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HPLC法测定紫景天中熊果苷的含量



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0 引言
紫景天为景天科景天属多年生野生草本植物,
生长在山地林下、林缘草地,分布于东北、内蒙古等
地。全草入药,具有收敛止血、清热解毒及调节免
疫功能等功效 [1]。熊果苷(对 - 羟基苯 -β-D- 吡
喃葡萄糖苷)是源于绿色植物的天然活性物质,具
有利尿、抗菌、镇咳等作用 [2]。近年来发现熊果苷有
很好的皮肤增白作用,它通过抑制黑素细胞的酪氨
酸酶活性而有效地抑制黑素的形成,在护肤用品方
面有很广泛的应用 [3]。
近年来由于其良好的美白效果,受到了国际各
界的普遍关注。随着人们对于熊果苷的不断深入
研究,熊果苷作为最安全高效美白剂必将在国际化妆
品中占有极其重要的地位,有着很好的应用前景 [4]。
然而,熊果苷的研究还未引起我国化妆品界和化工
业的足够重视,开发和利用还处在起步阶段,因此
对于熊果苷的不断深入认识有助于我们紧跟世界
化妆品行业的最新潮流,参与全球化贸易竞争 [5]。
我们建立了用高效液相色谱法测定其在紫景天中
含量的方法。
1 仪器与试药
所有仪器有:Agilent -1100 高效液相色谱
仪,Agilent Eclipse XDB-C18(4.6 mm×150 mm ,5
μm) 柱;紫景天产地为辽宁省台安县雅化村玉民
花卉苗木基地,经鉴定为 Sedum Purpureum(L.)
Schult;熊果苷对照品(湖北阿泰克化学有限公司
20100923A);甲醇为色谱纯;水为娃哈哈纯净水;
其他试剂为分析纯。
2 方法与结果
2.1 波长选择
取熊果苷对照品适量,加甲醇制成浓度约
10μg·mL-1的溶液,在 180~ 350 nm波长范围扫描,
测得熊果苷的最大吸收波长为 282 nm。
2.2 色谱条件
色谱柱:Agilent Eclipse XDB-C18 柱 (4.6 mm×
150 mm,5 μm);流动相:甲醇:水 =20∶80 为流动
相;检测波长:282 nm;流速:0.8 mL·min-1;进样
量:10μL。
2.3 溶液配制
2.3.1 熊果苷对照品的配制
精密称取熊果苷对照品 50.40 mg,加甲醇定容
到 50 mL 容量瓶中,制成浓度为 1mg·mL-1 的贮
备液。
2.3.2 提取条件的选择
熊果苷易溶于水、乙醇 , 可溶于甲醇、丙酮 , 较
难溶于乙酸乙酯 , 不溶于乙醚、石油醚和氯仿 [6], 故
选用乙醇为提取溶剂 , 采用超声、回流、连续回流方
法及不同超声时间进行提取条件考察 , 结果表明 ,
供试品用乙醇超声提取 30 min 为宜。
2.3.3 供试品溶液的制备 
取紫景天药材粉末 5.0036 g、5.0038 g、5.0021
g,分别加水、50% 乙醇、95% 乙醇 50 mL, 浸渍过夜,
超声处理 30 min, 滤过 , 残渣再加相应的溶剂 50
mL,超声处理 30 min, 滤过 , 用少量甲醇洗涤残渣,
合并滤液和洗液 , 蒸干 , 残渣加甲醇 20 mL 使溶解,
文章编号 :1005–3387 ( 2012 ) 06–0020–21
现代测量与实验室管理 2012 年第 6 期
HPLC 法测定紫景天中熊果苷的含量
王鑫宇 郝银霞 张 军
(通化市产品质量检验所,通化 134001)
摘 要:建立测定紫景天中熊果苷含量的高效液相色谱方法。采用 Agilent Eclipse XDB-C18 柱 (4.6 mm×150 mm,
5μm), 以甲醇:水 =20∶80 为流动相,检测波长为 282 nm。结果在 5~ 160 μg·mL-1 浓度范围内,熊果苷不同浓度的峰
面积比呈线性关系。
关键词:紫景天;熊果苷;HPLC
中图分类号:O657.7+2 文献标识码:A
DOI:10.16428/j.cnki.cn11-4827/t.2012.06.005
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定容到 25 mL 容量瓶内 , 加甲醇至刻度,摇匀,即得。
2.4 线性关系的考察
分别精密量取熊果苷对照品溶液适量于 25
mL 量瓶中,用甲醇稀释至刻度,配制成熊果苷浓度
分 别 为 5 μg·mL-1、10 μg·mL-1、20 μg·mL-1、40
μg·mL-1、80 μg·mL-1、160 μg·mL-1 溶液。取上述
不同浓度的对照品溶液各 20 μL 注入高效液相色
谱仪,记录色谱图并计算熊果苷不同浓度的峰面积
比 [7]。以熊果苷的质量浓度 c 对 Y 进行线性回归,
结果表明 5 ~ 160 μg·mL-1 范围内,质量浓度 c与
峰面积比 Y呈线性关系,回归方程如下:
c = 10.77Y + 0.053,r = 0.9999
2.5 回收率
取已知含量的紫景天药材粉末 0.2004 g,精密
称定 , 加入适量的熊果苷对照品 , 按“2.3.3”项下
的方法制备并测定 , 结果见表 1。
表 1 紫景天中熊果苷的回收率
序 号
初始量
(μg·mL-1)
回收量
(μg·mL-1)
回收率 (%)
1
20.24 20.28 100.2
20.18 20.26 100.4
20.16 20.14 99.9
2
100.34 100.01 99.7
100.16 100.27 100.1
100.23 100.31 100.1
3
200.36 200.13 99.8
200.42 200.48 100.0
200.17 200.15 100.0
2.6 精密度
精密量取对照品溶液 5μL, 重复进样 9 次 , 测
定峰面积积分值 , RSD =0.38%。
2.7 稳定性
配置后 0h、1h、3h、5h、7h、9h 分别取供试品溶
液 10 μL 测定 , 结果在 9 h 内 RSD =1.58 %。
2.8 含量测定
取供试品溶液和对照品溶液,分别进样,记录
色谱图,以峰面积比计算含量,含量 =5.89 μg·g-1
生药。结果见表 2,图 1 高效液相色谱。
表 2 紫景天中熊果苷含量
进样量
/μL
保留时
间 / min
峰面积 浓度
XGG2001 10 3.549 2571.16821 20 μg·mL-1
XGGSHUI2 20 3.575 303.75995 2.0016 mg·mL-1
XGG5001 20 3.546 256.031103 2.0016 mg·mL-1
XGG9501 20 3.531 90.15439 2.0016 mg·mL-1
XGGSHUI2
XGG5001
XGG9501
图 1 高效液相色谱
3 讨论
熊果苷较水溶性强,在反相固定相上保留较
弱,出峰较快,采用甲醇:水 =20:80 的流动相,熊
果苷能得到较好的分离。
参考文献:
[1] 李安良 , 杨淑琴 , 郭秀茹 . 熊果苷的研究进展 [J]. 日
用化学工业 ,2000(8)
[2] 宋康康 , 邱凌 , 黄璜 . (下转第 61 页)
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如损坏或丢失,应说明原因,属责任性事故给客户
造成经济损失的,由责任人承担。因样品损坏或丢
失造成检验中断时,检验室必须及时向技术负责人
汇报,采取必要的措施。属监督抽查的样品的,必
须确保检验样品与备用样品及企业留样为同一批
产品的样本,必要时启用备用样品;属委托检验的,
业务室应立即与委托方联系,协商解决满足委托人
要求的检验样品。
试毕样品交样品管理员办理退样,并做好交接
纪录,由业务室负责对样品室和实验室的样品管理
状况进行检查,对管理要素进行审核,不符合管理
要求的及时采取纠正措施。
3 食品样品的储存
因食品样品易于腐败变质,为保持样品的质量
特性,保证检验结果的准确性和代表性,一般采取
常温储存和低温贮存(冷冻贮存、冷藏贮存)两种方
式。如米面制品、食用油、调味品、糖果、瓶装饮料
等不易腐败的食品样品一般采用常温储存;对水产
品、畜禽制品、速冻食品、冷冻饮品等食品样品一般
采用冰箱、冰柜进行冷冻储存;对易腐败变质的肉
制品、糕点类等食品样品一般采用低温冷藏柜进行
低温储存。对于有特殊要求的食品样品要根据产
品标签(或说明书)标识的储存方法进行储存。
食品样品存放于专用的样品室,由样品管理员
负责管理。检验样品、备用样品及已检、退样、待处
理样品均分类、分柜、分区域的定位存放。必须保持
好食品样品室的环境条件,确保食品样品的有效性。
4 食品样品的处置
由于食品保质期的影响,试毕样品和备用样品
的留样期也有所不同,对于像面包等保质期比较短
的食品样品,它的留样期至保质期就可以,但对于
像调味品等保质期相对比较长的食品样品,它的留
样期不能低于 3 个月。
如果供样单位要求在报告申诉期内提前领回
样品时,应签署“对本样品的检验结果无异议”的
书面承诺方可办理退样;检验过程中发现数据异常
时,样品保留至问题的澄清。破坏性检验的食品样
品,可由检验室作为生活垃圾进行清理。
在检验结果异议期 3 个月后留样期满,业务室
实施退样程序,供样单位凭监督抽查抽样单或委托
抽样单将备用样品或试毕样品领回。未领回样品
的,业务室按以下规定执行:一是有使用价值的,督
促供样单位凭监督抽查抽样单或委托抽样单限期
领回;逾期未领取的,经技术负责人同意后处理;
二是超过保质期的,经技术负责人同意后,作为生
活垃圾销毁处理。
样品处理过程中严格记录样品名称、识别编
号、供样单位、样品数量、处理原因、处理方法、处理
时间、地点、处理人等详细信息,以便保持样品的可
追溯性。
除了以上关键控制点外,样品的保密安全和监
督管理也在食品样品管理中起着不可忽视的作用。
食品样品抽样、流转、处置等各环节相关人员,
应信守承诺,保护客户的技术机密和专利权,对客
户的样品、附件、检验结果等有关信息严格保密。留
样期内的样品不得以任何理由转借、出让或挪作他
用,保护样品的完好性和机密性。技术负责人加强
对样品各环节的流转记录是否齐全、样品处理是否
符合程序规定以及样品室的环境条件、储存设备容
器等方面的监督检查,以确保样品的质量特性和可
追溯性。
熊果苷作为化妆品添加剂对酪氨酸酶抑制作用 [J].
中国药学杂志,2003(16)
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