全 文 ：华西药学杂志
W C J·P S 2013，28(3)∶307 ～ 308
作者简介:麻秀萍(1971—) ，女，副教授，从事分析化学和中药制剂分析的教学及科研工作。Email:mxp001130@ sina． com． cn
HPLC测定毛大丁草中的熊果苷
麻秀萍1，谭 静2，蒋朝晖1，贾宪生1，张明昶1，徐文芬1
(1．贵阳中医学院，贵州 贵阳 550002;2．贵州同济堂制药有限公司，贵州 贵阳 550002)
摘要:目的 采用 ＲP － HPLC 法测定毛大丁草药材中的熊果苷。方法 色谱柱为 DiamonsilTM C18柱(150 mm × 4． 6 mm，
5 μm) ，柱温 35 ℃，流动相为甲醇 －水(5∶95) ，检测波长 280 nm。结果 熊果苷 0． 739 ～ 4. 434 μg与峰面积线性关系良好;
平均加样回收率为 99． 58%，ＲSD = 1． 1%。结论 所用方法专属性强、准确、重复性好，为毛大丁草药材质量标准的提高及完
善提供了依据。
关键词:毛大丁草;熊果苷;高效液相色谱法;含量测定
中图分类号:Ｒ917 文献标志码:A 文章编号:1006 － 0103(2013)03 － 0307 － 02
Determination of arbutin in Piloselloides hirsuta by HPLC
MA Xiu － ping1，TAN Jing2，JIANG Zhao － hui1，JIA Xian － sheng1，ZHANG Ming － chang1，XU Wen － fen1
(1． Guiyang College of Traditional Chinese Medicine，Guiyang，Guizhou，550002 P． Ｒ． China;2． Guizhou Tongjitang Pharmaceutical
Co． Ltd，Guiyang，Guizhou，550002 P． Ｒ． China )
Abstract:OBJECTIVE To determine the contents of arbutin in Piloselloides hirsuta(Forsk． )G． Jeffrey by ＲP － HPLC． METH-
ODS DiamonsilTM C18(150 mm × 4． 6 mm，5 μm)column was used． Column temperature was 35 ℃，and mobile phase consisted of
methanol － water (5∶95)mixture，with detecting wave at 280 nm． ＲESULTS The linear range determination of arbutin was 0． 739 －
4． 434 μg ，and the mean recovery was 99． 58% for arbutin with ＲSD of 1． 1% ． CONCLUSION The method is simple，accurate，
specific and sensitive for the determination arbutin content．
Key words:Piloselloides hirsuta;Arbutin;HPLC;Determination
CLC number:Ｒ917 Document code:A Article ID:1006 － 0103(2013)03 － 0307 － 02
毛大丁草又名兔耳风，为菊科植物毛大丁草
Piloselloides hirsuta(Forsk．)G． Jeffrey 的干燥全草，
收载于《贵州省中药材、民族药材质量标准》(2003
年版) ，具有宣肺止咳、发汗利水、行气活血的功效，
用于治疗伤风咳嗽、哮喘、水肿胀满、小便不利、小儿
食积、经闭、跌扑损伤、痈疖等。毛大丁草主要化学
成分为熊果苷、瑞香素 － 8 － O －葡萄糖苷、氢醌、琥
珀酸、伞形花内酯等［1 － 2］，其中，熊果苷有明显的镇
咳、祛痰和平喘作用，且毒性很低［3］。目前尚无含
量测定控制方法。为提高毛大丁草药材质量标准，
特采用 HPLC法测定毛大丁草中有效成分熊果苷的
含量，为开发利用这一民族药资源提供依据。
1 实验部分
1． 1 仪器与试药
1100 高效液相色谱仪系统(美国 Agilent)。熊
果苷对照品(Sigma － Aldrich 公司，含量 ＞ 99%) ;甲
醇为色谱纯和分析纯;水为纯净水;毛大丁草采于贵
州省长顺、惠水、兴义、贵阳、凯里、铜仁，经陈德媛研
究员鉴定为毛大丁草 Piloselloides hirsuta(Forsk．)G．
Jeffrey的全草，洗净，晒干，粉碎，过 40 目筛。
1． 2 方法与结果
1． 2． 1 色谱条件及系统适用性试验 采用 Dia-
monsilTM C18(150 mm ×4． 6 mm，5 μm)或 Lichropher
5 C18(250 mm × 4． 6 mm，5 μm)色谱柱，流动相为
甲醇 －水(5∶95) ，流速 1． 0 mL·min －1，柱温 35 ℃，
检测波长 280 nm。供试品中熊果苷与其他色谱峰
的分离度均大于 1． 5，理论板数按熊果苷峰计应不
低于3 × 103。分别精密吸取熊果苷对照品溶液和供
试品溶液各 10 μL，进样，测定，色谱图见图 1。
1． 2． 2 溶液的制备 精密称取熊果苷对照品适量，
用 50%甲醇溶解，制成 0． 2 mg·mL －1的熊果苷对照
品溶液。取毛大丁草药材粉末(40 目)约 1 g，精密
称定，置具塞锥形瓶中，精密加入 50%甲醇 50 mL，
密塞，称定重量，超声处理 1． 5 h，放冷，再称定重量，
用 50%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤
液，即得供试品溶液。
1． 2． 3 线性关系的考察 分别精密吸取 1． 0、2． 0、
3． 0、4． 0、5． 0、6． 0 mL 0． 7390 mg·mL －1的熊果苷对
照品溶液于 10 mL 量瓶中，加 50%甲醇定容，制成
系列熊果苷对照品溶液，分别进样 10 μL，按
“1. 2. 1”项色谱条件测定，记录色谱图。以熊果苷
DOI:10.13375/j.cnki.wcjps.2013.03.019
的进样量(μg)为横坐标、峰面积值为纵坐标进行线
性回归，得回归方程为:Y = 3． 949 × 102X + 4． 2631
(r = 0． 9999) ，熊果苷 0． 7390 ～ 4． 434 μg 与峰面积
呈良好线性关系。
1 2 3 4 5 6 7 8 9 1 2 3 4 5 6 7 8 9
A B
t/min
图 1 熊果苷对照品(A)与长顺毛大丁草药材(B)溶液的 HPLC色
谱图
Fig 1 HPLC chromatograms of arbutin solution(A)and Pilosel-
loides hirsuta solution collected in Changshun(B)
1． 2． 4 精密度试验 精密吸取 10 μL 熊果苷对照
品溶液(0． 1744 mg·mL －1) ，连续进样 6 次，记录色
谱图，结果熊果苷峰面积的 ＲSD = 0． 11%，表明仪器
精密度良好。
1． 2． 5 重复性试验 取长顺产毛大丁草粉末 6 份，
各约 1 g，精密称定，按“1． 2． 2”项方法制备供试液，
进样 10 μL，测定。熊果苷含量的平均值为 9. 242
mg·g －1，ＲSD = 1． 2%，说明方法重复性良好。
1． 2． 6 稳定性试验 取长顺产毛大丁草粉末约 1
g，精密称定，按“1． 2． 2”项下方法制备供试液，分别
于 0、2、4、6、8、10、12 h，进样 10 μL 测定，结果供试
品中熊果苷峰面积的 ＲSD = 0． 70%，表明供试液至
少在 12 h内测定稳定。
1． 2． 7 加样回收试验 取长顺产毛大丁草粉末 9
份，各约 0． 5 g，精密称定，取熊果苷对照品溶液
(4. 788 mg·mL －1) ，分别于 1、2、3 号样中精密加
0. 80 mL ，4、5、6 号样中精密加 1． 0 mL，7、8、9 号样
中精密加 1． 2 mL，按“1． 2． 2”项下方法制备供试液，
进样，记录色谱图，计算熊果苷的平均回收率为
99. 58%，ＲSD = 1． 1%，表明方法的准确性好(表
1)。
1． 2． 8 样品的测定 毛大丁草在贵州省全省均有
分布，对贵州省长顺、惠水、兴义、贵阳、凯里、铜仁 6
个不同产地的毛大丁草中熊果苷进行了含量测定，
按干燥品计分别为 0． 92%、0． 83%、0． 31%、
0. 45%、0． 37%、0． 63%。
表 1 加样回收试验测定结果(mg，n =9)
Table 1 The results of recovery experiment(mg，n =9)
Original Added Detected Ｒecovery /% 珔X /% ＲSD /%
4． 622 3． 830 8． 424 99． 27 99． 58 1． 1
4． 624 3． 830 8． 414 98． 96
4． 624 3． 830 8． 392 98． 38
4． 623 4． 788 9． 322 98． 14
4． 623 4． 788 9． 370 99． 14
4． 625 4． 788 9． 472 101． 20
4． 628 5． 746 10． 400 100． 40
4． 629 5． 746 10． 420 100． 80
4． 628 5． 746 10． 370 99． 93
2 讨论
由于熊果苷极性较大，曾比较不同提取溶剂
(水、30%甲醇、50%甲醇、70%甲醇、甲醇)、不同超
声提取时间(1. 0、1． 5、2． 0 h)对毛大丁草中熊果苷
的提取率，结果以 50%甲醇超声提取 1． 5 h 的提取
率最高。试验选择了 Lichrospher 5 C18(250 mm ×
4. 6 mm，5 μm) ，Diamonsil C18(150 mm × 4． 6 mm，
5 μm) ，Zorbax SB C18(150 mm × 4． 6 mm，5 μm)3
种色谱柱进行系统适用性试验，结果均适用于毛大
丁草中熊果苷的分离。还考察了甲醇 －水(5∶95、
15∶85、25∶75、35∶65)流动相对毛大丁草中熊果
苷的分离情况，随着含醇量增加，熊果苷峰形越来越
差，分离度下降，而甲醇含量等于或略小于 5%时，
均能得到较好的分离，这与熊果苷的极性较大有关。
于 190 ～ 400 nm对熊果苷进行了扫描，在 280 nm波
长处检测，熊果苷峰灵敏度较高，其他色谱峰干扰较
小，色谱峰的分离较为理想，故选此为检测波长。专
属性考察采用二极管阵列检测器进行峰纯度检查，
在供试品色谱图中熊果苷峰为纯峰，且溶剂无干扰，
方法的专属性强。毛大丁草在贵州全省均有分布，
对贵州省 6 个不同产地的毛大丁草进行了测定，结
果不同产地毛大丁草中熊果苷的含量差异较大，其
中，贵州长顺的含量最高。
参考文献:
［1］ 肖瑛，李建北，丁怡．毛大丁草化学成分的研究［J］． 中草药，
2003，34(2) :109 － 111．
［2］ 肖瑛，李建北，丁怡．毛大丁草根和根茎化学成分的研究［J］．
中国中药杂志，2002，27(8) :594 － 596．
［3］ 王亚芳，周宇辉，张建军． 熊果苷镇咳、祛痰及平喘的药效研
究［J］．中草药，2003，34(8) :739 － 741．
收稿日期:2012 － 05 － 11
803 华 西 药 学 杂 志 第 28 卷