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哈尔滨市主栽花楸果实主成分测定分析



全 文 :哈尔滨市主栽花楸果实主成分测定分析
张妍妍,李 静,卢慧颖,王艳敏* ,白 卉* (黑龙江省林业科学研究所速生林木培育重点实验室,黑龙江哈尔滨 150081)
摘要 [目的]对哈尔滨市主栽花楸果实主成分进行测定分析。[方法]以哈尔滨市主栽的 5个花楸种源的花楸果实作为研究材料,对
它们进行了可溶性糖、总黄酮、芦丁等次生代谢产物含量的测定。[结果]5个花楸种源中的欧洲花楸 US-05 果实中可溶性总糖、总黄酮
和芦丁含量均显著高于其他种源,分别达到 6. 389%、1. 564 1%和 6. 986 744 μg /ml。[结论]筛选出欧洲花楸 US-05为适于哈尔滨地区
栽培的药用花楸种源。
关键词 花楸果实;可溶性糖;总黄酮;芦丁;测定分析
中图分类号 S722. 3 文献标识码 A 文章编号 0517 -6611(2015)20 -204 -02
Determination and Analysis Composition of the Main Planting Sorbus pohuashanesis Fruit in Harbin
ZHANG Yan-yan,LI Jing,LU Hui-ying,WANG Yan-min* ,BAI Hui* (Key Laboratory of Fast-growing Tree Cultivating,Forestry Re-
search Institute of Heilongjiang Province,Harbin,Heilongjiang 150081)
Abstract [Objective]The composition of the main planting Sorbus pohuashanesis fruit in Harbin was determined and analyzed. [Method]
Choosing five provenances of Sorbus pohuashanesis fruit which main cultivated in Harbin as material,their secondary metabolites such as soluble
sugar,total flavonoids,rutin were determined .[Result]The results showed that content of secondary metabolites such as soluble sugar,total fla-
vonoids of Sorbus aucuparia L. US-05 fruit have reached a significant level between these provenances,respectively reached 6. 389%,
1. 564 1%,6. 986 744 μg /ml. [Conclusion]Sorbus aucuparia L. US-05 could thus be screened filter out the provenance of medicinal plant
which was suitable for cultivation in Harbin.
Key words Fruit of Sorbus pohuashanesis;Soluble sugar;Total flavonoids;Rutin;Determination and analysis
花楸(Sorbus spp.)为蔷薇科花楸属落叶小乔木,该树种
春季观叶、夏季观花、秋冬观果,是城市园林绿化的优良树
种;同时该树种具有结果早、产量高、适应性强,且富含黄酮
类等化合物的特点,是一个集园林绿化、食用、药用等价值于
一身的珍贵灌木浆果树种[1 -2]。黄酮类化合物对人类健康
有重要作用,其对体内自由基有明显的清除作用,并可抑制
细胞的调亡,是治疗心血管疾病药物的主要成分,由于黄酮
类化合物具有广谱的药理活性和较低毒性,是目前人们比较
关注的一类化合物,已成为国内外天然药物开发利用研究的
热点[3]。该研究通过对哈尔滨市主要栽植的 5 个花楸种源
的花楸果实进行主要成分分析,定向筛选适于哈尔滨地区栽
培的药用花楸种源。
1 材料与方法
1. 1 供试材料及试验地概况 供试材料为目前作为哈尔
滨市城市绿化树种进行栽植的,选自高寒地区的 5个种源的
花楸植株,树木年龄均为 3年,具体的种源地见表 1。
表 1 供试花楸植株的种源地信息
花楸种源编号 简称 拉丁名 种源地
欧洲花楸 US -05 US -05 S. aucuparia 俄罗斯布拉戈维申斯克市
百花花楸 1号 BH1 S. domestica 黑河市七二七林场
百花花楸 2号 BH2 S. domestica 伊春市五营区前丰林场
百花花楸 3号 BH3 S. domestica 山河屯林场凤凰山经营所
百花花楸 4号 BH4 S. domestica 大亮子河林场
试验地位于哈尔滨市松北区哈尔滨市林业科学院院内,
地理坐标为 125°42 ~ 130°10E,44°04 ~ 46°40N,海拔 146
m。地势平坦,土层深厚,特别是含有丰富的矿质元素及有机
质,土壤类型为黑钙土,土壤 pH为 6. 6。气候类型为温带半
湿润季风性气候,夏季炎热多雨,冬季则严寒漫长,结冰期达
5个月。当地年平均气温在 3. 6 ℃,最低月平均气温达
-19. 4 ℃(1月) ,最高月平均气温为 22. 9 ℃(7月) ,年平均
基金项目 黑龙江省财政厅自拟项目(2010 - 01);黑龙江省林业科学院
青年基金项目(201405);黑龙江省科研机构创新能力提升专
项计划项目(YC2014D005)。
作者简介 张妍妍(1981 - ),女,黑龙江黑河人,助理研究员,硕士,从事
森林培育研究。* 为共同通讯作者,王艳敏,助理研究员,博
士,从事林木遗传育种研究;白卉,副研究员,博士,从事林木
遗传育种工作。
收稿日期 2015-05-28
降雨量为 523 mm,相对湿度为 78%,≥10 ℃年积温 2 700
℃,无霜期是 135 d,最深冻土层达 1. 8 m。
1. 2 试验方法
1. 2. 1 花楸果实可溶性糖的测定。
(1)试剂配制。100 μg /ml 葡萄糖标准溶液的配制:取
100 mg分析纯无水葡萄糖,精密称量,用蒸馏水溶解后定容
至 100 ml,使用时再稀释 10 倍,即获得 100 μg /ml 葡萄糖标
准溶液。
蒽酮试剂配制:称取 1. 0 g 蒽酮,用 80%浓硫酸溶解后
定容至 1 000 ml。
(2)样品提取。称取剪碎混匀的新鲜果实各 1. 0 g,放入
大试管中,加入 15 ml 蒸馏水,在沸水浴中煮沸 20 min,取出
冷却,过滤入 100 ml容量瓶中,用蒸馏水冲洗残渣数次,定容
至刻度。
(3)标准曲线制作。取 6 支大试管,从 0 ~ 5 分别编号,
责任编辑 高菲 责任校对 况玲玲安徽农业科学,Journal of Anhui Agri. Sci. 2015,43(20) :204 - 205,342
DOI:10.13989/j.cnki.0517-6611.2015.20.072
按表 2 加入各试剂。
表 2 蒽酮法测可溶性糖制作标准曲线的试剂量
编号
100 μg /ml
葡萄糖溶
液∥ml
蒸馏水
ml
蒽酮
试剂
ml
葡萄
糖量
μg
0 0 1. 0 5. 0 0
1 0. 2 0. 8 5. 0 20
2 0. 4 0. 6 5. 0 40
3 0. 6 0. 4 5. 0 60
4 0. 8 0. 2 5. 0 80
5 1. 0 0 5. 0 100
将各管快速混匀后,置于沸水浴中 10 min,取出后冷却,
在 620 nm 波长下,用空白调零测定光密度,纵坐标为光密
度,横坐标为葡萄糖量(μg)绘制标准曲线(图 1)。
图 1 可溶性糖标准曲线
(4)样品测定。取待测样品提取液 1. 0 ml加蒽酮试剂 5
ml,同以上操作显色测定光密度,重复 3次。
(5)结果计算。可溶性糖含量 =
C × VT ×稀释倍数
V1 ×W ×10
6 ×
100%
式中:C为从标准曲线查得葡萄糖量(μg) ;VT 为样品提取液
总体积(ml) ;V1 为显色时取样品液量(ml) ;W为样品重(g)。
1. 2. 2 比色法对花楸果实总黄酮提取及其含量测定。
(1)对照品溶液的制备。取 120 ℃的常压干燥芦丁标准
品 0. 020 0 g,精密称量,用 30%的热乙醇溶解,并移至 100
ml的容量瓶中,定容,制备成 0. 200 mg /ml芦丁标准溶液。
(2)样品的提取。准确称取供试花楸果实鲜样各 1 g,用
70%的乙醇在超声波中提取 30 min,趁热过滤。再用旋转蒸
发仪浓缩提取液,直到所得的提取液近干为止,用 30%的乙
醇溶解并移至 100 ml容量瓶中,定容,为所得的总黄酮提取
液,然后从中各取出 1 ml,用 30%的乙醇稀释到 25 ml 的容
量瓶中,最后从中各取出 1 ml 用于分光光度计的测定,测定
方法同标准曲线的制备。
(3)标准曲线的制备。准确量取 0,1. 0,2. 0,3. 0,4. 0,5. 0
ml对照品溶液,置于 25 ml的容量瓶中,首先用 30%的乙醇将
其稀释至 12. 5 ml,各加 5%亚硝酸钠 0. 7 ml,摇匀,放置5 min。
然后加入 0. 7 ml 的 10%硝酸铝,摇匀后放置 6 min。最后再加
入10 ml的1 mol /L的氢氧化钠溶液,用 30%乙醇定容至刻度,
摇匀后放置 10 min,在波长 510 nm 处测定吸收度,以吸收度对
浓度进行回归,其结果用最小二乘法作线性回归,得芦丁浓度
Y与吸光度 A 的关系为 Y(g /L)= 0. 647 0A + 0. 015 6(r =
0. 995 5)。总黄酮含量标准曲线见图 2。
(4)样品总黄酮含量的计算公式。
总黄酮含量 = [(Y × 100 × 25 × 25)/(1 × 1 000) ]×
100%
式中:Y为根据所测定的溶液的吸光度值,用回归方程计算
相对应的总黄酮类化合物的物质含量。
图 2 总黄酮含量标准曲线
1. 2. 3 高效液相法对花楸果实芦丁定量测定。
(1)色谱条件。Kromasil C18(4. 6 mm ×250 mm)色谱柱,
流动相为甲醇∶ 0. 4%磷酸(60∶ 40) ,柱温为室温,流速为 0. 7
ml /min,检测波长为 368 nm。
(2)紫外波长的选择。对照品进行紫外波长的扫描,其
在 368 nm 处有最大吸收峰,所以选取的波长为 368 nm。
(3)对照品溶液的制备。精密称量对照品芦丁 2. 0 mg,
定容在 10 ml 的容量瓶中,制备成 0. 20 mg /ml 的芦丁标准
溶液。
(4)供试品溶液的制备。精密称量供试花楸果实鲜样各
1. 0 g,加入石油醚 100 ml进行索氏提取,目的是除去脂溶性
色素的干扰,提取后放凉,再加入 100 ml 的 70%甲醇溶液,
水浴提取 3 h,之后趁热过滤,所得的提取液用 70%甲醇定容
至 100 ml,快速冷却,过膜(0. 45 μm 微孔滤膜) ,即得供试品
溶液。
(5)标准曲线的制备。准确吸取对照品溶液 0. 10、
0. 20、0. 30、0. 60、1. 0 μg。按上述的色谱条件测定,其中横坐
标为进样量,纵坐标为峰面积,绘制标准曲线(图 3) ,回归方
程为 Y =48. 206C +15. 347(r =0. 998 5)。试验结果见表 3。
表 3 芦丁回归曲线数据
进样量 C∥μg 峰面积 A
0. 10 53. 0
0. 20 126. 5
0. 30 259. 0
0. 60 371. 5
1. 00 502. 0
1. 3 数据统计方法 所得数据采用 Excel 软件和 SPSS13. 0
分析软件进行方差分析及多重比较分析。
(下转第 342页)
50243 卷 20 期 张妍妍等 哈尔滨市主栽花楸果实主成分测定分析
村支付结算环境,优化农村金融业务结构、提升农村金融质
量入手,进一步完善金融服务,结合实际因地制宜展开业务
创新。
逐步建立以政策性金融组织为基础、合作金融组织为主
导,商业金融为发展方向的农村金融服务体系,形成多种形
式的金融机构并存功能互补的多层次金融服务体系。
3. 6 建立农村法律服务体系 引导法律服务资源向广大农
村地区有效转移,整合资源形成政府主导的公益法律法务组
织、群众性法律服务组织、民间自发性公益法律服务组织等
力量,构建多元化公益法律服务体系,满足广大农民的法律
服务需求。
形成网格化服务体系,建设县级法律服务中心,完善乡、
村法律服务站的布局,形成县、乡、村三级服务网格。建设多
元化纠纷解决渠道,积极促成工会、共青团、妇联、残联等组
织及其他政府部门的联动配合,形成全方位的农村基本公共
法律服务网格体系。我国法治建设尚未完善,农村与城市的
差异还比较大,要让农民真正完全享受到和城市均等的公共
服务不是一朝一夕就能完成的。
全面提升、建设农村公共服务体系还任重道远,相信党
和政府能够逐渐完善和提高农村公共服务水平,通过国家,
社会和每个人的努力,农村公共服务体系会越来越完善,越
来越好。
参考文献
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58.
(上接第 205 页)
图 3 以芦丁为对照的标准曲线
2 结果与分析
2. 1 可溶性总糖测定结果 可溶性总糖测定结果表明,欧
洲花楸US -05可溶性糖含量最高,为6. 389%,即每100 g欧
洲花楸果实中含有 6. 389 g的可溶性糖。百花花楸 3号可溶
性糖含量最低,每 100 g果实中仅含有 2. 167 g的可溶性糖,
显著低于其他 4 个花楸种源(BH1 6. 022%,BH2 5. 431%,
BH4 5. 329%)。由此,筛选出果实可溶性糖含量最高的种源
为欧洲花楸 US -05。
2. 2 总黄酮含量测定结果 供试花楸果实总黄酮含量测定
结果见表4,可以看出,欧洲花楸 US -05的总黄酮含量最高,
表 4 不同种源花楸果实的总黄酮含量测定结果
种源 OD值 总黄酮含量∥%
US -05 0. 218 1. 564 1
BH1 0. 113 0. 752 7
BH2 0. 090 0. 575 0
BH3 0. 050 0. 265 8
BH4 0. 091 0. 582 7
为 1. 564 1%,显著高于其他 4个种源,比总黄酮含量最低的
百花花楸 3号多出 1. 298 3 个百分点。因此,筛选出果实总
黄酮含量最高的种源为欧洲花楸 US-05。
2. 3 芦丁含量测定结果 供试花楸果实芦丁含量测定结果
见表 5,可以看出,欧洲花楸 US - 05 的芦丁含量最高,为
6. 986 744 μg /ml,显著高于其他 4 个种源,芦丁含量最低的
是百花花楸 4号,为 1. 993 590 μg /ml。因此,筛选出芦丁含
量最高的为欧洲花楸 US -05果实。
表 5 不同种源花楸果实中芦丁含量测定结果
种源 进样量∥μl 峰面积 含量∥μg /ml
US -05 20 352. 15 6. 986 744
BH1 20 175. 00 3. 311 891
BH2 20 270. 85 5. 300 232
BH3 20 236. 20 4. 581 442
BH4 20 111. 45 1. 993 590
3 小结
对花楸果实可溶性糖、总黄酮和芦丁 3 种次生代谢产物
含量进行了测定,结果表明:欧洲花楸 US - 05 可溶性总糖、
总黄酮和芦丁含量均显著高于其他种源,分别达到 6. 389%、
1. 564 1%和 6. 986 744 μg /ml;百花花楸 3号,可溶性总糖含
量和总黄酮含量均显著低于其他种源,为 2. 167% 和
0. 265 8%,筛选出欧洲花楸 US - 05 为黄酮类物质最佳提取
种质种源,最适于哈尔滨地区栽培的药用花楸种源。
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243 安徽农业科学 2015 年