全 文 :现代预防医学 2009 年第 36 卷第 16 期 Modern Preventive Medicine, 2009, Vol.36, NO.16
文章编号: 1003-8507(2009)16-3116-04 中图分类号: R697 + .3 文献标识码: A 【实验技术及其应用】
水蔓菁总黄酮对大鼠炎性前列腺组织形态
和超微结构的影响
张子梅 1, 苗明三 2, 张玉林 2
摘要: [ 目的 ] 观察水蔓菁总黄酮对大鼠前列腺炎模型前列腺组织形态及超微结构的影响。 [ 方法 ] 60 只大鼠
随机分为: 空白对照组, 模型组, 前列康组, 大、 中、 小剂量水蔓菁总黄酮组。 建立大鼠前列腺炎模型。 大、 中、 小剂
量水蔓菁总黄酮组分别灌服大 (120 mg / kg)、 中 (60 mg / kg)、 小 (30 mg / kg) 剂量的水蔓菁总黄酮混悬液进行治疗,
空白对照组和模型组均灌服同体积的生理盐水 (1 ml / 100 g), 前列康对照组灌服前列康混悬液 (1 000 mg / kg), 每日 1
次, 连续给药 22 d 后, 观察各组大鼠前列腺组织形态和电镜超微结构的变化。 [ 结果 ] 与空白对照组相比, 模型组大
鼠前列腺比膜面 (Sm) 显著降低 (P﹤0.01)。 与模型组相比, 大、 中、 小剂量水蔓菁总黄酮组大鼠 Sm 均显著增加 (P
﹤0.01)。 水蔓菁总黄酮能使前列腺炎模型大鼠的前列腺组织形态和超微结构的病理变化得到显著的改善。 [ 结论 ] 水
蔓菁总黄酮组可显著改善前列腺组织形态学病理变化, 且有明显的量效关系。
关键词: 水蔓菁总黄酮; 前列腺炎模型; 前列腺组织形态; 超微结构
STUDIES ON THE EFFECT OF BASTARD SPEEDWELL TOTAL FLAVONOIDS ON THE RAT
MODEL OF PROSTATITIS’S PROSTATE HISTOMORPHOLOGY AND ULTRASTRUCTURAL
ZHANG Zi-mei, MIAO Ming-san, ZHANG Yu-lin. (The Second Affiliated Hospital, Xinxiang Medical
College, Xinxiang 453002, China)
Abstract: [Objective] To observe the effect of bastard speedwell total flavonoids decotion on treating the rat’s Prostatitis
model’s Prostate histomorphology and ultrastructural. [Methods] 60 rats were randomly divided into six groups: normal group,
model group, the Qian Lie Kang group, the high, middle and low dosage bastard speedwell total flavonoids groups. The rats
Prostatitis models were established. the rats in Qian Lie Kang group were irrigated Qian Lie Kang suspension (1.5g / kg), the
rats in the high, middle and low dosage of bastard speedwell total flavonoids groups were irrigated bastard speedwell total
flavonoids suspension (180mg / kg, 90mg / kg and 45mg / kg respectively), and rats in the normal group and the model group
were filled normal saline into the stomachs. Drug was irrigated once a day. After giving drug for 22 days, the histomorphology
and ultrastructural changes of prostate in rats were observed change by electron microscope. [Results] Compared with normal
group, prostate Sm of model group significantly degraded (P﹤0.01). Compared with model group, Prostatitis model’s Sm sig-
nificantly increased (P﹤0.01) in the high, middle and low dosage of bastard speedwell total flavonoids groups. The pathologi-
cal changes of Prostate histomorphology and Ultrastructural in the rat Model of Prostatitis can be significantly improved by Bas-
tard speedwell total flavonoids. [Conclusion] Bastard speedwell total flavonoids can significantly improve the prostate tissue
change, which have apparent dose-effect relationship.
Key words: Bastard speedwell total flavonoids; Prostatitis animal model; Prostate histomorphology; Ultrastruc-
tural
水蔓菁为玄参科植物水蔓菁 Veronica linariifolia Pall. ex
Link subsp. dilatata (Nakai et Kitag.) Hong 的干燥全草, 味苦、
性微寒, 具有清热解毒、 利尿、 止咳化痰等功能, 临床用于支
气管炎、 肺脓疡、 急性肾炎、 尿路感染、 疖肿的治疗 [1]。 近年
来的研究表明, 水蔓菁中含有黄酮苷、 黄酮苷元等成分[2], 但
作者简介: 张子梅, 女, 硕士, 副主任药师, 研究方向: 中药药理与
临床
通讯作者: 苗明三, 男, 博士, 教授, 博士生导师, 研究方向: 中药
药理
作者单位: 1.河南新乡医学院第二附属医院, 新乡, 453002; 2.河南
中医学院
对其药理作用研究甚少。 本实验通过观察水蔓菁总黄酮对大鼠
前列腺炎模型的前列腺组织形态和超微结构的影响, 探讨水蔓
菁总黄酮提取物的药理作用及特点。
1 材料和方法
1.1 材料
1.1.1 实验用药 水蔓菁总黄酮, 由河南中医学院化学教研室
提供, 水蔓菁总黄酮的平均含量在 90%以上, 符合药理实验的
要求 ; 前列康片 (浙江康恩贝制药股份有限公司 , 批号
20060301); 戊巴比妥钠 (中国医药集团上海化学试剂公司,
批号 F20030816); 注射用青霉素钠 (华北制药股份有限公司,
批号 X0511332); 0.9%氯化钠注射液 (郑州永和制药股份有限
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公司, 批号 20060302); 消痔灵注射液 (北京双鹤药业股份有
限公司, 批号 20060415)。
1.1.2 动物 Wistar 大鼠 60 只, 体质量 240~260 g, 雄性 (河
北省医学实验动物中心提供), 合格证编号: 701023。
1.1.3 仪器 FA(N) / JA(N)系列电子天平, 上海民桥精密仪器
有限公司; TGL-16G 高速冷冻离心机, 上海安亭科学仪器厂;
电动匀浆机, 宁波新芝生物科技股份有限公司。
1.2 方法
1.2.1 分组与给药 [3] 取雄性 Wistar 大鼠 60 只, 随机均匀分
为 6 组, 其中 1 组为空白对照组, 做假手术, 其余 5 组造大鼠
前列腺炎模型。 分别给大鼠称重, 按 45 mg / kg 剂量腹腔注射
1%戊巴比妥钠, 待麻醉后, 常规消毒皮肤, 于无菌条件下,
造模型 5 组大鼠于下腹正中切口达腹腔, 暴露膀胱背侧前列腺
(背侧叶), 分别注入 25%消痔灵注射液 0.2 ml 只, 缝合肌肉
及皮肤, 肌肉注射青霉素 20 万 u / kg 防感染。 造模型 5 组再均
分为大、 中、 小剂量的水蔓菁总黄酮组、 前列康混悬液组和模
型组。 从造模 d 8 起, 分别灌服大、 中、 小剂量的水蔓菁总黄
酮混悬液 (120、 60、 30 mg / kg) 和前列康混悬液 (1 000 mg /
kg, 100 mg /ml, 1 ml / 100 g, 剂量相当于临床用量的 10 倍),
空白对照组和模型组分别灌服同体积的生理盐水 (1 ml / 100
g)。 每日 1 次, 连续给药 22 d。
1.2.2 前列腺组织形态和超微结构观察 [3,4] 于末次给药 1h
后, 将大鼠称重后处死, 迅速取出前列腺组织, 称重, 取一部
分前列腺组织固定于 10%福尔马林溶液中, 石蜡包埋, 切片,
HE 染色, 光镜下观察各组前列腺组织的形态学变化。 另取一
部分前列腺组织用 4%戊二醛磷酸缓冲液固定, 用作电镜观察,
观察各组前列腺的超微结构变化。
根据实验各组动物前列腺出现不同程度的腺体、 大小差异
和腺上皮皱折的不同程度差异, 采用立体计量学定量测定, 可
以客观地反映其病理变化的量, 按照每组动物 10 只, 每只拍
三张照片即 30 张, 求 X 数。 观测指标为比膜面 (Sm): Sm=
腺上皮交叉点数 /腺体体密度 (Vv)。
1.2.3 统计方法 数据分析用 SPSS 10.0 for windows 统计软
件, 计量资料组间比较采用单因素方差分析, 等级资料采用
Ridit 分析。
2 结果
2.1 对大鼠前列腺炎模型大鼠前列腺组织学的影响
各组前列腺组织病理变化: 与空白对照组比, 模型组前列
腺 Sm 显著降低 (P﹤0.01), 说明造大鼠前列腺炎模型成功,
与模型组比, 大、 中剂量水蔓菁总黄酮组和前列康混悬液组均
可显著增加前列腺炎模型的 Sm (P﹤0.01), 以大、 中剂量水
蔓菁总黄酮组对前列腺炎的抑制作用最好, 见表 1。
各组大鼠前列腺组织进行光镜观察 (见图 1), 结果为 :
空白对照组大鼠的前列腺多数腺体处于静止状态, 腺体缩小,
腺上皮皱折排列, 腺腔内无分泌物, 腺腔明显缩小; 模型组大
鼠前列腺呈显著扩张状态, 腺体增大 1~3 倍, 腺上皮呈扁平
状, 腺腔内充满着大量红色分泌物, 腺腔明显扩张, 周围可见
散在炎症细胞 (淋巴细胞); 前列康混悬液组少部分腺体显著
缩小, 大部分腺体处扩张状态, 分泌物减少, 周围可见炎症细
胞 (淋巴细胞); 大剂量水蔓菁总黄酮组大鼠前列腺部分腺体
显著缩小, 腺腔有分泌物存在, 而大部分腺体处于扩张状态,
分泌物减少, 周围可见少量的炎症细胞 (淋巴细胞); 中剂量
水蔓菁总黄酮组大鼠前列腺大部分腺体缩小, 腺上皮呈皱缩状
态, 腺腔明显缩小, 腔内分泌物明显缩小, 少数腺体扩大, 腔
内充满大量的红色分泌物; 小剂量水蔓菁总黄酮组大鼠前列腺
腺体处于明显的扩张状态, 腺上皮变薄呈扁平状, 腺腔内充满
着大量红色的分泌物。 各用药组对前列腺炎模型均有不同程度
的抑制作用, 以大、 中剂量水蔓菁总黄酮组对前列腺炎抑制作
用最好。
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图 1 水蔓菁总黄酮对大鼠前列腺炎模型前列腺形态影响的光镜照片
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3 讨论
前列腺炎是严重危害中青年身心健康的疑难病 [5], 其发病
率呈上升趋势。 本实验成功地复制了与临床病理基本相似的大
鼠前列腺纤维增生性炎症模型, 光镜结果显示模型组大鼠前列
腺呈显著扩张状态, 腺体增大, 腺腔内及间质炎细胞浸润明
显; 通过大鼠的前列腺上皮细胞超微结构的观察结果分析可
见, 模型组大鼠前列腺上皮细胞中的线粒体数量明显减少, 嵴
明显变短或消失, 说明上皮能量代谢障碍, ATP 产生降低, 内
质网结构也发生明显的改变, 明显的扩张呈囊泡状, 其蛋白质
合成代谢也出现障碍而降低的病理改变; 这些病理表现与正常
对照组间存在明显差异。
(下转第 3121 页)
2.2 对前列腺炎大鼠模型影响超微结构的观察结果
实验各组大鼠前列腺上皮细胞中线粒体和内质网超微结构
的观察可见: 空白对照组大鼠的前列腺上皮细胞中的线粒体和
线粒体嵴排列整齐密集, 内质网排列整齐; 模型组大鼠前列腺
上皮细胞中的线粒体数量减少, 线粒体嵴大部分变短或消失,
嵴间腔扩张, 内质网排列紊乱, 扩张明显呈囊泡状; 前列康对
照组大鼠的前列腺上皮细胞中的线粒体增多, 明显增生, 嵴大
部分排列整齐, 小部分嵴变短或消失, 内质网排列整齐; 大剂
量水蔓菁总黄酮组大鼠的前列腺细胞中的线粒体增多, 嵴部分
排列整齐, 部分嵴变短或消失, 内质网部分排列较整齐; 中剂
量水蔓菁总黄酮组大鼠的前列腺上皮细胞中的线粒体明显增
多, 嵴大部分排列整齐, 小内质网大部分排列较整齐, 少部分
扩张; 小剂量水蔓菁总黄酮组大鼠的前列腺上皮细胞中的线粒
体有所增多, 嵴大部分变短或消失, 内质网排列整齐。 结果显
示水蔓菁总黄酮各用药组对前列腺炎模型均有不同程度的抑制
作用, 见图 2。
图 2 水蔓菁总黄酮对大鼠前列腺炎模型前列腺超微结构影响的电镜照片
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现代预防医学 2009 年第 36 卷第 16 期 Modern Preventive Medicine, 2009, Vol.36, NO.16
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本实验通过大、 中、 小剂量水蔓菁总黄酮组可显著增加前
列腺炎模型的 Sm, 结合大、 中、 小剂量水蔓菁总黄酮组模型
大鼠的前列腺组织的光镜观察和前列腺上皮细胞超微结构的观
察结果分析, 阐述了水蔓菁总黄酮对前列腺炎模型大鼠的治疗
作用, 证明了大、 中、 小剂量水蔓菁总黄酮组具有增强线粒体
能量代谢的作用, 改善线粒体结构的恢复, 促进蛋白质的合成
代谢, 恢复内质网 (特别是粗面内质网) 的结构和功能。 水蔓
菁总黄酮各用药组光镜与电镜病理改善程度接近正常对照组,
显示水蔓菁总黄酮可显著改善前列腺炎性症状, 综合分析, 以
大、 中剂量的水蔓菁总黄酮作用较好, 该结果与前期的研究结
果[6]一致。 实验显示水蔓菁总黄酮对前列腺炎模型有一定的疗
效, 为水蔓菁进行更深入的研究和进一步开发应用提供了药理
实验基础。
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取效果, 因而更加节省时间。 另外, 采用氮吹仪一次可以完成
对多个样品的浓缩, 工作效率更高。
(3) 本方法没有采用无水硫酸钠对萃取液进行脱水干燥,
原因是笔者实验发现无水硫酸钠对农药的吸附较强, 它的加量
直接影响回收结果。
2.5 方法应用
采用国标方法和本方法分别对水样进行测定, 检出氯氰菊
酯, 结果分别为: 0.258 mg/L 和 0.275 mg/L, 二者的相对相差
为 6.2%。
3 小结
从以上结果可以看出, 水中的 7 种拟除虫菊酯类农药使用
正己烷分两次萃取, 于快速混合器中快速混合后静置分层, 分
离出有机相, 用氮吹仪吹至 1 ml 以后通过 DB-1 弹性石英毛
细管柱 (30 m × 0.25 mm × 0.25 μm) 进行色谱分析, 7 种拟
除虫菊酯类农药得到了较好分离。 该方法萃取效果好, 并且具
有简便、 快速、 准确的优点, 能够满足水中拟除虫类农药残留
量的测定。
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