全 文 :欧亚花楸繁殖技术优化
祁 爽 (辽宁省生态公益林管理中心,辽宁沈阳 110036)
摘要 从种子层积处理、整地作床、播种时间与方法、灌溉、除草、苗期管理、扦插方法与管理等方面对欧亚花楸播种、扦插和组织培养技
术进行了报道,以期为研究这一珍贵树种的育苗技术提供参考。
关键词 欧亚花楸;播种;扦插;组织培养
中图分类号 S792. 25 文献标识码 A 文章编号 0517 -6611( 2013) 01 -00459 -01
作者简介 祁爽( 1980 - ) ,女,吉林梅河口人,高级工程师,硕士,从事
林业生态、林木育种研究,E-mail: qishuangjianghao@ 163.
com。
收稿日期 2012-11-22
欧亚花楸(Sorbus commixta Hedl)为蔷薇科花楸属落叶
乔木,原产日本、朝鲜,高 10 ~15 m,树皮灰褐色至灰黑褐色。
奇数羽状复叶,长 12 ~ 24 cm,小叶 9 ~ 15 片,小叶长椭圆状
披针形,秋叶变红色。复伞房花序,径 10 ~ 12 cm,花多数,白
色,花期 5 ~ 6 月。果红色或橘红色,径 0. 6 cm,果期 9 ~ 10
月。喜光,稍耐阴,较耐寒,喜湿润环境及微酸性土壤[1]。欧
亚花楸的繁殖方法主要有播种、扦插和组织培养。林木种子
体积小,易于采收、储藏和运输,具有操作简单、繁殖快的特
点,可以在较短的时间内培育出大量的实生苗[2];扦插和组
织培养是欧亚花楸无性繁殖的主要方式。无性繁殖遗传稳
定性好,能保持母本的优良特性,繁殖出的新个体性状一致,
长势整齐。无性繁殖不但可以有效增加这些树种的资源存
量,而且对该树种的物种保护和永续利用均有重要意义[3]。
研究欧亚花楸的繁殖技术,对这种珍稀优质树种的推广和开
发有着重要的意义。
1 播种
1. 1 材料来源 于 2010 年 10 ~ 11 月在沈阳盛世绿源科技
有限公司,采种母树应选取干形通直、无病虫、5 ~ 10 年生向
阳健康的优良树木。
1. 2 种子层积处理 11月下旬在沈阳盛世绿源科技有限公
司,选择地势较高、排水良好、背风向阳处挖坑,坑深在地下
水位以上,冻层以下,宽在 1. 0 ~ 1. 5 m,坑长视种子数量而
定。在坑底放石子、石砾等有利于排水物,约 10 ~ 20 cm厚,
或铺一层石子,上面加些粗沙,再铺 3 ~ 4 cm 的湿沙。坑中
每隔 1. 0 ~1. 5 m插一束草把,以便通气。在层积以前种子
用 0. 5%的高锰酸钾浸种 2 h,用清水洗净,然后将种子与湿
沙混合,放入坑内,种子和沙体积比约为 1∶ 4,或一层种子一
层沙子交错层积,每层厚度约 5 cm。沙子湿度以手握成团,
不出水,松手触之即散开为宜,种子堆到离地面 10 ~ 20 cm
时停止,上覆 5 cm河沙和 10 ~ 20 cm厚的秸杆等,四周挖好
排水沟。层积期间要定期检查温度、湿度及通气状况,并及
时调节。
1. 3 整地作床 选择土壤肥沃、结构疏松、排水良好的地
块。苗圃地在 10 月下旬进行第 1 次翻垦,使土壤有机质分
化,翻垦时随锄捡拾消灭地下害虫。翌年 3 月底进行第 2
次翻垦,使床面平整、土壤细碎,苗床高 20 cm、宽 120 cm、
长 30 m。
1. 4 播种时间与播种方法 采用条播或撒播。条播行距一
般为10 ~30 cm,覆土厚度1. 5 ~2. 5 cm。4月上旬播种,为了
使播种均匀,可将种子与细沙按 1∶ 1比例混合播下,播后应
马上覆土,材料用过筛的细土,厚度以不见苗床为宜。
1. 5 及时覆盖 播种后,用稻草麦秆、谷壳等进行覆盖,覆
盖厚度以不见土面为宜,以保蓄水分,防止床面土壤板结,抑
制杂草生长,避免强光照射和暴雨冲击,提高地表温度。当
幼苗大量出土时,应及时分次撒除,以免引起幼苗黄化或弯
曲,生长不良。
1. 6 合理灌溉和排水 播种苗在出苗期间根系分布浅,应
保持湿润。从苗木速生初期到速生末期,气温较高,苗木需
水量较多,主根分布较深,灌溉应深些,水量应增大,采用少
次多量,一次灌透的方法。苗木后期为促进苗木木质化,应
停止灌溉,同时水分过多也不利于苗木生长,易引起立枯病
和根腐病,因此,在雨季到来时应及时开沟排水。
1. 7 除草 在幼芽出土前要进行松土除草。除草宜“除早、
除小、除了”,以减少除草用工和减轻杂草对苗木的危害。
1. 8 苗期管理 在高温、炎热、干旱条件下应注意遮荫,其
方法有插荫枝、搭荫棚等,有条件的可推广使用遮阳网。特
别是幼苗出土覆盖物揭去时,用此法来缓和环境条件的突然
变化,待苗木根芽木质化时及时拆除,以利苗木的正常生长。
对过于密集、生长不良、发育不健全和遭受病虫害的苗
木,以及影响周围苗木生长的“霸王苗”要及时去除。将肥料
稀释后全面喷施于苗床上,然后用清水冲洗苗株。在苗木封
顶前 30 d左右,应停止追施氮肥。在苗木生长后期追肥应以
钾为主、磷为辅,以促进苗木幼茎木质化,提高防风抗倒
能力。
1. 9 病虫害防治 发现苗木有病株应立即清除烧掉,防止
感染其他苗木。发生立枯病、根腐病可用 800 ~1 000倍白菌
清或 70%甲基托布津 500 ~ 600 倍每隔 7 d喷 1 次即可。发
现食叶、食芽害虫、蚜虫可用 90%敌百虫 900 倍或用 40%速
扑杀 1 000倍进行喷雾。对金龟子、蝼虫等害虫可用辛硫磷
或氧化乐果灌施或进行人工捕捉。
2 扦插
2. 1 材料来源 2009 年 6 月初,沈阳盛世绿园科技股份有
限公司 5年生健康母树上幼嫩枝条。
(下转第 465页)
安徽农业科学,Journal of Anhui Agri. Sci. 2013,41(1):459,465 责任编辑 高菲 责任校对 况玲玲
DOI:10.13989/j.cnki.0517-6611.2013.01.172
[82]NIKOLAI WINDBICHLER,PHILIPPOS ARIS PAPATHANOS,FLAMIN-
IA CATTERUCCIA,et al. Homing endonuclease mediated gene targeting
in Anopheles gambiae cells and embryos[J]. Nucleic Acids Research,
2007,35(17):5922 -5933.
[83]REDONDO P,PRIETO J,MUNOZ I G,et al. Molecular basis of xeroderma
pigmentosum group C DNA recognition by engineered meganucleases[J].
Nature,2008,456:107 -111.
[84]CLEAVER J E. Cancer in xeroderma pigmentosum and related disorders
of DNA repair[J]. Nature Rev Cancer,2005,5:564 -573.
[85]SEIDMAN M M,GLAZER P M. The potential for gene repair via triple
helix formation[J]. The Journal of Clinical Investigation,2003,112(4):
487 -494.
[86]DUCA M,VEKHOFF P,OUSSEDIK K,et al. The triple helix:50 years
later,the outcome[J]. Nucleic Acids Res,2008,36(16):5123 -5138.
[87]MOSER H E,DERVAN P B. Sequence specific cleavage of double helical
DNA by triple helix formation[J]. Science,1987,238:645 -650.
[88]LE DOAN T,PERROUAULT L,PRASEUTH D,et al. Sequence-specifi
recognition,photocrosslinking and cleavage of the DNA double helix by an
oligo-[alpha]-thymidylate covalently linked to an azidoprofiavine deriva-
tive[J]. Nucleic Acids Res,1987,15:7749 -7760.
[89]CULVER K W,HSIEH W T,HUYEN Y,et al. Correction of chromosomal
point mutations in human cells with bifunctional oligonucleotides[J]. Na-
ture Biotechnology,1999,17(10):989 -993.
[90]CHIN J Y,SCHLEIFMAN E B,GLAZER P M. Repair and recombination
induced by triple helix DNA[J]. Frontiers in Bioscience,2007,12:4288
-4297.
[91]CHIN J Y,GLAZER P M. Repair of DNA lesions associated with triplex-
forming oligonucleotides[J]. Mol Carcinog,2009,48(4):389 -399.
[92]CHIN J Y,KUAN J Y,LONKAR P S,et al. Correction of a splice-site mu-
tation in the beta-globin gene stimulated by triplex-forming peptide nucle-
ic acids[J]. Proc Natl Acad Sci USA,2008,105(36):13514 -13519.
[93]FARUQI A F,DATTA H J,CARROLL D,et al. Triple-Helix Formation
Induces Recombination in Mammalian Cells via a Nucleotide Excision
Repair-Dependent Pathway[J]. Mol Cell Biol,2000,20(3):990 -1000.
[94]CHAN P P,LIN M,FARUQI A F,et al. Targeted Correction of an Episo-
mal Gene in Mammalian Cells by a Short DNA Fragment Tethered to a
Triplex - forming[J]. J Biol Chem,1999,274(17):11541 -11548.
[95]KNAUERT M P,LLOYD J A,ROGERS F A,et al. Distance and Affinity
Dependence of Triplex-Induced Recombination[J]. Biochemistry,2005,
44:3856 -3864.
[96]KNAUERT M P,KALISH J M,HEGAN D C,et al. Triplex-Stimulated In-
termolecular Recombination at a Single-Copy Genomic Target[J]. Mol
Therapy,2006,14(3):392 -400.
[97]VASQUEZ K M,MARBURGER K,INTODY Z,et al. Manipulating the
mammalian genome by homologous recombination[J]. PNAS,2001,98
(15):8403 -8410.
[98]MAJUMDAR A,MUNIANDY P A,LIU J,et al. Targeted gene knock in
and sequence modulation mediated by a psoralen-linked triplex - forming
oligonucleotide[J]. J Biol Chem,2008,283(17):11244 -11252.
[99]CANNATA F,BRUNET E,PERROUAULT L,et al. Triplex-forming oligo-
nucleotide-orthophenanthroline conjugates for efficient targeted genome
modification[J]. Proc Natl Acad Sci USA,2008,105(28):9576 -9581.
[100]KAHAN B D,STEPKOWSKI S,KILIC M,et al. Phase I and phase II
safety and efficacy trial of intercellular adhesion molecule-1 antisense ol-
igodeoxynucleotide(ISIS 2302)for the prevention of acute allograft re-
jection[J]. Transplantation,2004,78(6):858 -863.
[101]DUCA M,GUIANVARC'H D,OUSSEDIK K,et al. Molecular basis of the
targeting of topoisomerase II-mediated DNA cleavage by VP16 deriva-
tives conjugated to triplex-forming oligonucleotides[J]. Nucleic Acids
Research,2006,34(6):
檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪
1900 -1911.
(上接第 459页)
2. 2 插床处理 为避免真菌、细菌危害,插前进行插壤灭
菌。先用清水充分淋洗床面,再用 0. 2% ~0. 3%的高锰酸钾
溶液淋洗,用量 2 500 ~3 000 ml /m2,也可用多菌灵 500倍液
喷淋。
2. 3 插穗处理 将采取的穗条剪成 10 cm长,带有 1 ~ 2个
芽的插穗,下端斜切面,上端为平切面,将基部 2 ~ 3 cm浸入
NAA∶ IBA =1∶ 1,浓度为 200 mg /L的生根剂中,处理 2 h[4]。
2. 4 扦插方法 扦插密度为 6 cm ×6 cm,扦插深度为 3 cm。
插后轻按,使插穗与插壤密切接触,生根率在 90%以上。
2. 5 扦插后的管理 插床全部插齐后,立即全面喷撒 500
倍多菌灵液进行插穗灭菌,用量 1 000 ml /m2,以后每隔 10 d
喷药 1次防病,雨后还要加喷 1 次,喷药在傍晚停止喷雾后
进行。大多数树种的最适生根温度为 20 ~ 26 ℃,常绿树种
的生根需要光照,但强烈的光照会使插穗失水,降低成活率。
最好采用间歇喷雾法,既保证供水又不影响光照。
3 组织培养
3. 1 材料来源 2004 年 10 月从日本引进当年生欧亚花楸
数株,定植于辽宁林业优良苗木繁育中心苗圃。2008 年 4
月,剪取生长健壮,无病虫害的欧亚花楸幼嫩茎段。
3. 2 培养条件 培养温度:25 ℃ ± 1 ℃,光照强度 3 000 ~
5 000 lux(14 h /d)。
3. 3 无菌芽的获取 剪取长 1. 5 ~2. 0 cm欧亚花楸幼嫩茎
段,清水冲洗 2 ~3 h后,在超净工作台上 75%酒精浸润 30 s,
无菌水冲洗 2 ~ 3 次,0. 1%升汞消毒 8 min,清水冲洗 3 ~ 4
次,接种于 MS培养基中,放置于培养室中。
3. 4 芽的增殖 待无菌芽长至 1. 0 cm,切取无菌芽接种于
MS +6 - BA 1. 0 mg /L + NAA 0. 2 mg /L培养基中,增殖系数
在 10以上[5]。
3. 5 芽诱导生根 把长至 1. 5 cm以上的芽从芽丛中切离
转到 1 /2MS + IBA0. 2 mg /L + NAA0. 2 mg /L 的生根培养基
中,生根率在 90%以上,根数在 6条以上。
3. 6 生根苗的驯化移栽 当苗根长达 2. 5 cm时,把生根苗
连瓶放在温室内,炼苗 2 ~ 3 d,打开瓶盖,向瓶内喷少量水,
瓶苗叶片湿润即可,使瓶苗接触有菌环境,然后将瓶盖盖上,
再炼苗 2 ~3 d。温室温度控制在 25 ℃ ± 2 ℃,炼苗后,将生
根苗取出,用自来水冲洗干净后,移栽到装有细河沙∶珍珠岩
=2∶ 1的育苗穴盘中,罩上塑料薄膜和遮荫网拱棚保持湿度
在 85%以上,光照 2 000 ~3 000 lux。
参考文献
[1]李作文,汤天鹏.中国园林树木[M].沈阳:辽宁科学技术出版社,2008:
290.
[2]ASHLEY J A,PREECE J E. Seed cutting treatments stimulate germination
and elucidate a dormancy gradient in dormant Faxxinus americana L. and
Fraxinus pennsylvanica Marsh[J]. Propagation of Ornamental Plants,2009,
9(3):122 -128.
[3]郝跃.红花玉兰播种育苗技术与标准化体系研究[D].北京:北京林业
大学,2010.
[4]祁爽,吴月亮. 欧亚花楸扦插技术研究[J].北方园艺,2011(18):110 -
111.
[5]祁爽.欧亚花楸组培快繁技术研究[J].北方园艺,2010(8):167 -169.
56441 卷 1 期 李和刚等 人工诱导双链断裂( DSB) 与三螺旋形成寡核苷酸( TFO) 在提高基因打靶效率中的应用