全 文 ：中国药物与临床 2008年 11月第 8卷第 11期 Chinese Remedies & Clinics，November 2008,Vol.8,No.11
为有效开发和充分利用水蔓菁总黄酮，我们采用正交试
验方法对其提取工艺进行了研究。
1 仪器与试药
1.1 仪器：752型紫外分光光度计(上海菁华科技仪器有限公
司)；KQ3200DE超声波仪 （昆山市超声仪器有限公司）；RE—
52AA型旋转蒸发仪（上海亚荣仪器厂）；KDM型电热套（甄城
华鲁电热仪器有限公司）。
1.2 试药：水蔓菁药材（购自山西万荣，经山西省药检所鉴定
为玄参科细叶婆婆纳属水蔓菁），芦丁对照品（中国药品生物
制品检定所，批号：0080-9705）；其他试剂为分析纯。
2 方法与结果
2.1 总黄酮含量测定方法
2.1.1 标准曲线的绘制：精密称取芦丁对照品适量置量瓶
中，加 60 %乙醇超声溶解并定容，制得浓度为 0.062 mg/ml的
芦丁对照品溶液。精密量取芦丁对照品溶液 0.5，1.0，2.0，3.0，
4.0 ml，分别置 10 ml量瓶中，各加 0.1 mol/L AlCl3溶液 2 ml，
0.1 mol/L KAc溶液 3 ml，加 60 %乙醇至刻度，摇匀，放置 30
min，在 410 nm处测定吸收度。以吸收度（A）为纵坐标，芦丁
浓度（c）为横坐标绘制标准曲线，计算得回归方程：A=34.9×
10-3c-0.0005，r=0.9999，结果芦丁浓度在 3.1~24.8 μg/ml范围
内与吸收度线性关系良好。
2.1.2 总黄酮含量测定：
精密称取水蔓菁药粉 10 g 共 9 份，按正交实验设计（见
表 1，2）回流提取，过滤，合并滤液，浓缩至 50 ml。精密量取 1
ml至 10 ml量瓶中，用 60 %乙醇稀释至刻度，作为样品溶
液。精密吸取 1 ml样品溶液至 10 ml量瓶中，按“2.1.1”项下
方法测定，计算总黄酮的含量。
2.1.3 回收率实验：精密吸取一定量的已知黄酮含量的水蔓
菁提取液，分别加入一定量的芦丁对照品溶液,按上述方法测
定总黄酮的含量，结果上述方法对黄酮的回收率为 98.0%~
102.0%，符合试验要求。
2.2 提取方法的选择
2.2.1 水提取法：称取水蔓菁药粉 10 g，置圆底烧瓶中，加水
100 ml，提取 2 次，每次 1 h，合并滤液，定容至 50 ml，按
“2.1.2”项下方法测定，计算水蔓菁总黄酮含量。
2.2.2 乙醇提取法：称取水蔓菁 10 g，置圆底烧瓶中，加 60%
乙醇 100 ml，回流提取 2次，每次 1 h，合并滤液，定容至 50
ml，按“2.1.2”项下方法测定，计算水蔓菁总黄酮含量。结果表
明水提取法所得水蔓菁总黄酮含量为 1.10%，乙醇提取法所
得水蔓菁总黄酮含量为 2.12%。
2.3 乙醇提取工艺的考察
由上可知乙醇提取法优于水提取法。采用正交实验设
计，选用乙醇浓度、提取时间、提取次数、乙醇用量 4个因素，
每个因素选用 3个水平，用 L9（34）正交表进行实验设计，结果
见表 1~3。
3 讨 论
实验结果表明，乙醇提取法优于水提取法。乙醇法提取
·药物研究·
正交设计研究水蔓菁中总黄酮提取工艺
杜 艳 丁 红 范 博 张静芳
基金项目：山西医科大学创新基金资助项目（200677）
作者单位：030001 太原，山西医科大学药学院药剂教研室
通讯作者：丁红，Email:qdh26@sohu.com
水平
因素
A乙醇浓度
%
B提取时间
h
1 80 1
2 70 1.5
3 60 2
表 1 因素水平
C提取次数
次
D乙醇用量
倍
1 8
2 9
3 10
表 2 正交实验设计及结果分析
试验号 A B C D 总黄酮含量（%）
1 1 1 1 1 1.35
2 1 2 2 2 1.76
3 1 3 3 3 1.89
4 2 1 2 3 1.91
5 2 2 3 1 1.72
6 2 3 1 2 1.12
7 3 1 3 2 2.13
8 3 2 1 3 1.73
9 3 3 2 1 1.90
k1
k2
1.667
1.583
1.797
1.737
1.400
1.857
1.657
1.670
k3
R
1.920
0.337
1.637
0.160
1.913
0.513
1.843
0.186
表 3 方差分析
因素 偏差平方和 自由度 F比 F值
A 0.184 2 4.718 19.000
B 0.039 2 1.000 19.000
C 0.475 2 12.179 19.000
D 0.065 2 1.667 19.000
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中国药物与临床 2008年 11月第 8卷第 11期 Chinese Remedies & Clinics，November 2008,Vol.8,No.11
表 1 加样回收率试验结果表
称样量（mg） 样品中含量（mg） 芍药苷加入量（mg） 测得量（mg） 回收率（%） 平均回收率（%） RSD（%）
112 0.180 88 0.18 0.357 48 98.11
107.8 0.1741 0.18 0.353 14 99.47
107.4 0.173 45 0.18 0.352 77 99.62 98.71 0.71
110.4 0.1783 0.18 0.355 36 98.37
125.6 0.202 84 0.18 0.379 17 97.96
112.2 0.1812 0.18 0.358 88 98.71
温脾实肠颗粒具有温肠健脾、调运中焦的功能，主治慢
性结肠炎、肠易激综合征等证属久泻脾虚、中肠不运、下腹隐
痛、肛门坠胀、便溏不实者。芍药苷是方中主药白芍的主要有
效成分，其含量测定法中高效液相色谱法（HPLC）报道较多，
较为稳定，快捷。为保证药品质量，本实验采用了 HPLC测定
温脾实肠颗粒中芍药苷的含量。
１ 仪器与试药
1.1 仪器：Waters 2695 高效液相色谱仪（Waters 515泵，2487
紫外检测器，20 μl定量进样环）。1/10万电子分析天平（BP—
211D 型，德国 Sartorius）；KQ—1000E型医用超声波清洗器
（昆山市超声仪器有限公司）；101—1A型电热鼓风干燥箱（南
通沪通制药机械设备厂）；HH—4数显型恒温水浴锅（江苏省
金坛市荣华仪器制造有限公司）。
1.2 试药：芍药苷对照品（中国药品生物制品检定所，批号
0736-9912）。温脾实肠颗粒（江苏省中医院中药制剂实验室，
批号 061207、061208、061209）。所用中药材均购自江苏省药
材公司，并由本室专家鉴定。HPLC所用试剂为色谱纯，水为
超纯水，其他试剂为分析纯。
2 溶液制备
2.1 对照品溶液的制备：精密称取经五氧化二磷减压干燥器
中干燥 24 h 的芍药苷对照品适量，置 50 ml 容量瓶中，加
70%甲醇溶解制成每 ml含芍药苷 0.283 mg的对照品溶液。
2.2 供试品溶液的制备：精密称取温脾实肠颗粒样品约 0.2
g，置 50 mL 容量瓶中，加 70%乙醇适量，超声 15 min，再加
70%乙醇定容至刻度，摇匀，微孔滤膜滤过，取续滤液即得。
2.3 阴性供试品溶液的制备：除白芍外，按处方比例称取其
他各药材，按工艺制成不含白芍制剂，照供试品溶液制备方
法制成阴性对照溶液，即得。
3 色谱条件及系统适应性
3.1 色谱条件：色谱柱：Kromasile C18柱（250 mm×4.6 mm，5
μm）；流动相：乙腈-0.2 %磷酸溶液=14∶86；检测波长［1］：230
nm；柱温：30 ℃；流速：1.0 ml/min。
3.2 系统适应性试验：分别吸取芍药苷对照品溶液、供试品
溶液及阴性供试品溶液各 20 μl，注入 HPLC中，按上述条件
测定，样品与对照品在相同位置有较大吸收，阴性对照无干
扰。
4 方法与结果
4.1 线性关系的考察：取上述对照品溶液，用 70%甲醇稀
释至 28.3，14.15，7.075，3.5375，1.7688，0.8844 μg/ml 浓度
的对照品溶液，分别精密吸取各不同浓度的对照品溶液 20
μl，注入 HPLC仪中测定。经线性回归，得芍药苷回归方程
y=29 207x-1275.9，r=1.0000，芍药苷在 0.8844～28.3 μg/ml浓
度范围内，与峰面积的积分值呈良好的线性关系。
4.2 精密度试验：取同一供试品溶液，精密吸取 20 μl，注入
HPLC仪，重复测定 6次，以峰面积计算，相对标准差（RSD）为
0.80%。
4.3 重复性试验：精密称取同一个批号的温脾实肠颗粒样品
（061207）约 0.4 g，共 6份，依法制备供试品溶液，测定，以芍
药苷含量计算，RSD=0.91%。
4.4 稳定性试验：取同一供试品溶液，按上述色谱条件下，于
0，2，4，6，8，12 h分别进样，测定色谱峰面积，RSD为 1.72%，
说明本品在 12 h内稳定。
4.5 回收率试验：按加样回收率试验要求，精密称取已知含
量的温脾实肠颗粒样品（批号 061207）6份，分别加入芍药苷
对照品，依法制备供试品溶液，精密吸取 20 μl，注入 HPLC
仪，测定，计算，平均回收率为 98.71%，RSD为 0.71%见表 1。
高效液相色谱法测定温脾实肠颗粒中芍药苷含量
钱 芳 刘志辉 陆 超 张 芹
水蔓菁总黄酮的最佳工艺为 A3B1C3D3，即用 60%乙醇回流
提取 1 h，共提取 3次。乙醇提取工艺中对水蔓菁总黄酮含量
的主要影响因素为提取次数，其次为乙醇浓度和提取时间。
本研究运用正交实验法优化实验条件，提高了水蔓菁总黄酮
的提取效率，为以后水蔓菁的进一步开发研究奠定基础。
（收稿日期：2008-06-30）
作者单位：210029南京，江苏省中医院药剂科
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