全 文 ：大孔树脂纯化水蔓菁总黄酮的工艺研究
杜 艳， 刁海鹏， 丁 红*
(山西医科大学，山西 太原 030001)
收稿日期:2011-05-18
基金项目:山西医科大学大学生创新基金资助项目(2007077)
作者简介:杜 艳(1980—) ，女，讲师，硕士，研究方向:药物新剂型、植物有效成分的提取及应用。Tel:13753150381，E-mail:dulinhui －
2004@ 163． com
* 通信作者:丁 红(1949—) ，女，教授，研究方向:药物新剂型、植物有效成分的提取及应用。Tel:(0351)4690137，E-mail:qdh26@ 163． com
摘要:目的 研究大孔树脂纯化水蔓菁总黄酮的最佳工艺条件。方法 以静态饱和吸附量、解吸量、解吸率为考察指标，
比较了 5 种大孔树脂，并对 HPD600 树脂的动态比上柱量、比吸附量、比洗脱量进行了考察，以总黄酮保留率和纯度为指
标对树脂吸附工艺条件进行了筛选。结果 HPD600 树脂具有最佳的吸附特性，最佳工艺为上样液浓缩至药液比1 ∶ 8，
依次以 2 BV水洗脱，4 BV 50%乙醇洗脱，所得水蔓菁总黄酮纯度为 20%左右。结论 HPD600 树脂吸附性能好，用于纯
化水蔓菁中总黄酮有效成分。
关键词:大孔树脂;水蔓菁总黄酮;分离纯化
中图分类号:R284． 2 文献标志码:B 文章编号:1001-1528(2012)02-0365-03
水蔓菁 Veronica linariifolia 为玄参科细叶婆婆纳属植
物，具有清热解毒、利尿、止咳化痰等作用［1］。主要化学成
分为木犀草素苷、芹黄素［2］等黄酮类化合物，临床用于治疗
肺炎、急性肾炎等疾病［3］。本实验拟采用大孔树脂法分离
纯化水蔓菁中总黄酮有效成分，提高其含有量，为进一步开
发水蔓菁资源奠定基础。
大孔吸附树脂近年来常用于中草药提取纯化，具有高
效、低毒的特点。本实验首次采用大孔吸附树脂法对水蔓菁
提取物进行纯化，比较 5 种树脂吸附特性，筛选出最佳树脂。
考察了上样质量浓度、洗脱剂体积分数、洗脱剂用量等工艺
参数，确定最佳纯化工艺条件。
1 仪器试剂
1. 1 仪器 紫外分光光度计(上海菁华仪器) ;760CRT 双
光束紫外-可见分光光度计(上海精密分析仪器厂) ;
FA1004 电子天平(上海分析天平仪器厂) ;真空干燥箱
(DEG-402 型天津天宇技术实业有限公司) ;大孔树脂(购
自河北沧州)。
1. 2 试药 芦丁对照品(中国药品生物制品检定所，批号:
1521-200401) ;水蔓菁药材，经山西省药检所鉴定为细叶婆
婆纳属水蔓菁 Veronica linariifolia，产自山西省万荣县。
2 方法与结果
2. 1 总黄酮测定方法
2. 1. 1 对照品溶液的制备 精密称取芦丁对照品 3. 1 mg，
置 50 mL量瓶中，加适量 60%乙醇，超声溶解，用 60%乙醇
稀释至刻度，摇匀，即得质量浓度为 0. 062 mg /mL 的芦丁对
照品溶液。
2. 1. 2 标准曲线的建立 分别精密吸取芦丁对照品溶液
0. 5、1. 0、2. 0、3. 0、4. 0 mL，置 10 mL 量瓶中，各加 0. 1 mol /L
AlCl3 溶液 2 mL，0. 1 mol /L KAc 溶液 3 mL，再加 60%乙醇至
刻度，摇匀，放置 30 min，在 410 nm 处测定吸光度。以吸光度
(Y)为纵坐标，以质量浓度(X)为横坐标绘制标准曲线，得回
归方程 Y = 0. 034 9X －0. 000 5，r =0. 999 9，表明芦丁质量
浓度在 3. 1 ～ 24. 8 μg /mL范围内呈良好线性关系［4-5］。
2. 1. 3 定量测定 称取水蔓菁纯化物粉末 0. 02 g 3 份，精
密称定，按 2. 1. 1 项的方法制备供试液，取 0. 5 mL 置 10 mL
量瓶中，按 2. 1. 2 项方法操作，测定总黄酮量。
2. 2 树脂筛选研究
2. 2. 1 上样液的制备 将 30 g 药材用 10 倍量水回流提取
3次，每次 1 h，合并 3 次提取液，减压浓缩至药液比为1 ∶ 8，
作为上柱液备用［6-7］。
2. 2. 2 静态吸附实验 将各型号干树脂 400 mg置于 50 mL
锥形瓶中，精密加入水蔓菁上样液 20 mL，振摇 24 h，滤过，
得吸附后的滤液［12］。
将吸附后的各型号树脂过滤后分别置 50 mL锥形瓶中，
精密加入 85%乙醇 20 mL，其余操作同上，得解吸后的滤液。
测定吸附液和解吸液的质量浓度，计算各树脂静态饱和吸附
量和解吸量、解吸率［8］，结果见表 1。
饱和吸附量 =(吸附前溶液质量浓度 －吸附后溶液质
量浓度)×溶液体积 /干树脂质量
解吸量 = (解吸液质量浓度 × 解吸液体积)/干树脂
质量
解吸率 =解吸量 /饱和吸附量 × 100%
结果表明:HPD600 树脂的饱和吸附量和解吸率最大，
确定选用 HPD600 树脂分离纯化总黄酮。
563
2012 年 2 月
第 34 卷 第 2 期
中 成 药
Chinese Traditional Patent Medicine
February 2012
Vol． 34 No． 2
表 1 5 种树脂静态饱和吸附量及解吸率测定结果 (n =3)
树脂型号
质量浓度 /(mg·mL －1)
吸附前 C1 吸附后 C2
饱和吸附量 /
(mg·g － 1)
解吸量 /
(mg·g － 1)
解吸
率 /%
HPD600 1. 8 0. 19 80. 5 75. 3 93. 6
AB-8 1. 8 0. 44 68. 0 58. 1 85. 4
HPD700 1. 8 0. 35 72. 5 58. 1 80. 1
HPD450 1. 8 0. 30 75. 0 67. 8 90. 4
LSA-40 1. 8 0. 24 78. 0 62. 9 80. 7
2. 3 动态吸附试验 将树脂装柱，采用 1 BV /h的体积流量
上样，用 FeCl3 溶液检测，以反应变绿为泄漏，待吸附饱和
后，先用水洗脱，水洗体积流量 1 BV /h，洗至水洗液无明显
颜色，然后用 70%乙醇洗脱，洗至无明显 AlCl3 反应。计算
比上柱量、比吸附量、比洗脱量［9］，结果见表 2。
比上柱量:S =(M上 －M残)/W
比吸附量:A =(M上 －M残 － M水洗)/W
比洗脱量:E =M洗脱 /W
表 2 HPD600 动态吸附水蔓菁总黄酮的参数 (n =3)
树脂
比上柱量 /
(mg·mL －1)
比吸附量 /
(mg·mL －1)
比洗脱量 /
(mg·mL －1)
HPD600 13. 01 10. 80 8. 91
结果表明 HPD600 动态比吸附量为 10. 80 mg /mL，比洗
脱量为 8. 91 mg /mL，吸附分离效果良好。
2. 4 HPD600 树脂吸附总黄酮工艺参数考察
2. 4. 1 上样液质量浓度的考察 将处理好的树脂 HPD600
装柱，分别将药液比为 1 ∶ 6、1 ∶ 8、1 ∶ 10(g ∶ mL)的水蔓菁
药材提取液以 1 BV /h 的体积流量上样，采用 FeCl3 溶液检
测，以反应变绿为泄漏;然后水洗，体积流量为 1 BV /h，洗脱
至近无色;然后用 70%乙醇洗脱至近无色，体积流量为 1
BV /h。收集洗脱液，测定水蔓菁总黄酮量。将洗脱液浓缩
为浸膏，计算水蔓菁浸膏中总黄酮纯度等各项指标，结果见
表 3。吸附率:E% = (Co － Ce)/ Co × 100% 式中，Co 为吸
附前溶液质量浓度(mg /mL) ，Ce 为吸附后溶液质量浓度
(mg /mL)［10］。
表 3 上样质量浓度的考察结果 (n =3)
生药:溶剂
(g ∶ mL)
比上柱量 /
(mg·mL －1)
总黄酮纯度 /
%
吸附率 /
%
1 ∶ 6 10. 97 22. 5 95. 0
1 ∶ 8 9. 62 28. 3 96. 2
1 ∶ 10 9. 32 28. 0 93. 3
结果表明:上样液质量浓度为 1 ∶ 8(g ∶ mL)时总黄酮纯
度和吸附率最高，故确定上样液质量浓度为 1 ∶ 8(g ∶ mL)。
2. 4. 2 洗脱溶剂浓度考察 取 3 根树脂柱，将药液比为 1
∶ 8 的水蔓菁药材提取溶液以 1. 5 BV /h的体积流量上样，用
FeCl3 溶液检测，以反应变绿为泄漏，待吸附饱和后，用 2 BV
的水洗，体积流量为 2 BV /h，洗脱液弃去;然后分别用 4 BV
50%、70%、80%的乙醇洗脱，收集洗脱液，测定总黄酮，计算
各项指标［11］。结果见表 4。
表 4 醇洗体积分数的考察 (n =3)
醇洗体积
分数 /%
比洗脱量 /
(mg·mL －1)
保留率 /
%
出膏率 /
%
纯度 /
%
50 7. 52 89. 44 6. 8 19. 91
70 7. 27 73. 61 6. 6 19. 10
80 8. 09 72. 76 6. 4 21. 62
试验结果表明:用 50%乙醇洗脱时，总黄酮的保留率为
最高值 89. 44%，而且 50%乙醇所得参数指标与 70%乙醇、
80%乙醇所得各参数指标差别不大。考虑生产成本，最后确
定用 50%醇洗脱。
2. 4. 3 洗脱剂用量考察 将处理好的树脂装柱，将水蔓菁
提取溶液上样，至泄漏，用 2 BV 的水以 2 BV /h 的体积流量
洗脱，然后用 50%乙醇以 2 BV /h的体积流量洗脱，以 10 mL
为 1 份收集洗脱液，测定吸光度值，以体积为横坐标，吸光度
为纵坐标作图。结果见图 1。
图 1 洗脱体积的确定 (n =3)
结果表明:当 50%乙醇洗脱体积为 4 BV(120 mL)时，就
可以将大部分黄酮洗脱下来，确定用 50%乙醇洗脱 4 BV。
2. 4. 4 洗脱用水量考察 取 3 根树脂柱，将药液比为1 ∶ 8
的水蔓菁药材提取液，上样，吸附，用 FeCl3 溶液检测，以反
应变绿为泄漏，待吸附饱和后，分别用 2、4、6 BV 的水洗脱，
然后用 2. 5 BV 70%乙醇洗脱至无色，洗脱体积流量 1. 5
BV /h。收集馏分，测定水蔓菁总黄酮保留率和纯度，结果见
表 5。
表 5 水洗脱体积考察 (n =3)
水洗用 /BV 总黄酮保留率 /% 总黄酮纯度 /%
2 81. 6 26. 9
4 80. 2 29. 4
6 77. 8 27. 5
结果表明:水洗用量在 2 BV 时就能去除极性较大的杂
质，达到很好的洗脱杂质效果，而且损失总黄酮量少，出膏率
低。因此水洗用量在 2 BV较为合适。
2. 4. 5 大孔树脂富集水蔓菁总黄酮工艺的验证试验 按上
述确定的最佳工艺条件制备 3 批样品，测定其各项指标，结
果见表 6。
试验结果表明:所确定的树脂富集水蔓菁总黄酮最佳工
艺条件具有良好的重复性，3 批水蔓菁纯化物的总黄酮平均
质量分数为 21. 3%，RSD 值为 2. 2 %。证明该工艺方法稳
定可行。
663
2012 年 2 月
第 34 卷 第 2 期
中 成 药
Chinese Traditional Patent Medicine
February 2012
Vol． 34 No． 2
表 6 大孔树脂富集水蔓菁总黄酮工艺验证试验结果(n =3)
批次
比上柱量 /
(mg·mL －1)
比吸附量 /
(mg·mL －1)
比洗脱量 /
(mg·mL －1)
保留率 /
%
纯度 /
%
平均含量 /
%
RSD /
%
1 7. 47 6. 59 5. 89 89. 4 21. 4
2 8. 74 7. 84 7. 28 92. 8 20. 8 21. 3 2. 2
3 8. 55 7. 62 6. 88 90. 29 21. 7
3 讨论
3. 1 根据静态吸附和动态吸附试验结果，HPD600 大孔树脂
被选用分离纯化水蔓菁总黄酮，最佳工艺为:上样液质量浓
度为1 ∶ 8(g ∶ mL) ，用 2 BV 的水洗脱，再用 4 BV 的 50%乙
醇洗脱，将洗脱液浓缩，干燥为浸膏，即得水蔓菁纯化物，总
黄酮的纯度达到 20%以上。
3. 2 分别考察了用 2、3、4 BV的水洗脱树脂柱，结果表明水
洗脱体积大时，将部分黄酮也洗脱下来，损失有效成分，考虑
到除杂效果，最终确定使用 2 BV的水洗脱。
3. 3 乙醇洗脱体积分数也很重要，不同体积分数的乙醇能
洗脱不同极性的黄酮化合物，为了使尽可能多的总黄酮洗脱
下来，分别考察使用 30%、50%、70%、80%的乙醇，结果表明
用 50%的乙醇，总黄酮的保留率达到最高为 89. 44%，而且
50%乙醇所得各参数指标与 70%乙醇、80%乙醇所得各参
数指标差别不大。综合考虑工业生产成本，选用洗脱效果
好，体积分数较低的乙醇，最后确定用 50%醇洗脱。
3. 4 水蔓菁纯化物的干燥温度暂定为 80 ℃。
参考文献:
［1］ 江苏新医学院． 中药大辞典［M］． 上海:上海科技出版社，
1986:1032．
［2］ 马翠英．水蔓菁中黄酮类化合物的研究［J］．药学学报，1991，
26(3) :203-208．
［3］ 杨丁铭，朱开贤．水蔓菁的化学成分研究(Ⅱ) ［J］． 中草药，
1991，22:2-4．
［4］ 杜 艳，丁 红，赵 艳．紫外分光光度法测定水蔓菁中总黄
酮的含量［J］．山西医科大学学报，2007，38(7) :610-611．
［5］ 揭金阶．罗布麻叶总黄酮类化合物的提取及含量测定［J］．中
国医院药学杂志，2006，26(12) :1490-1491．
［6］ 杜 艳，丁 红，范 博，等． 正交设计研究水蔓菁中总黄酮
提取工艺［J］．中国药物与临床，2008，8(11) :905-906．
［7］ 刁海鹏，杜 艳，孙体健．水蔓菁滴丸的制备工艺和质量评价
［J］．中成药，2010，32(9) :1612-1615．
［8］ 刘江波，傅婷婷，吕秀阳．大孔树脂分离纯化三叶青总黄酮的
工艺研究［J］．中国药学杂志，2011，46(4) :287-293．
［9］ 王丽婷，王丽娟． 大孔树脂分离纯化金银花叶中的总黄酮
［J］．华西药学杂志，2010，25(5) :575-576．
［10］ 涂琪顺，蔡光明，黄 媛，等． 大孔树脂分离纯化半枝莲总黄
酮的研究［J］．中南药学，2008，2(6) :173-174．
［11］ 黄 松，赵 薇，陶 艳．甜茶总黄酮大孔树脂精制工艺研究
［J］．中成药，2010，32(8) :1338-1343．
［12］ 苗明三，王智明，张玉林，等． 水蔓菁总黄酮对大鼠前列腺增
生模型的影响［J］．中国现代应用药学，2011，28(1) :4-8
前列泰丸的质量分析研究
张晓萍1， 丁永辉2* ， 杨 锡3， 朱 宇3
(1. 兰州大学药学院，甘肃 兰州 730000;2. 甘肃省食品药品监督管理局，甘肃 兰州 730000;3. 甘肃省食
品药品检验所 甘肃 兰州 730000)
收稿日期:2011-07-18
作者简介:张晓萍(1983—) ，女，硕士研究生，研究方向:药物分析学。Tel:18794894862，E-mail:zh8762151@ 163． com
* 通信作者:丁永辉，男，教授，硕士生导师。Tel:18693102958，E-mail:dingyonghui@ gsda． gov． cn
摘要:目的 研究并建立前列泰丸的质量控制方法。方法 采用薄层色谱法(TLC)对制剂中的黄柏、知母、萹蓄、红花进
行定性鉴别;采用 HPLC-ELSD法测定君药益母草中盐酸水苏碱的量。结果 薄层色谱法定性鉴别，特征斑点清晰，阴性
对照无干扰;HPLC-ELSD法测定结果显示，盐酸水苏碱在5. 585 0 ～ 27. 925 0 μg 范围内线性关系良好，r = 0. 999 9，平均
加样回收率为 99. 90%，RSD为 1. 57%(n = 9)。结论 所建立的方法简便、准确、专属性强，重复性好，可有效地控制前
列泰丸的质量。
关键词:前列泰丸;质量分析;TLC;HPLC-ELSD;盐酸水苏碱
中图分类号:R927. 2 文献标志码:B 文章编号:1001-1528(2012)02-0367-05
前列泰丸是由益母草、萹蓄、红花、油菜蜂花粉、知母 (盐炒)、黄柏(盐炒)六味药材，经水提浓缩等工艺制备的浓
763
2012 年 2 月
第 34 卷 第 2 期
中 成 药
Chinese Traditional Patent Medicine
February 2012
Vol． 34 No． 2