全 文 ：单用蒿甲醚组与顺铂组为多，但联合给药组组间没有差异。顺铂
组较单药蒿甲醚组体质量下降明显(P ＜ 0． 05)。
目前，关于青蒿素类药物抑制肿瘤的机制尚未完全明了。有
文献报道［2］，青蒿素类药物具有抑制肿瘤新生血管的形成的作
用。本试验中通过对瘤组织进行 HE 染色发现联合用药组各组
瘤组织散在分布，大片坏死，瘤组织内及其周围微血管较生理盐
水组及单药蒿甲醚或顺铂组少见，同样证实蒿甲醚与顺铂联用后
增强了对肿瘤血管生成的抑制作用，进而抑制肿瘤的生长。
国内也有研究［3，4］表明，青蒿素类药物有阻滞细胞周期、诱
导肿瘤细胞凋亡的作用。临床上大多的抗肿瘤药物均系细胞周
期特异性药物，这类药物通过将肿瘤细胞阻滞于增殖周期的某一
时相进而起到抑制肿瘤细胞生长的作用，在阻断细胞周期进程的
同时还可引起细胞凋亡、促进细胞的坏死。Li 等［5］报道青蒿素
及其衍生物对 P388 细胞的抗增殖效应是由于细胞阻滞于 G1 期，
DNA损伤后诱导细胞程序性死亡的结果。我们运用流式细胞仪
对瘤组织细胞周期、凋亡与坏死分析发现:与生理盐水组及单药
蒿甲醚组或顺铂组比较，联合用药组瘤组织中的细胞周期大多阻
滞在 G0 /G1 期及 S期、而进入 G2 /M 期细胞明显减少;同时我们
也观察到联合用药组在诱导肿瘤细胞的凋亡及促进细胞坏死方
面明显强于生理盐水组及单药蒿甲醚组或顺铂组。笔者也认为，
蒿甲醚与顺铂联合作用于 Lewise肺癌小鼠后可通过细胞周期阻
滞的方式来诱导细胞的凋亡、促进细胞的坏死，进抑制肿瘤生长。
总之，我们在该研究中发现蒿甲醚与顺铂联用后对 Lewise
肺癌小鼠的抑制作用明显增强，其机制可能是通过抑制肿瘤新生
血管的形成、细胞周期的阻滞、诱导肿瘤细胞的凋亡及促进肿瘤
细胞的坏死来实现的。这为我们将蒿甲醚作为化疗辅助用药应
用于临床提供了一定的理论依据。
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收稿日期:2010-01-01; 修订日期:2011-07-12
基金项目:黑龙江省卫生厅资助项目(No． 2006 － 335)
作者简介:张 涛(1964-) ，女(汉族) ，黑龙江佳木斯人，现任佳木斯大学
医学院教授，博士学位，主要从事植物药抗肿瘤研究工作．
* 通讯作者简介:田黎明(1962-) ，男(汉族) ，黑龙江佳木斯人，现任佳木
斯大学医学院教授，硕士学位，主要从事抗肿瘤药物研究工作．
紫花地丁对 U14 荷瘤鼠抑瘤作用的实验研究
张 涛，苍 薇，田黎明* ，朴金花，田丽华
(佳木斯大学医学院，黑龙江 佳木斯 154007)
摘要:目的 探讨紫花地丁对 U14 荷瘤鼠的抑制作用与机制。方法 用不同浓度的紫花地丁水提液、醇提液连续灌服荷
瘤鼠 13 d，取动物血清、胸腺、脾脏和瘤体，计算抑瘤率、胸腺和脾脏重量系数。放免法测定血清肿瘤坏死因子 α(TNF －
α)、白细胞介素 － 2(IL － 2)水平;免疫组化法测定肿瘤组织中突变型 P53 蛋白和 Bcl － 2(B细胞淋巴瘤 /白血病 － 2)蛋白
的表达。结果 紫花地丁水提大、小剂量组，醇提大、小剂量组抑瘤率分别为 40． 62%，34． 00%，29． 31%，35． 33%;紫花地
丁能提高 U14 荷瘤鼠的胸腺和脾脏指数;紫花地丁可提高 U14 荷瘤鼠体内 IL － 2 及 TNF － α水平;降低瘤组织中突变型
P53 和 Bcl － 2 蛋白的表达。结论 紫花地丁对 U14 荷瘤鼠肿瘤组织生长具有明显的抑制作用。
关键词:紫花地丁; 突变性 P53 蛋白; Bcl － 2 蛋白; 肿瘤坏死因子 － α; 白细胞介素 － 2
DOI标识:doi:10． 3969 / j． issn． 1008-0805． 2011． 12． 045
中图分类号:R737． 33 文献标识码:B 文章编号:1008-0805(2011)12-2926-02
中药紫花地丁 Viola yedoensis Makino 属堇菜属，是植物紫花
地丁的干燥全草，具有清热解毒、凉血之功效，常用于治疗疔疮热
毒，痈肿及各种化脓性感染等。研究表明紫花地丁水煎剂可调节
小鼠免疫细胞 IL － 2 和 TNF － α 的分泌。但其对荷瘤鼠的抗肿
瘤作用及其机制的研究尚未见报道。本实验以紫花地丁的水和
醇提物为施加因素，观察其对 U14 荷瘤鼠的抑瘤作用，对荷瘤鼠
P53、bcl － 2 基因的表达及对血清 IL － 2、TNF － α 水平的影响，探
讨紫花地丁的抗肿瘤作用与机制。
1 材料与方法
1． 1 材料 ①实验动物:昆明种小鼠，雌性 65 只，6 ～ 8 周龄，体
质量(20 ± 2)g。由佳木斯大学实验动物中心提供。②细胞株:
小鼠宫颈癌 U14 细胞株，购自中国医学科学院。③主要试剂:IL
－ 2 放免试剂盒、TNF 放免试剂盒为北京福瑞生物公司产品，免
疫组化试剂盒、多聚赖氨酸、DAB显色剂等武汉博士德生物公司
产品，环磷酰胺为上海华联制药有限公司产品。
1． 2 方法 取昆明小鼠 60 只，无菌条件下每只鼠右腋下接种
0． 2 ml瘤细胞悬液制成局灶性肿瘤模型。次日随机分 6 组，每组
10 只，小剂量组 0． 15 g /ml，大剂量组 0． 3 g /ml。1 次 /d 灌胃给
药，连续 13 d 后，摘眼球取血，离心分离血清，－ 20℃冰箱备用，
用于测定血清 IL － 2 和 TNF － α 水平，并处死小鼠取出肿瘤、胸
腺和脾脏称重，计算抑瘤率(%)、胸腺指数、脾脏指数。免疫组
化法检测肿瘤组织中 P53 和 Bcl － 2 蛋白的表达。
1． 3 统计学方法 检测结果以 珋x ± s表示，组间比较用 t检验。
2 结果
2． 1 紫花地丁对 U14 荷瘤鼠的抑瘤率 结果见表 1。
2． 2 紫花地丁对 U14 荷瘤鼠脏器重量指数的影响 结果见表 2。
2． 3 紫花地丁对 U14 荷瘤鼠血清 IL － 2 和 TNF － α 的影响 结
果见表 3。
2． 4 紫花地丁对 U14 荷瘤鼠肿瘤组织 P53 和 Bcl － 2 蛋白表达
的影响 结果见表 4，图 1 ～ 2。褐色核染色是突变型 P53 和 Bcl －
2 蛋白阳性表达细胞，蓝色核染色是突变型 P53 和 Bcl － 2 蛋白阴
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时珍国医国药 2011 年第 22 卷第 12 期 LISHIZHEN MEDICINE AND MATERIA MEDICA RESEARCH 2011 VOL． 22 NO． 12
性表达细胞。
表 1 紫花地丁对 U14 荷瘤鼠抑瘤率的影响(珋x ± s)
组别 动物数 瘤重 m /mg 抑瘤率(%)
模型 10 2． 91 ± 0． 53 －
CTX 9 1． 51 ± 0． 34△△ 48． 14
地丁水提物(小) 10 1． 92 ± 0． 39△△ 34． 00
地丁水提物(大) 10 1． 73 ± 0． 27△△ 40． 62
地丁醇提物(小) 10 1． 89 ± 0． 56△ 35． 33
地丁醇提物(大) 10 2． 06 ± 0． 32△△ 29． 31
与模型组比较，△P ＜ 0． 05，△△P ＜ 0． 01
表 2 紫花地丁对 U14 荷瘤鼠胸腺、脾腺重量指数的影响(珋x ± s)
组别 动物数 胸腺指数 m /mg·g － 1 脾脏指数 /mg·g － 1
模型 10 34． 08 ± 3． 27 67． 75 ± 3． 92
CTX 9 23． 06 ± 5． 33△△ 75． 88 ± 13． 15
地丁水提物(小) 10 36． 25 ± 2． 70 90． 39 ± 8． 27△△
地丁水提物(大) 10 58． 95 ± 4． 83△△ 96． 96 ± 4． 64△△
地丁醇提物(小) 10 43． 04 ± 3． 13△△ 95． 99 ± 8． 98△△
地丁醇提物(大) 10 37． 66 ± 2． 49 83． 52 ± 4． 02△△
与模型组比较，△P ＜ 0． 05，△△P ＜ 0． 01
表 3 紫花地丁对 U14 荷瘤鼠
血清 IL － 2 和 TNF － α的影响(珋x ± s)
组别 动物数 IL － 2m /ng·ml －1 TNF － αm /ng·ml －1
模型 10 7． 97 ± 3． 42 1． 02 ± 0． 53
CTX 9 3． 92 ± 0． 73△ 0． 61 ± 0． 07△
地丁水提物(小) 10 11． 61 ± 2． 29 1． 72 ± 0． 34△
地丁水提物(大) 10 14． 06 ± 0． 86△△ 1． 90 ± 0． 29△△
地丁醇提物(小) 10 13． 64 ± 2． 89△ 2． 07 ± 0． 27△△
地丁醇提物(大) 10 10． 30 ± 4． 25 1． 81 ± 0． 54△
与模型组比较，△P ＜ 0． 05，△△P ＜ 0． 01
表 4 紫花地丁对 U14 荷瘤鼠肿瘤
组织 P53 和 Bcl － 2 蛋白表达的影响(珋x ± s)
组别 动物数 P53 Bcl － 2
模型 10 70． 93 ± 6． 87 54． 60 ± 4． 56
CTX 9 39． 95 ± 6． 44△△ 37． 52 ± 6． 60△△
地丁水提物(小) 10 64． 40 ± 6． 95△ 50． 48 ± 4． 84△
地丁水提物(大) 10 42． 34 ± 5． 10△△ 40． 42 ± 8． 24△△
地丁醇提物(小) 10 58． 45 ± 13． 85△ 49． 49 ± 7． 63△
地丁醇提物(大) 10 64． 09 ± 10． 67 51． 30 ± 4． 71
与模型组比较，△P ＜ 0． 05，△△P ＜ 0． 01
A －对照组;B －紫花地丁水提物大剂量组
图 1 突变性 P53 蛋白在 U14 荷瘤鼠肿瘤细胞中的表达 (SP，100 ×)
A －对照组;B －紫花地丁水大提物剂量组
图 2 Bcl － 2 蛋白在 U14 荷瘤鼠肿瘤细胞中的表达 (SP，100 ×)
3 讨论
肿瘤可通过多种不同途径影响机体的免疫功能，使荷瘤宿主
呈现不同程度的免疫抑制状态。胸腺和脾脏的重量指数能反映
机体免疫系统的功能状况。本实验紫花地丁能增加 U14 荷瘤鼠
的胸腺和脾脏重量指数，对荷瘤鼠的免疫器官无明显抑制作用，
有利于荷瘤机体的治疗。
IL － 2 是机体复杂免疫网络中起调节作用的重要淋巴因子，
促进 T细胞的体内增殖，增强细胞免疫和体液免疫。TNF － α 是
一种多肽类激素，TNF在体内能引起肿瘤细胞凋亡和坏死，与机
体免疫调节系统变化有关［1］。研究发现 TNF － α 与 IL － 2 具有
协同抗肿瘤效应［2，3］。本实验证明紫花地丁能提高荷瘤鼠 IL － 2
及 TNF － α的含量，从而恢复和增强机体免疫功能，利于其有效
地发挥抗肿瘤作用。
许多研究证明突变型 P53 丧失抑瘤活性，并能在 DNA 复制
水平上调节细胞生长，是促进肿瘤发生、发展及导致增殖异常活
跃的一个重要因素。本实验结果显示，CTX组和紫花地丁各组的
突变型 P53 明显降低。提示紫花地丁可能通过某种机制直接或
间接的抑制 P53 基因的突变从而达到抑制肿瘤的作用。
Bcl － 2 是 Tsujimoto等从 B细胞滤泡性淋巴瘤染色体断裂点
发现的凋亡抑制基因，可通过抑制凋亡而延长肿瘤细胞的寿
命［4］。本实验表明紫花地丁能使 U14 荷瘤鼠的 Bcl － 2 蛋白低表
达。故认为紫花地丁对 U14 荷瘤鼠的抑制作用可能与 Bcl － 2 蛋
白表达减少有关。有关紫花地丁的抗肿瘤作用及其机制尚待进
一步研究。
参考文献:
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