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陕西不同产区珠子参中竹节参皂苷Ⅳa含量比较研究



全 文 :族 、侗族)、芒 Miscanthus sinensis Anderss.(布依
族)、稻Oryza sat iva L .(布依族)、芦苇 Phragm ites
communis T rin.(侗族)、苦竹 Pleioblastus amarus
(Keng)Keng f.(苗族)、玉蜀黍 Zea mays L.(苗族 、
仡佬族 、布依族)等。
参考文献:
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(收稿日期:2009-9-23)
陕西不同产区珠子参中竹节参皂苷
Ⅳa含量比较研究
崔九成1 ,白吉庆1 ,王 薇1 ,张恩林2 ,宋小妹1*
(1.陕西中医学院 , 陕西 咸阳 712046;2.宁强县良种场 ,
陕西 汉中 724400)
摘要:目的 测定陕西不同产区珠子参中竹节参皂苷Ⅳ a含
量 ,以评价药材质量。方法 采用 HPLC 法 , 色谱柱为 Iner t-
sil ODS-sp(150 mm×4.6 mm , 5 μm)柱 , 以乙腈-0.2%磷酸溶
液(35∶65)为流动相 , 流速为 1.0 mL · min -1 , 检测波长为
203 nm。结果 陕西不同产区珠子参中竹节参皂苷Ⅳ a含量
存在一定的差异 ,其中野生珠子参中竹节参皂苷Ⅳ a含量普
遍高于移植珠子参 ,但移植 2 年的珠子参中竹节参皂苷Ⅳa的
含量明显高于移植 1 年的珠子参。结论 不同地域环境的珠
子参其质量存在差异。
关键词:珠子参;陕西;竹节参皂苷Ⅳa;H PLC
doi:10.3969/ j.issn.1004-2407.2010.01.013
中图分类号:R927.2   文献标识码:A   
文章编号:1004-2407(2010)01-0023-02
基金项目:珠子参栽培技术研究(陕西省科学技术研究发展
计划项目 2006K16-G1(2));钮子七栽培技术研究(陕西省教
育厅 2005 年科学研究计划项目 05JK168)。
作者简介:崔九成 ,教授 , 硕士生导师
*通讯作者:宋小妹 ,女 , 教授 ,硕士生导师
  珠子参又名珠儿参 、钮子七 、扣子七 ,为五加科植
物珠子参 Panax japonicus C.A.Mey.var.major
(Burk.)C.Y.Wu et K.M .Feng 或羽叶三七 Panax
japonicus C.A.Mey .var.bipinnat i f idus(Seem)C.
Y.Wu et K.M .Feng 的干燥根茎;主产于陕西 、四
川 、云南 、甘肃 、贵州 、西藏等地;具有补肺 、养阴 、活
络 、止血功效 ,用于治疗气阴两虚 、烦热口渴 、虚劳咳
嗽 、跌扑损伤 、关节疼痛 、咳血 、外伤出血等症[ 1] 。研
究表明 ,珠子参主要化学成分为多种皂苷类[ 2] ,而且
药理实验表明皂苷类成分具有镇痛 、镇静[ 3] 、增强免
疫力[ 4-5] 、抗肿瘤[ 6]活性 ,另外 ,珠子参水煎液对辐射
及化疗药物致血液系统损害有明显保护作用。珠子
参作为陕西等西部广大地区民间习用药材 ,野生资源
日益枯竭 ,开展珠子参的栽培研究 ,扩大资源范围迫
在眉睫 。为此 ,我们在对陕西地产珠子参资源调查的
基础上 ,对收集到的部分珠子参药材样本中的主要皂
苷类成分竹节参皂苷Ⅳa 进行了分析比较 ,为珠子参
优良品种选育及栽培研究提供参考依据 。
1 仪器与试药
1.1 仪器 岛津 LC-2010 AH THPLC 仪;Shimad-
zu LC solut ion工作站;SB-3200 D型超声清洗机(宁
波新芝生物科技股份有限公司 ,180 W ,40 kHz);BP-
121S 电子天平(北京赛多利斯仪器系统有限公司)。
1.2  试药  竹节参皂苷 Ⅳ a 对照品为自制 ,
经1HNMR和13 CNMR 鉴定结构 , HPLC 检测其纯
度 ,面积归一化法计算对照品的含量 ,纯度在 98%以
上 ,符合对照品纯度要求;乙腈为色谱纯(SK Chemi-
cals公司);水为娃哈哈纯净水;其余均为分析纯。珠
子参药材来源于陕西省太白县 、陕西省眉县及陕西宁
强县良种场珠子参药材种植基地 ,经陕西中医学院药
学院王继涛高级实验师鉴定为珠子参 Panax
japonicus C.A.Mey.var.major (Burk.)C.Y.
Wu e t K.M .Feng 的干燥根茎 。
2 方法与结果
2.1 色谱条件 色谱柱:Inertsil ODS-sp(150 mm×4.6
mm ,5μm);流动相:乙腈-0.2%磷酸溶液(35∶65);
检测波长:203 nm ;流速:1.0 mL·min-1 ;进样量:20
μL;柱温:30 ℃;理论板数按竹节参皂苷Ⅳa 峰计算
应不低于 3 000。
2.2 溶液制备
2.2.1 对照品溶液 取竹节参皂苷Ⅳa对照品适量 ,
精密称定 ,加体积分数 60%乙醇配制成1.007 6 g · L-1
的储备液 ,待用。精密吸取 2 mL 于 10 mL 量瓶中 ,加
60%乙醇至刻度 ,摇匀 ,作为对照品溶液 。
2.2.2 供试品溶液 取珠子参药材粉末(过 2号筛)
约 0.1 g ,精密称定 ,加 60%乙醇溶液 25 mL ,超声处
理 40 min ,取出 ,加 60%乙醇补足质量 ,滤过 ,取续滤
液即得 。
2.3 线性关系考察 分别精密吸取上述对照品储备
液 0.5 ,1 ,2 ,3 ,4和 5 mL ,置于 10 mL 量瓶中 ,加 60%
乙醇至刻度 ,摇匀 ,配制成 0.050 4 ,0.100 8 ,0.201 5 ,
0.302 3 ,0.403 0和0.503 8 g ·L-1的系列溶液 ,分别
进样 20 μL ,测定峰面积 ,以竹节参皂苷Ⅳa对照品进
样量(μg)为横坐标 ,峰面积为纵坐标 ,绘制标准曲线 ,
并计算回归方程得:Y =391 102X -16 725(r =
23西北药学杂志 2010 年 2 月 第 25 卷 第 1 期
0.999 9),结果表明 ,竹节参皂苷Ⅳa 进样量在 1.007 6
~ 10.076 0μg范围内 ,峰面积与进样量线性关系良好。
2.4 方法学考察
2.4.1 精密度实验  精密吸取同一样品溶液 20
μL ,连续进样 6 次 , 按上述色谱条件测定峰面积 ,
RSD为 0.02%。
2.4.2 稳定性实验  取同一供试品溶液分别于 0 ,
2 ,4 , 8 ,12 ,18和 24 h进样 20 μL ,按上述色谱条件测
定峰面积 ,RSD为 0.02%,结果表明样品溶液在 24 h
内稳定。
2.4.3 重现性实验 取同一样品 6份 ,按供试品溶
液制备方法制备 ,分别进样 20 μL ,按上述色谱条件
测定峰面积并计算含量 , RSD为 1.10%,结果表明 ,
本法具有较好的重现性。
2.4.4 回收率实验 取已知含量的样品 6份 ,各 0.05
g ,精密称定 ,精密加入竹节参皂苷Ⅳa 对照品适量 ,
按 2.2.2 项下方法制备供试品溶液 , 分别进样 20
μL ,按 2.1项下色谱条件测定峰面积 ,计算竹节参皂
苷Ⅳa 含量及加样回收率 ,结果见表 1。平均回收率
为 103.46%, RSD为 0.81%。
表 1 竹节参皂苷Ⅳa回收率实验结果(n=6)
实验号 样品质量/ g 样品中竹节参皂苷Ⅳa的量/mg 加入竹节参皂苷Ⅳa的量/mg 测得竹节参皂苷Ⅳa的量/mg 回收率 / % 平均回收率/% RSD/ %
1 0.051 62 2.299 6 2.508 0 4.917 8 104.39
2 0.050 45 2.247 5 2.508 0 4.857 0 104.05
3 0.051 89 2.311 6 2.508 0 4.885 9 102.64 103.46 0.81
4 0.051 02 2.272 9 2.508 0 4.857 0 103.03
5 0.050 99 2.271 6 2.508 0 4.883 6 104.15
6 0.051 34 2.287 1 2.508 0 4.857 2 102.48
2.5 样品测定 精密吸取按 2.2项下方法制备的对
照品溶液和供试品溶液各 20 μL ,按 2.1项下色谱条
件进行测定 ,记录色谱峰面积 ,外标法计算竹节参皂
苷Ⅳa含量 ,结果见表 2。竹节参皂苷 Ⅳa 对照品和
供试品 HPLC图见图 1 。
图 1 HPLC图
A-竹节参皂苷Ⅳa对照品;B-陕西太白珠子参;
C-陕西眉县珠子参;1-竹节参皂苷Ⅳa
表 2 陕西产珠子参中竹节参皂苷Ⅳa含量(n=3)
序号 样品来源 采集时间 竹节参皂苷 Ⅳa含量/ %
1 陕西槐芽野生   20070919 5.45
2 陕西槐芽野生   20061015 4.63
3 陕西眉县野生   20061018 6.81
4 陕西太白野生   20081025 5.30
5 陕西眉县野生   20081105 7.38
6 陕西宁强移植 1年 20080912 3.28
7 陕西宁强移植 2年 20080912 4.52
3 结果与讨论
珠子参作为秦巴山区地道药材 ,资源分布相对广
泛 ,但是 ,不同生长环境的土壤 、大气 、水质等因素对
其化学成分都会有一定影响 ,实验结果也证明了这一
点 。因此 ,在珠子参的野生驯化过程中 ,为了保证珠
子参产品的质量 ,进行大气 、土壤 、水质等的环境因素
分析及优良品种选育 ,对保证珠子参繁育及质量都将
产生很大影响。
近年来 ,我们以宁强作为珠子参的主产地之一进
行了珠子参的移植栽培实验研究 ,通过对移植 1年和
移植 2 年的珠子参中竹节参皂苷Ⅳa 的分析结果可
知 ,二者较其它野生样品的含量普遍偏低 ,但移植 2
年的较移植 1年的含量稍偏高(增长 1.24%,增长率
37.8%)。因此 ,可以认为珠子参有效成分的含量与
生长年限是有一定关系的 ,其规律还有待于进一步的
样本积累和分析 ,以便规范珠子参的采收 ,保证珠子
参的质量。
参考文献:
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(收稿日期:2009-09-03)
24 西北药学杂志 2010 年 2 月 第 25 卷 第 1 期