂生产 ) ,
均临用时以生理盐水配成所需浓度 。 瘤株为本
所按常规保种传代的动物移植性肿瘤 , L 1 2 1 0
及 L 61 5分别用 D B A / 2 及 61 5纯种鼠传代 ,其余
均为杂交 鼠。 大 、 小鼠为本所动物 室 饲 养 繁
殖 ; 兔 、 狗为市场购回后 , 在本所动物室饲养
观察 1 周以 上方供实验 。
二 、 实验方法与结果
(一 ) 抗肿瘤作用
1
. 对体外培养腹水型5 1 8。细胞的作用 按
· 天 津防疫站 , , 天津医 药科学研兜所
常 规 方 法 测 定 〔 8 〕 , D A G 半 数抑 制 浓 度
为 0 . 1一 1 . 0卜 g /m l , 显示药物有较强的细胞毒
作用 。
2
. 对移植性动物肿瘤的活性 按 1 9 7 8年全
国抗癌药物研究协作会议制订的 《抗肿瘤药物
体内筛选规程 (草案 ) 》 进行试验 , 但腹水瘤
动物观察 60 天 。 结 果表 明 , D A G 对 实 体 瘤
W 2 5 6
,
5 25 0
,
5 5 7
,
U i 4
, 肝 癌 ( H e p S ) 及腹
水型 5 15 0 , 肝 癌 ( H e p A ) , E A C , 白 血 病
L 1 2 1 o等均有 效 。 其 中 对 大 鼠 W 2 56 及小鼠
L 1 2 1 o的活性最高 , 但对 白血病 L 615 无效 。 口
服给药对 5 37 及 H eP S 也 有 一 定 疗 效 (各 项
P < 0
.
0 0 1 )
。有效瘤株的实验结果 见 表 1 、 2 。
(二 ) 对小鼠 L i Z i o的治疗比 ( t h e r a p e -
u t i e r a t i o )
参照 G o l d i n等的方法〔 4 〕 , 将接种 L 1 2 1 0细
胞后 24 小时的小鼠 , 一次 i p不 同剂量 D A G ,观
察 60 天内生命延长率 。 药物剂 量为 1 . s m g / k g
时 , 生命延长率为 2 3 . 2% , 随着剂量增加 , 疗
效亦提高 ; 剂量为 I o . l m g / k g时 , 生命延长率
达 2 8 9 . 3% , 5 / 6小鼠存活 。 但更高剂量时 , 由
于药物毒性 , 生命延长率急剧下降至 O % 。 据
估计 , 药物 E D 。 。为 1。 86 m g / k g , 最大有 效 量
为 1 0 . 1 0m g / k g 。 因此 ,治疗 比为 1 0 . 1 0 / 1 . 8 6 =
5
_ 连.
DOI : 10. 13375 /j . cnki . wcjps . 1987. 03. 013
1 6 2华 西 药 学 杂 志 : 巷
表 、 . DAG 对动物实体瘤的作用
T a b l e 1
.
E f fe c to fA DG
o n 盆he 5 0 !奋d tum o r i n a o i二 I ,一一 , . . . 目 . . . . . . . . . . 一 . 一 . . . . .口 . . . . . . . ~肿 瘤T U r n o r 别 量D O S e( xn g /火g ) 给药方案趾h e d u l e 平均瘤重A v e ra 李 t 、 In 飞o r w e i g ht( g ) 溜重抑制率In h ib l t i o n仁乡u )
叫W 25 6 1 . 2 IP x 7 ,
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.
0
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C o n t r o l
1
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3 2
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5 1 8 0
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Ql上,才O心一曰内匕…,工月IC照对 鲜H e声 C O n t r o l4 , 24 . 2 i P 大 2 . ( D l , 5 )iP x . ( D x , 5 ) ::. :
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P > 0
. 肠
二 P < 0 . 0 1
表 2 . D A G 对动物腹水瘤的作用
T a b l e Z
_
E f f e e t o f D A G
o n 伍 e a s e i t i e t u m o r s i n . i e e
~
二
~
一一 孟 。 _ 味一 . 户 . . . .曰口` 网 . ` . 门. . . 汽 ` . 留 ; ~ . . 0 . . , . . ` . . . . . . . . . . “ . . . . . . . . . . .一 . ` 肠一~ 灿 ` 翻 ~ 飞 J .一 - ” . ~ . . . . . 曰. . . . 侧. ~ . . . . . . . . . . . ~ . ~ ~ . .肿 瘤
T U m o r
剂 量
D O S e
(m g / k g )
给药方案
S e h e d u le
平均生存天数
A v e r ag e s u
r 城v in g it m e
( da y )
生命延长 率
1 L S %
,自
0.…品J月h三吸跪七勺自ù匀0,曰,占,口J马一勺目00.…一勺O臼自介.1,19曰J毛iP x li P x liP x l
i P x l
护口0
.…1叨勺ù匀8L 12 1 0
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.
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i P
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,
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,
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.
6 3 2
.
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.
9
.
0
一 ~ 一一一一一一 一一一一一一一~ ~ ~ ~ ~~ ~ 一~ 创~ 门. 口,对 照C o n tr ol 1 7 . 0H eP A 3 . 0 iP x l 2 7 . 5 6 1 . 8
. 期 6 13
叫一 = = = = = = = =二 =二二 = =…丹石6,自d.二,二,5 1 8 0 对 照C O D t r o l1 . 20 。 6 ip 、 7 , dqip 、 7 , 叫. P < 0 . 05(三 ) 联合用药1 . D A G 一 A r a C 取接种 L x Z i o 细 胞 后 2 4小时的小鼠 6 组 , 各组分别 i P生理盐水 , D A
G
,
A r a C
,
D A G + A r a C
, 给 D A G 后 2 4小 时
给 A r a C , 给 A r a C 后 2 4小 时 给 D A G 。 D A G
剂量为 3 . om g /` k g , A r a C为 2 () o . o m g / k g , 按
以往方法观察结果 , 并估计 “ 相加 作用” 〔匀 。
表 3 表明 , 同时使用 D A G 和 . A ar C , 或 先 给
D A G 后给 A r a C , 均有明显的协同疗效 , 生命
延长率远高于 “ 相加作用 ” 。
2
。
D A G 一 M T X 方法同上 , 仅以 1 5 . Om g
k/ g的 M T X代替 A r a C , 结果见表 4 。 给 D A G
后 2 4小时给 M T X , 对小鼠 L 1 2 10 的生 命 延 长
率达 ]_ 9 3 . 1% , 明显高于二药的 “ 相加 作 用”
( 1 0 3
。
0 )
。
(四 ) 毒性试验
1
. 急往毒性 一次 iP , 观察 21 天 , D A G
对小鼠的L D 。 。为9 . 9 士 0 . 6m g ,k/ g 。 小鼠 在 给
药后执小时仍活泼如常 , 一般 4 天 后 开 始 死
亡 , 少数动物甚至 14 天才死 。 给药后小鼠主要
毒性为消瘦 、 腹泻 , 尸检可见脾脏明显萎缩 。
2
. 亚急性毒性
( 1 ) 给小鼠 iP D A G , 每天一次 , 连续 7
天 , 观察 2 1天 , L D 。 。为4 . 2 士 o . s m g / k g 。 小鼠
毒性反应与急性毒性实验相同 。
( 2 ) 健康家兔 12 只 , 雄性 , 给药前分别
进行两次血象及肝 、 肾功能常规检查 , 然后均
分为三组 。 大剂量组每次给D A G 2 . 4m g / k g ,
小剂量组为 0 . s m g / k g , 对照组给生理盐水 。 均
隔日i v 一次 , 共 10 次 。 末次给药后 24 小时各组
处死 2 兔 , 20 天后再将其余动物处死 , 处死前
均取血进行血象及肝 、 肾功能检查 , 处死后对
各主要脏器进行肉眼及切片病理检查 。 结朵表
明 , 小剂量组动物除给药期间W B C数略 有 减
少外 , 药物对 R B C及血小板数 、 血 红 蛋 白 、
肝 、 肾功能等均无明显影响 ; 停药后 , W B C数
可 回升至正常水平 。 病理检查发现药物对骨髓
造血系统有轻度抑制 。 但停药后可恢复 , 其余
脏器未见明显损伤 。 大剂量组动物在给药期间
W B C数即有明显减少 , 至第功次给药后 降 至
表 3 .
T a b l e 3
.
E f f e e ll o f
D A G与A r a 一 e 联合用药对小 鼠 L 12 1 o的疗效
C o m b in a t i o n o f D A G a n d 人 r 壮 一 C o n L 1 2 1 0 I n v 鱼v o
给药方案
S可 h e d u le
平均生存天 数
A v e r a g e s u r v i V i n g
t im e ( d a y )
生命延长率
1 L S %
存活 鼠数 /实验鼠数
N o
.
o f s t之r v i v i gn 而ce
n o
.
o f t es t z n i ce
口U卜,61口`叮0/幻.4.8屯1,OU
对 照
C o n t r o l
D A G
A ar
一
C
一— 一— —— 一一— 一 — —一—一一— 一— 一一 -一 - ~ 气尸 -一12 . 1 一一 0 / gD A G + A ar 一 C2 4 h
D A G
.一令 A拍 一 C
2 4h
A r 几一 C 一 ) D A G
5 3
.
2
1 7
.
4
18 7
.
6 .
3 0
2 0
14 8
.
8 .
7 1
.
5
.
1八 3
O / 8
相加作用
A d d it iv e
.
R e P r e s e n t e d 盯 n e r g ism
华 西 药 学 杂 志 2 卷
表4 . D A G与M TX联合用药对小欧L 1 21 O的疗效
T.妞e 4 . E f f邪 t of e o mi b nat 五叨 f o D A G助d M TX 班 L 1 2 1 0 I nv i 下。
给 药 方 案 平均生存天效
A v的ge s u r v iv i ng
t七 ne (山y )
生 * 延长率
1 L S%
存活限效 / 实脸 鼠数
NO
.
f o s u r v iv i ng mieo
no
.
f o t es t mi e e
D A G
M X T
D A G
+ M TX
1 3
.
1
2 3
`
1
16
,
6
2 0
。
9
7 6
。
3
2 6
。
7
5 0
。
5
n 人 G鸣M T x
M T x笃 D A G
38
.
4
2 7
。
3
19 3
.
1 .
10 8
.
4 .
0 / 10
0 / 7
0 / 7
0 / 7
8 / 7
1 / 7
相加作用 10 3 . 0
A d
e i t i v e
今 斑 p~ n t ed s y n er g is m
最低 , 减少了 6 7 . 9 % , 停药后逐渐回升 , 但第20
天仍未达正常水平 ; 其余结果同小剂量组 ,
(五 ) 对犬血压 、 心率 、 呼吸及心 电的影
响
健康犬 8 只 , 戊巴比妥钠麻醉 , 按常规方
法由颈动脉记录血压 , 股静脉给药 , 给药前及
给药后每隔半小时记录血压 、 心率及呼吸 , 部
分动物记录心电 。 1 号犬剂量 为 2 . o m g / k g ,
2一 3 号犬为 4 . Om g k/ g , 4 一 8 号犬为 8 . o m g
/ k g
, 均缓慢注射或滴注 。 结果表明 , 2 . 0一 4 . 。
rn g k/ g时 , 无论 iv 或滴注 , 各项指标均无明显
改变 。 高剂量 (8 . Om g k/ 幼 时 ,动物心电无明
显改变 , 但有 3 犬在药后 1一 2 小时内血压略
降低 , 3小时内均可恢复正常 , 其中个别犬同
时伴有心率减慢 , 呼吸变浅而快 。 但随着血压
回升 , 心率及呼吸也恢复至接近正常 。
(六 ) 对小鼠胸腺及脾重量的影响
取同性别 C F W纯种小 鼠48 只 , 体 重 1份
17 9
, 平均分为 8 组 , 其中 4 组一次 i p生 理 盐
水作对照 , 另 4 组 iP D A G 7 . 4 m g / k g( L D 。 ) ,
给药后 1 、 3 、 5 、 7 天分别各将 1 组对照和
给药组小鼠处死 , 按常规称胸腺及脾重 , 并换
算成每 1 0 0 9动物体重相当的胸腺或脾的 m g 重 ,
分别为胸腺指数或脾指数 。 给药后 24 小时 , 胸
腺及脾指数均明显减小 , 并分别在第 5 及第 3
天降至最低 , 各为对照组的3 6 . 8%及 4 4 . 4% ,
7 天后脾重可恢复正常 , 而胸腺指数在给药后
15 天仍低于对照组 。
讨 论
D A G对多种动物移植性肿瘤有明显 抗 肿
瘤作用 , 其中W 25 6及 L 1 2 1。对药物尤为敏感 ,
这与 N石m e ht 等的结果一致喻 。 值得指出的 是
口服给药对 5 37 及 H e p S也有效 , J a g e r等用 日
服给药治疗 1 36 例实体瘤〔 7〕 , 发现其对胃 肠道
肿瘤有较好疗效 ,这可能是 由于 D A G在胃肠道
有一定的稳定性 , 或药物经胃肠道的代谢产物
也具有抗癌活性 。 D A G 系周期非特异性药 . 分
别与 A r a D及 M T X合用时 , 对小 鼠L 1 2 1 o可 产
生方案依赖性协同作用 , 后二药主要作用于细
.胞周期的 S期 , 可能与 D A G 的作用环节不同 ,
因而在一定条件下合用可增强活性 .
小 鼠毒性试验中 , 观察到动物出现严重消
瘦 、 腹泻等症状 ; 最小致死剂量 ( 7 . 4 m g k/ g)
可导致参与体内主要免疫过程的胸 腺 及 脾 萎
缩 ; 此外 , D A G 有较强的杀伤骨髓干 细 胞作
用〔幻 。 由此推测 , 免疫功能衰竭可能是导致动
物死亡的主要原因。
2 卷 1 6 5
~ = 二= = = = = = = = 拍` = = =
参 考 文 献
1 。 黄宗干 , 条 中华 内科杂志 19 8 2 , 2 1 ( 6 ) : 3 5 6 .
2
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一 G o ld滋 A , 眺 a l . C a n e e r C h en l ot h e r eB P 1 9 6 2 .
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A N T I T U M O R A C T IV I T Y A N D T O X I C I T Y O F
1 , 2 : 5
, ,
6一D I A N H Y D R O G A L A C T IT O L
F a n Y i一 J u n , W e i H u a n 一Y i n g
,
X i n B a m g一 H u a . ,
1 1e S h a o 一 X i o n g 奋 , , Z h a o C h a o 一 S h e n g ,
Z h o u J u n
,
L i M
a o , L u o B i n
G ua n g x 葱 1” s t诬u 亡e o f T r a d社i o n a l M e d云Ca 正
( a n d P h a
r伽 e e u t玄c a Z S e i e视 c e s N a 儿九玄n g )
A B S T R A C T I C
。 。 o f i
,
2 : 5
,
6 一 id an hy dr
o g a l a et i t o l ( D A G )w a s 0
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切 V i tr o . D A G w a s 鱿f e c t ive s a ga ir 巧 t 5 18 0 , 5 3 7 , U i 4 , H eP S , H即 A , E A C , W 2 5 6 an d L 1 2 1 o 运
v ivo
, o f w 址e h , W 2 5 s an d L 一2 1 0 w er e ih g h件 s e n 琳i v i t y . L 6 1 s w a s n o t s e n ist iv e ot the d r u g .
T h er
a eP 川 i c r at io of D A G w as 5 . 4 运 L 1 2 1 o . T h以 e , 7 e r e OS me CS h改加 l-e d e少m d e n t s yn er 多s lnS
运 L i 2 1 o w h 已 n D A G co m b in de , 八t h rA a 一 C an d M TX r se p沈 t lve l y . L D 。 。 o f D A G w er e 9 . , 士
0
.
6 m g / k g f o r t加 s c h e d u l e o全 i P x i an d 4 . 2士 0 . 5 m g /k g for iP x 7 垃 回 ce . T he r D。 工。 t o劝 c l -
伽 ~ “ ~
at ion
,
id ar 知平 an d 咖还 k age ” f “ lP ~ an d t h丫田叮 S 运 脉 .e D ec r仪因刀 g
W B C an d
s l i g ht d e P r es d 皿止 r o w w er e o b以犷 v ed 迈 r a b b it s w h e n D A G , 7 a s g i v en 认八ht a
CS h改比 le of iv x 10 on a l t e r n袱 e d ay s . A什份 iv 8 m g / gk of D A G , the bl o d rP 巴粥u r e , h ea 践
r以 e an d r es p让a桩Q n of do 李 rP o du c ed so me r ve 曰怡 l bl e c h a n g es
K ey W or ds l
, 2 : 5
,
6
一山曲坷山。 ga lac it t o l A n t i tU mo r 侧比i喊yt A d lr 山公 s t r at l o n of -co
m b迈at l o n T o 石 c计y
。
iT anj in A
n t l -e P i决叨』c 歇浦。
· 。 乃叨 j in 几目出 u et of M曰11。日叨 d P址盯斑目狱比目 cS l. 口。`