全 文 :哈尔滨市主栽花楸果实主成分测定分析
张妍妍,李 静,卢慧颖,王艳敏* ,白 卉* (黑龙江省林业科学研究所速生林木培育重点实验室,黑龙江哈尔滨 150081)
摘要 [目的]对哈尔滨市主栽花楸果实主成分进行测定分析。[方法]以哈尔滨市主栽的 5个花楸种源的花楸果实作为研究材料,对
它们进行了可溶性糖、总黄酮、芦丁等次生代谢产物含量的测定。[结果]5个花楸种源中的欧洲花楸 US-05 果实中可溶性总糖、总黄酮
和芦丁含量均显著高于其他种源,分别达到 6. 389%、1. 564 1%和 6. 986 744 μg /ml。[结论]筛选出欧洲花楸 US-05为适于哈尔滨地区
栽培的药用花楸种源。
关键词 花楸果实;可溶性糖;总黄酮;芦丁;测定分析
中图分类号 S722. 3 文献标识码 A 文章编号 0517 -6611(2015)20 -204 -02
Determination and Analysis Composition of the Main Planting Sorbus pohuashanesis Fruit in Harbin
ZHANG Yan-yan,LI Jing,LU Hui-ying,WANG Yan-min* ,BAI Hui* (Key Laboratory of Fast-growing Tree Cultivating,Forestry Re-
search Institute of Heilongjiang Province,Harbin,Heilongjiang 150081)
Abstract [Objective]The composition of the main planting Sorbus pohuashanesis fruit in Harbin was determined and analyzed. [Method]
Choosing five provenances of Sorbus pohuashanesis fruit which main cultivated in Harbin as material,their secondary metabolites such as soluble
sugar,total flavonoids,rutin were determined .[Result]The results showed that content of secondary metabolites such as soluble sugar,total fla-
vonoids of Sorbus aucuparia L. US-05 fruit have reached a significant level between these provenances,respectively reached 6. 389%,
1. 564 1%,6. 986 744 μg /ml. [Conclusion]Sorbus aucuparia L. US-05 could thus be screened filter out the provenance of medicinal plant
which was suitable for cultivation in Harbin.
Key words Fruit of Sorbus pohuashanesis;Soluble sugar;Total flavonoids;Rutin;Determination and analysis
花楸(Sorbus spp.)为蔷薇科花楸属落叶小乔木,该树种
春季观叶、夏季观花、秋冬观果,是城市园林绿化的优良树
种;同时该树种具有结果早、产量高、适应性强,且富含黄酮
类等化合物的特点,是一个集园林绿化、食用、药用等价值于
一身的珍贵灌木浆果树种[1 -2]。黄酮类化合物对人类健康
有重要作用,其对体内自由基有明显的清除作用,并可抑制
细胞的调亡,是治疗心血管疾病药物的主要成分,由于黄酮
类化合物具有广谱的药理活性和较低毒性,是目前人们比较
关注的一类化合物,已成为国内外天然药物开发利用研究的
热点[3]。该研究通过对哈尔滨市主要栽植的 5 个花楸种源
的花楸果实进行主要成分分析,定向筛选适于哈尔滨地区栽
培的药用花楸种源。
1 材料与方法
1. 1 供试材料及试验地概况 供试材料为目前作为哈尔
滨市城市绿化树种进行栽植的,选自高寒地区的 5个种源的
花楸植株,树木年龄均为 3年,具体的种源地见表 1。
表 1 供试花楸植株的种源地信息
花楸种源编号 简称 拉丁名 种源地
欧洲花楸 US -05 US -05 S. aucuparia 俄罗斯布拉戈维申斯克市
百花花楸 1号 BH1 S. domestica 黑河市七二七林场
百花花楸 2号 BH2 S. domestica 伊春市五营区前丰林场
百花花楸 3号 BH3 S. domestica 山河屯林场凤凰山经营所
百花花楸 4号 BH4 S. domestica 大亮子河林场
试验地位于哈尔滨市松北区哈尔滨市林业科学院院内,
地理坐标为 125°42 ~ 130°10E,44°04 ~ 46°40N,海拔 146
m。地势平坦,土层深厚,特别是含有丰富的矿质元素及有机
质,土壤类型为黑钙土,土壤 pH为 6. 6。气候类型为温带半
湿润季风性气候,夏季炎热多雨,冬季则严寒漫长,结冰期达
5个月。当地年平均气温在 3. 6 ℃,最低月平均气温达
-19. 4 ℃(1月) ,最高月平均气温为 22. 9 ℃(7月) ,年平均
基金项目 黑龙江省财政厅自拟项目(2010 - 01);黑龙江省林业科学院
青年基金项目(201405);黑龙江省科研机构创新能力提升专
项计划项目(YC2014D005)。
作者简介 张妍妍(1981 - ),女,黑龙江黑河人,助理研究员,硕士,从事
森林培育研究。* 为共同通讯作者,王艳敏,助理研究员,博
士,从事林木遗传育种研究;白卉,副研究员,博士,从事林木
遗传育种工作。
收稿日期 2015-05-28
降雨量为 523 mm,相对湿度为 78%,≥10 ℃年积温 2 700
℃,无霜期是 135 d,最深冻土层达 1. 8 m。
1. 2 试验方法
1. 2. 1 花楸果实可溶性糖的测定。
(1)试剂配制。100 μg /ml 葡萄糖标准溶液的配制:取
100 mg分析纯无水葡萄糖,精密称量,用蒸馏水溶解后定容
至 100 ml,使用时再稀释 10 倍,即获得 100 μg /ml 葡萄糖标
准溶液。
蒽酮试剂配制:称取 1. 0 g 蒽酮,用 80%浓硫酸溶解后
定容至 1 000 ml。
(2)样品提取。称取剪碎混匀的新鲜果实各 1. 0 g,放入
大试管中,加入 15 ml 蒸馏水,在沸水浴中煮沸 20 min,取出
冷却,过滤入 100 ml容量瓶中,用蒸馏水冲洗残渣数次,定容
至刻度。
(3)标准曲线制作。取 6 支大试管,从 0 ~ 5 分别编号,
责任编辑 高菲 责任校对 况玲玲安徽农业科学,Journal of Anhui Agri. Sci. 2015,43(20) :204 - 205,342
DOI:10.13989/j.cnki.0517-6611.2015.20.072
按表 2 加入各试剂。
表 2 蒽酮法测可溶性糖制作标准曲线的试剂量
编号
100 μg /ml
葡萄糖溶
液∥ml
蒸馏水
ml
蒽酮
试剂
ml
葡萄
糖量
μg
0 0 1. 0 5. 0 0
1 0. 2 0. 8 5. 0 20
2 0. 4 0. 6 5. 0 40
3 0. 6 0. 4 5. 0 60
4 0. 8 0. 2 5. 0 80
5 1. 0 0 5. 0 100
将各管快速混匀后,置于沸水浴中 10 min,取出后冷却,
在 620 nm 波长下,用空白调零测定光密度,纵坐标为光密
度,横坐标为葡萄糖量(μg)绘制标准曲线(图 1)。
图 1 可溶性糖标准曲线
(4)样品测定。取待测样品提取液 1. 0 ml加蒽酮试剂 5
ml,同以上操作显色测定光密度,重复 3次。
(5)结果计算。可溶性糖含量 =
C × VT ×稀释倍数
V1 ×W ×10
6 ×
100%
式中:C为从标准曲线查得葡萄糖量(μg) ;VT 为样品提取液
总体积(ml) ;V1 为显色时取样品液量(ml) ;W为样品重(g)。
1. 2. 2 比色法对花楸果实总黄酮提取及其含量测定。
(1)对照品溶液的制备。取 120 ℃的常压干燥芦丁标准
品 0. 020 0 g,精密称量,用 30%的热乙醇溶解,并移至 100
ml的容量瓶中,定容,制备成 0. 200 mg /ml芦丁标准溶液。
(2)样品的提取。准确称取供试花楸果实鲜样各 1 g,用
70%的乙醇在超声波中提取 30 min,趁热过滤。再用旋转蒸
发仪浓缩提取液,直到所得的提取液近干为止,用 30%的乙
醇溶解并移至 100 ml容量瓶中,定容,为所得的总黄酮提取
液,然后从中各取出 1 ml,用 30%的乙醇稀释到 25 ml 的容
量瓶中,最后从中各取出 1 ml 用于分光光度计的测定,测定
方法同标准曲线的制备。
(3)标准曲线的制备。准确量取 0,1. 0,2. 0,3. 0,4. 0,5. 0
ml对照品溶液,置于 25 ml的容量瓶中,首先用 30%的乙醇将
其稀释至 12. 5 ml,各加 5%亚硝酸钠 0. 7 ml,摇匀,放置5 min。
然后加入 0. 7 ml 的 10%硝酸铝,摇匀后放置 6 min。最后再加
入10 ml的1 mol /L的氢氧化钠溶液,用 30%乙醇定容至刻度,
摇匀后放置 10 min,在波长 510 nm 处测定吸收度,以吸收度对
浓度进行回归,其结果用最小二乘法作线性回归,得芦丁浓度
Y与吸光度 A 的关系为 Y(g /L)= 0. 647 0A + 0. 015 6(r =
0. 995 5)。总黄酮含量标准曲线见图 2。
(4)样品总黄酮含量的计算公式。
总黄酮含量 = [(Y × 100 × 25 × 25)/(1 × 1 000) ]×
100%
式中:Y为根据所测定的溶液的吸光度值,用回归方程计算
相对应的总黄酮类化合物的物质含量。
图 2 总黄酮含量标准曲线
1. 2. 3 高效液相法对花楸果实芦丁定量测定。
(1)色谱条件。Kromasil C18(4. 6 mm ×250 mm)色谱柱,
流动相为甲醇∶ 0. 4%磷酸(60∶ 40) ,柱温为室温,流速为 0. 7
ml /min,检测波长为 368 nm。
(2)紫外波长的选择。对照品进行紫外波长的扫描,其
在 368 nm 处有最大吸收峰,所以选取的波长为 368 nm。
(3)对照品溶液的制备。精密称量对照品芦丁 2. 0 mg,
定容在 10 ml 的容量瓶中,制备成 0. 20 mg /ml 的芦丁标准
溶液。
(4)供试品溶液的制备。精密称量供试花楸果实鲜样各
1. 0 g,加入石油醚 100 ml进行索氏提取,目的是除去脂溶性
色素的干扰,提取后放凉,再加入 100 ml 的 70%甲醇溶液,
水浴提取 3 h,之后趁热过滤,所得的提取液用 70%甲醇定容
至 100 ml,快速冷却,过膜(0. 45 μm 微孔滤膜) ,即得供试品
溶液。
(5)标准曲线的制备。准确吸取对照品溶液 0. 10、
0. 20、0. 30、0. 60、1. 0 μg。按上述的色谱条件测定,其中横坐
标为进样量,纵坐标为峰面积,绘制标准曲线(图 3) ,回归方
程为 Y =48. 206C +15. 347(r =0. 998 5)。试验结果见表 3。
表 3 芦丁回归曲线数据
进样量 C∥μg 峰面积 A
0. 10 53. 0
0. 20 126. 5
0. 30 259. 0
0. 60 371. 5
1. 00 502. 0
1. 3 数据统计方法 所得数据采用 Excel 软件和 SPSS13. 0
分析软件进行方差分析及多重比较分析。
(下转第 342页)
50243 卷 20 期 张妍妍等 哈尔滨市主栽花楸果实主成分测定分析
村支付结算环境,优化农村金融业务结构、提升农村金融质
量入手,进一步完善金融服务,结合实际因地制宜展开业务
创新。
逐步建立以政策性金融组织为基础、合作金融组织为主
导,商业金融为发展方向的农村金融服务体系,形成多种形
式的金融机构并存功能互补的多层次金融服务体系。
3. 6 建立农村法律服务体系 引导法律服务资源向广大农
村地区有效转移,整合资源形成政府主导的公益法律法务组
织、群众性法律服务组织、民间自发性公益法律服务组织等
力量,构建多元化公益法律服务体系,满足广大农民的法律
服务需求。
形成网格化服务体系,建设县级法律服务中心,完善乡、
村法律服务站的布局,形成县、乡、村三级服务网格。建设多
元化纠纷解决渠道,积极促成工会、共青团、妇联、残联等组
织及其他政府部门的联动配合,形成全方位的农村基本公共
法律服务网格体系。我国法治建设尚未完善,农村与城市的
差异还比较大,要让农民真正完全享受到和城市均等的公共
服务不是一朝一夕就能完成的。
全面提升、建设农村公共服务体系还任重道远,相信党
和政府能够逐渐完善和提高农村公共服务水平,通过国家,
社会和每个人的努力,农村公共服务体系会越来越完善,越
来越好。
参考文献
[1]财政部农业司“公共财政覆盖农村问题研究”课题组.公共财政覆盖农
村问题调研报告[J].农业经济问题,2004(7):48 -54,55,56.
[2]魏星河,刘堂山.处理中央与地方关系的关键:财权与事权的合理划分
[J].江西行政学院学报,2004(2):15 -18.
[3]柳园.农村职业教育:问题与出路[J].教育与职业,2010(11):28 -34.
[4]王家合,姚惊波.农民需求表达与农村公共服务有效供给[J].石河子
大学学报:哲学社会科学版,2011(6):
檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪
58.
(上接第 205 页)
图 3 以芦丁为对照的标准曲线
2 结果与分析
2. 1 可溶性总糖测定结果 可溶性总糖测定结果表明,欧
洲花楸US -05可溶性糖含量最高,为6. 389%,即每100 g欧
洲花楸果实中含有 6. 389 g的可溶性糖。百花花楸 3号可溶
性糖含量最低,每 100 g果实中仅含有 2. 167 g的可溶性糖,
显著低于其他 4 个花楸种源(BH1 6. 022%,BH2 5. 431%,
BH4 5. 329%)。由此,筛选出果实可溶性糖含量最高的种源
为欧洲花楸 US -05。
2. 2 总黄酮含量测定结果 供试花楸果实总黄酮含量测定
结果见表4,可以看出,欧洲花楸 US -05的总黄酮含量最高,
表 4 不同种源花楸果实的总黄酮含量测定结果
种源 OD值 总黄酮含量∥%
US -05 0. 218 1. 564 1
BH1 0. 113 0. 752 7
BH2 0. 090 0. 575 0
BH3 0. 050 0. 265 8
BH4 0. 091 0. 582 7
为 1. 564 1%,显著高于其他 4个种源,比总黄酮含量最低的
百花花楸 3号多出 1. 298 3 个百分点。因此,筛选出果实总
黄酮含量最高的种源为欧洲花楸 US-05。
2. 3 芦丁含量测定结果 供试花楸果实芦丁含量测定结果
见表 5,可以看出,欧洲花楸 US - 05 的芦丁含量最高,为
6. 986 744 μg /ml,显著高于其他 4 个种源,芦丁含量最低的
是百花花楸 4号,为 1. 993 590 μg /ml。因此,筛选出芦丁含
量最高的为欧洲花楸 US -05果实。
表 5 不同种源花楸果实中芦丁含量测定结果
种源 进样量∥μl 峰面积 含量∥μg /ml
US -05 20 352. 15 6. 986 744
BH1 20 175. 00 3. 311 891
BH2 20 270. 85 5. 300 232
BH3 20 236. 20 4. 581 442
BH4 20 111. 45 1. 993 590
3 小结
对花楸果实可溶性糖、总黄酮和芦丁 3 种次生代谢产物
含量进行了测定,结果表明:欧洲花楸 US - 05 可溶性总糖、
总黄酮和芦丁含量均显著高于其他种源,分别达到 6. 389%、
1. 564 1%和 6. 986 744 μg /ml;百花花楸 3号,可溶性总糖含
量和总黄酮含量均显著低于其他种源,为 2. 167% 和
0. 265 8%,筛选出欧洲花楸 US - 05 为黄酮类物质最佳提取
种质种源,最适于哈尔滨地区栽培的药用花楸种源。
参考文献
[1]周丹,宿宗艳,李文娟,等.欧洲花楸应用价值的探讨[J].中国林副特
产,2007(10):83 -85.
[2]余治家,于澎涛,王绪芳,等.多用途树种欧洲花楸及其引种[J].中国
城市林业,2007(5):56 -59.
[3]庄凤君,王继丰,王臣.国产及引进花楸属植物研究与应用发展[J].国
土与自然资源研究,2008(1):94 -96.
[4]张芹,刘保刚,李鹏,等.天山花楸中总黄酮和槲皮素测定[J].石河子
大学学报,2006(12):709 -712.
243 安徽农业科学 2015 年