全 文 ：北方园艺２０１６（０４）：９７～１０１ ·生物技术·
第一作者简介：王德芬（１９９０－），女，硕士研究生，研究方向为果树
逆境生理与分子生物学。Ｅ－ｍａｉｌ：ｑａｕｌｄｌ＠１６３．ｃｏｍ．
责任作者：王然（１９６０－），女，博士，教授，研究方向为果树育种。
Ｅ－ｍａｉｌ：ｑａｕｗｒ＠１２６．ｃｏｍ．
基金项目：现代农业产业技术体系建设专项资金资助项目
（ＣＡＲＳ－２９）；山东省优秀中青年科学家科研奖励基金资助项目
（ＢＳ２０１１ＮＹ００７）；山东省良种工程资助项目（２０１４－２０１６）；山东省高
等学校科技计划资助项目（Ｊ１４ＬＦ０５）。
收稿日期：２０１５－１０－１９
ＤＯＩ：１０．１１９３７／ｂｆｙｙ．２０１６０４０２６
秋子梨叶片高效再生体系的构建
王 德 芬，张 　 梅，李 鼎 立，王 　 然，马 春 晖，宋 健 坤
（青岛农业大学 园艺学院，山东 青岛２６６１０９）
　　摘　要：以秋子梨（Ｐｙｒｕｓ　ｕｓｓｕｒｉｅｎｓｉｓ　Ｍ．）叶片为外植体，ＮＮ６９为基本培养基，研究了秋子梨组
织培养高效再生体系。结果表明：噻隆（ＴＤＺ）对秋子梨叶片不定芽的诱导效果显著高于６－苄基腺嘌
呤（６－ＢＡ）和激动素（ＫＴ），吲哚丁酸（ＩＢＡ）和吲哚乙酸（ＩＡＡ）的诱导效果显著高于萘乙酸（ＮＡＡ）和２，４－二
氯苯氧乙酸（２，４－Ｄ）。其中，适合秋子梨叶片不定芽再生的最佳培养基为ＮＮ６９＋ＴＤＺ　３．０ｍｇ／Ｌ＋
ＩＢＡ　０．３ｍｇ／Ｌ，再生率和再生芽数分别为１００．０％和８．４７个；适合秋子梨不定根诱导的最佳培养基
为１／２ＭＳ＋ＩＢＡ　０．５ｍｇ／Ｌ，生根率为４５．５％，生根条数为２．２４条。
关键词：山梨；叶片；组织培养；再生
中图分类号：Ｓ　６６１．２０３．６　文献标识码：Ａ　文章编号：１００１－０００９（２０１６）０４－００９７－０５
　　秋子梨（Ｐｙｒｕｓ　ｕｓｓｕｒｉｅｎｓｉｓ　Ｍ．）是我国特有梨种质资
源，原产我国东北、西北和华北地区［１］，分为栽培种和野
生种２种。秋子梨野生种是梨属植物中最耐寒的砧木
类型，同时还兼具耐贫瘠的特性，在我国北方地区应用
较多，但由于其繁殖过程中主要依靠种子，后代参差不
齐，限制了其生产应用，高效的组织培养技术是实现种
苗一致性的有效方法之一［２－４］。国内对梨的组织培养研
究主要集中在白梨和砂梨，秋子梨报道较少［１，５－６］，由于
野生种之间基因型一致性较差，组织培养体系重复性较
差。课题组在砧木资源调查的基础上，以秋子梨野生种
质叶片为试材，进行了其高效再生体系的构建。
１　材料与方法
１．１　试验材料
秋子梨由吉林省农业科学院馈赠，嫁接保存于青岛
农业大学现代农业科技示范园梨种质资源圃，离体培养
体系初代于２０１０年建立，常规继代培养保存。
１．２　试验方法
１．２．１　芽的诱导与增殖　取秋子梨试管苗中上部叶片，
去叶柄，垂直叶中脉横切３刀，以远轴面（叶背面）接触培
养基，平铺接种到再生培养基上。基本培养基为ＮＮ６９，
并附加不同植物生长调节剂（表１、２）诱导芽分化，用于
筛选最佳的生长调节剂配比，每处理设４个重复，每个
重复接种１０个叶片，暗培养１４ｄ，然后转移至光下培养，
１４ｄ时统计秋子梨叶片的脱分化率，４０ｄ时统计秋子梨
叶片再生率和再生芽数。
１．２．２　根的再生　将诱导出不定芽的叶片转接于ＭＳ＋
６－苄基腺嘌呤（６－ＢＡ）１．０ｍｇ／Ｌ＋吲哚丁酸（ＩＢＡ）
０．１ｍｇ／Ｌ的生长培养基上进行继代培养（图１），培养
３０ｄ后将嫩梢切成２ｃｍ茎段，转入含有不同浓度ＩＢＡ
（表３）的生根培养基上，每处理接种茎段３０个，４０ｄ后
统计生根率和生根数。
１．２．３　培养条件　各处理蔗糖浓度为３０ｍｇ／Ｌ，琼脂
糖浓度为７ｇ／Ｌ，ｐＨ　５．８。培养温度（２５±１）℃，光照
强度４　８００ｌｘ，光周期１６ｈ／ｄ。
１．３　项目测定
再生率（％）＝再生芽的外植体数／接种的外植体总
数×１００；再生芽数（个）＝外植体再生芽的个数／再生芽的
外植体数；生根率（％）＝生根的茎段数／接种的茎段总
数×１００；生根条数（条）＝茎段生的总根数／生根的茎段数。
２　结果与分析
２．１　叶片不定芽发生的过程
秋子梨叶片在培养基上暗培养约４ｄ后，叶片开始
隆起，叶脉膨大，切口处产生少量的乳白色愈伤组织；暗
培养约７ｄ后愈伤组织迅速膨大，愈伤组织大量发生；培
养１０ｄ后愈伤组织形成量逐渐减少，在移至光培养前，
部分愈伤形成少量的芽点（图１Ａ）；培养约２０ｄ，在叶片伤
口处、叶片叶脉处分化出了丛生芽，其中以叶片基部分化
７９
·生物技术· 北方园艺２０１６（０４）：９７～１０１
　　　　
　　注：Ａ，叶片外植体培养１４ｄ形成的愈伤组织（有白色芽点）；Ｂ、Ｃ，由愈伤组织再生的不定梢；Ｄ，不定梢继代培养形成的丛芽；Ｅ，秋子梨生根苗；Ｆ，由
不定梢再生的不定根。
Ｎｏｔｅ：Ａ．ｆｏｒｍａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｃａｌｕｓ　ｆｒｏｍ　ｌｅａｖｅｓ　ａｆｔｅｒ　１４ｄａｙｓ　ｃｕｌｔｕｒｅｄ（ｗｉｔｈ　ｗｈｉｔｅ　ｂｕｄ　ｐｏｉｎｔｓ）；Ｂ，Ｃ．ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ　ｏｆ　ａｄｖｅｎｔｉｔｉｏｕｓ　ｓｈｏｏｔｓ　ｆｒｏｍ　ｃａｌｕｓ；Ｄ．ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ
ｏｆ　ａｄｖｅｎｔｉｔｉｏｕｓ　ｓｈｏｏｔ　ｉｎ　ｏｎｅ　ｓｕｂｃｕｌｔｕｒｅ；Ｅ．ｒｏｏｔ　ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ　ｆｒｏｍ　ａｄｖｅｎｔｉｔｉｏｕｓ　ｓｈｏｏｔｓ；Ｆ．ｒｏｏｔ　ｏｆ　Ｐ．ｕｓｓｕｒｉｅｎｓｉｓ．
图１　秋子梨叶片组织培养再生
Ｆｉｇ．１　Ｐｌａｎｔ　ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｌｅａｖｅｓ　ｏｆ　Ｐｙｒｕｓｕｓ　ｓｕｒｉｅｎｓｉｓ
的芽居多；３０ｄ左右不定芽大量形成（图１Ｂ、Ｃ），随后产生
不定芽的速度逐渐减缓，之后不定芽伸长生长形成嫩梢。
２．２　秋子梨叶片不定芽再生培养基的筛选
以ＮＮ６９为基本培养基，优化了ＴＤＺ和ＩＢＡ不同
浓度配比对秋子梨不定芽再生的影响。由表１可知，
不同浓度ＴＤＺ和ＩＢＡ配比影响秋子梨叶片的再生数
量和再生率，ＴＤＺ可以有效促进不定芽诱导效率。综
合２种激素浓度对秋子梨再生芽数和再生率的影响，
发现当ＴＤＺ浓度为３．０ｍｇ／Ｌ、ＩＢＡ浓度为０．３ｍｇ／Ｌ
和ＴＤＺ浓度为４．０ｍｇ／Ｌ、ＩＢＡ浓度为０．３ｍｇ／Ｌ时再
生率和再生芽数最高，但研究同时发现，当ＴＤＺ浓度
超过３．０ｍｇ／Ｌ时，秋子梨再生芽玻璃化现象严重。因
此，秋子梨叶片不定芽诱导最佳培养基为ＮＮ６９＋ＴＤＺ
３．０ｍｇ／Ｌ＋ＩＢＡ　０．３ｍｇ／Ｌ，再生率为１００．０％，再生芽数
为８．４７个。
２．３　细胞分裂素对秋子梨叶片不定芽再生的影响
不同细胞分裂素对秋子梨叶片不定芽再生影响明
显，由表２可知，在ＩＢＡ和ＩＡＡ浓度一定的情况下ＴＤＺ
的诱导效果显著高于６－ＢＡ和ＫＴ，且随着ＴＤＺ浓度的
增加，叶片不定芽的再生率和再生芽数量均得到提高，
在其浓度为３．０ｍｇ／Ｌ时达到最大，后逐渐平缓，但在
ＴＤＺ浓度为４．０ｍｇ／Ｌ时，不定芽玻璃化现象比较严重。
研究发现，与６－ＢＡ诱导不定芽以单芽为主不同，ＴＤＺ诱
导多为丛生芽，更有利于外植体的增殖。
表１　不同激素配比对秋子梨叶片再生的影响
　　Ｔａｂｌｅ　１　Ｅｆｅｃｔ　ｏｆ　ｈｏｒｍｏｎｅ　ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ　ｏｎ　ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ　ｏｆ
Ｐ．ｕｓｓｕｒｉｅｎｓｉｓｌｅａｖｅｓ
编号
Ｎｏ．
噻苯隆
ＴＤＺ
／（ｍｇ·Ｌ－１）
吲哚丁酸
ＩＢＡ
／（ｍｇ·Ｌ－１）
再生率
Ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ　ｆｒｅｑｕｅｎｃｙ／％
再生芽数Ｎｕｍｂｅｒ　ｏｆ
ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ　ｂｕｄｓ
ｐｅｒ　ｌｅａｆ／个
１　 ０．０　 ０．０　 ０．０ｉＩ　 ０．００ｇＧ
２　 ０．０　 ０．１　 ０．０ｉＩ　 ０．００ｇＧ
３　 ０．０　 ０．２　 ０．０ｉＩ　 ０．００ｇＧ
４　 ０．０　 ０．３　 ０．０ｉＩ　 ０．００ｇＧ
５　 ０．０　 ０．４　 ０．０ｉＩ　 ０．００ｇＧ
６　 １．０　 ０．０　 ４７．５ｆｇｈＦＧＨ　 １．４３ｆｇＦＧ
７　 １．０　 ０．１　 ８０．０ａｂｃｄＡＢＣＤ　 ３．８１ｂｃＣＤＥＦ
８　 １．０　 ０．２　 ８０．０ａｂｃｄＡＢＣＤ　 ３．９２ｂｃＣＤＥ
９　 １．０　 ０．３　 ５５．０ｅｆｇＤＥＦＧＨ　 ２．８８ｂｃｄｅｆＣＤＥＦ
１０　 １．０　 ０．４　 ４０．０ｇｈＧＨ　 ２．６６ｃｄｅｆＣＤＥＦ
１１　 ２．０　 ０．０　 ５２．５ｅｆｇＥＦＧＨ　 １．８８ｄｅｆｇＤＥＦＧ
１２　 ２．０　 ０．１　 ９０．０ａｂＡＢ　 ４．５７ｂｃＢＣ
１３　 ２．０　 ０．２　 １００．０ａＡ　 ７．６８ａＡ
１４　 ２．０　 ０．３　 ９．６ａｂＡ　 ４．１４ｂｃＣＤ
１５　 ２．０　 ０．４　 ９５．０ａｂＡ　 ６．７３ａＡＢ
１６　 ３．０　 ０．０　 ３０．０ｈＨ　 １．５８ｅｆｇＥＦＧ
１７　 ３．０　 ０．１　 ６７．５ｃｄｅＢＣＤＥＦ　 ４．３０ｂｃＣｄ
１８　 ３．０　 ０．２　 ９２．５ａｂＡＢ　 ７．１４ａＡ
１９　 ３．０　 ０．３　 １００．０ａＡ　 ８．４７ａＡ
２０　 ３．０　 ０．４　 ９５．０ａｂＡ　 ４．６３ｂＢＣ
２１　 ４．０　 ０．０　 ６２．５ｄｅｆＣＤＥＦＧ　 ３．３５ｂｃｄｅＣＤＥＦ
２２　 ４．０　 ０．１　 ７７．５ｂｃｄＡＢＣＤＥ　 ３．５５ｂｃｄＣＤＥＦ
２３　 ４．０　 ０．２　 ８５．０ａｂｃＡＢＣ　 ７．２１ａＡ
２４　 ４．０　 ０．３　 １００．０ａＡ　 ８．５０ａＡ
２５　 ４．０　 ０．４　 １００．０ａＡ　 ８．１０ａＡ
　　注：同列不同小写字母表示差异显著（Ｐ＜０．０５），不同大写字母表示差异极显著
（Ｐ＜０．０１）。下同。
Ｎｏｔｅ：Ｄｉｆｅｒｅｎｔ　ｌｏｗｅｒｃａｓｅ　ｌｅｔｔｅｒｓ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｓａｍｅ　ｃｏｌｕｍｎ　ｓｈｏｗ　ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ　ｄｉｆｅｒｅｎｃｅ　ａｔ
０．０５ｌｅｖｅｌ；ｄｉｆｅｒｅｎｔ　ｃａｐｉｔａｌ　ｌｅｔｔｅｒｓ　ｓｈｏｗ　ｈｉｇｈｌｙ　ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ　ｄｉｆｅｒｅｎｃｅ　ａｔ　０．０１ｌｅｖｅｌ．Ｔｈｅ
ｓａｍｅ　ｂｅｌｏｗ．
８９
北方园艺２０１６（０４）：９７～１０１ ·生物技术·
　　表２ 不同细胞分裂素对秋子梨叶片再生的影响
　　Ｔａｂｌｅ　２ Ｅｆｅｃｔ　ｏｆ　ｃｙｔｏｋｉｎｉｎ　ｏｎ　ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｐ．ｕｓｓｕｒｉｅｎｓｉｓｌｅａｖｅｓ
编号
Ｎｏ．
噻苯隆ＴＤＺ
／（ｍｇ·Ｌ－１）
６－苄基腺嘌呤６－ＢＡ
／（ｍｇ·Ｌ－１）
激动素 ＫＴ
／（ｍｇ·Ｌ－１）
吲哚丁酸ＩＢＡ
／（ｍｇ·Ｌ－１）
吲哚乙酸ＩＡＡ
／（ｍｇ·Ｌ－１）
再生率
Ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ　ｆｒｅｑｕｅｎｃｙ／％
再生芽数
Ｎｕｍｂｅｒ　ｏｆ　ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ　ｂｕｄｓ　ｐｅｒ　ｌｅａｆ／个
１　 ０．０　 ０．０　 ０．０　 ０．０　 ０．０　 ０．０ｅＤ　 ０．００ｇＧ
２　 ０．０　 ０．０　 ０．０　 ０．３　 ０．０　 ０．０ｅＤ　 ０．００ｇＧ
３　 １．０　 ０．０　 ０．０　 ０．３　 ０．０　 ５５．０ｄＣ　 ２．８８ｄｅＤＥ
４　 ２．０　 ０．０　 ０．０　 ０．３　 ０．０　 ９７．５ａｂＡＢ　 ４．１４ｃｄＢＣＤ
５　 ３．０　 ０．０　 ０．０　 ０．３　 ０．０　 １００．０ａＡ　 ８．４８ａＡ
６　 ４．０　 ０．０　 ０．０　 ０．３　 ０．０　 １００．０ａＡ　 ８．５０ａＡ
７　 ０．０　 ０．０　 ０．０　 ０．０　 ０．３　 ０．０ｅＤ　 ０．００ｇＧ
８　 １．０　 ０．０　 ０．０　 ０．０　 ０．３　 ４７．５ｄＣ　 ２．１７ｅｆＥＦ
９　 ２．０　 ０．０　 ０．０　 ０．０　 ０．３　 ７７．５ｃＢ　 ３．７５ｃｄＣＤＥ
１０　 ３．０　 ０．０　 ０．０　 ０．０　 ０．３　 ８２．５ｂｃＡＢ　 ５．７２ｂＢ
１１　 ４．０　 ０．０　 ０．０　 ０．０　 ０．３　 ８０．０ｃＡＢ　 ４．７０ｂｃＢＣ
１２　 ０．０　 １．０　 ０．０　 ０．３　 ０．０　 ２．５ｅＤ　 ０．２５ｇＦＧ
１３　 ０．０　 ２．０　 ０．０　 ０．３　 ０．０　 ２．５ｅＤ　 ０．２５ｇＦＧ
１４　 ０．０　 ３．０　 ０．０　 ０．３　 ０．０　 ０．５ｅＤ　 ０．５０ｇＦＧ
１５　 ０．０　 ４．０　 ０．０　 ０．３　 ０．０　 ０．５ｅＤ　 ０．５０ｇＦＧ
１６　 ０．０　 ５．０　 ０．０　 ０．３　 ０．０　 １５．０ｅＤ　 ０．９４ｆｇＦＧ
１７　 ０．０　 ６．０　 ０．０　 ０．３　 ０．０　 ７．５ｅＤ　 ０．７５ｇＦＧ
１８　 ０．０　 １．０　 ０．０　 ０．０　 ０．３　 ２．５ｅＤ　 ０．２５ｇＦＧ
１９　 ０．０　 ２．０　 ０．０　 ０．０　 ０．３　 ２．５ｅＤ　 ０．２５ｇＦＧ
２０　 ０．０　 ３．０　 ０．０　 ０．０　 ０．３　 ０．５ｅＤ　 ０．７５ｇＦＧ
２１　 ０．０　 ４．０　 ０．０　 ０．０　 ０．３　 ２．５ｅＤ　 ０．５０ｇＦＧ
２２　 ０．０　 ５．０　 ０．０　 ０．０　 ０．３　 ０．５ｅＤ　 ０．３８ｇＦＧ
２３　 ０．０　 ６．０　 ０．０　 ０．０　 ０．３　 ０．５ｅＤ　 ０．３８ｇＦＧ
２４　 ０．０　 ０．０　 １．０　 ０．３　 ０．０　 ０．０ｅＤ　 ０．００ｇＧ
２５　 ０．０　 ０．０　 ２．０　 ０．３　 ０．０　 ０．０ｅＤ　 ０．００ｇＧ
２６　 ０．０　 ０．０　 ３．０　 ０．３　 ０．０　 ０．０ｅＤ　 ０．００ｇＧ
２７　 ０．０　 ０．０　 ４．０　 ０．３　 ０．０　 ０．０ｅＤ　 ０．００ｇＧ
２８　 ０．０　 ０．０　 ５．０　 ０．３　 ０．０　 ０．０ｅＤ　 ０．００ｇＧ
２９　 ０．０　 ０．０　 ６．０　 ０．３　 ０．０　 ０．０ｅＤ　 ０．００ｇＧ
２．４　生长素对秋子梨叶片不定芽再生的影响
不同生长素类植物生长调节剂对秋子梨叶片再生
影响效果不同，以ＴＤＺ　３．０ｍｇ／Ｌ为不变因素评价了
　　　　
ＩＡＡ、ＩＢＡ、ＮＡＡ和２，４－Ｄ对秋子梨叶片再生的影响。从
表３可以看出，ＩＢＡ和ＩＡＡ效果相差不大，ＩＢＡ、ＩＡＡ的
诱导效果显著高于ＮＡＡ，极显著高于２，４－Ｄ。ＩＢＡ、ＩＡＡ
　　　　表３ 不同生长素对秋子梨叶片再生的影响
　　Ｔａｂｌｅ　３ Ｅｆｅｃｔ　ｏｆ　ａｕｘｉｎ　ｏｎ　ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｐ．ｕｓｓｕｒｉｅｎｓｉｓｌｅａｖｅｓ
编号
Ｎｏ．
噻苯隆ＴＤＺ
／（ｍｇ·Ｌ－１）
吲哚丁酸ＩＢＡ
／（ｍｇ·Ｌ－１）
吲哚乙酸ＩＡＡ
／（ｍｇ·Ｌ－１）
萘乙酸ＮＡＡ
／（ｍｇ·Ｌ－１）
２，４－二氯苯氧乙酸
２，４－Ｄ／（ｍｇ·Ｌ－１）
再生率
Ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ　ｆｒｅｑｕｅｎｃｙ／％
再生芽数
Ｎｕｍｂｅｒ　ｏｆ　ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ　ｂｕｄｓ　ｐｅｒ　ｌｅａｆ／个
１　 ０．０　 ０．０　 ０．０　 ０．０　 ０．０　 ０．０ｇＨ　 ０．００ｇＧ
２　 ３．０　 ０．０　 ０．０　 ０．０　 ０．０　 ３０．０ｅｆＦＧ　 １．５８ｅｆＦＧ
３　 ３．０　 ０．１　 ０．０　 ０．０　 ０．０　 ６７．５ｃｄＢＣＤ　 ４．３０ｄＤＥ
４　 ３．０　 ０．２　 ０．０　 ０．０　 ０．０　 ９２．５ａｂＡＢ　 ７．１４ｂＡＢ
５　 ３．０　 ０．３　 ０．０　 ０．０　 ０．０　 １０．０ａＡ　 ８．４８ａＡ
６　 ３．０　 ０．４　 ０．０　 ０．０　 ０．０　 ９５．０ａｂＡＢ　 ４．６３ｃｄＣＤ
７　 ３．０　 ０．０　 ０．１　 ０．０　 ０．０　 ６２．５ｃｄＣＤＥ　 ２．６６ｄｅＥＦ
８　 ３．０　 ０．０　 ０．２　 ０．０　 ０．０　 ９２．５ａｂＡＢ　 ６．０５ｂＢＣＤ
９　 ３．０　 ０．０　 ０．３　 ０．０　 ０．０　 ８．２５ａｂｃＡＢＣ　 ５．７２ｂｃＢＣＤ
１０　 ３．０　 ０．０　 ０．４　 ０．０　 ０．０　 ７７．５ｂｃＡＢＣ　 ６．４９ｂＢＣ
１１　 ３．０　 ０．０　 ０．０　 ０．１　 ０．０　 ３５．０ｅｆＦＧ　 ２．６７ｄｅＥＦ
１２　 ３．０　 ０．０　 ０．０　 ０．２　 ０．０　 ４７．５ｄｅＤＥＦ　 ２．０８ｅｆＦ
１３　 ３．０　 ０．０　 ０．０　 ０．３　 ０．０　 ３７．５ｅＥＦＧ　 ２．３７ｅＦ
１４　 ３．０　 ０．０　 ０．０　 ０．４　 ０．０　 １５．０ｆｇＧＨ　 ０．８３ｆｇＦＧ
１５　 ３．０　 ０．０　 ０．０　 ０．０　 ０．１　 ０．０ｇＨ　 ０．００ｇＧ
１６　 ３．０　 ０．０　 ０．０　 ０．０　 ０．２　 ０．０ｇＨ　 ０．００ｇＧ
１７　 ３．０　 ０．０　 ０．０　 ０．０　 ０．３　 ０．０ｇＨ　 ０．００ｇＧ
１８　 ３．０　 ０．０　 ０．０　 ０．０　 ０．４　 ０．０ｇＨ　 ０．００ｇＧ
９９
·生物技术· 北方园艺２０１６（０４）：９７～１０１
诱导的不定芽以丛生芽为主，ＮＡＡ则以单芽为主，２，４－Ｄ
则没有不定芽的产生。不同浓度的生长素类植物生长
调节剂对秋子梨叶片再生影响效果也不同，随着ＩＢＡ浓
度的增加叶片外植体再生率和再生芽数相应增加，
０．３ｍｇ／Ｌ时 达 到 最 高，进 一 步 提 高ＩＢＡ 浓 度 至
０．４ｍｇ／Ｌ，叶片再生率和芽数与前一浓度无显著性差
异，生长素为ＩＡＡ时也存在同样的情况。
２．５　不定根的诱导与再生
以１／２ＭＳ为基本培养基，优化了秋子梨不定芽根
诱导培养基。从表４可以看出，叶片再生不定芽并进行
增殖培养后，接种到生根培养基上２０ｄ左右就开始产生
不定根，后数量逐渐增多，在培养３０ｄ左右产生不定根
数量增长减缓，后以增长和增粗生长为主（图１Ｅ）。在
１／２ＭＳ上，当ＩＢＡ浓度为０．５ｍｇ／Ｌ时，不定芽的生根率
最高为４５．５％。
　　表４ 培养基和植物生长调节剂对不定梢生根的效应
　　Ｔａｂｌｅ　４　 Ｅｆｅｃｔ　ｍｅｄｉａ　ａｎｄ　ｐｌａｎｔ　ｇｒｏｗｔｈ　ｒｅｇｕｌａｔｏｒｓ　ｏｎ　ｒｏｏｔｉｎｇ　ｏｆ　ａｄｖｅｎｔｉｔｉｏｕｓ　ｓｈｏｏｔｓ　ｆｒｏｍＰ．ｕｓｓｕｒｉｅｎｓｉｓ
培养基 Ｍｅｄｉｕｍ 吲哚丁酸ＩＢＡ／（ｍｇ·Ｌ－１） 生根率Ｒａｔｅ　ｏｆ　ｒｏｏｔｉｎｇ／％ 生根条数Ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ　ｒｏｏｔｓ　ｐｅｒ　ｌｅａｆ／条
１／２ＭＳ　 ０．０　 ０．０ｂＢ　 ０．００ｂＢ
１／２ＭＳ　 ０．５　 ４５．５ａＡ　 ２．２４ａＡ
１／２ＭＳ　 １．０　 １８．２ｂＢ　 １．８０ａＡ
３　讨论与结论
组织培养再生受到基因型、外植体和培养基等因素
的影响，该研究以ＮＮ６９为基本培养基进行了秋子梨组
织培养再生研究，发现适合秋子梨叶片再生的最佳培养
基受到激素种类和浓度的限制，其中ＴＤＺ对不定芽的
诱导效果显著，显著高于６－ＢＡ和ＫＴ，这可能与ＴＤＺ的
活性有关，ＴＤＺ是苯基脲类化合物中活性最强的，其细
胞分裂素活性比ＢＡ、ＫＴ等嘌呤类化合物高出许多
倍［７－９］，它能使难以进行组织培养的植物，特别是木本植
物的组织培养获得成功［１０－１１］。虽然杨芳等［５］在激素的
选取上也使用了ＴＤＺ作为诱导芽的因子，但是再生效
果并不理想，最高再生率仅为１７．５％，该结果可能与激
素配比相关，有研究表明ＩＢＡ比ＮＡＡ更有效［１２］，该研
究亦表明，生长素ＩＢＡ、ＩＡＡ的诱导效果显著高于ＮＡＡ，
极显著高于２，４－Ｄ，推测ＮＡＡ适合西洋梨的组织培养再
生，东方梨品种则以ＩＢＡ、ＩＡＡ为主［１３］，同时２，４－Ｄ对细
胞有毒害作用［１４－１５］，不适合在再生培养基中进行添加。
除此以外，梨的组织培养再生还受到基本培养基的种
类、基因型和外植体的种类影响［１－４］。前人研究发现
ＮＮ６９较ＭＳ更适于叶片不定芽的诱导［１６］，该研究表明，
使用ＮＮ６９诱导秋子梨叶片再生获得了更高的再生率，
ＭＳ培养基在秋子梨的组织培养再生中一般再生率较
低［５，１６］，推测与基本培养基组成成分和浓度有关，ＮＮ６９
同ＭＳ培养基的主要区别是ＮＮ６９的无机盐成分较低，
约为ＭＳ的一半，有机成分中添加了生物素和叶酸成分。
该研究发现适合秋子梨叶片不定芽再生的最佳培
养基为ＮＮ６９＋ＴＤＺ　３．０ｍｇ／Ｌ＋ＩＢＡ　０．３ｍｇ／Ｌ，再生率
和再生芽数分别为１００．０％和８．４７个。适合秋子梨不
定根诱导的最佳培养基为１／２ＭＳ＋ＩＢＡ　０．５ｍｇ／Ｌ，生根
率为４５．５％，生根条数为２．２４条。该研究的开展为梨
属植物组织培养快繁和基因工程研究奠定了基础。
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００１
北方园艺２０１６（０４）：１０１～１０６ ·生物技术·
第一作者简介：何炎红（１９７９－），女，内蒙古呼和浩特人，博士，副
教授，研究方向为森林培育。Ｅ－ｍａｉｌ：ｈｙｈ２００１２００８＠ｉｍａｕ．ｅｄｕ．
ｃｎ．　
责任作者：白玉娥（１９６８－），女，教授，研究方向为林木遗传育种。
Ｅ－ｍａｉｌ：ｂｙｅ６６６＠１６３．ｃｏｍ．
基金项目：国家科技支撑资助项目（２０１３ＢＡＤ１４Ｂ０２）。
收稿日期：２０１５－１０－２８
ＤＯＩ：１０．１１９３７／ｂｆｙｙ．２０１６０４０２７
山杏愈伤组织诱导及植株再生
何 炎 红，吴 高 殷，白 玉 娥，田 有 亮，金 牧 兰，邹 薇 薇
（内蒙古农业大学 林学院，内蒙古 呼和浩特０１００１９）
　　摘　要：以山杏成熟胚和胚乳为外植体，以ＭＳ为基本培养基进行组织培养，研究了基于山杏
经愈伤组织途径建立的再生植株技术。结果表明：以胚乳为外植体诱导愈伤组织的适宜培养基
为ＭＳ＋６－苄基腺嘌呤（６－ＢＡ）１．０ｍｇ／Ｌ＋２，４－二氯苯氧乙酸（２，４－Ｄ）０．５ｍｇ／Ｌ＋蔗糖３０ｇ／Ｌ＋
琼脂３ｇ／Ｌ；愈伤组织的继代及分化培养基为ＭＳ＋６－ＢＡ　１．０ｍｇ／Ｌ＋萘乙酸（ＮＡＡ）０．１ｍｇ／Ｌ＋蔗
糖３０ｇ／Ｌ＋琼脂３ｇ／Ｌ；以成熟胚诱导愈伤组织和丛生芽增殖分化培养基为ＭＳ＋６－ＢＡ　２．０ｍｇ／Ｌ＋
蔗糖３０ｇ／Ｌ＋琼脂３ｇ／Ｌ；生根培养基为１／２ＭＳ＋ＮＡＡ　０．５ｍｇ／Ｌ＋蔗糖３０ｇ／Ｌ＋琼脂３ｇ／Ｌ。
关键词：山杏；愈伤组织；植株再生
中图分类号：Ｓ　６６２．２０３．６　文献标识码：Ａ　文章编号：１００１－０００９（２０１６）０４－０１０１－０６
　　山杏（Ａｒｍｅｎｉａｃａ　ｓｉｂｉｒｉｃａ（Ｌ．）Ｌａｍ）主要分布于我
国北方地区，是主要的经济树种和生态绿化树种，具有
广泛应用和实际价值。山杏常用的繁殖方法是播种繁
殖和嫁接繁殖，嫁接繁殖能够保持品种的优良特性，遗
传性状稳定，但繁殖速度慢，严重阻碍优良品种的推广
应用。播种繁殖需要层积等技术，种子处理时间长，要
求高，且种子产量往往受到气候影响，限制了山杏播种
　　　　
苗的培养。而植物组织培养技术，能够在较短时间内利
用较少的材料，大量繁殖出具有统一优良性状的山杏苗
木，不受地区、气候等影响，扩繁速度比常规方法近数万
倍，已被广泛应用于多种植物［１］。但迄今为止，山杏组
培苗在生产中尚未应用，对山杏组织培养的研究报道较
少。王鸿［２］以山杏下胚轴、子叶、茎尖和无性系叶片作
为外植体，研究不同外植体、外源植物生长调节剂、培养
基类型、培养时间、接种方式等因素对增殖效率、愈伤组
织诱导率、再生频率和试管苗生根的影响。刘小蕾［３］通
过对山杏的茎尖、叶片和下胚轴的组织培养初步建立了
山杏再生体系。现以山杏胚乳、成熟胚为外植体，经愈
伤组织途径诱导丛生芽，建立再生植株，以期为山杏快
速繁殖和种质资源保护等提供参考依据

。
Ｅｓｔａｂｌｉｓｈｍｅｎｔ　ｏｆ　Ｈｉｇｈ　Ｅｆｆｉｃｉｅｎｔ　Ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ　Ｓｙｓｔｅｍ　ｏｆ　Ｐｙｒｕｓ　ｕｓｓｕｒｉｅｎｓｉｓ　Ｌｅａｖｅｓ
ＷＡＮＧ　Ｄｅｆｅｎ，ＺＨＡＮＧ　Ｍｅｉ，ＬＩ　Ｄｉｎｇｌｉ，ＷＡＮＧ　Ｒａｎ，ＭＡ　Ｃｈｕｎｈｕｉ，ＳＯＮＧ　Ｊｉａｎｋｕｎ
（Ｃｏｌｅｇｅ　ｏｆ　Ｈｏｒｔｉｃｕｌｔｕｒｅ，Ｑｉｎｇｄａｏ　Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｑｉｎｇｄａｏ，Ｓｈａｎｄｏｎｇ　２６６１０９）
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｉｎ　ｔｈｉｓ　ｓｔｕｄｙ，ａｎ　ｅｆｉｃｉｅｎｔ　ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ　ｓｙｓｔｅｍ　ｏｆ　ｌｅａｖｅｓ　ｏｆ　Ｐｙｒｕｓ　ｕｓｓｕｒｉｅｎｓｉｓ　ｗａｓ　ｅｓｔａｂｌｉｓｈｅｄ　ｂｙ　ｕｓｉｎｇ　ｔｈｅ　ＮＮ６９
ｂａｓｉｃ　ｃｕｌｔｕｒｅ　ｍｅｄｉｕｍ．Ｔｈｅ　ｒｅｓｕｌｔｓ　ｓｈｏｗｅｄ　ｔｈａｔ　ｉｎｔｒｏｄｕｃｔｉｏｎ　ｅｆｅｃｔ　ｏｆ　ＴＤＺ　ｗａｓ　ｂｅｔｔｅｒ　ｔｈａｎ　ｔｈａｔ　ｏｆ　６－ＢＡ　ａｎｄ　ＫＴ，
ｉｎｔｒｏｄｕｃｔｉｏｎ　ｅｆｅｃｔ　ｏｆ　ＩＢＡ　ａｎｄ　ＩＡＡ　ｗａｓ　ｂｅｔｔｅｒ　ｔｈａｎ　ＮＡＡ　ａｎｄ　２，４－Ｄ，ｉｎ　ａｄｖｅｎｔｉｔｉｏｕｓ　ｂｕｄ　ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ．Ｔｈｅ　ｏｐｔｉｍａｌ
ｃｕｌｔｕｒｅ　ｍｅｄｉｕｍ　ｏｆ　ｓｈｏｏｔ　ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ　ｗｈｏｓｅ　ｅｆｉｃｉｅｎｃｙ　ｗａｓ　１００．０％ａｎｄ　ｔｈｅ　ｎｕｍｂｅｒ　ｏｆ　ｓｈｏｏｔｓ　ｐｅｒ　ｐｌａｎｔ　ｗａｓ　８．４７，ｗａｓ
ＮＮ６９＋ＴＤＺ　３．０ｍｇ／Ｌ＋ＩＢＡ　０．３ｍｇ／Ｌ．Ｔｈｅ　ｏｐｔｉｍａｌ　ｏｆ　ｒｏｏｔ　ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ　ｗａｓ　１／２ＭＳ＋ＩＢＡ　０．５ｍｇ／Ｌ，ａｎｄ　ｔｈｅ　ｅｆｉｃｉｅｎｃｙ
ｏｆ　ｉｔ　ｗａｓ　４５．５％ａｎｄ　ｒｏｏｔ　ｎｕｍｂｅｒ　ｗａｓ　２．２４ｐｅｒ　ｓｈｏｏｔ．
Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：Ｐｙｒｕｓ　ｕｓｓｕｒｉｅｎｓｉｓ；ｌｅａｖｅｓ；ｔｉｓｓｕｅ　ｃｕｌｔｕｒｅ；ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ
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