全 文 ：PoultryScience
自美国学者 Siegel等[1]提出“红细胞免疫系统”
以来,对红细胞免疫功能的研究取得了许多突破性
进展。现已证实红细胞主要通过膜上所含 C3b受体
(CR1)介导来发挥免疫功能,红细胞在天然免疫反
应中的最大作用是识别抗原、黏附运输抗原至巨噬
细胞网状内皮系统,将抗原递交给巨噬细胞系统销
毁。目前,红细胞免疫功能在疾病发生发展中的作
用受到了国内外学者普遍关注,我国在兽医学领域
红细胞免疫研究起步较晚,只见于畜禽传染病和微
量元素等营养因子对红细胞免疫功能影响的研究
报道[2-5]。
黄酮类化合物广泛存在于植物体中,其在畜牧
业生产中的研究应用发现,能提高饲料转化率,促
进动物生长[6];提高畜禽机体免疫力[7],抗菌消炎、
提高抗氧化应激能力和保健等作用[8],元宝枫树叶
黄酮同银杏叶黄酮成分、药理相类似,可广泛用于
食品、医药、保健品行业,具有较高的经济开发价值
[9]。本文拟以元宝枫黄酮作为饲料添加剂,研究肉鸡
红细胞免疫功能的动态变化,旨在揭示元宝枫黄酮
对红细胞免疫功能的影响规律,为其在生产应用上
提供理论依据。
1 材料
1.1 试验动物和日粮 选用健康的 1日龄艾维茵
商品代肉仔公鸡 375只,试验开始时采用随机分组
的方法,各组体重差异不显著(P>0.05)。
基础日粮以玉米、豆粕为主,参照肉鸡的营养标
准配制,见表1。试验所用的元宝枫黄酮由本课题组
制备。试验中,分别称取不同剂量的黄酮,加入少量
基础日粮混匀作为预混料,然后逐级放大,混匀于备
用的基础日粮中。本试验共分五个处理,1组为基础
日粮,作为空白对照,2组为添加元宝枫黄酮 5mg/
kg,3组为添加元宝枫黄酮 10mg/kg,4组为添加元
宝枫黄酮20mg/kg,5组为添加元宝枫黄酮40mg/kg,
每个处理3个重复,每个重复25只鸡。
表1 基础日粮营养指标
营养指标
粗蛋白
代谢能(Mcal/kg)
钙
磷
赖氨酸
蛋氨酸
2阶段(22~49日龄)
20%
3.01
0.92%
0.62%
1.01%
0.37%
1阶段(1~21日龄)
22.18%
3
1.03%
0.73%
1.22%
0.48%
2 试验方法
2.1 饲养管理 采用笼养。第1周每日喂料8次,
收稿日期:2008-4-15
摘 要:试验选择1日龄雄性艾维茵肉仔鸡375只,随机分为5个处理组,每个处理3个重复,
每个重复25只鸡,进行为期42d的试验。结果表明:添加元宝枫黄酮(5g、10、20、40mg/kg)能够显著
提高2~6周肉鸡的红细胞C3b受体花环率(P<0.01),能显著提高2~3周及5~6周红细胞IC花环率
(P<0.01),其中以20mg/kg元宝枫黄酮添加剂效果最为明显。
关键词:黄酮;元宝枫;红细胞免疫;肉鸡
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元
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宝
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枫
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黄
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酮
对肉鸡红细胞免疫机能的影响 *
中图分类号:S852.4 文献标识码:B 文章编号:1673-1085(2008)7-0003-03
谢晶 1,林毅 1,杨晓梅 1,李兴玉 1,杨汉博 2,汤华钊 3,廖党金 1,
(1.四川省畜牧科学研究院兽医所,成都 610066;2.成都思来生物科技有限公司;
3.四川大学轻纺与食品学院)
研究报道
*基金项目:四川省应用基础研究(课题编号:05GY029-007-6)
3
家禽科学2008.7研究报道
第2周6次,第3周以后每日喂料 4次,自由饮水;
光照前 3d为 24h,以后每天 23h,强度随鸡日龄增
加而递减;每天记录鸡舍内温、湿度,观察鸡群健康
状况并记录发病死亡情况;试验期间定期进行免疫
和消毒;7、21日龄滴鼻、点眼免疫新支二联苗,14、
28日龄口服免疫传染性法氏囊中等毒力活疫苗。
2.2 检测指标及测定方法 用红细胞 C3b受体花
环(C3bReceptorRosete,C3bRR)和红细胞免疫
复合物花环(ImmuneComplexRosete,ICR)试验
检测红细胞免疫功能[10-11],具体操作如下:
2.2.1 红细胞悬液制备 于试验的第 2、3、4、5、6、
7周,每个重复随机抽取两只鸡,无菌心脏采血
2ml,肝素钠抗凝,用pH7.2的Hanks液将 RBC
洗3次(每次2000r/min离心 5min),用 Hanks液配
成1.25×107个/mlRBC悬液。
2.2.2 C3b致敏酵母菌制备 先将酵母菌用 Hank
s液洗3次(每次 1000r/min离心 5min),在水浴煮
沸 25min,然后用纱布过滤,再用 Hanks液洗涤 3
次,并用 Hanks液配成 2×108个/ml酵母菌悬液,
然后加等量新鲜家兔血清,混匀,37℃孵育 15min,
再用 Hanks液洗 2次,最后配成 1×108个/ml的
C3b致敏酵母菌悬液。
2.2.3 镜检 取 C3b致敏酵母菌悬液和鸡红细胞
悬液各两滴,混匀,37℃孵育 40min后取出,轻轻摇
起,加0.25%戊二醛溶液1滴固定5min,涂片,干
燥,甲醇固定 2min,用姬姆萨氏液染色,再用瑞氏
液复染,最后用高倍镜检查,以一个 RBC粘附 2个
或2个以上酵母为一个花环。计数 200个RBC,求
出花环率。
2.2.4 红细胞免疫复合物(RBC-IC)花环试验 除
酵母菌(1×108个/ml)不加兔血清致敏外,其余步骤
均与RBC-C3b花环实验相同。
2.3 数据处理与统计分析 实验数据分析采用
excel和spss13.0进行处理。
3 结果
3.1 红细胞C3b受体花环率变化 见表2。
表 2结果表明,低剂量第 2组在第 3周开始
C3bR花环率明显高于对照组,并一直维持较高水
平至第6周 (P<0.01),到了第 7周有所下降 (P<
0.05);中等剂量的第3、4组C3bR花环率在第 2周
就表现出较高的水平(P<0.01),并维持到第 6周,
到第 7周第 4组花环率微高于对照组(P<0.05),第
3组差异不显著;高剂量第 5组,仅在第 3周花环
率高于对照组(P<0.01),其余检测时间均与对照组
差异不显著。
表2 红细胞C3b受体花环率动态变化
分组
1
2
3
4
5
3周龄
0.0950aA
0.1350bB
0.1325bB
0.1408bB
0.1058aAB
2周龄
0.0842aA
0.0917aA
0.1217bB
0.1267bB
0.0850aA
4周龄
0.0812aA
0.1450bB
0.1417bB
0.1350bB
0.0883aA
6周龄
0.0818aA
0.1317bB
0.1317bB
0.1300bB
0.0877aA
5周龄
0.0767aA
0.1353cB
0.1187bcB
0.1297bcB
0.0867aA
7周龄
0.0928aAB
0.1122bB
0.0942aAB
0.1045abAB
0.0897aA
注:在统计分析表中,数字右肩上方标注的小写字母
不同者为差异显著(P<0.05),大写字母不同者为差异极显
著(P<0.01)。下表同。
3.2 红细胞IC花环率变化 见表3。
表3红细胞免疫复合物(RBC-IC)花环率动态变化
分组
1
2
3
4
5
3周龄
0.1048aA
0.1125aA
0.1187aA
0.1475bB
0.1605bB
2周龄
0.1133aA
0.1152aA
0.1423bB
0.1813cC
0.1590bBC
4周龄
0.1267
0.1158
0.1188
0.1265
0.1305
6周龄
0.1180ab
0.1095a
0.1075a
0.1118ab
0.1262b
5周龄
0.1425bcAB
0.1207aA
0.1322abA
0.1358abAB
0.1590cB
7周龄
0.1057
0.1150
0.1190
0.1150
0.1157
表 3表明,不同添加剂量组对红细胞 IC花环
率的影响变化较大。低剂量第2组第1~4周龄及第
7周龄与对照组比较 IC花环率差异不显著,第 5、6
周龄花环率水平低于对照组(P<0.05),第 3组仅 1
周龄时红细胞 IC花环率高于对照组 (P<0.01),在
5、6周龄花环率水平低于对照组,其余检测时间差
异不显著;第 4、5组在第 2、3周龄红细胞 IC花环
率高于对照组(P<0.01),在第 5、6周龄时,第 4组
花环率低于对照组,而高剂量第 5组明显高于对照
组(P<0.01),在4、7周龄花环率均差异不显著。
4 小结与讨论
红细胞具有识别、粘附、浓缩、杀伤抗原、消除
免疫复合物的能力,参与机体免疫调控,并有完整
的自我调控系统。红细胞C3b受体的免疫粘附作用
是其发挥免疫功能的生理学基础。它参与调控补体
活性,清除循环免疫复合物,增强吞噬细胞的吞噬
功能以及对细胞免疫的调节作用。故红细胞C3b受
体即 CR1的免疫粘附活性的测定常作为红细胞免
疫功能的重要标志。红细胞可通过 C3b受体吸附
C3b致敏的酵母菌,红细胞被包绕在其中形成
C3bRR;ICR形成则是酵母菌表面的胶木多糖通过
C3b粘附红细胞表面的免疫复合物,红细胞被包绕
4
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在其中形成花环,C3bRR和 ICR依次反映红细胞
表面“自由”(空位)和“结合”(占位)状态 C3b受体
的数量[12]。本试验结果表明,5~20mg/kg元宝枫黄酮
的添加剂量可以明显提高红细胞 C3b受体花环率,
并维持较长时间,到了高剂量(40mg/kg)时则对红
细胞C3b受体花环率变化影响不大。不同剂量元宝
枫黄酮对红细胞 IC花环率的影响变化较大。5~
10mg/kg添加量对早期红细胞 IC花环率的无显著
影响,中后期有下降趋势,而 20~40mg/kg添加量在
早期可显著提高 IC花环率,到了中后期只有高剂
量才表现高水平 IC花环率。因此,20mg/kg元宝枫
黄酮添加剂量能较好地提高红细胞免疫功能。
参考文献:
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EfectofflavonesofAcertruncatum onimmunefunction
ofredbloodcelsinbroilers
XieJing1,LinYi1,YangXiao-mei1,LiXingyu1,YangHan-bo2,TangHua-zhao3,LiaoDang-jin1
(1.SichuanAnimalScienceAcademy,610066;2.ChengduSlanBiotechnologyLimitedCompany;3.
ColegeofLightTextileandFoodScienceEngineeringofSichuanUniversity)
Abstract:A totalof3751-day-oldAA malebroilerswererandomlydividedintofivetreatments.
Eachgroupcontained3repeateswith25broilers.Thetriallasted42days.Theresultsshowedthatdietary
flavonesofAcertruncatum supplements(5、10、20、40mg/kg)couldsignificantlyimprovetherateofC3b
ReceptorRoseteofredbloodcelsattheageof2~6weeksold(P<0.01), andtherateofImmune
ComplexRoseteofredbloodcelsin2~3and5~6week-oldbroilders (P<0.01),ofwhichtheflavones
supplementlevelwith20mg/kgwasthemostefective.
Keywords:flavones;Acertruncatum;immunityofredbloodcel;broilers □
研究报道
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