全 文 ：·基础研究 ·
RP-HPLC法对元宝枫果翅中 3种黄酮苷元的研究
赵文华　张英侠＊
(首都医科大学化学生物学与药学院)
摘要:目的　研究元宝枫果翅活性与其有效成分的相关性。方法　利用反相高效液相色谱法测定不同季节元宝枫果翅中
槲皮素 、山柰酚和异鼠李素含量。结果　不同季节样品中 3种黄酮苷元的定量分析结果分别为槲皮素平均回收率 99.8%,
RSD=0.72%;山柰酚平均回收率为 100.8%, RSD=1.09%;异鼠李素平均回收率为 102.4%, RSD=1.61%。结论　元宝
枫果翅中含有中槲皮素 、山柰酚和异鼠李素 , 其含量随季节变化。
关键词:元宝枫;果翅;反相高效液相色谱法;黄酮苷元;槲皮素;山柰酚;异鼠李素
中图分类号:R 961
Determination of the Flavonoid Aglycones of the Key Fruit Wing from
Acer Truncatum Bunge with Reversed-phase High-performance Liquid
Chromatographic Methods
Zhao Wenhua , Zhang Yingx ia＊
(School of Chemical Biology and Pharmaceutical Sciences , Capital University of Medical Sciences)
ABSTRACT:Objective　To study on the co rrelation between the activity and the effective components of the key fruit wing from
Acer T runcatum Bunge.Methods　The determination of three kinds of flavonoid aglycones w as performed with DiamonsilTM-C18
column(4.6 mm×250 mm , 5 μm), using Methano l-water(1% acetic acid)as mobile phase at a flow rate of 1.0 m L/min and
detected at the waveleng th of 360 nm.Results　The average recovery of quercetin was 99.8%, RSD=0.72%.The average
recovery of kaempferol w as 100.8%, RSD=1.09%.The average recovery of isorhamnetin w as 102.4%, RSD=1.61%.
Conclusion　There are quercetin , kaempferol and iso rhamnetin in the w ing of key fruit of Acer T runcatum Bunge , and their
contents change with season.
Key words:acer truncatum bunge;the wing of key fruit;reversed-phase high-perfo rmance liquid chromatographic methods;
flavonoid ag lycones;quercetin;kaempferol;isorhamnetin
　　元宝枫(Acer Truncatum Bunge)为槭树科
(Aceraceae)槭树属(Acer)植物 ,果翅呈八字型 ,锐
角展开。据报道 ,元宝枫果翅有镇静 、催眠 、抗凝血
等生物活性[ 1 ～ 4] 。
为了探讨元宝枫果翅药理活性与有效成分之
间的关系 ,对元宝枫果翅中的 3种黄酮苷元的含量
进行了研究。
1　材料与药品
Agillent 1100高效液相色谱仪(美国),包括四
元泵 ,自动进样器 , DAD检测器 ,HP 化学工作站 。
BSZ10S型电子分析天平(北京赛多利斯仪器系统
有限公司)。98-1-B型电子调温电热套(天津市泰
斯特仪器有限公司)。FZ102型微型植物试样粉碎
机(河北黄骅市齐家务科学仪器厂)。SB-2200型
超声波清洗机(上海必能信超声有限公司)。Dia-
monsilTM(钻石)C18色谱柱(迪马公司)。Daisogel
SP-120-50-RP18硅胶填料(50 μm ,批号 0406016 ,
购自北京金欧亚科技发展有限公司)。甲醇〔色谱
纯(迪马公司)〕;重蒸水 、冰醋酸为分析纯。
槲皮素对照品(产品号 113K1051 、购自 SIG-
MA公司),山柰酚对照品(批号 110861-200303)、
异鼠李素对照品(批号 110860-200204),均购自中
国药品生物制品检定所。元宝枫果翅采自于北京
百望山(15年生),从 5月至 10 月 ,每月 20日前后
采回翅果 ,清洗 ,脱粒 ,分离种仁 ,得到果翅 ,阴干 ,
粉碎 ,过 200目筛 ,备用 。
2　方法与结果
2.1　色谱条件
色谱柱:DiamonsilTM(钻石)-C18色谱柱(4.6
mm×250 mm , 5 μm),流动相甲醇-水(含 1%冰醋
酸)(60∶40),流速 1.0 mL/min ,检测波长 360 nm ,
进样量 20 μL ,柱温为室温。在此条件下 ,得到样
2005 年　8 月
第 26 卷　第 4 期
首 都 医 科 大 学 学 报
Journal of Capital University of Medical Sciences
Aug.2005
Vol.26　No.4
收稿日期:2004-12-13　　　＊通讯作者(Corresponding author)
基金项目:北京市教委科技发展项目(KM200410025013)资助项目
品及标准品的色谱分离图(图 1),元宝枫果翅样品
中槲皮素 、山柰酚和异鼠李素色谱峰分别与其他成
分分离良好。
图 1　HPLC色谱图
Fig 1　HPLC chromatograph
A　S tandard samples of quercetin , Kaempferol , and Isorhamnetin;
B　S amples;1　Quercetin;2　Kaempferol;3　Isorhamnet in.
2.2　对照品与样品溶液的制备
精密称取槲皮素 、山柰酚和异鼠李素对照品适
量 ,分别加甲醇制成 0.061 2 g/ L 、0.030 2 g/L 和
0.041 2 g/L 的对照品溶液。
取不同季节元宝枫果翅各约 2.0 g ,精密称定 ,
分别加 35 mL 甲醇和 5 mL 25%盐酸 ,回流 30
min ,回流液用 G3 漏斗过滤 ,并用 50 mL 甲醇洗
涤。回收滤液 ,转移至 50 mL 量瓶中 ,甲醇定容 。
然后用移液管从中取出 5 mL 溶液 ,过 RP18柱 ,再
用4 mL 甲醇冲洗 ,流出液定容至 10 mL 量瓶中 ,
0.45 μm微孔滤膜滤过 ,作为待测样品溶液。
2.3　线性关系检测
分别精密吸取槲皮素对照品溶液 2.5 、5.0 、
10.0 、15.0 、20.0μL ,山柰酚对照品溶液 0.5 、1.0 、
2.0 、4.0 、6.0 μL 和异鼠李素对照品溶液 0.3 、1.0 、
2.0 、3.0 、5.0 μL ,按上述色谱条件 ,测定峰面积 。
以色谱峰峰面积为纵坐标 ,对照品进样量为横坐
标 ,绘制标准曲线并进行线性回归 ,计算回归方程 。
槲皮素:Y =3 657.4X -21.82 , r =0.999 9 ,线性
范围 0.153 ～ 1.224 μg;山柰酚:Y =3 771.5X -
13.16 , r=0.999 9 ,线性范围 0.015 ～ 0.181μg;异
鼠李素:Y =3 479.7X -7.29 , r=0.999 8 ,线性范
围 0.012 ～ 0.206 μg 。
2.4　精密度试验
分别精密吸取同一份对照品溶液 20.0 μL ,连
续进样 5 次 ,测得槲皮素色谱峰峰面积平均值为
1 035.9 ,相对标准偏差(RSD)为 0.87%。山柰酚
峰面积平均值为 117.22 , RSD 1.84%。异鼠李素
峰面积平均值为 123.67 , RSD 1.63%。
2.5　稳定性试验
精密吸取同一样品溶液 20.0 μL ,分别在制备
后 0 、2 、4 、6 、8 、12 、24 h进样 ,测定槲皮素 、山柰酚
和异鼠李素色谱峰峰面积 ,计算峰面积RSD分别
为 1.85%、1.54%和 0.93%,提示样品溶液 24 h
内稳定性良好 。
2.6　重现性试验
取同一月份样品 ,精密称取 5份 ,按样品测定
项下方法 ,分别测定槲皮素 、山柰酚和异鼠李素含
量。结果槲皮素 、山奈酚 、异鼠李素的平均含量分
别为 0.147 7%、0.010 42%、0.010 87%, RSD 分
别为1.07%、1.37%、0.90%。
2.7　回收率试验
1)槲皮素回收率试验:精密称取已知槲皮素含
量0.147 7%的 9月份果翅 5份 ,每份精密称定1.0
g 。分别精密加入浓度为5.88 g/L 槲皮素对照品
溶液 250 μL ,再加入17.5 mL 甲醇和2.5 mL 25%
盐酸回流 30 min。冷却后 ,用 G3 漏斗过滤回流
液 ,并用 10 mL 甲醇洗涤 ,滤液减压回收至约 5
mL ,转移至 10 mL 量瓶中 ,甲醇定容。然后用移
液管从中取出 5 mL 溶液 ,过 RP18 柱 ,再用 4 mL
甲醇冲洗 , 流出液定容至 10 mL 量瓶中 , 摇匀 ,
0.45μm微孔滤膜滤过。按样品测定项下方法测
定 ,计算平均回收率为99.8%, RSD 0.72%,结果
见表 1 。
2)山柰酚回收率试验:精密称取已知山柰酚含
量0.010 42%的 9月份果翅 5份 ,每份精密称定
1.0 g ,分别精密加入质量浓度为 6.92 g/L 山柰酚
对照品溶液 15 μL ,按照样品溶液制备项下方法处
理 ,按样品测定项下方法测定 ,计算平均回收率为
100.8%,RSD 1.09%,结果见表 1 。
3)异鼠李素回收率试验:精密称取已知异鼠李
素含量 0.010 87%的 9月份果翅 5份 ,每份精密称
定 1.0 g ,分别精密加入质量浓度为 4.42 g/ L 异鼠
李素对照品溶液 25 μL ,按照样品溶液制备项下方
法处理 ,按样品测定项下方法测定 ,计算平均回收
率为 102.4%, RSD 1.61%,结果见表 1。
2.8　样品测定
分别精密称取 5至 10月份元宝枫果翅 ,按样
品溶液的制备项下方法分别制备样品溶液;精密吸
取 5至 10月份样品溶液 10.0 μL , 0.061 2 g/ L 槲
皮素对照品溶液 10.0 μL , 0.030 2 g/L 山柰酚对
照品溶液 4.0μL和 0.041 2 g/L 异鼠李素对照品
439　第 4 期 赵文华等:RP-HPLC 法对元宝枫果翅中 3 种黄酮苷元的研究
溶液 2.0μL 。注入液相色谱仪 ,依法测定 ,计算槲 皮素 、山柰酚和异鼠李素的含量 ,结果见表 2。
表 1　3种黄酮苷元的回收率
Tab 1　Radio of recovery of three kinds of flavonoid aglycones
Determinat ion item
Content Added Determined
mg
Recovery Average recovery RSD
%
Quercetin
1.477 1.470 2.950 100.2 99.8 0.72
1.456 1.470 2.925 99.9
1.461 1.470 2.921 99.3
1.473 1.470 2.952 100.6
1.468 1.470 2.920 98.8
Kaempferol
0.104 4 0.103 8 0.209 1 100.9 100.8 1.09
0.106 8 0.103 8 0.212 2 101.5
0.104 7 0.103 8 0.210 7 102.1
0.110 6 0.103 8 0.213 6 99.2
0.102 7 0.103 8 0.206 9 100.4
Isorhamnetin
0.108 8 0.110 5 0.221 4 101.9 102.4 1.61
0.110 5 0.110 5 0.222 9 101.7
0.107 3 0.110 5 0.218 2 100.4
0.109 4 0.110 5 0.223 2 103.0
0.108 6 0.110 5 0.224 4 104.8
表 2　样品中 3 种黄酮苷元含量测定结果
Tab 2　Contents of three kinds of f lavonoid aglycones in samples %
Date of collection Part
Quercet in
Con tent RSD
Kaempferol
Content RSD
Isorhamnetin
Content RSD
2004-05-22 Wing of key f ruit 0.073 0 1.02 0.007 23 0.74 0.004 68 1.23
2004-06-23 Wing of key f ruit 0.109 4 1.10 0.007 15 2.08 0.004 51 1.25
2004-07-21 Wing of key f ruit 0.125 2 1.03 0.007 42 2.74 0.006 05 1.91
2004-08-25 Wing of key f ruit 0.142 1 1.39 0.008 25 0.71 0.009 21 1.92
2004-09-22 Wing of key f ruit 0.147 7 1.07 0.010 42 1.37 0.010 87 0.90
2004-10-25 Wing of key f ruit 0.143 9 2.82 0.013 81 1.95 0.011 29 1.62
3　讨论
从图 1可看出 ,在元宝枫果翅的水解产物中含
有与槲皮素 、山柰酚 、异鼠李素 3种黄酮苷元保留
时间基本一致的色谱峰 ,提示所测样品含有上述 3
种黄酮苷元 ,本实验首次对元宝枫果翅中的黄酮类
成分进行分析。实验表明槲皮素在 0.153 ～ 1.224
μg 范围内呈线性 , R 2=0.999 9;山柰酚在0.015 ～
0.181范围内呈线性 , R 2=0.999 9 , 异鼠李素在
0.012 ～ 0.206 μg 范围内呈线性 , R 2=0.999 8 。
槲皮素平均回收率99.8%, RSD=0.72%;山柰酚
平均回收率为100.8%, RSD=1.09%;异鼠李素平
均回收率为102.4%,RSD=1.61%。
从表 2 可以看出 ,所采集的样品中槲皮素 、山
柰酚 、异鼠李素含量从 5 10月份呈上升趋势 ,10
月份槲皮素 、山柰酚的含量约是 5 月份的 2倍 ,异
鼠李素含量大约是 5月份的 2.5 倍。这与植物次
生代谢物合成积累的时效性基本一致。但槲皮素
的含量在 10月份果实成熟时却略有下降。本实验
同时检测了成熟种子 ,发现种子中不含有上述 3种
黄酮苷元 ,因此应进一步对不同月份元宝枫果翅中
的黄酮苷类成分进行具体分析 ,从而为元宝枫果翅
的开发利用提供实验依据。
4　参考文献
[ 1] 李云志 , 曾凡骏 , 曾里.元宝枫的综合开发利用.食品
与发酵工业 , 2004 , 30:90～ 93
[ 2] 王性炎 , 盛平想 ,王珠请.元宝枫开发利用研究.西安:
陕西科技出版社 , 1982
[ 3] 吕居涌 , 李映丽 , 韩强.元宝枫生药学研究.经济林研
究 , 1994 , 12:14～ 16
[ 4] Parellade J , Guinea M.Flavonoid inhibitors of trypsin
and leucine aminopeptidase:a proposed ma thema tical
model for IC50 Estimation.J Nat Prod , 1995 , 58:
823～ 829
440 首 都 医 科 大 学 学 报 第 26 卷