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矮紫堇总生物碱的含量测定及其抗炎活性研究
舒　花，马学燕，李　鑫，李　蕾，井剑歌，岐　琳＊（西安交通大学药学院，西安　７１００６１）
摘要：目的　建立矮紫堇中总生物碱的含量测定方法，初步研究矮紫堇总生物碱的抗炎活性。方法　用乙醇提取法提取生物碱，
用酸性染料比色法对总生物碱进行定量测定，用小鼠耳肿胀模型和大鼠足肿胀模型测定其抗炎活性。结果　小檗碱质量浓度在
６～３０μｇ·ｍＬ
－１范围内线性良好，ｒ＝０．９９５　９（ｎ＝５），矮紫堇中总生物碱含量为０．２０％～０．２５％；矮紫堇总生物碱具有明显的
抗炎活性。结论　该方法操作简便、准确，具有良好的重复性和稳定性，适用于矮紫堇中总生物碱的含量测定；矮紫堇中生物碱
具有良好的抗炎活性。
关键词：矮紫堇；总生物碱；抗炎活性
ｄｏｉ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１００４－２４０７．２０１５．０５．０１６
中图分类号：Ｒ２８　　　文献标志码：Ａ　　　文章编号：１００４－２４０７（２０１５）０５－０６０２－０３
Ｓｔｕｄｙ　ｏｎ　ａｎｔｉ－ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ　ａｃｔｉｖｉｔｙ　ａｎｄ　ｃｏｎｔｅｎｔ　ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｔｏｔａｌ　ａｌｋａｌｏｉｄｓ　ｉｎ
Ｃｏｒｙｄａｌｉｓ　ｈｅｎｄｅｒｓｏｎｉ
ＳＨＵ　Ｈｕａ，ＭＡ　Ｘｕｅｙａｎ，ＬＩ　Ｘｉｎ，ＬＩ　Ｌｅｉ，ＪＩＮＧ　Ｊｉａｎｇｅ，ＱＩ　Ｌｉｎ＊（Ｓｃｈｏｏｌ　ｏｆ　Ｐｈａｒｍａｃｙ，Ｘｉ′ａｎ　Ｊｉａｏｔｏｎｇ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｘｉ′ａｎ　７１００６１，Ｃｈｉｎａ）
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ　Ｔｏ　ｅｓｔａｂｌｉｓｈ　ａ　ｍｅｔｈｏｄ　ｆｏｒ　ｔｈｅ　ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｔｏｔａｌ　ａｌｋａｌｏｉｄｓ　ｏｆ　Ｃｏｒｙｄａｌｉｓ　ｈｅｎｄｅｒｓｏｎｉｉ　ａｎｄ　ｔｏ　ｐｒｅｌｉｍｉｎａｒｉｌｙ　ｉｎ－
ｖｅｓｔｉｇａｔｅ　ｉｔｓ　ａｎｔｉ－ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ　ａｃｔｉｖｉｔｙ．Ｍｅｔｈｏｄｓ　Ｔｈｅ　ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ　ｏｆ　ｔｏｔａｌ　ａｌｋａｌｏｉｄｓ　ｗａｓ　ｐｅｒｆｏｒｍｅｄ　ｂｙ　ｕｓｉｎｇ　ｅｔｈａｎｏｌ，ａｎｄ　ｔｈｅ　ｑｕａｎ－
ｔｉｔａｔｉｖｅ　ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｔｏｔａｌ　ａｌｋａｌｏｉｄｓ　ｗａｓ　ｐｅｒｆｏｒｍｅｄ　ｂｙ　ｕｓｉｎｇ　ａｃｉｄ　ｄｙｅ　ｃｏｌｏｒｉｍｅｔｒｙ．Ｔｗｏ　ｍｏｄｅｌｓ　ｏｆ　ｍｉｃｅ　ｅａｒ　ｅｄｅｍａ　ａｎｄ　ｒａｔ　ｐａｗ
ｅｄｅｍａ　ｗｅｒｅ　ｕｓｅｄ　ｔｏ　ｏｂｓｅｒｖｅ　ｔｈｅ　ａｎｔｉ－ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ　ａｃｔｉｖｉｔｙ　ｏｆ　ｔｏｔａｌ　ａｌｋａｌｏｉｄｓ．Ｒｅｓｕｌｔｓ　Ｔｈｅ　ｌｉｎｅａｒｉｔｙ　ｗａｓ　ｇｏｏｄ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｒａｎｇｅ　ｏｆ　６－３０
μｇ·ｍＬ
－１，ｒ＝０．９９５　９（ｎ＝５）．Ｔｈｅ　ｃｏｎｔｅｎｔｓ　ｏｆ　ｔｏｔａｌ　ａｌｋａｌｏｉｄｓ　ｗｅｒｅ　０．２０％－０．２５％ｉｎ　Ｃ．ｈｅｎｄｅｒｓｏｎｉｉ．Ｔｈｅ　ｔｏｔａｌ　ａｌｋａｌｏｉｄｓ
ｓｈｏｗｅｄ　ｏｂｖｉｏｕｓ　ａｎｔｉ－ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ　ａｃｔｉｖｉｔｙ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ　Ｔｈｉｓ　ｍｅｔｈｏｄ　ｉｓ　ｓｉｍｐｌｅ，ｒａｐｉｄ，ｓｅｎｓｉｔｉｖｅ　ａｎｄ　ａｃｃｕｒａｔｅ　ｗｉｔｈ　ｇｏｏｄ　ｒｅｐｒｏｄｕｃ－
ｉｂｉｌｉｔｙ．Ｉｔ　ｉｓ　ｓｕｉｔａｂｌｅ　ｆｏｒ　ｔｈｅ　ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｔｏｔａｌ　ａｌｋａｌｏｉｄｓ　ｉｎ　Ｃ．ｈｅｎｄｅｒｓｏｎｉｉ　ａｎｄ　ｔｈｅ　ｔｏｔａｌ　ａｌｋａｌｏｉｄｓ　ｄｅｍｏｎｓｔｒａｔｅｄ　ａｎｔｉ－ｉｎｆｌａｍｍａｔｏ－
ｒｙ　ａｃｔｉｖｉｔｙ．
Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ：Ｃｏｒｙｄａｌｉｓ　ｈｅｎｄｅｒｓｏｎｉｉ　Ｈｅｍｓｌ．；ｔｏｔａｌ　ａｌｋａｌｏｉｄｓ；ａｎｔｉ－ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ　ａｃｔｉｖｅ
基金项目：西安交通大学创新基金（编号：２０１３２７９）
作者简介：舒花，女，本科生
＊通信作者：岐琳，女，实验师
　　矮紫堇（Ｃｏｒｙｄａｌｉｓ　ｈｅｎｄｅｒｓｏｎｉｉ　Ｈｅｍｓｌ．）藏药名
桑格丝哇，全草入药，功能活血散瘀、利气止痛，藏医
用于治疗胃溃疡、胃炎、跌打损伤、坐骨神经痛、疥癖
疮毒、毒蛇咬伤、刀伤等，该药属于紫堇属［１］。随着研
究的不断深入，紫堇属植物或者其提取物在国外也越
来越广泛地被应用于医疗保健，该属多种植物具有抑
制胆碱酯酶活性，可以改善记忆，在丹麦等国家的民
间常用于治疗老年痴呆；抗菌活性强的血根碱已被开
发成牙膏、口腔清洗剂等保健品。从目前对该属植物
的化学成分研究结果来看，该属植物主要含异喹啉类
生物碱以及挥发油成分，现已从该属的藏药植物中分
离得到的生物碱成分有３０多种，这些生物碱具有广
泛的生物活性［２］，如抗肿瘤、抗炎镇痛、保护肝损伤
等。但从目前藏医临床应用该属植物的情况来看，未
被开发利用的种数尚多，而且藏医临床上所用的该属
植物基本上限于分布于青藏高原的该属植物。因此，
有待于深入研究该属植物，探究其有效成分，指导临床
用药或开发新药。本研究通过理化鉴定、酸性染料比
色法、小鼠耳肿胀模型和大鼠足肿胀模型测定矮紫堇
中生物碱的含量及活性，为建立药材质量标准提供依
据。
１　仪器与材料
１．１　仪器　ＵＶ－２６０紫外分光光度计（日本岛津）；
ＣＰ－２２４Ｓ电子天平（德国赛多利斯公司）。
１．２　试药　矮紫堇（２０１１年采自西藏），经鉴定为罂
粟科植物矮紫堇（Ｃｏｒｙｄａｌｉｓ　ｈｅｎｄｅｒｓｏｎｉｉ　Ｈｅｍｓｌ．）的
全草；小檗碱（中国药品生物制品检定所）；无水乙醇
（西安化学试剂厂，分析纯）；乙醇（西安化学试剂厂，
分析纯）；石油醚（天津市天力化学试剂有限公司，分
析纯）；氯仿（分析纯）；二甲苯（广东光华科技股份有
限公司，分析纯）。
１．３　动物　健康昆明种小鼠，雄性，体质量２２～２５ｇ，
由西安交通大学实验动物中心提供，许可证号：
ＳＹＸＫ（陕）２０１２－００５。
２　总生物碱含量测定
２．１　总生物碱的提取　称取矮紫堇粗粉１５．０ｇ，用
１５０ｍＬ乙醇回流提取３次，每次１ｈ，提取结束后将
提取液合并回收溶剂至浸膏状；将浸膏用体积分数
２０６ 西北药学杂志　２０１５年９月　第３０卷　第５期
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２％盐酸３０ｍＬ捏溶后滤过，得酸液；将酸液用石油
醚萃取４次，每次３０ｍＬ，弃去石油醚层，酸液用
ＮａＯＨ溶液调ｐＨ值至１０，再用氯仿萃取５次，每次
３０ｍＬ，至氯仿层颜色变淡；合并氯仿层，回收氯仿得
总生物碱。
２．２　溶液的制备　
２．２．１　对照品溶液的制备　精密称取小檗碱对照品
约１０ｍｇ，置于５０ｍＬ量瓶中，用乙醇溶解并稀释至
刻度，摇匀，精密量取２ｍＬ，置于１０ｍＬ量瓶中，用
乙醇稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液。
２．２．２　总生物碱样品溶液的制备　精密称取２．１项
下所得总生物碱样品０．０１４　０ｇ，置于５０ｍＬ量瓶中，
用乙醇溶解并稀释至刻度，滤过，取续滤液作为供试
品溶液。
２．３　最大吸收波长的确定　分别取对照品溶液
３．０ｍＬ，置于３支试管中，加蒸馏水２．０ｍＬ，再依次
加入ｐＨ７．５磷酸盐缓冲液５．０ｍＬ、０．２５ｇ·Ｌ－１溴
麝香草酚蓝溶液２．０ｍＬ、氯仿１０．０ｍＬ，振摇，混匀，
静置３０ｍｉｎ，分取氯仿层，加无水硫酸钠干燥５ｍｉｎ。
以相应试剂作空白对照，用紫外可见分光光度计在
３８０～４３０ｎｍ范围内扫描，结果在４１６ｎｍ处有最大
吸收，因此选择４１６ｎｍ进行样品测定。
２．４　总生物碱测定方法　取矮紫堇总生物碱溶液
３．０ｍＬ，置于３支试管中，加蒸馏水至５．０ｍＬ，再依
次加入ｐＨ７．５磷酸盐缓冲液５．０ｍＬ、０．２５ｇ·Ｌ－１
溴麝香草酚蓝溶液２．０ｍＬ、氯仿１０．０ｍＬ，振摇，混
匀，静置３０ｍｉｎ，分取氯仿层，加无水硫酸钠干燥
５ｍｉｎ，于４１６ｎｍ处测吸光度。
２．５　结果计算　按照２．３项所述方法测定吸光度，
由２．５．１项下回归方程计算样品中生物碱质量浓度，
按下式计算总生物碱含量：
总生物碱含量＝Ｃ·Ｄ／Ｗ×１００％
式中：Ｃ为样品最终测定液中总生物碱质量浓度
（μｇ·ｍＬ
－１），Ｄ为稀释倍数，Ｗ 为矮紫堇样品质量（ｇ）。
２．６　方法学验证
２．６．１　线性关系　分别精密量取对照品溶液０，
１．０，２．０，３．０，４．０和５．０ｍＬ，分别加蒸馏水至
５．０ｍＬ，再依次加入ｐＨ７．５磷酸盐缓冲液５．０ｍＬ、
０．２５ｇ·Ｌ－１溴麝香草酚蓝溶液 ２．０ ｍＬ、氯仿
１０．０ｍＬ，振摇，混匀，静置３０ｍｉｎ，分取氯仿层，加无
水硫酸钠干燥５ｍｉｎ，于４１６ｎｍ处测吸光度。以质
量浓度（μｇ·ｍＬ
－１）为横坐标、吸光度为纵坐标，绘制
标准曲线，得回归方程：Ｙ＝０．０２２　３　Ｘ＋０．１１５　０（ｒ＝
０．９９５　９），结果表明，小檗碱质量浓度在６～３０μｇ·ｍＬ
－１
范围内，线性关系良好。
２．６．２　稳定性实验　分别精密吸取样品溶液
３．０ｍＬ，置于３支试管中，按照２．３项下的方法依次
测定样品放置０，１５，３０，６０，９０，１２０，１５０和１８０ｍｉｎ
时的吸光度，考察样品的稳定性。依次测得平均吸光
度为０．６６６，０．６８３，０．６８５，０．６８７，０．６９１，０．６９７，
０．７０３和０．７１２，ＲＳＤ为２．０２％，表明样品染色后３ｈ
内稳定性良好。
２．６．３　重复性实验　分别精密吸取样品溶液
３．０ｍＬ，置于６支试管中，平行制备６份，按照２．３
项下的方法测量吸光度，所得吸光度依次为０．６６４，
０．６６６，０．７１０，０．６５０，０．６７７和０．６８３，ＲＳＤ为３．０５％，
表明本方法重复性良好。
２．６．４　精密度实验　精密吸取对照品溶液２．０ｍＬ，
置于试管中，按照２．３项下的方法制备溶液，测定
６次吸光度，吸光度值依次为０．４０７，０．４０９，０．４０７，
０．４０６，０．４０８和０．４０７，ＲＳＤ为０．２５％，表明本方法
精密度良好。
２．６．５　回收率实验　精密量取样品溶液２．２ｍＬ，共
９份，分为３组，分别精密加入对照品溶液２．４，３．０
和３．６ｍＬ，按照２．３项下的方法测定吸光度，结果见
表１，平均回收率为９８．１０％，ＲＳＤ为１．０５％。表明
本方法回收率良好。
表１　回收率实验结果
Ｔａｂ．１Ｔｈｅ　ｒｅｓｕｌｔｓ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｒｅｃｏｖｅｒｙ　ｔｅｓｔ
编号
测出量
／μｇ
样品生物碱含量
／μｇ
加入对照品量
／μｇ
回收率
／％
平均回
收率／％
ＲＳＤ
／％
１　３２８．２　 １８７．２　 １４４．０　 ９７．９２　９８．１０　１．０５
２　３３０．６　 １８７．２　 １４４．０　 ９９．５８
３　３２９．１　 １８７．２　 １４４．０　 ９８．５４
４　３６２．５　 １８７．２　 １８０．０　 ９６．８３
５　３６５．２　 １８７．２　 １８０．０　 ９９．０１
６　３６４．６　 １８７．２　 １８０．０　 ９８．５６
７　３９６．３　 １８７．２　 ２１６．０　 ９６．８０
８　４００．１　 １８７．２　 ２１６．０　 ９８．５６
９　３９７．１　 １８７．２　 ２１６．０　 ９７．１８
２．７　矮紫堇总生物碱含量测定　按照２．１．２项下方
法制备样品溶液，按２．３项下方法进行测定。根据
２．４项下方法计算，结果３批矮紫堇中总生物碱含量
分别为０．２４％，０．２０％和０．２５％。
３　总生物碱抗炎活性
３．１　供试样品的配制　用１０ｇ·Ｌ－１的羧甲基纤维
素钠将矮紫堇总生物碱配制成０．０２５，０．１２５和
０．２５ｍｇ·ｍＬ－１的混悬溶液。
３．２　二甲苯致小鼠耳肿胀实验　选取昆明种雄性小
鼠４０只，每只约２５ｇ，随机分为４组，分别设置为低、
中、高剂量组及空白组。空白组将右耳用２０μＬ二甲
３０６西北药学杂志　２０１５年９月　第３０卷　第５期
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苯致炎，左耳作为对照，致炎后４５ｍｉｎ脱颈处死小
鼠，沿耳廓基线剪下两耳后用打孔器取下耳缘左右耳
片，称质量；其余各组腹腔注射相应质量浓度的药物，
给药３０ｍｉｎ后按照空白组方法处理。以两耳片质量
差为肿胀度，并计算肿胀抑制率，结果见表２。
表２　总生物碱对二甲苯致小鼠耳肿胀的抗炎活性
Ｔａｂ．２Ａｎｔｉ－ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ　ａｃｔｉｖｉｔｙ　ｏｆ　ｔｏｔａｌ　ａｌｋａｌｏｉｄｓ　ｏｎ　ｘｙｌｅｎｅ
ｉｎｄｕｃｅｄ　ｍｉｃｅ　ｅｄｅｍａ （ｎ＝１０）
组别 剂量／ｍｇ·ｋｇ－１ 肿胀度／ｍｇ 肿胀抑制率／％
空白 － ２４．７２±１．１０ －
低剂量 １　 １５．６６±９．６０　 ３６．６５
中剂量 ５　 １３．２５±５．２１　 ４６．４０
高剂量 １０　 １０．８３±３．６２　 ５６．１９
３．３　大鼠足肿胀实验　将５０只雄性 ＳＤ 大鼠
（１６０～１８０ｇ）随机分成５组（空白对照组、地塞米松
磷酸钠阳性对照组和高、中、低３个剂量给药组），连
续灌胃给药７ｄ。末次给药之前，测量每只大鼠右足
足趾厚度，并记录数据。末次给药３０ｍｉｎ后，除模型
对照组外，其他４组用１０ｇ·Ｌ－１的角叉菜胶溶液
１００μＬ皮下注射于每只大鼠的右后足趾。在注射角
叉菜胶后１，２，３，４和５ｈ测量每只大鼠的右足趾厚
度。大鼠的足肿胀度（ΔＴ）和肿胀抑制率（％）按以下
公式计算：
ΔＴ＝Ｔｔ－Ｔ０
Ｔｔ表示大鼠在ｔ时的右足趾厚度（ｍｍ），Ｔ０ 表
示大鼠在注射角叉菜胶前的右足趾厚度（ｍｍ）。
肿胀抑制率（％）＝
空白组足肿胀度－给药组足肿胀度
空白组的足肿胀度 ×１００％
实验结果见表３。
表３　总生物碱对角叉菜胶诱导大鼠足肿胀的作用
Ｔａｂ．３Ｔｈｅ　ｅｆｆｅｃｔ　ｏｆ　ｔｏｔａｌ　ａｌｋａｌｏｉｄｓ　ｏｎ　ｃａｒｒａｇｅｅｎａｎ－ｉｎｄｕｃｅｄ
ｈｉｎｄ　ｐａｗ　ｅｄｅｍａ （ｎ＝１０）
组别
剂量
／ｍｇ·ｋｇ－１
不同时间（ｈ）足肿胀抑制率／％
１　 ２　 ３　 ４　 ５
空白对照 － － － － － －
低剂量 ５　 ４５．８２　４３．６６　４２．９６　４３．５０　４１．２５
中剂量 １０　 ５９．１９　５８．４９　５５．１３　５１．６１　５２．５５
高剂量 ２０　 ７２．５１　７０．８３　６７．４７　６１．８９　６２．７１
地塞米松 ５　 ７９．２６　７１．１５　６８．８０　６５．６２　６６．３３
４　讨论
生物碱是存在于生物体（主要为植物）中的一类
含氮的碱性有机化合物，大多数有复杂的环状结构，
氮素多包含在环内，有显著的生物活性，是中草药中
重要的有效成分之一［３］，也是近年来研究的热点。传
统的生物碱提取分离方法有溶剂法，离子交换树脂法
等。游离的生物碱及其盐类一般都能溶于乙醇，因此
本实验将乙醇作为生物碱的提取溶剂应用较为适合。
我们平行比较了几种方法，如酸碱滴定法、分光
光度法、高效液相色谱法等，本研究建立了用酸性染
料比色法对总生物碱进行定量测定，酸性染料比色
法［４－６］是根据一定ｐＨ 值条件下，生物碱盐的阳离子
和酸性染料的阴离子定量结合生成有色的络合物（即
离子对），此离子对可以定量地被某种有机溶剂萃取
的原理，通过测定萃取液的吸光度，来测定中药中总
生物碱含量的方法。经系统的方法学考察，表明这种
方法灵敏度高，选择性好，准确度高，分析成本低，操
作简便快速，重复性好。
矮紫堇与小檗碱紫外扫描图谱在４１６ｎｍ处均
有较大吸收，由于总生物碱中各种生物碱紫外吸收具
有加和性，故采用以乙醇提取后的矮紫堇粗总生物碱
含量折算为小檗碱的含量，对矮紫堇总生物碱含量进
行测定。
矮紫堇中生物碱的含量较高，我们采用小鼠耳肿
胀模型及大鼠足肿胀模型对其抗炎活性进行初步测
定［７］。小鼠耳肿胀模型中，涂抹二甲苯３０～６０ｍｉｎ
后达到最大肿胀度，９０ｍｉｎ后肿胀基本消除，故实验
中通常选择在给予二甲苯１ｈ左右断颈处死小鼠。
大鼠足肿胀模型中，大鼠肿胀随着时间的增加逐渐增
加，并且在３ｈ达到高峰。给药组和地塞米松磷酸钠
给药组在致炎后３ｈ的肿胀度和空白对照组比较均
有明显的下降。实验结果显示，３个剂量组总生物碱
均有良好的抗炎活性，为其进一步药用研究奠定基
础。
参考文献：
［１］　范彩霞．紫堇属（Ｃｏｒｙｄａｌｉｓ　ＤＣ．）植物资源在藏药中的
应用及其开发与保护［Ｊ］．中国医学生物技术应用，
２００３，２（１）：３６－３８．
［２］　吕芳，徐筱杰．紫堇属藏药中生物碱成分及生物活性研
究进展［Ｊ］．时珍国医国药．２００７，１８（４）：７７９－７８０．
［３］　胡洪羽，彭蜀晋，陈颖，等．常见生物碱的性质及其用
途［Ｊ］．青年科学：教师版，２０１０，８（４）：１２３－１２４．
［４］　刘喜纲，刘翠哲，常金花．应用酸性染料比色法测定总
生物碱的含量［Ｊ］．中国药房，２００７，１８（１１）：８７５－８７６．
［５］　费艳美，张玉萍，方步武，等．白英中总生物碱的含量
测定［Ｊ］．西北药学杂志，２００９，２４（４）：２６０－２６２．
［６］　甄会贤，李平，解育静，等．酸性染料比色法测定延胡
索总生物碱的含量［Ｊ］．现代中药研究与实践，２０１２，２６
（３）：６６－６８．
［７］　周娟，张梦军，郭嘉伟，等．小鼠耳肿胀模型及药理应用
［Ｊ］．国际检验医学，２０１２，１７（９）：２１０２－２１０４．
（收稿日期：２０１４－１０－１１）
４０６ 西北药学杂志　２０１５年９月　第３０卷　第５期