全 文 ：北方园艺２０１０（１７）：１４１～１４３ ·生物技术·
参考文献
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Ｔｈｅ Ｏｒｎａｍｅｎｔａｌ Ｅｘｐｌｏｉｔａｔｉｏｎ Ｉｎｓｔａｎｃｅ ａｎｄ ｔｈｅ Ｃｏｕｎｔｅｒｍｅａｓｕｒｅ
ａｂｏｕｔ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｐｅｏｎｙ ｉｎ Ｄｉａｎｊｉａｎｇ Ｃｈｏｎｇｑｉｎｇ
ＺＨＡＮＧ Ｚｕ－ｒｏｎｇ１，２，ＹＯＵ Ｙｕ－ｍｉｎｇ１，３
（１．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ，Ｃｈｏｎｇｑｉｎｇ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ａｒｔｓ ａｎｄ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｃｈｏｎｇｑｉｎｇ ４０２１６８；２．Ｃｈｏｎｇｑｉｎｇ Ｐｅｏｎｙ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ，Ｃｈｏｎｇｑｉｎｇ
４０５１６０；３．Ｄｉａｎｊｉａｎｇ Ｃｏｕｎｔｙ ｔｏｕｒ Ｂｕｒｅａｕ，Ｃｈｏｎｇｑｉｎｇ ４０５１６０）
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｔｈｒｏｕｇｈ ｔｈｒｅｅ ｒｅａｓｅａｒｃｈ ｍｅａｎｓ ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ ｑｕｅｓｔｉｏｎａｉｒｅ，ｖｉｓｉｔ ａｎｄ ｉｎｑｕｉｒａｔｉｏｎ，ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ ｃｏｌｅｃｔｉｏｎ，ｔｈｉｓ ｐａｐｅｒ
ｈａｄ ａ ｃｏｍｐｌｅｔｅ ａｎｄ ｉｎ－ｄｅｐｔｈ ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎ ａｎｄ ａｎｌｙｚａｔｉｏｎ ｏｎ ｔｈｅ ｏｒｎａｍｅｎｔａｌ ｅｘｐｌｏｉｔａｔｉｏｎ ｉｎｓｔａｎｃｅ ａｂｏｕｔ ｍｅｄｉｃａｌ ｐｅｏｎｙ ｉｎ
Ｄｉａｎｊｉａｎｇ Ｃｈｏｎｇｑｉｎｇ．Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ ｔｈｅ ｅｘｐｌｏｉｔａｔｉｏｎ ｈａｄ ａｃｈｉｅｖｅｄ ｍａｒｋｅｄ ｅｆｅｃｔ ｔｈｒｏｕｇｈ ｍａｎｙ ｙｅａｒｓ ｗｏｒｋ ｂｙ
ｔｈｅ ｌｏｃａｌ ｇｏｖｅｒｎｍｅｎｔ．Ｂｕｔ ｔｈｅｒｅ ｗｅｒｅ ｍａｎｙ ｐｒｏｂｌｅｍｓ ｉｎ ｄｉｒｅ ｎｅｅｄ ｏｆ ｉｍｐｒｏｖｉｎｇ．Ｓｕｃｈ ａｓ ｔｈｅ ｆｏｒｍ ａｎｄ ｃｏｌｏｕｒ，ｔｈｅ ｓｃｅｎｔ
ａｎｄ ｑｕａｎｔｉｔｙ，ｔｈｅ ｆｌｏｒｅｓｃｅｎｃｅ ｌｅｎｇｔｈ ａｎｄ ｆｏｒｅｃａｓｔ，ａｎｄ ｔｏｕｒ ｓｅｒｖｉｃｅ ａｎｄ ｐｒｏｐａｇａｎｄｉｚｉｎｇ ｍａｎａｇｅｍｎｅｔ．Ｆｏｒ ｔｈｉｓ，ｔｈｉｓ ｐａｐｅｒ
ａｄｖａｎｃｅｄ ｓｏｍｅ ｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｉｎｇ ｓｏｌｖｉｎｇ ｃｏｕｎｔｅｒｍｅａｓｕｒｅｓ．
Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ：Ｄｉａｎｊｉａｎｇ Ｃｈｏｎｇｑｉｎｇ；ｍｅｄｉｃａｌ ｐｅｏｎｙ；ｏｒｎａｍｅｎｔａｌ ｅｘｐｌｏｉｔａｔｉｏｎ；ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎ ａｎｄ ａｎａｌｙｓｉｓ
第一作者简介：张丽杰（１９７２－），女，硕士，讲师，现主要从事林木遗
传育种教学研究工作。Ｅ－ｍａｉｌ：ｚｈａｎｇｌｉｊｉｅ＿１０６＠ｓｉｎａ．ｃｏｍ。
基金项目：“十一五”国家科技基础条件平台建设资助项目
（２００５ＤＫＡ２１００３）。
收稿日期：２０１０－０５－１１
桃叶卫矛组织培养的研究
张 丽 杰１，王 强 恩２，周 强２，张 才２
（１．沈阳农业大学 林学院，辽宁 沈阳１１０１６１；辽宁省实验林场，辽宁 清原１１３３１１）
摘 要：以桃叶卫矛的成熟胚为外植体，研究了不同消毒方法对桃叶卫矛离体胚萌发的影
响，并筛选出最佳消毒液及消毒时间。同时，选取不同培养基和激素浓度进行卫矛的离体胚培养
最佳激素组合筛选。结果表明：不同的灭菌剂和不同的灭菌时间对无菌苗的萌发与生长有显著
的影响；筛选出ＭＳ１／２＋ＢＡ ０．５ｍｇ／Ｌ＋ＮＡＡ ０．２ｍｇ／Ｌ＋蔗糖３０ｇ／Ｌ＋琼脂７ｇ／Ｌ的培养基为
成熟胚萌发的最适培养基配比。
关键词：桃叶卫矛；灭菌方法；组织培养
中图分类号：Ｓ ６８７ 文献标识码：Ａ 文章编号：１００１－０００９（２０１０）１７－０１４１－０３
桃叶卫矛（Ｅｕｏｎｙｍｕｓ ｂｕｎｇｅａｎｕｓ Ｍａｘｉｍ）为卫矛科卫
矛属的落叶小乔木。该树种对风和烟尘有很强的抵抗
力，病虫害少，且枝叶娟秀细致，树冠饱满形美，是园林
绿化观赏树种，同时具有较高的经济价值。桃叶卫矛的
繁殖一般采用播种、扦插、分株繁殖等方法，但由于受种
子园数量以及产量所限制，所获得的优质苗木非常少，
而且繁殖速度也比较慢，而且播种繁殖种子的采集时间
要求很强，采种后预处理复杂，且后期管理要求高，在生
产上很难采用种子繁殖的方法大规模培育苗木［１］。因
此，该研究应用组织培养的手段探索桃叶卫矛无性繁殖
的新途径，并取得良好效果。
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·生物技术· 北方园艺２０１０（１７）：１４１～１４３
１ 材料与方法
１．１ 试验材料
取自辽宁省湾甸子实验林场１０ａ生的桃叶卫矛，选
取发育良好的母树，采取当年生的成熟种子，以成熟胚
为外植体作为试验材料。
１．２ 试验方法
１．２．１ 培养基的配置 选取了ＭＳ、ＭＳ１／２（所有元素都
减半）和１／２ＭＳ（大量元素减半）３种基本培养基，附加细
胞分裂素ＢＡ（０、０．２、０．５ｍｇ／Ｌ），生长素ＮＡＡ（０、０．１、
０．２、０．５ｍｇ／Ｌ），蔗糖３０ｇ／Ｌ，琼脂７ｇ／Ｌ，ｐＨ ５．８，用常
规方法配制分装后，经１２１℃灭菌２０ｍｉｎ备用。
１．２．２ 材料消毒 将桃叶卫矛种子的假种皮去除，然后
将种子用自来水浸泡３ｄ，每天换２次水；接种前１ｄ用
流水冲洗。然后在超净工作台上进行消毒处理。试验
设计４种消毒组合。每组合设５个处理。每个处理重
复５次，每瓶３个外植体（表１）。外植体消毒后，切开种
子取出成熟胚，将其接种在培养基上进行培养。
表１ 试验所用的不同种类消毒剂和消毒时间
序号
消毒剂
种类 处理时间／ｓ 种类 处理时间／ｍｉｎ
１ ７０％酒精 ３０ ０．１％升汞 ８
２ ７０％酒精 ３０ ０．１％升汞 １０
３ ７０％酒精 ３０ ０．０８％Ｈ２Ｏ２ ８
４ ７０％酒精 ３０ ０．０８％Ｈ２Ｏ２ １０
１．２．３ 培养条件 接种后放入培养室中光照培养
（１２ｈ／ｄ），培养室的温度控制为２３～２５℃，光照强度为
２ ０００ｌｘ左右，湿度在６０％～７０％之间。
２ 结果与分析
２．１ 不同消毒剂和消毒时间对外植体生长的影响
将种子浸泡３ｄ后，按表１中的消毒剂和消毒时间
对桃叶卫矛的种子进行消毒。然后将处理好的种子用
解剖刀切开，取出种胚接种到培养基中，１０ｄ后统计外
植体染菌情况。将染菌情况记录于表２。
表２ 不同消毒剂和不同处理时间对
外植体生长的影响
培养基 处理 消毒剂
处理时间
／ｍｉｎ
平均染
菌率／％
Ｆ０．０１
显著水平
ＭＳ １ ０．０８％Ｈ２Ｏ２ ８ ４６．６７ Ａ
２ ０．０８％Ｈ２Ｏ２ １０ ３６．６７ Ａ
３ ０．１％升汞 ８ ３８．８９ Ａ
４ ０．１％升汞 １０ １０．５６ Ｂ
注：每个处理３次重复，用ＬＳＤ最小显著差数法进行多重比较。
由表３可知，不同消毒方法对外植体的萌发与生长
有极显著影响（Ｐ＜０．０１）。因此选择最佳消毒方法是必
要的，在以后的试验中选取７０％的酒精浸泡３０ｓ＋
０．１％升汞１０ｍｉｎ为最佳消毒处理。
２．２ 不同培养基对外植体生长的影响
试验中选用了３种基本培养基：ＭＳ、１／２ＭＳ（只有大
量元素减半）、ＭＳ１／２（所有元素都减半），将预处理的种
子用解剖刀解开取出种胚，然后接种于上述３种培养基
中。每种培养基设４个处理，共计１２个处理，每处理重
复５次，每瓶接种３个外植体。１０ｄ后观察统计成熟胚
在不同培养基上的萌发情况。
表３ 不同培养基对外植体萌发的影响
培养基 总接种数 总萌发数 总萌发率／％ 生长状况
ＭＳ ６０ １４ ２３．３３ 子叶薄，长势弱胚根长势弱
ＭＳ１／２ ６０ ３４ ５６．６７ 子叶胚根长势均良好
１／２ＭＳ ６０ ２１ ３５．００ 子叶卷曲，胚根褐化
由表３可知，培养基不同，对桃叶卫矛成熟胚的离
体萌发的影响是很大的。其中在 ＭＳ１／２培养基上的成
熟胚的子叶萌发及长势很好，而在ＭＳ培养基上的外植
体的子叶长势很弱，子叶略为变绿，但大部分子叶出现
黄褐色；１／２ＭＳ培养基上的外植体在接种３～４ｄ后，子
叶膨胀，边缘向里卷曲，并且在胚根处出现褐变现象。
以后褐变的外植体逐渐死亡。
２．３ 不同激素配比对外植体生长的影响
将成熟胚取出后接种于 ＭＳ１／２培养基上，试验共
设３个处理和１个对照。接种１０ｄ后，观察外植体在培
养基上的生长情况，并对萌发率进行统计。
表４ ＭＳ１／２培养基中不同激素配比外植体萌发率
激素配比／ｍｇ·Ｌ－１ 接种数 萌发数 萌发率／％ 生长状况
ＢＡ ０＋ＮＡＡ ０ １５ ５ ３３．３３ 长势良好
ＢＡ ０．２＋ＮＡＡ ０．５ １５ ７ ４６．６７ 长势良好
ＢＡ ０．５＋ＮＡＡ ０．２ １５ １２ ８０．００ 长势良好
ＢＡ ０．５＋ＮＡＡ ０．１ １５ １０ ６６．６７ 长势良好
由表４可以看出，ＢＡ ０．５ｍｇ／Ｌ＋ＮＡＡ ０．２ｍｇ／Ｌ
的激素组合萌发率最高达到８０％，ＢＡ ０．５ｍｇ／Ｌ＋ＮＡＡ
０．１ｍｇ／Ｌ的激素组合也较高为６６．６７％，由此可知可推
测高ＢＡ含量与低的ＮＡＡ含量组合可能更有利于胚的
萌发，不加任何激素的配方也有一定的萌发率，而且萌
发率相对较高，但无菌苗的长势差，１５ｄ后逐渐失去活
力而死亡。这可能是在启动初期，外植体本身含有一定
的外源激素，可以促进其萌发，但促进萌发的能力有限，
因此只有添加适宜的外源激素才能最大程度地促进其
形成完整的无菌苗。由以上统计结果表明，激素组合
ＭＳ１／２＋ＢＡ ０．５ｍｇ／Ｌ＋ＮＡＡ ０．２ｍｇ／Ｌ萌发率最高，
且长势也好。因此，选取ＭＳ１／２＋ＢＡ ０．５ｍｇ／Ｌ＋ＮＡＡ
０．２ｍｇ／Ｌ为最适宜的激素组合。
２．４ 生根培养
在无菌苗生根培养过程中，选取了 ＭＳ１／２（所有元
素都减半）培养基；附加了０．２ｍｇ／Ｌ的生长素ＮＡＡ，将
已发育良好，生长正常的小苗转入生根培养基中。５ｄ
后观察，在无菌苗的根部已经长出浅绿色的块状愈伤组
织，１０ｄ后，在愈伤组织上长出大约１ｃｍ左右的不定根。
但是，在生根培养过程中，大部分萌发苗出现了褐变现
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北方园艺２０１０（１７）：１４１～１４３ ·生物技术·
象，褐变是离体组织培养时细胞中多酚氧化酶活性增
加，致使酚类物质氧化生成棕褐色醌类物质的结果［２－３］。
目前，已经在许多植物的组织培养过程中发现了有外植
体褐变现象［４］。例如，在白桦（Ｂｅｔｕｌａ ｐｌａｔｙｐｈｌａ）的组织
培养中，低盐浓度的 ＷＰＭ培养基比 ＭＳ培养基更能有
效的阻止褐变［５］。在桑树（Ｍｏｒｕｓ ａｌｂａ））的组织培养中，
褐变的原因归为水的硬度、蔗糖的品质、无机盐的浓度、
培养基的硬度、继代时间长短、光照和培养温度、外植体
的生理状态等综合影响的结果［６］。
２．５ 试管苗的移栽
试管苗的移栽要经过移栽前的准备、移栽和移栽后
的养护管理等环节。试管苗从试管内移到试管外，由异
养转为自养，由原来的恒温、高温、弱光变为自然变温、
低温、强光，环境条件由无菌变为有菌，变化是很剧烈
的。因此，在移栽前１周左右的时间，将根系生长良好
的封口膜打开，进行练苗２～３ｄ，使小苗逐渐适应外界
的环境。然后将已经生根的无菌苗移栽至盛有草炭土
的基质的容器中。刚开始几天要用保鲜膜保水和遮荫，
以防止外界强烈的光照和水分的散失。
将生长良好长出细根的小苗用镊子取出，自来水洗
去根部琼脂移栽入准备好的塑料花盆中，并浇透水，盖
上塑料膜以防水分散失过快。１０ｄ后观察，植株生长良好。
３ 结论
该项研究是首次通过选取桃叶卫矛的成熟种子，利
用成熟胚为外植体，获得无菌苗、生根苗、移栽这一无性
繁殖方法。
通过选取４种不同的灭菌剂和不同的灭菌时间对
外植体进行消毒处理，结果表明，不同灭菌剂采用不同
的灭菌时间对外植体的萌发与生长有显著的影响。
选取以ＭＳ、１／２ＭＳ、ＭＳ１／２的３种培养基为外植体
萌发培养基，并附加不同浓度的ＢＡ和ＮＡＡ结果表明
外植体在 ＭＳ１／２培养基上萌发率最高，生长较好。因
此，筛选出ＭＳ１／２＋ＢＡ ０．５ｍｇ／Ｌ＋ＮＡＡ ０．２ｍｇ／Ｌ培
养基为成熟胚萌发的最适培养基。萌发率可以达
到８０％。
以ＭＳ１／２培养基为生根培养基，附加生长素ＮＡＡ，
０．２ｍｇ／Ｌ ５ｄ后，在苗根部长有约３ｍｍ的块状愈伤，并
在愈伤部位长有细根。
经过２～３ｄ的练苗，将已生根的小苗转入草炭土基
质的容器中，１０ｄ后观察，小苗生长正常。
试验证明，选取桃叶卫矛的成熟胚为外植体进行诱
导使其萌发、生根、成苗，这是一条可行的植株再生
途径。
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ＺＨＡＮＧ Ｌｉ－ｊｉｅ１，ＷＡＮＧ Ｑｉａｎｇ－ｅｎ２，ＺＨＯＵ Ｑｉａｎｇ２，ＺＨＡＮＧ Ｃａｉ ２
（１．Ｆｏｒｅｓｔｒｙ Ｃｏｌｅｇｅ ｏｆ Ｓｈｅｎｙａｎｇ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｓｈｅｎｙａｎｇ，Ｌｉａｏｎｉｎｇ １１０１６１；２．Ｌｉａｏｎｉｎｇ Ｐｒｏｖｉｎｃｅ Ｔｅｓｔｓ Ｔｒｅｅ Ｆａｒｍ，Ｑｉｎｇｙｕａｎ，Ｌｉａｏｎ－
ｉｎｇ １１３３１１）
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｉｎ ｏｒｄｅｒ ｔｏ ａｃｈｉｅｖｅ ｔｈｅ ｅｘｓｏｍａｔｉｚｅ ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ Ｅｕｏｎｙｍｕｓ ｂｕｎｇｅａｎｕｓ Ｍａｘｉｍ．ｔａｋｉｎｇ ｉｔｓ ｍａｔｕｒｅ ｅｍｂｒｙｏ
ａｓ ｅｘｐｌａｎｔｓ，ｓｔｕｄｉｅｓ ｔｈｅ ｉｎｆｌｕｅｎｃｅ ｏｎ ｔｈｅ ｅｘｐｌａｎｔｓ ｇｒｏｗｔｈ ｕｎｄｅｒ ｄｉｆｅｒｅｎｔ ｓｔｅｒｉｌｉｚｉｎｇ ａｇｅｎｔｓ ａｎｄ ｄｉｆｅｒｅｎｔ ｓｔｅｒｉｌｉｚａｔｉｏｎ ｔｉｍｅ，
ａｎｄ ｉｍｐａｃｔ ｏｎ ｔｈｅｍ ｗｈｉｃｈ ｗａｓ ｃａｕｓｅｄ ｂｙ ｄｉｆｅｒｅｎｔ ｍｅｄｉｕｍｓ ａｎｄ ｄｉｆｅｒｅｎｔ ｈｏｒｍｏｎｅ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ ｒａｔｉｏｓ．Ｔｈｉｓ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔ
ｓｔｕｄｉｅｓ ｔｈｅ ｐｏｓｓｉｂｌｅ ａｐｐｒｏａｃｈｅｓ ｏｆ ｆｒｏｍ ｖｉｔｒｏ ｇｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｔｏ ｎｏｒｍａｌ ｓｔｒａｉｎｓ ｗｉｔｈ ｔｈｅ ｈｏｐｅ ｔｏ ｇｅｔ ｔｈｅ ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ ｐｌａｎｔｓ．
Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ ｔｈｅ ｄｉｆｅｒｅｎｔ ａｇｅｎｔｓ ａｎｄ ｄｉｆｅｒｅｎｔ ｓｔｅｒｉｌｉｚａｔｉｏｎ ｓｔｅｒｉｌｉｚａｔｉｏｎ ｔｉｍｅ ｏｎ ｔｈｅ ｇｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ａｎｄ ｇｒｏｗｔｈ ｏｆ
ｎｏｎ－ｖａｃｃｉｎｅ ｈａｓ ａ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ ｉｍｐａｃｔ．Ｆｉｌｔｅｒ ｏｕｔ ｔｈｅ ＭＳ１／２＋ＢＡ ０．５ｍｇ／Ｌ＋ＮＡＡ ０．２ｍｇ／Ｌ＋ｓｕｃｒｏｓｅ ３０ｇ／Ｌ＋ａｇａｒ ７
ｇ／Ｌ ｍｅｄｉｕｍ ｆｏｒ ｔｈｅ ｇｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ ｍａｔｕｒｅ ｅｍｂｒｙｏｓ ｏｆ ｔｈｅ ｂｅｓｔ ｍｅｄｉｕｍ ｒａｔｉｏ．
Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ：Ｅｕｏｎｙｍｕｓ ｂｕｎｇｅａｎｕｓ；ｓｔｅｒｉｌｉｚａｔｉｏｎ ｍｅｔｈｏｄｓ；ｔｉｓｓｕｅｃｕｌｔｕｒｅ
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