全 文 ：第 32卷第 2期
2009年 4月
云南中医学院学报
JournalofYunnanUniversityofTraditionalChineseMedicine
Vol.32No.2
4.2009
滇龙胆花粉生活力的快速测定＊
李娅琼 , 古　今
(云南中医学院中药学院 , 云南昆明　650500)
　　摘　要:目的:滇龙胆花粉生活力的研究。方法:采用 I2 -KI染色法 、 醋酸洋红染色法 、 TTC染色法 、 过
氧化物酶沉淀法 、 离体萌发测定法。 结果:醋酸洋红染色法 、 TTC染色法 、 过氧化物酶沉淀法 、 离体萌发测定
法都可以用于现采滇龙胆花粉生活力的测定。 TTC染色法 、 离体萌发测定法可用于不同贮藏时间的花粉生活力
的测定 , 而醋酸洋红染色法 、 过氧化物酶沉淀法均不能用于贮藏滇龙胆花粉生活力的测定。无论是现采的花粉
还是贮藏花粉其生活力都不能用 I2 -KI染色法测定。对滇龙胆花粉进行生活力测定 , 以离体萌发测定法所得结
果最为直观 、 稳定 , 是测定滇龙胆花粉生活力的最佳方法。 结论:为滇龙胆花粉进行优良种质资源的保存和滇
龙胆迁地保护提供了理论依据。
关键词:滇龙胆;花粉生活力;测定方法
中图分类号:R282.71　　文献标识码:A　　文章编号:1000— 2723(2009)02— 0042— 03
滇龙胆 GentianarigescensFranch属于龙胆科龙
胆属多枝组多年生草本植物 , 具有有清热燥湿 , 泻
肝胆实火的功效 , 用于治疗各种炎症 , 以及流行性
乙型脑炎等疾病。滇龙胆作为云南道地药材 , 近年
来 , 由于采收量远远超过了自然生长量 , 产量急剧
下降 。因而保护和扩大滇龙胆种质资源的研究工作
尤为重要 。有关植物种质资源保存的方法主要有种
质保存 、 贮藏保存 、试管保存等。花粉是种子植物
的雄配子体 , 在有性繁殖中发挥着重要作用 , 利用
花粉进行种质资源的贮藏保存是非常重要的手段之
一。对野生滇龙胆的花粉进行生活力的测定研究 ,
可为滇龙胆优良种质资源的保存和迁地保护提供理
论依据。目前国内对花粉生活力测定的方法主要有
室内形态测定法 [ 1] 、 染色法 (包括 I2 -KI染色
法[ 1, 2] 、 醋酸洋红染色法 [ 3] 、 TTC染色法 [ 2, 3] 、 二
乙酸盐荧光素染色法[ 4] )、 离体萌发测定法和田间
授粉测定 [ 2, 3] 。本文采用 I2 -KI染色法 、 醋酸洋红
染色法 、 TTC染色法 、过氧化物酶沉淀法 、 离体萌
发测定法这 5种方法对滇龙胆花粉生活力进行测
定 , 并建立和筛选出准确 、 简便 、 快捷的滇龙胆花
粉生活力测定方法 , 为滇龙胆大规模制种和贮藏花
粉的生活力鉴定提供可靠的依据。
1　材料与方法
1.1　供试花粉
昆明市阿子营居群及移栽于温室的滇龙胆提供
的正常花粉 。
1.2　测定方法
1.2.1　I2 -KI染色法
取现采的花粉 , 置于载玻片上 , 加 1 ～ 2滴 I2
-KI溶液 , 盖上盖玻片 , 置于显微镜下观察。
1.2.2　醋酸洋红染色法
取现采的花粉 , 置于载玻片上 , 加 1 ～ 2滴醋
酸洋红溶液 (100mL45%的醋酸), 盖上盖玻片 ,
置于显微镜下观察。
1.2.3　TTC染色法
取少数花粉置于载玻片上 , 加 1 ～ 2滴的 TTC
溶液 (0.5%), 盖上盖玻片 , 将制片放置 35℃恒
温箱中 15min, 然后在低倍镜下观察。
1.2.4　过氧化物酶沉淀法
0.5%联苯胺 (将 0.5g联苯胺溶于 100mL
50%乙醇中), 0.5%α-萘酚 (将 0.5gα-萘酚溶
于 100mL50%乙醇中), 0.25%碳酸钠 (将 0.25g
碳酸钠溶于 100mL蒸馏水中)实验前将上述 3种
溶液各取 10mL混合均匀成试剂 I, 0.3%过氧化
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＊收稿日期:2008— 11— 06　　修回日期:2009— 03— 12
作者简介:李娅琼 (1977 ～ ), 女 , 云南昭通人 , 博士研究生在读 , 从事植物资源与保护的研究。
第 2期 李娅琼 , 等:滇龙胆花粉生活力的快速测定 　　 　　　　　　　　　　　
氢 , 在干洁载玻片上放少量花粉 , 然后加试剂 I和
0.3%过氧化氢各 1滴 , 搅匀后盖上盖玻片 , 将制
片放置 30℃恒温箱中 15min, 然后在低倍镜下观
察。
1.2.5　离体萌发测定法
主要利用 10%蔗糖 、 100mg/L硼酸 、 5mg/L
赤酶素的液体培养基培养花粉。然后在光学显微镜
下观察萌发情况 , 以花粉管长度超过 1/2花粉直径
的为萌发花粉 , 有活力 。
田间采样 (花药)放于室内自然干燥贮藏 ,
然后分别用上述 5种方法 , 在第 2、 4、 6天测定花
粉生活力 , 以标定哪几种方法可以用来测定贮藏花
粉的生活力。不同贮藏条件下花粉的萌发:将初花
期的花粉装入瓶中 , 分别于低温 (4℃)冰箱和室
温 (23 ～ 25℃)两种条件下保存花粉 , 每隔一定
的天数取少量花粉接种 10%蔗糖 +0.1%硼酸 +
5mg/L赤霉素的培养基上 , 统计花粉的萌发率。
以上每次测定均观察 2 ～ 3个制片 , 每个取 5
个视野 , 统计 100粒 , 并计算其发芽率 。
2　结果与分析
2.1　不同花期花粉的萌发
表 1　不同花期花粉萌发率 (离体萌发测定法)
花期 花粉萌发率 (%) 花药形态
花蕾期 73.6 幼嫩 , 药室尚未开放
初花期 92.3 膨大饱满 , 药室刚刚开放
开放 3d的花 42.3 药室已完全开放
2.2　不同测定方法对现采花粉生活力测定的结果
分析
由表 2的实验结果表明:这五种方法除了 I2 -
KI染色法以外所得出有活力花粉的比率经过方差
分析差异不显著 。因而除了 I2 -KI染色法以外其
它四种方法均可用于现采花粉生活力的测定。本研
究所采用的 5种滇龙胆花粉生活力测定方法中 , 只
有 TTC染色法测得的数值偏高为 90.18%, 醋酸洋
红染色法偏低为 88.98%.表 2资料表明:各种方
法内观察值之间分散程度也有所不同 , 其中过氧化
物酶沉淀法测定时各重复之间的差异很大 , 标准差
为 3.0105 , 醋酸洋红染色法和 TTC染色法次之 ,
只有离体萌发测定法所得的结果分散程度最小 , 标
准差仅为 1.7062, 同时该法所测得的有活力花粉比
率平均数 89.74%最接近其它 4种方法的平均值
(89.48%), 所以为获得准确的测定结果 , 对现采
滇龙胆花粉的生活力测定 , 最好选用离体萌发法。
2.3　不同测定方法对自然条件风干贮藏时间不同
的滇龙胆花粉生活力测定结果
由表 3的数据结果表明 , 测定贮藏的花粉生活
力时 , 部分方法测得的有活力花粉比率呈上升趋
势 , 有的则呈下降趋势 , 直至降为 0。根据文献说
明滇龙胆花粉在自然干燥状况下贮藏 , 其生活力会
随着贮藏时间的延长而大幅度下降 , 一般 5 ～ 7天
生活力完全丧失 [ 5] 。表 3分析结果表明 , 醋酸洋红
染色法和过氧化物酶沉淀法所测得的滇龙胆花粉生
活力均呈上升的趋势 , 与实际不相符合因而不能用
于滇龙胆花粉的生活力测定;TTC染色法和离体萌
表 2　不同测定方法所得现采滇龙胆花粉生活力的结果分析 (%)
方法 I2 -KI染色法 醋酸洋红染色法 TTC染色法 过氧化物酶沉淀法 离体萌发测定法
有活力花粉比率平均数 ——— 88.98 90.18 89.08 89.74
标准差 (S) ——— 2.6563 2.5602 3.0105 1.7062
表 3　不同方法对自然风干贮藏时间不同的滇龙胆花粉生活力测定结果 (%)
方法 I2 -KI染色法 醋酸洋红染色法 TTC染色法 过氧化物酶沉淀法 离体萌发测定法
第 2天 ——— 80.3 86.5 83.4 88.6
第 4天 ——— 82.5 20.5 89.6 11.54
第 6天 ——— 88.6 2.6 90.7 2.5
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2009年 云南中医学院学报 第 32卷
发测定法所测得的数据结果符合自然干燥贮藏花粉
生活力的变化规律 , 并且两种方法之间的差异不
大 , 所以这两种方法可以用来测定贮藏花粉的生活
力。但由表 2分析结果表明 , TTC染色法测定花粉
生活力时得出的结果之间的分散程度比离体萌发测
定法大。所以为了达到滇龙胆花粉生活力测定结果
的准确性 , 本研究认为离体萌发测定法为测定贮藏
滇龙胆花粉生活力的最优方法。
2.4　不同贮藏条件下滇龙胆花粉萌发率的测定结
果 (离体萌发测定法)
表 4数据表明 , 滇龙胆的花粉生活力受贮藏温
度的影响很大 , 在低温和室温条件下贮藏的花粉随
贮藏时间的延长 , 花粉的生活力均呈下降趋势 , 室
温第 6天花粉已经完全丧失萌发能力 , 低温贮藏
15天的时候 , 花粉的萌发率下降到 3.6%, 17天
则完全丧失萌发能力 , 由此得出低温条件有利于滇
龙胆花粉的贮藏 。然而在 4℃冰箱保存 , 最长可贮
藏 15天左右的时间。
表 4　不同贮藏条件下花粉的萌发 (离体萌发测定法)
贮藏温度 不同贮藏时间萌发率 (%)
2d 4d 6d 8d 10d 11d 13d 15d 17d
室温 (23 ～ 25℃) 83.5 2.3 0 0 0 0 0 0 0
低温 (4℃) 82.6 70.6 61.2 51.5 28.7 10.8 3.6 0 0
3　结论与讨论
3.1　结论
五种方法除 I2 -KI染色法以外其它四种方法
可以用于现采滇龙胆花粉生活力的测定 。 TTC染色
法和离体萌发测定法适用于不同贮藏时间的花粉生
活力的测定 , 而醋酸洋红染色法和过氧化物酶沉淀
法不能用于贮藏滇龙胆花粉生活力的测定 , 为获得
准确的测定结果无论是现采的花粉还是贮藏花粉最
好的测定方法是离体萌发测定法。
3.2　讨论
花粉保持生活力的长短 , 一方面是由遗传因素
所决定 , 另一方面也受环境因素的影响 , 花粉萌发
虽不能完全等同于生活力 , 但在实践中大多数是花
粉萌发率来表示花粉生活力的 [ 6, 7] 。每种花粉萌发
和花粉管的生长都有其自身的温度调节范围 , 大多
数亚热带地区的植物花粉萌发和花粉管的生长在
4℃下受到一定的抑制 , 23 ～ 25℃为最适宜的萌发
温度 。离体萌发测定法虽然是滇龙胆花粉生活力的
最好的测定方法 , 但是此法需要在特定的温度
(25℃)和较长的时间 (3h)培养才能实现 。因而
在条件允许的情况下采用此法 , 同时为了获得准确
的测定结果需要一定的重复次数 。TTC染色法也是
滇龙胆花粉生活力测定的较好方法 , 它不仅适用范
围广而且操作程序简单快捷 , 在特定情况下可单独
使用 , 也可以和离体萌发测定法结合使用 , 以提高
滇龙胆花粉生活力测定的准确性。
[参考文献 ]
[ 1] 沈阳农学院主编.蔬菜育种学 [ M] .北京:农业出
版社 , 1980.283-285.
[ 2] 王少先.四种检验方法在辣椒花粉生活力检验上的应
用效果.河南农业科学 [ J] .1998 (2):25-26.
[ 3] Atesf.Soliman.刘达先译.小麦花粉粒的生活力.麦
类作物 [ J] .1982 (4):37-40.
[ 4] R.H.PetersonandH.G.taber.西红柿花粉二乙酸
盐荧光素活体染色技术.中国蔬菜 [ J] .1989 (6):
52, 27.
[ 5] 董伟.不同花龄及贮藏条件对滇龙胆花粉萌发与授粉
的影响.中国蔬菜 [ J] .1990 (2):11-12.
[ 6] HuSYAngiospermEmbryology(被子植物胚胎学)Bei-
jing:People, sEducationalPress, 1982.
[ 7] WangQL, LuLD, WuLD, etal.Pollenstorageand
abilitydetermination[ J] .ChinBulBot(植物学通报),
20.
(编辑:迟　越)
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