全 文 ：生物多样性　2005, 13(2):105 - 111 　 　 　 　 　 　 　
Biodiversity Science
*
滇牡丹遗传多样性的 ISSR分析
杨淑达 1, 2　施苏华 3　龚　洵 1, 3*　周仁超 3
1 (中国科学院昆明植物研究所 , 　昆明　650204)
2 (中国科学院研究生院 , 　北京　100039)
3 (中山大学生命科学学院 , 　广州　510275)
摘要:应用 ISSR标记对中国西南地区特有植物滇牡丹(Paeonia delavay i)的遗传多样性进行了研究。从 100个引
物中筛选出 10个用于正式扩增 , 在取自 16个自然居群和 1个迁地保护居群的 511个个体中 ,检测到 92个多态位
点。在居群水平上 , 多态位点百分率(PPB)为 44. 61%, Nei′s基因多样性指数 (H)和 Shannon信息指数( I)分别为
0. 1657和 0. 2448。在物种水平上 , 多态位点百分率(PPB)为 79. 31%, Ne i′s基因多样性指数(H)和 Shannon信息
指数( I)分别为 0. 2947和 0. 4355。居群间的遗传分化系数(GST)达 0. 4349。结果表明:滇牡丹遗传多样性水平较
高 , 居群间遗传分化较大。结合以前的研究结果 , 对滇牡丹的现状进行评估的结果显示 ,滇牡丹并不濒危。
关键词:Paeonia delavayi,居群 , 居群遗传结构 , 遗传分化
Genetic d iversity ofPaeonia delavayi as revea led by ISSRs
Shuda Yang
1, 2 , Suhua Sh i3 , Xun Gong1, 3* , Renchao Zhou3
1Kunm ing Institute ofB otany , Ch inese Academy of Sciences, Kunm ing 650204
2Gradua te School of the Chinese Academy of Sciences, Beijing 100039
3 School of L ifeSciences, Sun Yat-senUn iversity, Guangzhou 510275
Abstract:The gene tic diversity o fPaeonia delavayi, a species endem ic to Sou thw est China, was ana-
lyzed using in ter-simp le sequence repeatma rke rs(ISSR). A to tal of 116 bands w ere amplified from 16
natural populations and one ex situ conserved popu lation by 10 in formative and reliab le prime rs o f 100
pre-screened primers. O f them , 92 ISSR loc iw ere po lymo rphic. A re la tive ly high leve l of in traspec ific
gene tic d iversity w as revealed:PPB =44. 61%, H =0. 1657 and I =0. 2448 a t popu lation leve l;
PPB =79. 31%, H =0. 2947 and I =0. 4355 a t species leve.l TheGST =0. 4349 ind ica ted a high
deg ree o f genetic differen tia tion occurred among P. delavay i popula tions. The results o f genetic diversity
study, combined w ith fie ld su rvey and previous investigations, suggest that P. delavay i is no t endan-
ge red.
Key words:Paeonia delavayi, population, popu lation gene tic structu re, gene tic d ifferen tiation
　　滇牡丹 (Paeon ia delavay i)是芍药科 (Paeoniace-
ae)芍药属 (Paeon ia)牡丹组 (Sec.t M outan)肉质花
盘亚组 (Subsec.t De lavayanae)植物 (Hong et al. ,
1998;Hong＆ Pan, 2001),为中国西南地区特有种 ,
也是芍药属分布最南的一个牡丹类群 ,在芍药属的
起源 、演化 、地理分布研究方面有重要的学术价值
(龚洵等 , 2003)。在 S tern(1946)和方文培 (1958)
的分类系统中 ,滇牡丹复合群包括紫牡丹 (Paeonia
delavayi )、黄牡丹(P. lutea )、保氏牡丹 (P. potan i-
ni)、金莲牡丹(P. potanini var. trollioides )和白花
保氏牡丹 (P. potanini .f alba )。 1998年 ,洪德元
等将这 5个类群归并为 1个种 ,即滇牡丹 (Hong et
a l. , 1998)。在《中国植物红皮书》中 ,滇牡丹被定
为渐危种 ,并被列为国家三级保护植物 (冯国楣 ,
1992)。
许多学者在滇牡丹的生态学 、形态解剖学 、细胞
学等方面作过一些研究 (S tern, 1944, 1946;龚洵
等 , 1991, 1999;Hong et a l. , 1998),表明滇牡丹的生
存环境多样化 ,它在形态和核型方面也表现出一定
的多样性 。但从 DNA分子水平对滇牡丹遗传多样
* 收稿日期:2004 - 11 -22;接受日期:2004 - 12 -17
基金项目:云南省自然科学基金(2003C0062M)
*通讯作者 Au thor for correspondence. E-mai l:gongxun@m ai.l k ib. ac. cn
106　 生 物 多 样 性　　B iodiversity Science 13卷
表 1　17个滇牡丹居群的样品来源
Table 1　Accessions of 17 Paeon ia de lavay i populations for ISSR analysis
居群代号
Popu lation cod e
分布地
Loca lity
采样数
Sam p le size
纬度
Latitude
经度
Longitude
KM 迁地保护居群 Ex situ conserved in Kunm ing B otan ic Garden 29 25°09′N 102°42′E
XSH 昆明西山 M .t X ishan, Kunm ing 23 25°02′N 102°39′E
SM 嵩明梁王山 M .t Liangw ang, S ongm ing C oun ty 28 25°22′N 102°50′E
CJ 澄江梁王山 M .t Liangw ang, C hengjiang C oun ty 30 24°45′N 102°54′E
HDB 大理花甸坝 Huadianba, Da liC ity 21 25°55′N 100°02′E
GHZ 丽江干海子 Ganhaizi, L ijiang C ity 24 27°03′N 100°15′E
MNP 丽江牦牛坪 M aoniuping, Lijiang C ity 30 27°11′N 100°16′E
LGH 宁蒗泸沽湖 Lugu Lake, N inglang C oun ty 24 27°39′N 100°41′E
TGC 中甸土官村 Tugu anV i llage, Zhongdian C oun ty 24 27°24′N 99°57′E
GZ 中甸格咱 Gezan, Zhongdian C ounty 46 28°13′N 99°44′E
NPH 中甸纳帕海 Nap ahai, Zhongdian C oun ty 54 27°55′N 99°37′E
NX 中甸尼西 N ixi, Zhongd ian County 30 28°01′N 99°32′E
SHS 德钦书松 Shusong, Deqin Coun ty 33 28°17′N 99°10′E
LBL 维西拉波罗 Lab oluo, W eix iC ounty 27 27°40′N 98°50′E
DD 维西垛垛 Duoduo, WeixiC oun ty 30 27°42′N 99°02′E
MW 木里瓦厂 W ach ang, M u liC oun ty 28 28°05′N 100°48′E
M S 木里沙湾 Shaw an, M u liC oun ty 30 28°30′N 100°55′E
性的研究尚未见报道 。
ISSR分子标记是一种简单重复序列之间扩增
多态性分子标记 ,具有 DNA样品用量少 、操作简单 、
实验成本低等优点 ,且实验重复性好 、信息量大 、多
态性高 ,因而是一种非常理想的检测物种内遗传变
异的分子标记 (葛颂 , 2001;N agaoka ＆ O gihara,
1997)。 ISSR分子标记已被广泛用于遗传多样性分
析 、DNA指纹图谱绘制 、品种鉴定 、进化及分子生态
学研究中 (王建波 , 2002)。本文采用 ISSR分子标
记技术对 16个滇牡丹自然居群和 1个迁地保护居
群的遗传多样性进行了研究 ,旨在阐明其遗传多样
性水平和遗传结构 ,并从遗传多样性和遗传结构方
面探讨滇牡丹的现状 。
1　材料和方法
1. 1　实验材料
16个自然居群的新鲜叶片采自云南和四川 ,迁
地保护居群 (KM)的样品采自昆明植物园 ,各个居
群的具体位置和采样个体数详见表 1和图 1。新鲜
叶片经硅胶干燥后 ,保存于 4℃。
1. 2　DNA的提取与 PCR扩增
采用改进后的 CTAB微量 FastPrep法提取总
图 1　滇牡丹的取样分布图(居群代号同表 1)
F ig. 1　M ap show ing loca tions of the 17 samp led Paeonia de la-
vayi popu lations. Popu lation codes a re the sam e as in Table 1.
2期 杨淑达等:滇牡丹遗传多样性的 ISSR分析 107　
DNA(张志红等 , 2004)。取微量硅胶干燥叶片放入
2 mL灭菌 FastPrep管 ,加入磁珠和少许石英砂 ,在
FastPrep植物组织破碎仪上震荡 45 s,仪器参数为
Speed 6。加入 1mL 2×CTAB提取液提取总 DNA。
以 1%琼脂糖凝胶电泳(1×TAE)检测总 DNA ,将样
品浓度稀释至 10 ng /μL备用。
PCR反应在 PTC-200 Thermocycle r PCR仪上进
行 。反应体系 (10 μL):Taq酶 (5U /μL)(威佳公
司 )0. 15 μL, 10 ×PCR bu ffe r 1. 0 μL, 25 mmo l /L
M gC l2 0. 6 - 0. 8 μL, 10 mmol /L dNTPs(上海生工 )
0. 1μL, 10 μmol /L引物(上海博亚)0. 2 μL, 10 ng /
μL模板 DNA 1. 0 μL, DMSO 0. 25 μL, dd H2O 7. 0
μL。扩增程序:94℃ 5m in, 1循环;94℃ 45 s→50 -
52℃ 1m in→72℃ 2 m in, 38循环;72℃ 7 m in, 1循
环 。电泳条件:PCR扩增产物以 1. 5%的琼脂糖胶
加 0. 5% EB染色 , 0. 5×TBE缓冲液和 4V /cm的电
压电泳分离 。
1. 3　数据分析
将 ISSR电泳胶图记录后进行人工读带 ,以 100
bp DNA ladder为分子量标准 ,同一引物扩增的电泳
迁移率一致的条带被认为具有同源性 ,属于同一位
点的产物。
按扩增阳性记为 1和扩增阴性记为 0的格式输
入计算机 ,构成 ISSR表型数据矩阵 ,采用 POPGENE
1. 32软件 (Yeh et al. , 1997)计算出滇牡丹各居群
的 N ei′s基因多样性(H)、Shannon信息指数 (I)、多
态位点百分率(PPB)、基因分化系数 (GST )、基因流
(Nm =(1 -GST ) /4GST)、居群内基因多样度 (Hs)和
总的基因多样度 (H t)。用 MEGA软件对各居群进
行 UPGMA聚类分析。
2　实验结果
2. 1　引物筛选结果
从哥伦比亚大学设计 (上海博亚生物技术有限
公司合成 )的 100条引物中筛选出 10条条带清晰 、
稳定性和重复性好且相对较多条带的引物用于全部
DNA样品的 PCR扩增 (表 2)。
2. 2　遗传多样性与群体遗传变异
对滇牡丹 16个自然居群和 1个迁地保护居群
共 511个个体的群体遗传分析表明:总体而言 ,滇牡
丹的遗传多样性水平较高。在所有检测到的清晰而
且可重复的 116个有效位点当中 , 多态位点有 92
个。在物种水平上 , 多态位点百分率 (PPB )是
79. 31%, N ei′s基因多样性(H)和 Shannon信息指数
(I)分别是 0. 2947 ( ±0. 1882)和 0. 4355( ±
0. 2610)。在居群水平上 ,多态位点百分率 (PPB)为
44. 61%, N ei′s基因多样性(H)和 Shannon信息指数
(I)分别为 0. 1657 ( ±0. 1854)和 0. 2448( ±
0. 2844)。从各个居群来看 , 以四川木里沙湾居群
(MS, PPB =18. 97%)遗传多样性水平最低 ,云南
中甸格咱居群 (GZ , PPB =63. 79%)的最高 ,迁地保
护的昆明植物园居群 (KM , PPB =57. 76%)处于中
等水平(表 3)。
自然居群内基因多样度 (Hs )和总基因多样度
(H t)分别为 0. 1656和 0. 2931 ,根据遗传多样性水
平在居群内(Hs)和居群间 (Ht -H s)的分化 ,各个居
群之间的 N ei′s基因分化系数 (GS T =(H t -Hs) /Ht)
是 0. 4349。这说明在物种水平上 ,有 56. 51%的遗
传变异存在于居群内 ,而 43. 49%的遗传变异存在
于居群间 ,居群之间表现出较高水平的遗传分化 。
表 2　本研究选用的 10个引物
Table 2　The ten p rim ers used for g enerating ISSR m arkers
引物
P rim er
序列
Sequen ce (5′-3′)
引物
P rim er
序列
S equence (5′-3′)
UBC811 GAGAGAGAGAGAGAGAC UBC844 CTCTCTCTCTCTCTCTRC
UBC823 TCTCTCTCTCTCTCTCC UBC852 TCTCTCTCTCTCTCTCRA
UBC824 TCTCTCTCTCTCTCTCG UBC853 TCTCTCTCTCTCTCTCRT
UBC835 AGAGAGAGAGAGAGAGYC UBC854 TCTCTCTCTCTCTCTCRG
UBC836 AGAGAGAGAGAGAGAGYA UBC866 CTCCTCCTCCTCCTCCTC
108　 生 物 多 样 性　　B iodiversity Science 13卷
表 3　滇牡丹自然居群和栽培居群内的遗传多样性(居群代号同表 1)
Table 3　Genetic va riation in na tural and ex situ conse rved populations o fPaeonia delavayi. Popu la tion codes a re g iven in Tab le 1.
居群
Popu lat ion
等位基因数
Na
有效等位基因数
Ne
Nei′s基因多样性
H
Shannon′s指数
I
多态位点百分率
PPB
昆明西山 XSH 1. 2328±0. 4244 1. 1446±0. 2988 0. 0838±0. 1656 0. 1244±0. 2401 23. 28
嵩明梁王山 SM 1. 4483±0. 4995 1. 2530±0. 3555 0. 1482±0. 1930 0. 2229±0. 2778 44. 83
澄江梁王山 C J 1. 4483±0. 4995 1. 3022±0. 3882 0. 1712±0. 2080 0. 2512±0. 2976 44. 83
大理花甸坝 HDB 1. 4224±0. 4961 1. 2709±0. 3716 0. 1556±0. 2005 0. 2305±0. 2879 42. 24
丽江干海子 GHZ 1. 4569±0. 5003 1. 3019±0. 3789 0. 1728±0. 2066 0. 2541±0. 2967 45. 69
丽江牦牛坪 MNP 1. 5086±0. 5021 1. 3275±0. 3829 0. 1885±0. 2060 0. 2789±0. 2951 50. 86
宁蒗泸沽湖 LGH 1. 4138±0. 4946 1. 2633±0. 3637 0. 1525±0. 1980 0. 2264±0. 2855 41. 38
中甸土官村 TGC 1. 4741±0. 5015 1. 3280±0. 3963 0. 1848±0. 2120 0. 2704±0. 3024 47. 41
中甸格咱 GZ 1. 6379±0. 4827 1. 4009±0. 3786 0. 2330±0. 2013 0. 3463±0. 2866 63. 79
中甸纳帕海 NPH 1. 6034±0. 4913 1. 3397±0. 3582 0. 2026±0. 1949 0. 3056±0. 2803 60. 34
中甸尼西 NX 1. 5603±0. 4985 1. 3856±0. 3920 0. 2197±0. 2110 0. 3221±0. 3014 56. 03
德钦书松 SHS 1. 5603±0. 4985 1. 3688±0. 4001 0. 2083±0. 2129 0. 3058±0. 3020 56. 03
维西拉波罗 LBL 1. 4224±0. 4961 1. 2987±0. 3868 0. 1686±0. 2094 0. 2461±0. 3000 42. 24
维西垛垛 DD 1. 4052±0. 4931 1. 2777±0. 3722 0. 1587±0. 2043 0. 2328±0. 2938 40. 52
木里瓦厂 MW 1. 3534±0. 4801 1. 2301±0. 3573 0. 1319±0. 1934 0. 1951±0. 2784 35. 34
木里沙湾 M S 1. 1897±0. 3937 1. 1217±0. 2825 0. 0700±0. 1553 0. 1037±0. 2250 18. 97
居群水平 M ean 1. 4461±0. 4596 1. 2884±0. 3665 0. 1657±0. 1854 0. 2448±0. 2844 44. 61
物种水平 A t species level 1. 7931±0. 4068 1. 5140±0. 3697 0. 2947±0. 1882 0. 4355±0. 2610 79. 31
迁地保护居群 KM 1. 5776±0. 4961 1. 3637±0. 3970 0. 2070±0. 2093 0. 3063±0. 2961 57. 76
Na, Ob served num ber of a lleles;Ne, E ffective number of alleles;H , Nei′s(1973) gene d iversi ty;I, Sh annon′s in form ation index;PPB , Percentage of
polymorph ic loc.i
图 2　滇牡丹的 UPGMA聚类图(居群代号同表 1)
F ig. 2　UPGMA dendrogram o f populations ofPaeonia delavay i based on Nei′s(1972) genetic distance. Population codes are g iven in
Table 1.
2期 杨淑达等:滇牡丹遗传多样性的 ISSR分析 109　
居群间的基因流 (Nm )较小 ,仅为 0. 3248。
2. 3　聚类分析
在 UPGMA聚类图中 ,云南的居群聚在一起而
与四川的居群 (MW 、MS ,原 P. lutea)分开;在云南
的居群中 ,花色均为黄色 (XSH、SM 、C J、HDB ,原 P.
lutea)、金黄色 (NX、 SHS ,原 P. trollioides)或白色
(LBL、DD,原 P. potanini .f alba)的居群以及迁地
保护居群 (KM)聚在一起 , 与花色为紫色 (LGH、
GHZ、MNP, 原 P. delavay i)或混有紫色 、橙色 (P.
potanini)、黄色(TGC、GZ、NPH)的居群分开(图 2)。
3　讨论
3. 1　滇牡丹的遗传多样性和遗传结构
普遍认为稀有的或分布区狭窄的物种遗传多样
性水平偏低 (H ickey et a l. , 1991;Swensen et al. ,
1995)。然而 ,近年来有研究发现一些特有和濒危
物种仍然保持着高水平的遗传变异 (Rich ter et al. ,
1994;Sm ith＆ Pham , 1996;Ge et al. , 1997;Ayres
＆ Ryan, 1999;K ang et a l. , 2000;Helenurm , 2001;
Zawko et a l. , 2001)。本文通过对滇牡丹 16个自然
居群的 ISSR分析得到多态位点百分率 (PPB )为
79. 31%,表明滇牡丹虽然为分布区狭窄的特有种 ,
但是与一些典型稀有和濒危的物种相比 ,遗传多样
性并不低 ,比一些典型濒危植物的多态位点百分率
要高得多 , 如贵州苏铁 (Cycas guizhouensis)只有
35. 90%(X iao et al. , 2004),银杉 (Cathaya argyro-
phy lla)仅为 32%(W ang et a l. , 1997)。
龚洵等 (2003)从地理分布 、生境 、形态 、繁殖生
物学特性 、迁地保护效果等方面对滇牡丹的多样性
进行了评估 ,也推断滇牡丹可能具有较高的遗传多
样性。形态多样性是遗传多样性的表现形式之一 。
滇牡丹的形态性状表现出极高的多样性 ,从植株高
矮 、叶形 、苞片和萼片数量到花色都表现出很大的变
异 ,且这些变异不仅存在于居群间 ,而且存在于居群
内 。 S tern(1946)、方文培(1958)等人曾根据花色等
性状将滇牡丹分为 5个类群 , 而 Hong等 (1998,
2001)将其归并为一个分类单元 。本研究的 UPG-
MA聚类结果(图 4)并不支持将滇牡丹分为 5个类
群 ,而支持 Hong等 (1998)将其归并为一个种的观
点 。
野外调查发现 ,云南中部居群的形态比较一致 ,
只有云南中甸居群的形态变异较大 ,如 TGC 、GZ、
NPH等居群。因此从花色等形态变异特征来看 ,不
能截然把它们分为 5个类群。其中以中甸格咱居群
(GZ)形态变异最大 ,本文的研究结果也表明该居群
的遗传多样性水平最高 。
滇牡丹居群之间存在较大的遗传分化 ,其基因
分化系数 GST(0. 4349)几乎是 Ham rick等 (1992)得
出的平均值 (0. 2280)的 2倍 。其成因可能有以下
几点:(1)牡丹类植物主要靠飞行能力较弱的昆虫
传粉 ,且种子较大 ,种子散布主要依靠重力 (罗毅波
等 , 1998)。在居群水平上 ,繁育系统是影响遗传分
化的重要因素 (葛颂 , 1994),由弱飞行能力的动物
授粉和靠种子迁移的植物居群之间的遗传分化显著
(Av ise, 1994)。 (2)滇牡丹居群间的地理距离普遍
较大 ,例如大理花甸坝居群与昆明附近居群的直线
距离在 100 km以上 ,而与丽江居群的直线距离也在
50 km以上 ,阻碍了居群间的基因交流 。 (3)滇牡丹
的无性繁殖能力较强 ,使居群之间无法进行基因交
流。 (4)滇牡丹的分布区域属于横断山区的东南边
缘 ,海拔 1900 - 3600 m ,是横断山区高山深谷地形
最典型的区域 。随着海拔的升高 ,气候 、植被和土壤
等也呈现明显的垂直变化 。这种特殊的地形和生
境 ,造成滇牡丹居群间个体迁移率小 ,基因流偏小 ,
从而形成了居群间较大的遗传分化。
3. 2　基于遗传多样性对滇牡丹现状的评估
物种的遗传多样性水平可以为其现状和保护价
值的评估以及迁地保护提供非常重要的信息 (Hog-
bin＆ Peakall, 1999;Baw a＆A sh ton, 1991;Ham rick＆
God t, 1996)。本研究表明 ,滇牡丹维持了较高的遗
传多样性水平 。同时 ,对有滇牡丹记录地点的调查
表明 ,没有一处灭绝 ,大多数的居群繁衍更新良好 ,
如中甸格咱 (GZ)、中甸尼西 (NX)等居群个体数目
均在千株以上 。以上结果支持了龚洵等 (2003)对
滇牡丹现状评估的观点 ,即滇牡丹拥有较高的遗传 、
生境和形态的多样性 ,具有较强的适应能力和进化
潜力 ,并不处于濒危境地;最主要的威胁可能是人
为造成的生境破坏和滥挖滥采。
3. 3　迁地保护的遗传风险分析
Franke l等(1995)指出:50个个体被认为是维
持足够等位基因丰度的最小有效居群;而有效居群
大小为 500个个体才足以维持居群内数量性状的遗
传变异 ,以及居群对未来环境变化的适应能力。从
遗传多样性的有效保护上来说 ,迁地保护居群的遗
110　 生 物 多 样 性　　B iodiversity Science 13卷
传多样性应达到或至少接近物种水平上的遗传多样
性 。尽管迁地保护的滇牡丹居群 (KM )的个体数在
50株以上 ,但其遗传多样性水平 (PPB =57. 76%)
比格咱 (63. 79%)和纳帕海 (60. 34%)等居群的遗
传多样性要低;从物种水平看 ,仅占该类群多态位点
百分率 (79. 31%)的 72. 82%。也就是说迁地保护
居群仅保护了一部分遗传多样性。
从迁地保护种源来分析 , KM居群主要来自云
南中部地区 ,因为从该地区引种较方便 ,且生境比较
相似 ,种质易于保存;而从云南西北部引种相对较困
难 ,且生境差异大 ,难以保存。 UPGMA聚类分析结
果也表明 ,迁地保护居群与来自滇中地区的 SM和
C J两个居群遗传距离最近而聚在一起。考虑到迁
地保护的有效性 ,取样时应该把所有居群考虑在内 ,
特别对遗传多样性较高的 GZ和 NPH居群应给予
足够的重视 。
参考文献
Av ise JC牗1994牘MolecularMarkers牞Na tura lH istory and Evolu-
tion. Chapman＆H all牞New Yo rk.
Ay res DR牞Ryan FJ牗1999牘G enetic d ive rsity and struc ture o f
the narrow endem icW yeth ia reticulate and its congenerW. bi-
landeri牗A ste raceae牘using RAPD and a llozyme techn iques. A-
m erican Journa l of Botany牞86牞344 -353.
Baw a KS牞Ashton PS牗1991牘Conserva tion o f rare tree s in tropi-
ca l rain fo rest牶a gene tic perspective. In牶Genetic and Conserva-
tion of Rare P lant牗eds Falk DA牞Ho lsingerKE牘牞pp. 62 -71.
Ox fo rd Unive rsity P re ss牞New York.
FangW P牗方文培牘牗1958牘Notes on Chinese paeonies. Acta
Phy totaxonom ica S inica牗植物分类学报牘牞7牞297 - 323. 牗in
Ch inese牘
Feng GM 牗冯国楣牘牗1992牘Paeonia delavayi F ranch. var. lut-
ea牗Delavay i ex F ranch. 牘F inet＆G agnep. In牶China P lan tRed
Da ta Book牗中国植物红皮书牘牗ed. Fu LK牘牞pp. 1牞530 -
531. 牗in Chinese牘
F ranke lOH牞B rown AHD牞Burdou JJ牗1995牘The Conserva tion
of P lant B iodiversity. Cam bridge University P re ss牞Cambridge.
Ge S牗葛颂牘牗1994牘A llozym e and plant evo lu tiona ry bio logy
study. In牶P lant Evolutionary B iology牗植物进化生物学牘牗eds
Chen JK牗陈家宽牘牞Yang J牗杨继牘牘牞pp. 153 - 208. W uhan
University P ress牞W uhan. 牗in Chinese牘
Ge S牗葛颂牘牗2001牘App lication o f DNA m olecu lar ma rker in
conservation b io logy. In牶MolecularMarker in Systema tic and
Evolutionary Botany牗系统与进化植物学中的分子标记牘牗eds
Zou YP牗邹喻苹牘牞Ge S牗葛颂牘牞W ang XD牗王晓东牘牘牞pp.
140 - 149. Sc ience P re ss牞Be ijing. 牗in Chinese牘
Ge S牞Zhang DM牞W angHQ牞Rao GY牗1997牘A llo zym e varia-
tion in Ophiopogon xy lorrhizus牞 an ex treme endem ic spec ies of
Yunnan牞China. Conservation B iology牞11牞562 -565.
Gong X牗龚洵牘牞Gu ZJ牗顾志建牘牞Wu QA牗武全安牘牗1991牘
A cy to log ical study o f seven popula tions in Paeon ia de lavay i
F ranch. var. lutea. Acta Botan ica Yunnanica 牗云南植物研
究牘牞13牞402 - 410. 牗in Ch inese w ith Eng lish abstrac t牘
Gong X 牗龚洵牘牞Pan YZ 牗潘跃芝牘牞Yang ZY 牗杨志云牘
牗2003牘The diversity and va lue of pre sen t situa tion of Paeon ia
delavay i. Acta Botanica Boreali-Occidentalia S inica 牗西北植物
学报牘牞23牞218 - 223. 牗in Ch inese w ith Eng lish abstrac t牘
Gong X牗龚洵牘牞X iao TJ牗肖调江牘牞Gu ZJ牗顾志建牘牞Lu YX
牗鲁元学牘牗1999牘G iem sa C-banding patterns in eight popu la-
tions of Paeonia delavayi F ranch. var. lutea. Acta Botanica
Yunnan ica 牗云南植物研究牘牞21牞477 - 482. 牗in Chinese w ith
Eng lish abstrac t牘
H am rick JL牞GodtM J牗1996牘Conservation gene tics o f endem ic
plan t species. In牶Conservation Genetics牗eds Avise JC牞H am-
rick JL牘牞pp. 281 - 304. Chapman and H a ll牞New Yo rk.
H am rick JL牞GodtM J牞Sherm an-B roy les SL牗1992牘Factors in-
fluencing leve ls o f genetic diversity in woody p lant species. New
Forests牞6牞95 - 124.
H e lenurm K牗2001牘H igh leve ls o f gene tic po lymo rph ism in the
insular endem ic herb Jepsonia m alvifolia. Journal of Heredity牞
92牞427 - 432.
H ickey RJ牞VincentMA牞Gutm ann SI牗1991牘Gene tic va ria tion
in runn ing buffals clove rTrifolium soloniferum牞Fabaceae. Con-
serva tion B iology牞5牞309 -316.
H ogbin PM牞Peakall R牗1999牘Eva lua tion o f the con tribution of
gene tic resea rch to them anagem ent of the endange red p lantZ ie-
ria prostrata. Conservation B iology牞13牞514 - 522.
H ong DY牞Pan KY牗2001牘Paeon iaceae. In牶F lora of Ch ina.
Vo.l 6牗edsWu ZY牞Pe ter HR牘. Sc ience P ress牞Be ijing牞 and
M issouri Bo tanica lGa rden P ress牞S.t Louis.
H ong DY牞Pan KY牞Yu H 牗1998牘Taxonom y o f the Paeon ia
delavay i com plex牗Paeon iaceae牘. Anna ls of theM issouri Botan i-
ca l Garden牞85牞554 -564.
Kang U牞Chang CS牞K im YS牗2000牘Gene tic struc ture and con-
se rva tion conside ra tions of ra re endem icAbeliophy llum d istichum
Naka i牗Oleaceae牘 in Ko rea. Journa l of P lant R esearch牞113牞
127 - 138.
Luo YB牗罗毅波牘牞Pei YL牗裴颜龙牘牞Pan KY 牗潘开玉牘牞
H ong DY牗洪德元牘牗1998牘A study on po llination bio logy of
Paeonia suffru ticosa subsp. spontanea牗Paeoniaceae牘. Acta Phy-
totaxonom ica S in ica牗植物分类学报牘牞36牞134 - 144. 牗in Chi-
nese w ith Eng lish abstract牘
Nagaoka T牞Og ihara Y牗1997牘App licab ility o f in te r-simp le se-
quence repeat po lym orph ism in wheat fo r use a s DNA m arke rs in
2期 杨淑达等:滇牡丹遗传多样性的 ISSR分析 111　
comparison to RFLP and RAPD m arkers. Theoretica l and Ap-
plied Genetics牞93牞133 -139.
R ich te r TS牞Soltis PS牞So ltis DE牗1994牘Gene tic varia tion w ith-
in and among populations of the narrow endem icDelphin ium
viridescens牗Ranuncu laceae牘. Am erican Journa l of B otany牞
81牞1070 - 1076.
Sm ith JF牞Pham TV牗1996牘Genetic d ive rsity of the narrow en-
dem ic Allium aaseae 牗Alliaceae牘. Am erican Journa l of
Botany牞83牞717 -726.
S te rn FC 牗1944牘Geographical distribu tion of the genus Paeo-
n ia. P roceed ings of the Linnean Society of London牞155牞76
- 80.
S te rn FC牗1946牘A S tudy of theGenus Paeon ia. The Roya lH or-
ticulture Soc ie ty牞London.
Swensen SM牞 A llan G J牞 How e M牞 Elisens W J牞 Junak SA
牗1995牘Gene tic analysis of the endangered island endem ic
Ma lacothamnus fasciculatus牗Nu t.t牘 G reen var. nesiotic
牗Rob. 牘Kearn牗M alvaceae牘. Conservation B iology牞9牞404
- 415.
W ang JB牗王建波牘牗2002牘 ISSR m arke rs and their app lications
in p lant gene tics. Hereditas牗遗传牘牞24牞613 - 616. 牗in
Chine se w ith Eng lish abstrac t牘
W ang X-Q牞Zou YP牞Zhang DM牞Hong DY牞L iu ZY 牗1997牘
Gene tic diversity ana lysis by RAPD inCa thaya argyrophy l-
la Chun et Kuang. Science in Ch ina牞40牞91 - 97.
X iao LQ牞Ge XJ牞Gong X牞Hao G牞Zheng SX牗2004牘 ISSR va r-
ia tion in the endange red plan tCycas guizhouensis牗Cyca-
daceae牘. Anna ls of Botany牞94牞1 - 6.
Yeh FC牞Yang RC牞Boy le TBJ牞Ye ZH牞M ao JX牗1997牘POP-
GENE牞 the U ser-friendly Shareware for Popu lation Genetic
Ana ly sis. M olecu lar B io logy and B iotechno logy C en tre牞U-
niversity of A lberta牞Edm on ton牞A lberta牞Canada.
Zaw ko G牞K rau ss SL牞D ixon KW牞S ivasitham param K 牗2001牘
Conservation genetics o f the ra re and endangered Leuco-
pogon obtectus牗E ricaceae牘. Molecu lar E cology牞10牞2389
- 2396.
Zhang ZH 牗张志红牘牞Tan FX牗谈凤笑牘牞H e HH 牗何航航牘牞
Wu LH牗吴令辉牘牞Zhong CR牗钟才荣牘牞Shi SH牗施苏华牘
牗2004牘. Optim iza tion o f ISSR ana lysis for E xcoecaria
agollocha L. Acta S cien tiarum Naturalium Universitatis Su-
nya tsen i牗中山大学学报牗自然科学版牘牘牞43牞63 - 66.
牗in Chinese w ith Eng lish abstract牘
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