全 文 :125※基础研究 食品科学 2007, Vol. 28, No. 09
收稿日期:2007-08-04 *通讯作者
基金项目:国家自然科学基金项目(30550001)
作者简介:白洁(1983-),女,硕士研究生,研究方向为生化制药。
天山花楸全株抑菌作用的比较
白 洁,王艳梅,赵 强,兰 雁,祖丽皮亚·玉努斯,帕提古丽·马合木提*
(新疆大学生命科学与技术学院,新疆 乌鲁木齐 830046)
摘 要:用一系列细菌和真菌试验了天山花楸枝条、叶、果实及根乙醇提取物的抑菌作用。结果表明一定浓度
的天山花楸枝条、叶、果实及根乙醇提取物对供试细菌和真菌都显示出一定的抑制作用,MIC和MBC均较低,
其抑菌活性随着提取物浓度的增大而逐渐增强。天山花楸不同部位具有一定的抑菌作用和杀菌作用,尤其是对葡萄
球菌的作用更为显著。
关键词:天山花楸枝条;叶、果实、根;乙醇提取物;抗菌活性
Antibacterial Effects of Extract from Whole Sorbus tianschanica
BAI Jie,WANG Yan-mei,ZHAO Qiang,LAN Yan,ZULFIYA Yunus,PATIGUL Mahmut*
(College of Life Sciences and Technology, Xinjiang University, Urumqi 830046, China)
Abstract :Experimented the Tianshan service tree branch, theleaf, the fruit and the root ethyl alcohol withdrawing
bacteriostasisfunction with a series of bacteria and the fungus. The resultindicated the certain density the Tianshan service tree
branch, theleaf, the fruit and the root ethyl alcohol withdraw the thing tosupply to try the bacterium and the fungus all
demonstrated thecertain inhibitory action, MIC and MBC are lower, its bacteriostasisactiveness increases along with the
withdrawing density but graduallystrengthens. Therefore the Tianshanservice tree branch, the leaf, the fruit and the root ethyl
alcoholwithdraw the thing to be possible to use in food anticorrosion, maintains freshness and so on the domain, has the widespread
usescope.
Key words:S bus tianschanica;ethyl lcohol extract;antibac erial effect
中图分类号:Q949.7518 文献标识码:A 文章编号:1002-6630(2007)09-0125-03
天山花楸(Sorbus tianschanica)属于蔷薇科,花楸
属。全世界约有80余种,我国有50余种,主要分布
在东北、西北、西南等地区。新疆有3种花楸:天山
花楸(Sorbus tianschanica)、西伯利亚花楸(Sorbus
aucuparia)、天山毛花楸(Sorbus tianschanica.var.
tomentosa),主要分布在新疆哈密至伊梨的天山山脉。
在维吾尔族和哈萨克族民间常以嫩枝叶、果实和茎
皮入药。天山花楸嫩枝叶味甘苦、性寒;果实:味
甘、性平。具有清热利肺、补脾生津、止咳的作用;
常用于治疗慢性气管炎、肺结核、哮喘、咳嗽、水
肿、胃炎、VA和VC缺乏症等症[1-3]。药理学研究表
明,天山花楸具有镇咳、祛痰、平喘及依赖性的抑制
心肌收缩和保护心肌缺血等功能[4-6]。花楸属植物主要含
有氰苷、黄酮、萜类和木质素类化合物[7]。但是,关
于天山花楸抑菌活性的研究尚未见报道。
本实验进行了天山花楸枝条、叶等不同部位乙醇提
取物对细菌及真菌的抗菌活性研究,阐明其抗菌特性,
为天山花楸的综合利用,也为天山花楸乙醇提取物在食
品天然防腐剂领域中的开发利用开辟一条新途径。
1 材料与方法
1.1材料、试剂与仪器
1.1.1植物材料
天山花楸(6月中旬采于新疆乌鲁木齐南山,经植物
教研室鉴定)。
1.1.2供试菌种
枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis);金黄色葡萄球菌
(Staphylococcus aureus);大肠杆菌(Escherichia coli);
产气肠杆菌(Enterobacter aerogenes);酿酒酵母
(Saccharomyces cerevisiae);黑曲霉(Aspergillus
niger);青霉(Penicillium sp.);根霉(Rhizopus s);
2007, Vol. 28, No. 09 食品科学 ※基础研究126
毛霉(Mucor sp.) 以上菌中均由本院微生物教研室提供。
1.1.3培养基
适宜条件培养后观察有无菌落生长。无菌生长的最低浓
度即为该提取物的最低抑菌浓度(MIC)。
1.2.5最低杀菌浓度(MBC)的测定
将提取物的浓度高于MIC(包括MIC)的各管培养物
各吸取0.1ml涂布于合适的琼脂培养基平板上,置适宜
条件继续培养。平板上菌落数小于五个的最低样品浓度
即为该样品的最低杀菌浓度(MBC)。
2 结果与分析
2.1提取物对供试菌的抑菌圈的分析
牛肉膏蛋白胨培养基(用于细菌培养)
成分 牛肉膏 NaCl蛋白胨 琼脂粉 pH 水
量 3g 5g 10g 20g 7.2~7.41000ml
马铃薯培养基(用于真菌的培养)
成分 马铃薯 葡萄糖 琼脂粉 pH 水
量 200g 10g 20g 自然 1000ml
注:液体培养基不加琼脂粉。
1.1.4试剂
95%的乙醇、牛肉膏、 蛋白胨、琼脂粉、氯化
钠、葡萄糖等。
1.1.5仪器
旋转蒸发仪、电子恒温水浴锅、电子天平、压力
蒸汽灭菌锅、冰箱、电热恒温培养箱等。
1.2方法[8-11]
1.2.1制备天山花楸枝条、叶果实及根乙醇提取物
分别称取1000g天山花楸枝条、叶、果实及根(自
然晾干,磨碎),分别加4000ml的95%乙醇置于室温下
24h,次日电热恒温水浴锅中回流提取90min,抽滤得
滤液,药渣在加3倍的95%乙醇提取60min,滤得药液。
将两次所得滤液合并置于旋转蒸发仪中减压浓缩并分离
出乙醇,最后的浓缩液用干燥箱烘干(45~ 0℃)后贮藏
备用。
1.2.2含不同浓度提取物培养基的制备
以提取备用液作为100%原液,先用少量乙醇溶
解,再加蒸馏水稀释配成浓度为25%的乙醇提取物溶
液。准确量取该溶液加入到盛有液体培养基的试管中,
配成含不同浓度的乙醇提取物系列培养基。
1.2.3菌悬液的制备
在相对应的试管斜面培养基上,细菌置35~37℃活
化18h,真菌27~28℃活化44~48h。
分别用接种环挑取少许菌体置于装有9ml无菌水的
试管内,震荡均匀,十倍稀释法稀释,制成菌悬液(含
菌量为106~107个/ml)。
1.2.4最低抑菌浓度(MIC)的测定
每一系列接种一种菌种(0.1ml),每个浓度做三个重
复,另取1稀释系列,不接种任何菌做空白对照,置
适宜条件培养(细菌35~37℃ 18~24h,真菌27~28℃
44~48h),观察实验结果,统计分析抑菌圈的直径。以
能抑制细菌和真菌生长的最低添加量为该提取物的最低
抑菌浓度(MIC)。因含提取物的培养液肉眼不宜辩明菌
体的生长情况,可从各管取一环转接于固体平板上,经
表1 最低抑菌浓度下抑菌圈的直径
Table 1 Diameter of inhabitary zoon on MIC
材料
供菌
果实(mm)根(mm)枝条(mm)叶(mm)
枯草芽孢杆菌 7 8 6 8
金黄色葡萄球菌 7 6 8 7
大肠杆菌 8 7 7 8
产气杆菌 8 7 6 7
酵母菌 6 7 7 6
黑曲霉 7 9 6 8
青霉 8 7 7 8
根霉 6 7 8 7
由表1 可知,利用不同浓度提取物对供试菌的抑菌
效果进行筛选时,当抑菌圈直径为6~8mm时,此抑菌
圈对应的提取物浓度即为最低抑菌浓度。
2.2提取物对供试菌的MIC
3.0
2.5
2.0
1.5
1.0
0.5
0
枯草
芽孢
杆菌
M
I
C
(
%
)
图1 提取物对受试菌的最低抑菌浓度
Fig.1 MIC of ESTB and ESTL against some bacterials
果实
根
枝条
叶
金黄
色葡
萄球
菌
大肠
杆菌
产气
杆菌酵母
菌
黑曲
霉 青霉 根霉
由图1可知,天山花楸果实、根、枝条、叶乙
醇提取物对各供试菌种都有一定的抑制作用,其中果实
提取物的抑菌能力较强。天山花楸不同部位的各提取物
都对金黄色葡萄球菌的抑制能力较显著。 不同部位最低
抑菌浓度依次为:果实>根>枝条>叶。
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由图2可知,天山花楸果实、根、枝条、叶乙
醇提取物对各供试菌种都有一定的杀菌作用,天山花楸
不同部位的各提取物都对金黄色葡萄球菌的杀菌能力较
显著,依次为:果实>根>枝条>叶。
根据实验结果分析,天山花楸不同部位具有一定的
抑菌作用和杀菌作用,尤其是对葡萄球菌的作用更为显
2.3提取物对供试菌的MBC 著。这为天山花楸的合理开发和利用提供了可行性的理
论依据。
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3.0
2.5
2.0
1.5
1.0
0.5
0
枯草
芽孢
杆菌
M
B
C
(
%
)
图2 提取物对受试菌的最低杀菌浓度
Fig.2 MBC of ESTB and ESTL against some bacterial
金黄
色葡
萄球
菌
大肠
杆菌
产气
杆菌酵母
菌
黑曲
霉 青霉 根霉
果实
根
枝条
叶