全 文 ：第 10 期
收稿日期：2012－11－26
基金项目：青海省科技厅科技发展基础研究项目（2010－Z－746）
作者简介：李海丽（1967－），女，陕西西安人，教授，主要从事药理学教学和研究工作，（电话）13119710300（电子信箱）lhlsw＠vip．sina．com。
第 52 卷第 10期
2013 年 5 月
湖北农业科学
Hubei Agricultural Sciences
Vol． 52 No.10
May．，2013
紫堇属（Corydalis D C．）全球约 320 种，主要产
于亚洲。 中国有 200 余种，全国均有分布，以西南部
种类分布最多，其中青藏高原约 120 余种，仅西藏
就多达 94种［1，2］。在临床实践中，藏医主要将紫堇属
植物用于治疗各种出血、肝炎或胆囊炎、流感等疾
病，也有将其用于治疗跌打损伤或其他外伤、发烧、
肠胃炎等 。 赛北紫堇 ［Corydalis impatiens （Pall．）
Fisch］为罂粟科紫堇属植物。 在藏药处方中赛北紫
堇的入药率高达 70％， 是藏药应用中很重要的药
材。 截止目前，尚未见有关急性毒理学试验的报道。
本研究旨在通过灌胃给药，利用改良寇氏法进行藏
药赛北紫堇总生物碱对小鼠 LD50的测定，为临床用
药提供参考依据。
1 材料与方法
1．1 试验动物
KM小白鼠（青医动字第 2012004号），体重 18～
22 g，雌雄各半，试验前禁食 12 h，不禁水。
1．2 药品
藏药赛北紫堇总生物碱提取物，每克相当于生
药 22．73 g（藏药赛北紫堇于 2011 年 8 月 21 日采于
青海省贵德县，并经由青海省药检所藏药室骆桂法
研究员鉴定， 总生物碱提取物是由粗粉经 2％盐酸
渗漉提取，提取液浓缩至小体积后加碱碱化至pH 12，
收集沉淀干燥即得，待用时用生理盐水稀释）。
1．3 仪器
XB－5200B 超声波清洗 （宁波新芝生物科技股
份有限公司）；FA1604电子天平（上海精密科学仪器
有限公司）；金马牌 JPT－5 架盘天平（上海岑达天平
秤有限公司）。
1.4 试验方法
1．4.1 100％和 0％致死量的确定 探索剂量范围：
先找出 100％致死量与 0％致死量为试验的上、下限
剂量（Dm和 Dn）［3，4］。
赛北紫堇总生物碱 LD50的测定
李海丽 1，吴 彤 1，潘国庆2
（1．青海民族大学化学与生命科学学院，西宁 810007；2．青海省植物化学资源重点实验室，西宁 810007）
摘要：选取 18～22 g KM 小鼠 90 只，给予不同浓度赛北紫堇［Corydalis impatiens（Pall．）Fisch］生物碱灌胃
给药，观察 30 min 内小鼠的存活情况，利用改良寇氏法公式计算 LD50。 结果表明，赛北紫堇总生物碱的
LD50为 176 mg ／ （kg·bw）。 为赛北紫堇的开发和利用提供理论支撑。
关键词：赛北紫堇［Corydalis impatiens（Pall．）Fisch］；总生物碱；半数致死量
中图分类号：R284．1 文献标识码：A 文章编号：0439－8114（2013）10－2371-02
Determination on LD50 of the Extracted Total Alkaloids from Corydalis impatiens
LI Hai－li1，WU TONG1，PAN Guo－qing2
（1． Department of Chemical and Life Science， Qinghai Nationalities University， Xining 810007， China；
2． Key Laboratory of Qinghai Phytochemicals Resources，Xining 810007，China）
Abstract： To determine LD50 of the total alkaloids which extracted from Corydalis impatiens （Pall．）Fisch， 90 mice of 18~22 g
weight were selected and treated with different concentration of C. impatiens alkaloids by intragastric administration． In 30 min
after administration， the survival situation of the mice were recorded and used to calculate LD50 of the alkaloids by improved
Cole’s method． The results showed that LD50 of the total alkaloids extracted from C. impatiens was 176 mg ／ kg body weight．
It provided a theoretical support for the development and utilization of C. impatiens（Pall．）Fisch．
Key words： Corydalis impatiens（Pall．）Fisch； total alkaloids； 50％ lethal dose（LD50）
DOI:10.14088/j.cnki.issn0439-8114.2013.10.035
湖 北 农 业 科 学 2013 年
取 KM 小白鼠 20 只，雌雄各半，逐一称重并做
好标记，雌、雄分别按照体重由小到大（或由大到
小） 排序。 然后按照分层随机原则将小白鼠分成 5
组，每组 4 只，按不同剂量的赛北紫堇总生物碱灌
胃给药，如出现 4 ／ 4 死亡时，下一组剂量降低，当出
现 3 ／ 4 死亡时，则上一剂量为 Dm；如降低一剂量出
现的死亡率为 2 ／ 4 或 1 ／ 4 时，应考虑到 4 ／ 4 死亡剂
量组在正式试验时可能出现死亡率低于 70％，为慎
重起见可将 4 ／ 4死亡剂量乘以 1．4倍，作为 Dm［5］。同
法找出 Dn。
1.4.2 改良寇氏法测量半数致死量（LD50） 取小白
鼠 50 只，雌雄各半，逐一称重并做好标记，雌、雄分
别按照体重由小到大（或由大到小）排序。 然后按照
分层随机原则将小白鼠分成 5 个剂量组， 每组 10
只。小白鼠不禁水，禁食 12 h后，按照计算剂量将赛
北紫堇的总生物碱以灌胃方式给药 （按 0．2 mL ／ 10g
给药）。观察 30 min内小白鼠的存活情况，记录各组
小白鼠死亡率［6-8］。
2 结果与分析
2．1 100％和 0％致死量
由表 1、表 2 可知，赛北紫堇总生物碱的 100％
和 0％致死量分别为 316 mg ／ （kg·bw） 和 61．2 mg ／
（kg·bw）。
2．2 改良寇氏法测量半数致死量（LD50）
按下列公式（1）和公式（2）分别计算公比 r 和组
距 i
r＝ Dm/Dn
（G-1）
姨 （1）
式中，G为组数；Dm、Dn为上下限剂量。
i＝（Xm－Xn） ／ （G－1） （2）
式中，Xm、Xn为上下限剂量的对数，G为组数。
按下列公式（3）计算 LD50［9］
LD50＝log－1［Xm－i（ΣP-0.5）］ （3）
式中，Xm为最大剂量的对数；i 为组距， 即相邻
两组剂量之差；P 为各组动物死亡率，计算时用小数
表示；ΣP为各组动物死亡率总和。
按公式（4）、（5）、（6）分别计算 log LD50 的标准
误 LD50的 95％可信限和 LD50的平均可信限：
log LD50的标准误＝i× （ΣP-ΣP2）/（n-1）姨 （4）
LD50的 95％可信限＝log－1（log LD50±1．96 SlogLD50）
（5）
LD50 的平均可信限＝LD50±（LD50 95％可信限的
高限－LD50 95%可信限的低限） ／ 2 （6）
式中，n 为每组动物数（n＝10），p、q 分别为每组
的死亡率和存活率。
把表 3试验结果的相应数值带入公式得：
r＝0．66
i＝2．499 7－2．318 0＝0．181 7
LD50＝log－1［Xm－i（ΣP-0.5）］
＝log－1［2．4997－0．181 7（1．9－0．5）］
＝log－12．25
＝176 mg ／ （kg·bw）（总生物碱）
log LD50 的 标 准 误 ＝i × （ΣP-ΣP2）/（n-1）姨 ＝
0．1817× （1.9-1.13）/（n-1）姨 ＝0．05
LD50的 95％可信限＝log－1（log LD50±1．96 SlogLD50）
＝log－1（2．2544±1．96×0．05）
＝143～225 mg ／ （kg·bw）（总生物碱）
LD50的平均可信限＝LD50±（LD5095％可信限的高
限－低限） ／ 2
＝176±（225－143） ／ 2
＝135～217 mg ／ （kg·bw）（总生物碱）
3 小结与讨论
赛北紫堇粗提物半数致死量 LD50 为 176 mg ／
（kg·bw）总生物碱，logLD50的标准误为 0．05；LD50的
95％可信限为（143～225）mg ／ （kg·bw）总生物碱；LD50
的平均可信限为（135～217）mg ／ （kg·bw）总生物碱。
半数致死量 （LD50） 是衡量药物毒性大小的指
标，是评价药物优劣的重要参数。 通过半数致死量
表 3 改良寇氏法测量半数致死量（LD50）
剂量//mg/（kg·bw）
316
208
138
92
60
剂量对数（X）
2.499 7
2.318 0
2.136 3
1.954 6
1.772 9
死亡//只
8
6
3
2
0
存活//只
2
4
7
8
10
死亡率//%
80
60
30
20
0
表 1 100%致死量
剂量//mg/（kg·bw）
500
350
333
316
245
剂量对数（X）
2.699 0
2.544 1
2.522 4
2.499 7
2.389 2
死亡//只
4
4
4
4
3
存活//只
0
0
0
0
1
死亡率//%
100
100
100
100
75
表 2 0%致死量
剂量//mg/（kg·bw）
245
184
123
61.2
24.5
剂量对数（X）
2.389 2
2.264 8
2.089 9
1.786 8
1.389 2
死亡//只
3
2
1
0
0
存活//只
1
2
3
4
4
死亡率//%
75
50
25
0
0
（下转第 2379页）
2372
第 10 期
（责任编辑 程碧军）
（LD50）可了解药物单次给药或短时间内多次给药后
动物所产生的毒性反应及其严重程度，为临床用药
提供一定的参考。 通常将药物的半数致死量 ／半数
有效量的比值称为治疗指数［9］。 用以表示药物的安
全性，指数越大越安全 ［10］。 本文研究的半数致死量
（LD50）为赛北紫堇的后续药理学研究奠定了剂量基
础， 将在赛北紫堇的开发和利用上发挥极大的作
用，具有重要的研究价值。
参考文献：
［1］ 范彩霞．紫堇属（Corydalis D C．）植物资源在藏药中的应用及其
开发保护［J］．中国医学生物技术应用杂志，2003（1）：36．
［2］ 张秀峰，王水潮．青海紫堇属药用植物资源调查与开发利用［J］．
时珍国药研究，1997，8（6）：547．
［3］ 陈 奇 ．中药药理研究方法学［M］．第二版 ．北京：人民卫生出版
社，2011．
［4］ 邹莉波．药理学学习指导［M］．北京：中国医药科技出版社，2007．
［5］ 王玉祥．药理学实验［M］． 北京：中国医药科技出版社，1998．
［6］ 钱望月，董海平，刘思远，等．羟丁酸钠对布比卡因、罗哌卡因和
氯普鲁卡因惊厥 ED50、LD50 的影响 ［J］． 数理医药学杂志 ，
2010，23（1）：84－86．
［7］ 程慧珍，丁伯平，张年宝，等．八厘麻毒素的提取及其半数致死量
研究［J］．中国药业，2010，19（15）：10．
［8］ 吴 桐，张 龙，王 晋，等．东莨菪碱对氯胺酮镇痛、催眠作用
及半数致死量的影响［J］．上海医学，2010，33（4）：325－328．
［9］ 牛 牧，文 静，刘轶兰，等．异丙嗪对氯胺酮催眠、镇痛作用及
LD50的影响［J］． 中国医药导报，2008，5（10）：11－12．
［10］ 马志宏 ． 红茂草水提取物腹腔注射对小鼠半数致死量的测
定［J］．畜牧兽医杂志，2010，29（15）：13－15．
（上接第 2372页）
（责任编辑 屠 晶）
左右。鱼种放养适宜的水温为 16～18 ℃，鱼种放养时
温差不得超过 3 ℃。 鱼种放养前（包括以后分级、测
重等操作后）都应用 2％～3％ NaCl 溶液浸泡消毒 5～
7 min。 饲养斑点叉尾鮰的人工配合饲料，其卫生安
全要求除符合 GB13078 和 NY5072 的规定外，其粗
蛋白含量应不低于 32％，粒径应与不同规格鱼种的
口径相适应。
3．2 网箱养殖技术
饲养食用鱼的网箱规格为 5．0 m×4．0 m×3．0 m
和 6．0 m×5．0 m×3．0 m。 放养的鱼种应游动活泼、体
质健壮、规格整齐、无病无伤无畸形。 鱼种放养前
（包括以后分级、测重等操作后）必须用 2％～3％ Na-
Cl溶液浸泡消毒 5～7 min。 鱼种放养密度依其规格
而定， 一般每平方米放养尾重 50 g 鱼种 130 尾；放
养尾重 100 g 鱼种 120 尾；放养尾重 150 g 鱼种 110
尾。 网箱饲养斑点叉尾鮰食用鱼的饲料，其卫生、安
全与营养指标要求与池塘养殖所用饲料相同。
4 斑点叉尾鮰鱼病防治
突出“预防为主，防治结合”理念，把平时饲养
管理纳入鱼病预防范围，工作做细、做到位，对入池
或入箱的鱼种要严格进行检疫和消毒［5，6］。在网箱饲
养期间，每个月用生石灰在箱内泼洒一次，每次用
量为 25～30 mg ／ L；每半个月在箱内泼洒（或挂袋）二
氧化氯消毒剂使箱内水体药物浓度在 0．3～0．5 mg ／
L，对在池塘或网箱内使用的所有工具要严格消毒。
在斑点叉尾鮰养殖周期中，需注意预防的疾病主要
有水霉病、小瓜虫病、出血性败血症、肠道败血症、
柱形病等。
参考文献：
［1］ DB42 ／ T 658－2010，斑点叉尾鮰繁殖技术规范［S］．
［2］ DB42 ／ T 660－2010，斑点叉尾鮰鱼苗鱼种培育技术规范［S］．
［3］ DB42 ／ T 659－2010，斑点叉尾鮰养殖技术规范［S］．
［4］ 蔡焰值，雷晓中，杨德忠，等．斑点叉尾鮰受精卵水霉病中草药防
治的研究［J］．湖北农业科学，2010，49（5）：1170－1172．
［5］ 张幼敏．目标养鱼新法·斑点叉尾鮰 ［M］．北京：中国农业出版社，
2005．
［6］ 丁德明．斑点叉尾鮰成鱼养殖技术［J］． 内陆水产，2005，30（4）：
12－13．
!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!
雷晓中等：斑点叉尾鮰无公害高效养殖技术概要 2379