全 文 ：【论　著】
脱氢紫堇碱体外对兔血小板中环核苷酸含量的影响
丁　顺1 ,李　贺2 ,范新田2
(1.吉林化纤集团公司职工医院内科 ,吉林　吉林　132012;2.北华大学药学院)
【摘要】　目的:研究脱氢紫堇碱(DHC)对兔血小板中 cAMP 和 cGMP含量的影响以探讨其抑制血小板聚集的作用机制。方法:应用放射
免疫分析方法。结果:DHC显著增加兔血小板中 cAMP的含量 ,而降低兔血小板中 cGMP 的含量。结论:DHC可能通过增加血小板中 cAMP的
含量和降低血小板中 cGMP 的含量而产生血小板抑制作用。
【关键词】　脱氢紫堇碱;血小板聚集;cAMP ;cGMP
[ 中图分类号] 　R973　　　　　　　[文献标识码] 　A　　　　　　　[ 文章编号] 　0369(2007)03-0165-02
Effects of dehydrocorydaline on cyclic
nucleotide concentration in rabbit platelets in vitro
DING Shun , LI He ,FAN Xin-tian
【Abstract】　Objective:To study Effects of dehydrocorydaline(DHC)on cAMP and cGMP concentration in rabbit platelets in vitro.Meth-
ods:Radioimmunoassay method was used.Results:DHC increased cAMP concentration in rabbit platelets in vitro and decrease concentration in
rabbit platelets.Conclusion:DHC may inhibit platelet aggregation through increasing cAMP and decreasing cGMP concentration in rabbit
platelets.
【Key words】　Dehydrocorydaline;Platelet aggregation;cAMP;cGMP
　　脱氢紫堇碱(dehydrocorydaline , DHC)系从罂粟科植物延
胡索块茎中提得的一种季胺碱。有文献报道 , DHC 有抗心肌
缺血和抗心律失常的作用 , 亦有实验证明 DHC 体内和体外
给药对ADP 和胶原诱导的血小板聚集都有抑制作用。本文
通过观察DHC体外给药对兔血小板中 cAMP和 cGMP含量的
影响以探讨 DHC 抑制血小板聚集的作用机制。
1　材料与方法
1.1　材料
1.1.1　试剂　DHC 由天津药物研究所提供 , 使用时用生理
盐水配制。 cAMP 和 cGMP放射免疫分析药盒由北京原子能
研究所提供。茶碱用生理盐水配制成 0.27%溶液。 枸橼酸
钠用蒸馏水配制成 38%溶液。三氯醋酸用蒸馏水配制成
15%溶液。水饱和乙醚:用分液漏斗使适量乙醚与水混合 ,
然后充分振荡 3 分钟 , 静置 10 分钟 , 弃去分液漏斗内的水
层。如此进行 3次 , 留已饱和水的乙醚备用。 EDTA—生理盐
水溶液:将 EDTA(乙二胺四乙酸钠盐)用生理盐水配制成 0.
1%溶液备用。磷酸缓冲液(PBS):用生理盐水溶解磷酸氢二
钾和磷酸二氢钾配制成 0.02M PBS。
1.1.2　仪器及器材　放射免疫分析仪器使用国产 FJ-
2101G 双道液体闪烁计数仪。凡接触血小板的实验用玻璃器
皿及注射器针头均用甲苯-硅油溶液硅化。
1.2　方法
1.2.1　标本的采集　选择体重为 2.2～ 3.8kg 的健康家兔 ,
雌雄各半 ,随机分组。实验用家兔禁食水 12 小时后 , 在乌拉
坦(1g/kg)腹腔麻醉下 ,剥离左颈总动脉 , 切开该动脉后沿向
心端插入硅胶管 ,管的另一端连接注射器 , 注射器事先装入
枸橼酸钠溶液 0.5ml ,采血 4.5ml , 即按 9:1 体积比例抗凝。
1.2.2　富血小板血浆(plasma of rich platelet , PRP)的制备　取
上述样本以 1 000rpm 离心 8 分钟 ,取起上清液 , 计数血小板。
1.2.3　贫血小板血浆(plasma of poor platelet , PPP)的制备　将
PRP再以 4 000rpm 离心 15 分钟 ,取起上清液 , 计数血小板。
1.2.4　血小板浓缩液(platelet concentrate , PC)的制备　制备
过程中的沉淀用 EDTA—生理盐水液悬浮 , 洗涤 3 次 , 最后一
次弃上清液 ,悬浮血小板于 1.0ml 0.02M PBS 中 ,其血小板数
(统计 30只兔每ml中所含血小板数)为(0.651×109±0.086
×109)个。
1.2.5　待测样本的制备　去 1.0 ml PC , 加入 200μl不同剂量
的药物或生理盐水 , 37℃培育 15 分钟 , 再加入 15%三氯醋酸
0.5ml。 2小时后 ,用水饱和乙醚振荡提取 3 次 , 去水饱和乙
醚后 ,样品在 65～ 72℃下烘干 ,然后冰冻保存备用。
1.2.6　样品的测定　①cAMP 测定:应用蛋白结合分析法。
整个反应都在冰水浴中进行 ,将(0.8×6)cm 的试管编号浴入
冰水中 ,反应液总体积为 150μl。加入结合蛋白后轻轻摇匀 ,
培育 2 ～ 4 小时后 , 按要求加入吸附剂 50μl , 摇匀 , 立即以
3 500rpm 离心 6～ 7 分钟 , 吸取上清液 120μl , 置测量杯中 , 加
入 1.5ml无水乙醇 , 再加闪烁液 3.5ml , 盖严摇匀 , 在液体闪
烁计数仪上测定放射性 ,求出样品中实际 cAMP含量。数据
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第 19 卷　下半月　第 3 期
中国民康医学
Medical February of Chinese People′s Health
Mar.2007
Vo1.19　SHM　No.3
缺乏信心。故希望通过“快捷简便” 的剖宫产术来解除充满
未知因素的长时间分娩过程的心理压力[ 2] ;社会上较为普遍
的错误认识如剖宫产为安全 、完美的分娩方式 , 剖宫产儿聪
明 、产妇痛苦少且能保持体形 、家属方便 , 甚至因封建迷信思
想而提出择“吉日”分娩的要求;胎儿电子监护对胎儿呼吸窘
迫的过度诊断 、B 超对脐带绕颈 2、3 圈及羊水过少的确诊 , 胎
膜早破超过 48小时未分娩者 , 臀位 , 瘢痕子宫以及其他妊娠
合并症等 ,由于存在许多不确定因素 , 且独生子女导致的社
会和家庭对优生 、优育过高的期望值 , 医疗环境条件及医患
关系的巨大压力以及医疗纠纷的不断增加 , 或因熟人 、亲属
等往往迫使产科医生采取妥协态度 ,把剖宫产当成防止分娩
以外的预防性手术及缓解医患矛盾 、解决医疗纠纷的方式。
诸如此类的原因对临床工作的冲击 ,促使社会因素剖宫产率
逐年增加。文化程度对社会因素剖宫产存在一定的影响。
城镇人口的社会因素剖宫产率明显高于农村人口 , 说明两者
对剖宫产术存在不同的观点。
妊娠分娩绝大多数是繁衍过程中的一个正常生理过程 ,
是人的一种本能行为。 孕妇和胎儿都是具有潜力主动参与
并完成分娩过程的 ,偶尔因某些不良因素的影响可能超出生
理范围而进入病理状态 ,才需要以社会心理因素为主的综合
医护措施干预帮助重返生理范围。 剖宫产毕竟属于手术范
畴 , 对产妇及围产儿来说 , 并不是绝对安全的分娩方式[ 5] 。
本研究显示 , 术后并发症如大出血 、新生儿窒息 、母乳初始分
泌量较顺产者少等 ,特别是剖宫产儿呼吸系统并发症如呼吸
窘迫综合征 、新生儿肺炎等较阴道产儿为多。有研究表明 ,
经剖宫产的新生儿体内缺乏 IgG ,导致机体抵抗力下降 , 从而
增加了患病的概率。且中外学者研究发现 , 剖宫产儿由于缺
乏阴道分娩以前各种内分泌及神经系统的调整 ,易出现感觉
统和失调 , 日后有可能出现定位差 、注意力不集中 、多动及阅
读 、花钱 、打球困难[ 6 , 7] 。无手术指征的社会因素剖宫产也会
给产妇造成医源性痛苦 , 甚至影响母儿及今后的妊娠分娩 ,
对社会及家庭带来额外的经济负担 ,对医学发展造成助产技
术的衰退 ,导致恶性循环。
为此 , 应采取以下措施以控制并降低社会因素剖宫产
率:加强围生保健和孕产妇系统管理 , 提高产前健康教育普
及率 ,增强孕产妇社会心理支持 , 提高孕产妇及家属对阴道
分娩的信心;改善医疗环境 , 加强行业自律 ,提高医务人员的
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分析时以 pmol cAMP/(0.651×109±0.086×109)个血小板表
示之。 ②cGMP测定:应用放射免疫分析法。取(0.8×6)cm
的试管编号浴入冰水中 , 依次加入试剂 , 最后加抗血清
100μl ,反应液总体积为 200μl。轻轻摇匀 , 于 2 ～ 4℃下保温 4
小时后 ,加 0.02M PBS 1ml 以终止反应。将样品滴加至微孔
滤膜上减压抽滤 , 以 2.5ml同一缓冲液洗去膜片上(3H)-
cGMP ,将膜片置于 70 ～ 80℃下烤干。烤干后在液体闪烁计
数仪上测定其放射强度。实验数据的计算和分析同 cAMP。
2　结果
血小板中 cAMP和 cGMP 结果如表 1 和表 2 所示。数据
分析采用 t检验。
表 1　DHC 对兔血小板 cAMP含量的影响
组别 动物数 cAMP P
对照组 10 3.26±1.24
茶碱 10 3.92±1.30 >0.05
低浓度 DHC 10 5.04±1.23 <0.05
高浓度 DHC 10 7.25±1.48 <0.01
表 2　DHC 对兔血小板 cGMP含量的影响
组别 动物数 cGMP P
对照组 10 6.25±1.48
茶碱组 10 5.84±1.83 >0.05
低浓度 DHC 10 4.92±1.30 <0.05
高浓度 DHC 10 2.44±1.25 <0.01
3　讨论
1995年Marcus 和 Zucker 报道了 cAMP 是血小板聚集抑
制剂 ,此后 , 一些研究亦表明 cAMP在血小板功能方面起着重
要作用[ 1 ～ 3] 。近年来有文献报道支持这一观点 ,认为提高血
小板内 cAMP的浓度 , 是抑制血小板聚集的机制之一。 cAMP
和 cGMP是调节机体多种功能的共同体。在调节血小板功能
方面 , cGMP 抑制血小板聚集 , 而 cGMP 增加血小板聚集 ,
cAMP 和 cGMP 作为机体内的一对内源性物质有机地调节血
小板功能[ 4 , 5] 。本实验结果表明 , 与对照组相比 ,具有血小板
抑制作用[ 6]的 DHC 增加体外兔血小板 cAMP 含量 , 而降低兔
血小板 cGMP含量 , 且具有剂量依赖性 ,与前述报道相符合。
因此可以认为 , DHC 可能是通过增加体外血小板 cAMP 含
量 , 降低血小板 cGMP 含量而抑制血小板聚集。但是确切机
制以及是否还通过其他机制而抑制血小板聚集还有待于深
入研究。
参考文献
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Platelet Aggregation and Release Induced by High Level Arachidonate
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(收稿日期:2006-11-24)
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中国民康医学
Medical February of Chinese People′s Health
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