全 文 ：不同激素配比对荷包花组织培养的影响
章玉平　(广州城市职业学院生物与环境工程系,广东广州 510405)
摘要　研究了不同激素配比对荷包花不定芽诱导、丛生芽增殖和不定芽生根的影响。结果表明:不定芽的诱导以 6-BA 2mg/ L+NAA0.1
mg/L较好 ,丛生芽的增殖以 6-BA 1 mg/L+NAA 0.1mg/L较好 ,不定芽生根以NAA 0.05 mg/ L+IBA 0.5 mg/ L或 IBA 1.0 mg/L较好 ,使用
NAA 0.05 mg/L+IBA 0.5 mg/L时根较粗、数量较多。
关键词　荷包花;激素配比;快速繁殖
中图分类号　Q943.1　　文献标识码　A　　文章编号　0517-6611(2007)15-04440-02
Effect of the Plant Hormone Ratio on Tissue Culture of Calceolaria herbeohybrida
ZHANG Yu-ping　(Department of Biology and Environment Technology ,Guangzhou City Polytechnic, Guangzhou ,Guangdong 510405)
Abstract　Effect of plant hormone ratio on tissue culture of Calceolaria Herbeohybrida was studied.The result showed that MS + 6-BA 2 mg/L+NAA
0.1 mg/L was suited for bud induction;MS+6-BA 1 mg/L+NAA 0.1 mg/Lwas suited for bud multiplication;and 1/2MS+NAA 0.05 mg/L+IBA 0.5
mg/L orMS+IBA 1.0 mg/Lwas suited for root regeneration.
Key words　Calceolaria herbeohybrida;Plant hormone ratio;Rapid propagation
　　荷包花(Calceolaria herbeohybrida Voss)属玄参科蒲包花属
草本花卉。其花形奇特 ,具二唇花冠 ,上唇前伸 ,下唇膨胀成
荷包状 ,向下弯曲;色彩艳丽 ,花色丰富 ,分单色和复色品种 ,
观赏价值较高。目前 ,荷包花主要采用种子繁殖 ,但 F1 种子
价格较昂贵 ,且由于种子细小 ,育苗难度较大 ,成苗率较低。
因此 ,植物组织培养是快速繁殖荷包花的最佳途径[ 1-3] 。笔
者探讨了不同植物激素配比对荷包花组织培养的影响 。
1　材料与方法
1.1　材料　荷包花F1种子的播种苗(泛美种子公司)。
1.2　方法　以幼嫩顶芽或侧芽为外植体。切取带顶芽或腋
芽的嫩枝 ,去掉叶和叶柄 ,经流水冲洗后先用 75%的酒精浸
泡 8～ 10 s ,然后用 0.1%HgCl2 灭菌 7 ～ 8 min ,再用无菌水冲
洗 5～ 6次 ,吸干茎段表面水分 ,把顶芽或侧芽接种到诱导培
养基中进行培养。不定芽的诱导和丛生芽的增殖采用MS为
基本培养基 ,添加不同浓度的 6-BA和NAA 。①不定芽诱导
阶段。6-BA浓度分别设 0.5、1.0、2.0、3.0、5.0 mg/L 5个处
理 ,NAA设0.1、0.2 mg/L 2个处理;②丛生芽增殖阶段 6-BA
浓度分别设 0.1、0.5、1.0 、2.0、3.0 mg/L 5个处理 ,NAA设
0.1、0.2 mg/L 2个处理;③不定芽生根阶段。采用 1/2 MS为
基本培养基 ,分别添加不同浓度的NAA或 IBA ,或同时添加
NAA 、IBA ,以不添加任何激素为对照。单独使用激素时NAA
的浓度分别设 0.1、0.2、0.5 mg/L 3个处理;IBA设 0.2、0.5、
1.0 mg/L 3个处理;2种激素组合设NAA 0.1+IBA 0.2 ,NAA
0.1+IBA 0.5 ,NAA 0.1+IBA 1.0 ,NAA 0.05+IBA 0.2 ,NAA 0.05
+IBA 0.5 ,NAA 0.05+IBA 1.0等 6个处理(单位均为mg/L)。
以上各试验 ,附加 3%蔗糖 ,6 g/L琼脂 , pH值 5.4 ,在温度为(25
±1)℃,光强为 2 000 lx ,光照 12 h/d的环境条件下进行培养。
2　结果与分析
2.1　不同激素配比对荷包花顶芽和侧芽诱导不定芽的影响
　顶芽或侧芽接种到不定芽诱导培养基 ,7 d后部分处理顶
芽和侧芽开始生长 , 15 d后处理②、③、④、⑦、⑧、⑨中顶芽
或侧芽有不同程度的生长 ,其中以处理③和⑧较好 ,其不定
作者简介　章玉平(1968-),男 ,江西新建人 ,硕士,副教授 ,从事植物生
理学和花卉学的教研工作。
收稿日期　2007-02-16
芽诱导率分别达 60%和 50%。这表明 6-BA的浓度在 1 ～ 3
mg/L时有利于荷包花不定芽的诱导 ,其中以 2 mg/L为最佳 ,低
于 0.5mg/L或高于5.0 mg/L均不利于不定芽的诱导。NAA低
浓度(0.1 mg/L)比高浓度(0.2mg/L)利于诱导不定芽(表 1)。
　　表1 不同激素配比诱导不定芽的效果
处理 激素配比
mg/ L
接种
芽数
诱导不
定芽数
诱导率
%
① MS+6-BA 0.5+NAA 0.1 10 0 　　0
② MS+6-BA 1.0+NAA 0.1 10 3 30
③ MS+6-BA 2.0+NAA 0.1 10 6 60
④ MS+6-BA 3.0+NAA 0.1 10 2 20
⑤ MS+6-BA 5.0+NAA 0.1 10 0 0
⑥ MS+6-BA 0.5+NAA 0.2 10 0 0
⑦ MS+6-BA 1.0+NAA 0.2 10 3 30
⑧ MS+6-BA 2.0+NAA 0.2 10 5 50
⑨ MS+6-BA 3.0+NAA 0.2 10 2 20
⑩ MS+6-BA 5.0+NAA 0.2 10 0 0
　　表2 不同激素配比对荷包花丛生芽增殖的影响
处理 激素配比∥mg/ L 单芽增殖倍数
① MS+6-BA 0.1+NAA 0.1 1.5
② MS+6-BA 0.5+NAA 0.1 2.1
③ MS+6-BA 1.0+NAA 0.1 5.3
④ MS+6-BA 2.0+NAA 0.1 3.3
⑤ MS+6-BA 3.0+NAA 0.1 1.9
⑥ MS+6-BA 0.1+NAA 0.2 1.5
⑦ MS+6-BA 0.5+NAA 0.2 1.8
⑧ MS+6-BA 1.0+NAA 0.2 4.2
⑨ MS+6-BA 2.0+NAA 0.2 3.0
⑩ MS+6-BA 3.0+NAA 0.2 1.3
2.2　不同激素配比对荷包花丛生芽增殖的影响　将获得的
无菌新芽切下转入丛生芽增殖培养基培养 ,5周后统计芽的
增殖情况。表 2表明 ,处理③最好 ,增殖效率达 5.3倍 ,可满
足生产上的需要。6-BA低浓度(<1mg/L)时 ,随浓度的增大
丛生芽的增殖率提高;6-BA浓度超过 1 mg/L时 ,随浓度增大
对丛生芽增殖的抑制效应增强 。0.1 mg/L NAA对丛生芽的
增殖效应优于 0.2 mg/L ,表明荷包花丛生芽的增殖与 6-BA/
NAA的大小有关 ,6-BA/NAA比值大时促进丛生芽的增殖。
安徽农业科学 , Journal of Anhui Agri.Sci.2007, 35(15):4440-4441　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　责任编辑　罗芸　责任校对　李洪
DOI :10.13989/j.cnki.0517-6611.2007.15.023
　　表 3 不同激素对不定芽生根的影响
处理 激素配比
mg/ L
单芽生根的
平均数量 根生长情况
① 1/ 2MS+NAA 0.1 5.5 根较粗、短 ,数量较多
② 1/ 2MS+NAA 0.2 2.3 根较粗、短 ,数量很少
③ 1/ 2MS+NAA 0.5 1.9 根较粗、短 ,数量很少
④ 1/ 2MS+IBA 0.2 3.5 根细长 ,数量较少
⑤ 1/ 2MS+IBA 0.5 4.6 根细长 ,数量居中
⑥ 1/ 2MS+IBA 1.0 7.5 根细长、数量多
⑦ 1/ 2MS+NAA 0.1+IBA 0.2 6.5 根粗壮、数量多
⑧ 1/ 2MS+NAA 0.1+IBA 0.5 4.5 根粗壮、数量居中
⑨ 1/ 2MS+NAA 0.1+IBA 1.0 3.7 根粗壮、数量少
⑩ 1/ 2MS+NAA 0.05+IBA 0.2 5.5 根粗壮、数量较多
1 1/ 2MS+NAA 0.05+IBA 0.5 7.8 根粗壮、数量最多
12 1/ 2MS+NAA 0.05+IBA 1.0 5.8 根粗壮、数量较多
CK 1/ 2MS 2.6 根较少、生长慢
2.3　不同激素配比对荷包花不定芽生根的影响　将带有 2
～ 3片叶的不定芽(或称无根苗)切下 ,接入生根培养基中 ,10
～ 15 d左右开始长出不定根 ,25 d生根率达 95%以上 。其中
处理⑥、⑦、 1较好 ,表明NAA 0.1 ～ 0.5 mg/L时随浓度增加
其抑制生根的作用增强 ,IBA 0.2～ 1.0mg/L时随浓度增加其
促进生根的作用增强。但单独使用 NAA时 ,根的数量较少
但较粗 、短 ,单独使用 IBA时 ,根的数量较多且较细 、长 。使
用NAA 0.05 mg/L+IBA 0.5 mg/L时根数量最多且较粗壮。
3　结论
荷包花在组培过程中对激素比较敏感 ,激素量过低或过
高均不利于其诱导 、增殖和生根。诱导不定芽阶段以 6-BA
2 mg/L+NAA 0.1 mg/L较好;不定芽的增殖阶段前期以 6-
BA1 mg/L+NAA 0.1mg/L较好 ,后期随植物体内 6-BA的逐
渐累积 ,可适当降低 6-BA的用量;在不定芽的生根过程中使
用NAA 0.05 mg/L+IBA 0.5 mg/L或 IBA 1.0 mg/L较好 ,尤
其使用NAA 0.05 mg/L+IBA 0.5 mg/L时根较粗 、数量较多。
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(上接第 4425页)
的 ,至于要比较几个菌株的数量差异 ,需要保持接种量的一
致 ,或选择定量测定的方法 。
从整个曲线的稳定性来看 ,比色法测定的结果较稳定 ,
需要准确测定和比较菌株的数量以及种类的多少 ,需要用
高效液相色谱仪或液质联用色谱 ,另外也需要知道接种的
数量 ,或者使用每克干细胞含量 ,而不用每毫升的含量作
单位。
微生物产生植物激素 ,研究最多的是生长素(IAA)。已
经知道包括荧光假单胞杆菌(Pseudomonas.spp)在内的许多
根际微生物可以产生生长素 、赤霉素和细胞激动素等物质 ,
色氨酸(生长素的前体)能由植物根分泌 ,也可由微生物的
代谢产物或微生物自溶而得 ,它可以促进生长素的合成[ 9] 。
3　讨论
目前 ,有关微生物肥料促进植物生长的机理研究 ,微生
物活动产生的植物激素 、酸性物质以及维生素都能不同程
度地刺激 、调节植物的生长 。
许多研究表明 ,植物生长发育过程中 ,共生微生物产生
的植物激素对其生长起重要作用。对根际促生细菌产生
IAA的作用及机制的研究较为深入 ,IAA的重要作用不仅在
于其直接促生作用 ,即通过与质膜上质子泵结合使之活化 ,
改变细胞内环境 ,导致细胞壁糖溶解 、可塑性增加以及促进
RNA 、蛋白质的合成 ,最终增加细胞体积和质量以达到促生
的作用 。同时可使色氨酸(Trp)类似物解毒 ,减轻其毒害作
用。另外 , IAA还可以抑制植物防卫系统酶 ,如几丁质酶 、β-
1 ,3葡聚糖酶等的活性 ,使有益细菌更易定殖于植物。
菌肥发酵液中植物激素的测定结果是将蜡状芽孢杆菌
和胶质芽孢杆菌分别发酵 24 h后 ,等体积混合发酵液 ,类吲
哚乙酸浓度为 5.82 μg/ml。徐幼平报道阴沟肠杆菌在发酵
48 h ,培养基中添加 0.2%色氨酸时 ,发酵液中 IAA含量可
达 904.38 mg/L ,与不加色氨酸的对照相比 ,增加了近 900
倍[ 12] 。其中发酵液稀释 32倍对植物的促进效果最好 ,但该
试验结果只能提高 2倍。
硅酸盐细菌NBT菌株在有氮培养基中 ,能产生并分泌
生长素(IAA),其浓度分别为 0.54 ～ 3.77 nmol/ml 。在培养
的初期 ,发酵液中的含量较少 ,培养 3 d ,虽然细胞数量最
多 ,但发酵液中 IAA的量没有达最大 ,随着培养时间延长 ,
细胞部分衰亡 ,自溶 ,产生的 IAA ,分泌到培养液中 ,使培养
液中的 IAA浓度增加 ,说明 IAA 是在稳定期的后期大量产
生[ 9] 。
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