全 文 ：收稿日期:2005-12-18
作者简介:李　 (1974～ ),女 ,讲师 ,研究方向:天然产物有效成分分离和分析。电话:010-83911522, E-m ail:juni ly88@ sohu. com
[ 3] 　陈　奇主编. 中药药理实验方法 [ M ] . 北京:人民卫生出版
社 , 1994:67, 107
[ 4] 　王浴生 ,邓文友 ,薛春生 ,主编. 中药药理与应用 [M ] . 北京:
人民卫生出版社 , 1998:892
[ 5] 　郑筱萸主编. 中药新药临床研究指导原则(试行 )[M ] . 第一
版.北京:中国医药科技出版社 , 2002:115-118
[ 6] 　沃格尔 H. G. , [德 ]沃格尔 W. H. [美 ]编著 ,杜冠华 ,李学军 ,
张永祥等译. 药理学实验指南-新药发现和药理学评价 [M ] .
北京:科学出版社. 2001. 278-280.
[成分分析 ]
HPLC测定元宝枫中游离和水解没食子酸的含量
李　 , 　黎金龙 , 　王耀楠 , 　张英侠
(首都医科大学化学生物学与药学院 ,北京 100069)
关键词:元宝枫;没食子酸;高效液相色谱法
摘要:目的:用 HPLC测定元宝枫中游离和水解没食子酸的含量。方法:采用高效液相色谱法在 Diam onsil C18色谱柱 (5
μm , 4. 6 mm ×250 mm), 流动相:甲醇 -0. 025 m o l /L磷酸水溶液(15∶85);流速:1. 0 mL /m in;检测波长:272 nm;柱温:
室温;分离测定了元宝枫叶中游离和水解没食子酸的含量。结果:游离没食子酸含量为 0. 045 , RSD为 1. 06 ;水解没
食子酸含量为 1. 456 , RSD为 2. 43 。结论:游离没食子酸含量较少 ,水解没食子酸含量大 , 且不同季节含量不同。
中图分类号:R284. 1　　　　　文献标识码:A　　　　　文章编号:1001-1528(2006)12-1788-02
Determ ination of free and hydrolysab le gallic ac id in Acer Trunca tum Bunge by
HPLC
LI Jun , 　LI Jin-long, 　WANG Y ao-nan, 　ZHANG Y ing-x ia
(Schoo l ofChem ica lB iology and Phamaceu tica lS ciences, Cap tia lMed ica lU niversi ty, B eijing 100069, Ch ina)
KEYWORDS:Acer Truncatum Bunge;gallic acid;high perfo rmance liquid ch roma tography
ABSTRACT:AIM:To de tect free and hydro ly sab le ga llic acid inAcer Trunca tum Bunge byHPLC. METHODS:
A method fo r dete rm ining ga llic acid in leaves o fAcer Truncatum Bunge. The operating conditionsHPLC were Dia-
monsilC18 co lumn (5μm , 4. 6mm ×250mm) at room temperature, me thano l- 0. 025mo l /L phosphoric acid so-
lu tion(15∶85) as mob ile phase at a flow o f 1. 0 mL /m in and UV detection at 272 nm. RESULTS:The contents
of free and hydro lysab le ga llic acid w ere 0. 045 and 1. 546 , repective ly. The rela tive standard devia tions o f
free and hydrolysable ga llic acid w ere 1. 06 and 2. 43 , respective ly. CONCLUSION:The con tents o f free
and hydrolysable ga llic acid inAcer Truncatum Bunge in different periods a re differen.t
　　元宝枫 (Acer Trunca tum Bunge)为槭树科 (Acer-
aceae)槭树属(Acer)植物 ,为落叶乔木 ,是中国独有
树种 ,在我国大江南北广泛分布 ,资源相当丰富 [ 1] 。
元宝枫在我国民间有很长的药用历史 ,未发现任何
毒性。元宝枫叶中含有多种生物活性成分 ,如黄酮 、
强心苷 、绿原酸 、甾体 、鞣质 、多糖等 [ 2, 3] 。鞣质又称
单宁或鞣酸 [ 4] ,是一类复杂的多元酚类大分子化合
物 (分子量约 500 ～ 3000),广泛存在于中药中 。其
中可水解鞣质在稀酸和酶的作用下 ,水解成没食子
酸 、糖 、多元醇或其他酸等简单的化合物 。鞣质具有
与蛋白质和金属离子结合的特性 ,故可作为酶的抑
制剂 。元宝枫叶中鞣质含量高达 11. 4 ,对病原菌
的生长 、发育有抑制或致死作用 [ 5] 。而没食子酸及
其衍生物具有抗突变 、抗氧化 、抗肿瘤和保肝消炎等
多种生物活性 [ 6-8] 。
我们的酶动力学实验证实 , 元宝枫提取物对
1788
2006年 12月
第 28卷　第 12期
中 成 药
Chine se T raditiona l PatentM ed icine
Decem be r 2006
Vo.l 28　No. 12
FAS有强抑制作用。细胞实验表明 ,元宝枫落叶提
取物在 10 μg /mL的低浓度下对肝癌细胞 (BEL-
7402)的抑制率即可达 55 以上 。对食道癌细胞
(CAES-17)、胃癌细胞 (BGC823)和乳腺癌细胞
(MCF7)等都有抑制作用 ,是广谱抗癌剂 (已申请国
家发明专利 ,专利号:200510068054. 2)。
通过高效液相色谱 (HPLC)分离分析 ,表明该
类植物含有游离的没食子酸和大量的水解没食子酸
(gallic acid),从基础研究的角度 ,可探索元宝枫中
的生物活性成分的抑癌作用机理 ,并且为开发中国
广博的天然产物资源提供了新的思路 。
1　仪器与材料
1. 1　仪器
高效液相色谱仪 (美国 Agilent-1100型 ):FZ102
型微型植物试样粉碎机 (河北省黄骅市齐家务科学
仪器厂 ):HH-601型恒温水浴锅 (江苏省金坛市荣
华仪器制造有限公司 )。
1. 2　材料
没食子酸(批号 0831-9501 ,购自中国药品生物
制品检定所 );甲醇 、磷酸 、H 2SO 4、N aOH为分析纯;
水为双蒸水;元宝枫叶采自北京百望山。
2　方法与结果
2. 1　色谱条件
Diamonsil C18色谱柱 (5 μm , 4. 6 mm ×250
mm),流动相:甲醇-0. 025 mo l /L磷酸水溶液 (15∶
85);流速:1. 0mL /m in;检测波长:272 nm;柱温:室
温;在上述色谱条件下 ,没食子酸与其他干扰成分分
离良好 。进样量为 10 μL。
2. 2　标准曲线的制备
精密称取没食子对照品 ,用甲醇配制成浓度为
0. 1mg /mL的没食子酸对照品溶液。精密吸取没食
子酸对照品溶液 (0. 1 mg /mL)0. 1、0. 2、0. 4、0. 8、1、
2、4、6、8、10 μL,测得色谱峰面积 ,以进样量 (μg)为
横坐标 ,峰面积为纵坐标绘制标准曲线 ,回归 ,得线
性方程为:Y =24. 28 1X +7. 033 1(r=1. 000 0)。在
0. 01 ～ 1. 00 μg线性关系良好 。
2. 3　样品的测定
元宝枫叶研细 ,过 40目筛 ,精密称取 0. 25 g于
锥形瓶中 ,加 50 甲醇冷浸过夜 ,经滤膜(0. 45μm)
过滤后 ,用于测定游离没食子酸的含量。元宝枫叶
研细 ,过 40目筛 ,精密称取 0. 25 g于锥形瓶中 ,加
50 甲醇冷浸过夜;再加 H 2SO 4于 90 °C水解 6 h;
待冷却后加 N aOH调至 pH4;定容至 25 mL,经滤膜
(0. 45 μm)过滤后 ,用于测定水解没食子酸的含量 。
结果见图 1。
a
b
c
图 1　HPLC图
a没食子酸对照品　b水解前样品　 c水解后样品
2. 4　测定波长的选择
没食子酸在甲醇-0. 025 mol /L磷酸水溶液流动
相中于紫外-可见波段扫描 ,在 216 nm和 272 nm处
最大吸收 ,因为 216 nm波长处存在溶剂吸收的干
扰 ,所以选择测定波长为 272 nm。
2. 5　精密度的测定
取样品溶液重复进样 ,游离没食子酸峰面积积
分值的 RSD为 1. 17 (n =6),水解没食子酸峰面
积积分值的 RSD为 2. 31 (n =6)。
2. 6　稳定性的测定
取样品溶液在 0, 0. 5, 1, 2, 4, 6, 8, 24, 48 h分别
进样 10μL,记录峰面积积分值 ,游离没食子酸峰面
积积分值的 RSD为 2. 56 ,水解没食子酸峰面积积
分值的 RSD为 2. 31 。说明没食子酸在样品中较
为稳定。
2. 7　重现性的测定
取同一月份样品 ,精密称取 5份 ,外标法定量 ,
测定游离没食子酸含量为 0. 045 , RSD为 1. 06 ;
水解没食子酸含量为 1. 456 , RSD为 2. 43 。
2. 8　回收率的测定
取已知含量的样品液 ,准确加入一定量的对照
1789
2006年 12月
第 28卷　第 12期
中 成 药
Chine se T raditiona l PatentM ed icine
Decem be r 2006
Vo.l 28　No. 12
品溶液 ,按色谱条件进行测定 ,计算游离没食子酸回
收率为 98. 24 。
2. 9　提取方法的选择
比较甲醇 、50 甲醇提取溶剂种类 ,发现 50
甲醇提取的没食子酸含量最高;比较了超声提取 、回
流提取和冷浸过夜等提取方法 ,发现冷浸过夜提取
的没食子酸含量最高 ,且重现性好。
2. 10　水解方法的选择
比较了水解时间 , 2、4、6、8、10 h,时间太短 ,提
取率低 ,时间太长 ,没食子酸易被破坏 ,故选择 6 h;
比较水解温度 60、70、80、90、100 ℃,温度高 ,水解效
果好 ,温度过高 ,溶剂易蒸干 ,没食子酸易被破坏和
损失 ,故选择 90 ℃;比较 pH 2、4、6,发现 pH 4时 ,
重现性较好 。
2. 11　样品测定
分别按上述处理方法和色谱方法 ,测定不同采
集日期的元宝枫叶中游离和水解没食子酸的含量 ,
结果见表 1。
表 1　 游离和水解没食子酸的含量测定
采集日期(月) 游离没食子酸含量( ) 水解没食子酸含量( )
4 0. 316 5. 412
5 0. 146 3. 122
6 0. 165 2. 614
7 0. 110 1. 351
8 0. 108 3. 000
9 0. 141 2. 883
10 0. 055 1. 461
11 0. 045 1. 456
3　讨论
3. 1　元宝枫叶中游离的没食子酸含量为 0. 045 。
通过冷浸的方法提取元宝枫叶游离没食子酸 ,方法
简单。用 HPLC分离分析元宝枫叶游离没食子酸的
含量 ,重现性好。
3. 2　元宝枫叶中水解的没食子酸含量较高 , 为
1. 456 。水解没食子酸的提取受水解时间 、温度 、
pH等很多因素影响 ,在提取率和提取稳定性方面尚
需摸索。
3. 3　游离没食子酸含量较少 ,水解没食子酸含量
大 ,且不同季节含量不同 ,其中 4月份的游离没食子
酸含量和水解没食子酸含量均较高 , 11月份的落叶
中游离没食子酸含量和水解没食子酸含量均较低 。
3. 4　研究发现 [ 9] , 酰基与抑制 FAS有关 ,元宝枫
叶中含有该类物质 ,与水解没食子酸含量高和随季
节变化有很大关系 。通过探讨元宝枫叶没食子酸含
量 ,对开发天然产物资源有重要意义。
参考文献:
[ 1] 　谢宗万 ,余友芩. 全国中草药名鉴 [M ] . 北京:人民卫生出版
社 , 1990.
[ 2] 　王兰珍 ,马希汉 ,王妹清 ,等. 元宝枫叶营养成分分析 [ J] . 西
北林学院学报 , 1997, 12(4):61.
[ 3] 　赵文华 ,宋晓红 ,李　 ,等.不同季节元宝枫叶中的三种黄酮
苷元的含量测定 [ J] .中成药 , 2005, 27(5):574.
[ 4] 　肖崇厚.中药化学 [M ] .上海科技出版社 , 1987.
[ 5] 　于新蕊 ,曲　军 ,丛月珠. 茶叶的化学成分及药理作用研究进
展 [ J] .中草药 , 1995, 26(4):219.
[ 6] 　Anand K K, Singh B, Saxena A K , et a l. 3, 4, 5-trihyd roxy ben-
zoic acid(gallic acid), the hepatop rotective princip le in the fru its
of Term ina lia Belerica-b ioassay gu ided activity [ J] . Pharm acol
Res, 1997, 36(4):315.
[ 7] 　郭向红 ,张　鹏 ,匡海学 ,等.刺玫果口服液中没食子酸甲酯葡
萄糖甙的含量测定 [ J] .中医药信息 , 1999, 3:53.
[ 8] 　李肖玲 , 崔　岚 , 祝德秋. 没食子酸生物学作用的研究进展
[ J] . 中国药师 , 2004, 10(7):767.
[ 9] 　W ang X , Song K S, Guo Q X , et a l. The galloylm oiety of green
tea catech in s is th e critical structu ral feature to inh ib it fat ty-acid
syn thase[ J] . B iochem P harmaco l, 2003, 66:2039.
RP-HPLC测定枇杷叶中熊果酸和齐墩果酸的含量
杜丰玉 1, 2 , 　陈　钧 1 , 　宣　寒 1 , 　任晓峰1 , 　郭海燕 1
(1. 江苏大学药学院 ,江苏 镇江 212013;2. 莱阳农学院植物保护学院 ,山东 青岛 266000)
收稿日期:2005-11-16
作者简介:杜丰玉(1981～ ),男 ,硕士生 ,研究方向:中药新药开发和药物分析 ,电话:13775375855　E-m ail:du fengyu@ sohu. com.
关键词:枇杷叶;熊果酸;齐墩果酸;含量测定;高效液相色谱法
摘要:目的:为控制和评价枇杷叶及其中药制剂的质量 ,建立 RP-HPLC法测定枇杷叶中熊果酸和齐墩果酸含量的方法。
1790
2006年 12月
第 28卷　第 12期
中 成 药
Chine se T raditiona l PatentM ed icine
Decem be r 2006
Vo.l 28　No. 12