全 文 ：北方园艺２０１４（２１）：９１～９７ ·生物技术·
第一作者简介：李伟（１９７７－），男，博士，副教授，研究方向为蔬菜学
教研工作。Ｅ－ｍａｉｌ：ｌｉｗ２１＠１６３．ｃｏｍ．
基金项目：贵州大学人才基金资助项目（贵大人基合字（２００７）０２１
号）；贵州省农业攻关资助项目（黔科合ＮＹ［２０１３］３０２４号）。
收稿日期：２０１４－０７－１４
朝天椒子叶离体培养与植株再生体系的建立
李 伟１，敖 艳 飞１，何 文 超２，杨 增 杰１，赵 利 平１
（１．贵州大学 农学院，贵州 贵阳５５００２５；２．玉屏县农牧科技局，贵州 玉屏５５４０００）
摘 要：以贵州黎平朝天椒地方种为试材，取其无菌苗子叶作外植体，采用植物固体培养基
组织培养法，研究了培养基激素配比、无菌苗生理年龄、子叶部位等对朝天椒子叶的离体接种、诱
导愈伤、不定芽分化、芽茎伸长、诱导生根、驯化移栽、成苗等离体培养及植株再生阶段的影响。
结果表明：朝天椒子叶适宜芽诱导分化的培养基为ＭＳ＋６－ＢＡ ２ｍｇ／Ｌ＋ＮＡＡ ０．１ｍｇ／Ｌ，芽分化
率达１００％；适宜芽伸长的培养基为ＭＳ＋ＫＴ ２ｍｇ／Ｌ，芽伸长率可达５０％；适宜生根的培养基为
ＭＳ无激素培养基，生根率可达４４％。单个外植体平均分化含１５～１８个不定芽的芽丛（１４～１６个
芽茎），出苗６～７株。从子叶外植体接种至再生苗出瓶需５０～５５ｄ，再生苗移栽成活率达９８％。
该研究构建了贵州朝天椒的高效离体培养植株再生体系，为朝天椒的组织快繁和遗传转化奠定
了重要的基础。
关键词：朝天椒；子叶；激素配比；离体培养；植株再生
中图分类号：Ｓ ６４１．３０３．６ 文献标识码：Ａ 文章编号：１００１－０００９（２０１４）２１－００９１－０７
辣椒（Ｃａｐｓｉｃｕｍ ａｎｎｕｕｍＬ．）是一种重要的茄科蔬菜
作物。我国辣椒播种面积约１．６×１０６ ｈｍ２，仅次于大白
菜，年总产量３．１４×１０７ｔ，经济总产值１ ０００亿元以上，居
蔬菜首位。辣椒已成为我国许多地区及省市县的重要
经济支柱作物。辣椒产业的可持续、健康发展，得益于
辣椒脱毒快繁、杂种优势固定、种质保存利用及新品种
选育等方面的重要保障，而辣椒组织培养再生体系的建
立，有利于以上工作的开展［１］，也有助于后期的遗传转
化、基因转移工作，进而通过细胞工程、基因工程等遗传
改良技术培育辣椒新品种。目前，关于辣椒离体培养与
植株再生的研究报道已有不少，但与马铃薯、番茄相比，
其芽诱导分化率与植株再生频率偏低，遗传转化仍难以
实现［２］。其中，辣椒不定芽难以伸长的问题较为突
出［３－４］，甚至仅停留在芽诱导阶段而不能进一步生长。
同时，还存在基因型依赖性强、再生周期长等问题。
国内外对辣椒组织培养的研究主要集中在品种基
因型［５－９］、培养基配方［３，１０－１５］与外植体类型等方面。外植
体类型主要有子叶［１６－２０］、带柄子叶［２１－２２］、茎尖［２３－２５］、叶
片［３，２６－２７］、下 胚 轴［２８－３１］、腋 芽［３２］、组 培 苗 茎 段［３３］、根
段［３４－３５］、子叶原生质体［１７］、半粒种子［８］等。
全国干椒栽培面积中朝天椒已跃居首位。随着国
外大量朝天椒品种的涌入与种植，使得一些朝天椒地方
种质正在加速流失、消亡。面对朝天椒品种退化严重的
生产实际，可通过组培快速挽救、保存、改良品种。目
前，关于朝天椒组培的报道极少，李明军等［２８］以朝天椒
下胚轴为外植体，进行组培获得再生苗。该研究以贵州
朝天椒子叶为外植体，通过选取不同苗龄子叶、子叶不
同部位及不同培养基配方来筛选、建立朝天椒的离体高
效再生体系，以期为种质保存利用等奠定基础。
１ 材料与方法
１．１ 试验材料
以贵州黎平朝天椒地方种为试材，种子采自２０１２
年自交留种地。
１．２ 试验方法
试验于２０１２年８月至２０１３年１０月在贵州大学南
校区农学院园艺系实验室进行，再生苗驯化后种植在南
校区蔬菜园实验场。
１．２．１ 无菌苗外植体的制备 典型、饱满、色泽鲜亮、无
霉、无病虫朝天椒种子，投入５０～５５℃热水中浸种１０～
１５ｍｉｎ，不断搅动，补充热水维持此水温，之后自然摆放
降至室温，继续浸泡８～１０ｈ后，用清水洗净种皮上粘
液。转入超净工作台，以７０％～７５％酒精对种子消毒
３０ｓ，后用０．１％ ＨｇＣｌ２ 表面灭菌８ｍｉｎ，再用无菌水冲
洗５～６次。同步准备好容量１５０ｍＬ三角瓶，向其内倒
入约２５ｍＬ ＭＳ培养基（附加３％蔗糖、０．７５％琼脂，ｐＨ
调至５．８），放入灭菌锅内１２３℃（０．１２ＭＰａ）下消毒
２０ｍｉｎ，取出冷却，室温下放置３～４ｄ，未长菌斑瓶即可
１９
·生物技术· 北方园艺２０１４（２１）：９１～９７
备用。将上述处理好种子无菌操作接种到三角瓶内培
养基上，每瓶接种５粒，瓶口用封口膜密封，最后置入光
照培养箱内（光照强度２ ５００ｌｘ、光照时间１２ｈ／ｄ、光培
养温度（２５±１）℃、暗培养温度（２０±１）℃）进行培养。约
２０ｄ大部分已萌生，待无菌苗长至５ｃｍ（约４０ｄ）时，剪
取其子叶作外植体。
１．２．２ 不定芽的诱导分化 将无菌苗子叶切成３ｍｍ×
（３～５）ｍｍ小块，外植体切口应尽量平整，每个三角瓶
接种４块，每个处理接种４瓶，４次重复，接种于１０种不
同配比芽诱导分化培养基（表１），培养条件同１．２．１，期
间进行１次愈伤组织的继代转接，诱导分化培养阶段，
观察、记载接种外植体形成愈伤组织、发生不定芽等情
况，计算愈伤组织诱导率、芽分化率，筛选出最适芽诱导
分化培养基。
１．２．３ 不定芽的茎伸长 将表１中最适芽诱导分化培
养基所诱导分化出的丛生芽切成３ｍｍ×（３～５）ｍｍ切
块，每个切块约含３～５个芽片，无菌接种到４种芽伸长
培养基（表２）上继续培养，培养条件同１．２．１，每１５ｄ换
瓶继代，生长３０ｄ时进行统计。继代培养阶段，观察、记
载不定芽茎伸长情况，计算不定芽茎伸长率，筛选最适
不定芽伸长培养基。
１．２．４ 小苗的生根与移栽 待表２中最适芽伸长培养
基上芽茎伸长至２～３ｃｍ时，将其自基部切下，移至２种
生根培养基（表４）上进行培养，培养条件同１．２．１，每１５ｄ
换瓶继代，生根培养阶段，观察、记载长根情况，计算生
根率。筛选利于根诱导的生根培养基。长根再生小苗
开瓶练苗２ｄ后，假植于营养钵内，内装含水量６０％营养
土（泥炭土∶珍珠岩＝３∶１），盖塑料薄膜保湿７ｄ逐步
放风揭膜，继续培养１５ｄ后移栽大田，正常栽培管理直
至开花结果。
１．２．５ 适宜苗龄及子叶部位外植体的筛选 以苗龄分
别为４、６、８、１０、１２、１４、１６、１８、２０ｄ无菌苗子叶为试材，选
择、剪取子叶中部、子叶边缘、带柄子叶３种外植体，无菌
接种于表１中最适芽诱导分化培养基上。培养条件同
１．２．１，诱导分化期３０ｄ，筛选出子叶外植体的最适苗龄
及适宜子叶部位。
２ 结果与分析
２．１ 不同培养基对不定芽诱导与分化的影响
从外部形态上看，１～４号培养基的愈伤组织由致密
小颗粒软愈伤组织构成，１、２、３号愈伤组织为白色
（图１），４号愈伤组织为淡黄色，质地疏松，外表比较匀
质，中等大小，生长较慢，培养１５ｄ后开始形成绿色芽点
（图２），培养３０ｄ后分化形成短缩不定芽，但数量很少，
平均每个外植体分化２～３个不定芽；７号形成白色愈伤
组织后，培养１０ｄ开始形成绿色芽点，培养２０ｄ后分化
形成短缩不定芽，聚生呈芽丛状，分化率１００％，平均每
个能分化１５～１８个不定芽；５、６、１０号愈伤组织为淡黄
色，８、９号为浅绿色，愈伤组织较小，生长缓慢，培养３０ｄ
后分化形成短缩不定芽，平均每个愈伤组织分化４～５
个不定芽（图３）。
图１ 子叶块产生愈伤组织（接种后７ｄ）
Ｆｉｇ．１ Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｏｆ ｃａｌｕｓ ｆｒｏｍ ｃｏｔｙｌｅｄｏｎ ｐｉｅｃｅ
（７ｄａｙｓ ａｆｔｅｒ ｉｎｏｃｕｌａｔｅｄ）
图２ 愈伤组织分化出不定芽（接种后１５ｄ）
Ｆｉｇ．２ Ａｄｖｅｎｔｉｔｉｏｕｓ ｂｕｄｓ ｄｉｆｅｒｅｎｔｉａｔｅｄ ｆｒｏｍ ｃａｌｕｓ
（１５ｄａｙｓ ａｆｔｅｒ ｉｎｏｃｕｌａｔｅｄ）
图３ 不定芽形成芽丛
Ｆｉｇ．３ Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｏｆ ｃｌｕｓｔｅｒｅｄ ｂｕｄｓ ｆｒｏｍ ａｄｖｅｎｔｉｔｉｏｕｓ ｂｕｄ
子叶外植体接种在不同培养基上，反应不同，芽诱
导、分化效果存在明显差异。由表１可知，处理１芽分化
率为３０．０％，处理７芽分化率最高达１００％，不定芽生长
势最好。处理２～６芽分化率介于二者之间，不难发现，
２９
北方园艺２０１４（２１）：９１～９７ ·生物技术·
从处理１到处理７，随着６－ＢＡ浓度的增大与ＮＡＡ浓度
的减小，即随６－ＢＡ／ＮＡＡ浓度比值的增大，子叶外植体
经愈伤诱导分化出不定芽的频率呈增大趋势。而ＩＡＡ
与６－ＢＡ组合中，较高ＩＡＡ浓度、添加ＡｇＮＯ３ 的处理９
芽分化率较处理８高出１８．３百分点。ＭＳ中仅配入ＺＴ
的处理１０芽分化率为５０．０％。
表１ 不同培养基配比下子叶诱导愈伤、分化不定芽的差异
Ｔａｂｌｅ １ Ｄｉｆｅｒｅｎｃｅｓ ｏｎ ｃａｌｕｓ ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ ａｎｄ ａｄｖｅｎｔｉｔｉｏｕｓ ｂｕｄ ｄｉｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ ｕｎｄｅｒ ｄｉｆｅｒｅｎｔ ｐｒｏｐｏｒｔｉｏｎｉｎｇ ｍｅｄｉａ
处理
Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ
ＭＳ＋生长调节剂组合
ＭＳ＋Ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎｓ ｏｆ ｇｒｏｗｔｈ ｒｅｇｕｌａｔｏｒｓ／（ｍｇ·Ｌ－１）
ＮＡＡ ＩＡＡ ６－ＢＡ ＺＴ ＡｇＮＯ３
子叶外植体数
Ｎｕｍｂｅｒ ｏｆ ｃｏｔｙｌｅｄｏｎ
ｅｘｐｌａｎｔ／个
愈伤组织数
Ｎｕｍｂｅｒ ｏｆ
ｃａｌｕｓ／个
愈伤组织诱导率
Ｐｅｒｃｅｎｔ ｏｆ ｃａｌｕｓ
ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ／％
分化外植体数
Ｎｕｍｂｅｒ ｏｆ ｄｉｆｅｒｅｎｔｉａｔｅｄ
ｅｘｐｌａｎｔ／个
不定芽丛分化率
Ｐｅｒｃｅｎｔ ｏｆ ａｄｖｅｎｔｉｔｉｏｕｓ
ｂｕｄｓ ｄｉｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ／％
１ ２．０ ０ ０．１ ０ ０ ６０ ５８ ９６．７ １８ ３０．０
２ ２．０ ０ ０．５ ０ ０ ６０ ６０ １００ ２５ ４１．７
３ ２．０ ０ １．０ ０ ０ ６０ １０ １６．７ ３０ ５０．０
４ ２．０ ０ ２．０ ０ ０ ６０ ４５ ７５．０ ４５ ７５．０
５ １．０ ０ ２．０ ０ ０ ６０ ３６ ６０．０ ３６ ６０．０
６ ０．５ ０ ２．０ ０ ０ ６０ ４０ ６６．７ ４０ ６６．７
７ ０．１ ０ ２．０ ０ ０ ６０ ６０ １００ ６０ １００
８ ０ ０．３ ５．０ ０ ０ ６０ ４０ ６６．７ ４０ ６６．７
９ ０ ０．６ ５．０ ０ ５．０ ６０ ３５ ５８．３ ５１ ８５．０
１０ ０ ０ ０ ２．０ ０ ６０ ３０ ５０．０ ３０ ５０．０
２．２ 不同培养基对不定芽茎伸长的影响
由表２可知，伸长培养基中加入１种生长调节剂
时，处理２丛生芽切块芽茎分化伸长率高于处理１。处
理２芽茎伸长率也高于处理３、４。不难发现，处理３、４
配方中也含有ＫＴ，加入ＮＡＡ后，表现出抑制芽茎分化
伸长的趋势，而处理４中加入ＰＰ３３３后抑制程度有所减
轻。单个丛生芽切块伸长芽茎比率也反映出以上变化
趋势。
结合表２分析表３可知，处理２所产生的不定芽
茎伸长数最多达５５个，伸长效果最明显，其高大于
１ｃｍ的芽茎占到５８％，而处理３的芽茎伸长数仅为４个
（图４）。
２．３ 不同培养基对芽茎生根的影响
将伸长芽茎自基部剪断，转置生根培养基中培养
（图５），２种生根培养基中芽茎的生根效果不同。由表４
可以看出，处理１ＭＳ培养基中的芽茎生根率高于处理２
（ＭＳ＋ＫＴ ２ｍｇ／Ｌ＋ＮＡＡ ０．０２ｍｇ／Ｌ）。
图４ 丛生芽切块不定芽伸长分化
Ｆｉｇ．４ Ｅｌｏｎｇａｔｉｏｎ ａｎｄ ｄｉｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ ｏｆ ａｄｖｅｎｔｉｔｉｏｕｓ ｂｕｄ ｆｒｏｍ
ｃｌｕｓｔｅｒｅｄ ｂｕｄｓ ｐｉｅｃｅ
表２ 不同培养基配比下丛生芽切块不定芽伸长分化率的差异
Ｔａｂｌｅ ２ Ｄｉｆｅｒｅｎｃｅｓ ｏｎ ｐｅｒｃｅｎｔａｇｅ ｏｆ ａｄｖｅｎｔｉｔｉｏｕｓ ｂｕｄ ｄｉｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ ａｎｄ ｅｌｏｎｇａｔｉｏｎ ｆｒｏｍ ｃｌｕｓｔｅｒｅｄ ｂｕｄｓ ｐｉｅｃｅ ｕｎｄｅｒ ｄｉｆｅｒｅｎｔ ｐｒｏｐｏｒｔｉｏｎｉｎｇ ｍｅｄｉａ
处理
Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ
ＭＳ＋生长调节剂组合
ＭＳ＋Ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎｓ ｏｆ ｇｒｏｗｔｈ ｒｅｇｕｌａｔｏｒｓ
／（ｍｇ·Ｌ－１）
ＫＴ ＮＡＡ ６－ＢＡ ＰＰ３３３
丛生芽切块外植体数
Ｎｕｍｂｅｒ ｏｆ ｃｌｕｓｔｅｒｅｄ
ｂｕｄｓ ｐｉｅｃｅ ｅｘｐｌａｎｔ
／个
分化外植体数
Ｎｕｍｂｅｒ ｏｆ
ｄｉｆｅｒｅｎｔｉａｔｅｄ
ｅｘｐｌａｎｔ／个
芽块伸长分化率
Ｐｅｒｃｅｎｔ ｏｆ ｂｕｄｓ
ｐｉｅｃｅ ｄｉｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ
／％
不定芽茎伸长数
Ｎｕｍｂｅｒ ｏｆ
ａｄｖｅｎｔｉｔｉｏｕｓ ｂｕｄ
ｅｌｏｎｇａｔｉｏｎ／个
单个丛生芽切块伸长芽茎比率
Ｐｅｒｃｅｎｔ ｏｆ ｅｌｏｎｇａｔｅｄ ｓｉｎｇｌｅ
ｂｕｄ ｆｒｏｍ ｏｎｅ ｃｌｕｓｔｅｒｅｄ
ｂｕｄｓ ｐｉｅｃｅ／％
１ ０ ０ ２ ０ ６０ １５ ２５ １８ １２０
２ ２ ０ ０ ０ ６０ ３０ ５０ ５５ １８３
３ ２ ０．０２ ０ ０ ６０ ６ １０ ４ ６６
４ ２ ０．０２ ０ ０．１ ６０ １８ ３０ ２２ １２２
表３ 不同培养基配比下丛生芽切块不定芽伸长度的差异
Ｔａｂｌｅ ３ Ｄｉｆｅｒｅｎｃｅｓ ｏｎ ｌｅｎｇｔｈ ｏｆ ｅｌｏｎｇａｔｅｄ ａｄｖｅｎｔｉｔｉｏｕｓ ｂｕｄ ｆｒｏｍ ｃｌｕｓｔｅｒｅｄ ｂｕｄｓ ｐｉｅｃｅ ｕｎｄｅｒ ｄｉｆｅｒｅｎｔ ｐｒｏｐｏｒｔｉｏｎｉｎｇ ｍｅｄｉａ
处理
Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ
ＭＳ＋生长调节剂组合
ＭＳ＋Ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎｓ ｏｆ ｇｒｏｗｔｈ ｒｅｇｕｌａｔｏｒｓ／（ｍｇ·Ｌ－１）
ＫＴ ＮＡＡ ６－ＢＡ ＰＰ３３３
不定芽茎伸长数
Ｎｕｍｂｅｒ ｏｆ ａｄｖｅｎｔｉｔｉｏｕｓ
ｂｕｄ ｅｌｏｎｇａｔｉｏｎ／个
芽茎高
Ｈｅｉｇｈｔ ｏｆ ｅｌｏｎｇａｔｅｄ ｂｕｄ／ｃｍ
ｈ＞３／个 ％ １＜ｈ≤３／个 ％ ｈ≤１／个 ％
１ ０ ０ ２ ０ １８ ３ １７ ７ ３９ ８ ４４
２ ２ ０ ０ ０ ５５ ８ １４ ２４ ４４ ２３ ４２
３ ２ ０．０２ ０ ０ ４ １ ２５ ２ ５０ １ ２５
４ ２ ０．０２ ０ ０．１ ２２ ４ １８ ９ ４１ ９ ４１
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·生物技术· 北方园艺２０１４（２１）：９１～９７
表４ 不同培养基配比下芽茎生根率的差异
Ｔａｂｌｅ ４ Ｄｉｆｅｒｅｎｃｅｓ ｏｎ ｐｅｒｃｅｎｔａｇｅ ｏｆ ｒｏｏｔ ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ ｏｆ ｅｌｏｎｇａｔｅｄ ａｄｖｅｎｔｉｔｉｏｕｓ ｂｕｄ ｕｎｄｅｒ ｄｉｆｅｒｅｎｔ ｐｒｏｐｏｒｔｉｏｎｉｎｇ ｍｅｄｉａ
处理
Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ
ＭＳ＋生长调节剂组合
ＭＳ＋Ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎｓ ｏｆ ｇｒｏｗｔｈ ｒｅｇｕｌａｔｏｒｓ／（ｍｇ·Ｌ－１）
ＫＴ ＮＡＡ
芽茎外植体数
Ｎｕｍｂｅｒ ｏｆ ｅｌｏｎｇａｔｅｄ ａｄｖｅｎｔｉｔｉｏｕｓ
ｂｕｄ ｅｘｐｌａｎｔ／个
生根外植体数
Ｎｕｍｂｅｒ ｏｆ ｒｏｏｔｅｄ
ｅｘｐｌａｎｔ／个
生根率
Ｐｅｒｃｅｎｔ ｏｆ ｒｏｏｔ
ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ／％
１ ０ ０ ５０ ２２ ４４
２ ２ ０．０２ ５０ １７ ３４
图５ 伸长芽茎诱导生根
Ｆｉｇ．５ Ｒｏｏｔ ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ ｆｒｏｍ ｅｌｏｎｇａｔｅｄ ｙｏｕｎｇ ｓｔｅｍ ｗｉｔｈ ｂｕｄ
２．４ 练苗及移栽
试验表明，再生苗生长正常，无萎蔫，无病虫害发
生。移栽成活率约为９８％（图６、７）。
图６ 形成完整再生苗
Ｆｉｇ．６ Ｄｅｖｅｌｏｐｅｄ ｉｎｔｏ ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ ｓｅｅｄｌｉｎｇ
图７ 再生苗驯化后移栽
Ｆｉｇ．７ Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔｅｄ ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ ｓｅｅｄｌｉｎｇ ａｆｔｅｒ ａｃｃｌｉｍａｔｉｚａｔｉｏｎ
２．５ 苗龄对子叶芽分化的影响
由表５可知，不同苗龄的朝天椒子叶外植体，其芽
分化率差别较大，随着子叶外植体苗龄的增大，不定芽
分化率呈先增大后减小的趋势。子叶诱导、分化能力以
苗龄１４ｄ最强，且能不经愈伤而直接诱导形成不定芽。
表５ 苗龄对子叶诱导、分化不定芽的影响
Ｔａｂｌｅ ５ Ｅｆｅｃｔ ｏｎ ｃｏｔｙｌｅｄｏｎ ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ ａｎｄ ａｄｖｅｎｔｉｔｉｏｕｓ ｂｕｄ
ｄｉｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ ａｎｄ ｅｌｏｎｇａｔｉｏｎ ｂｙ ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｉｃａｌ ａｇｅｓ ｏｆ ａｓｅｐｔｉｃ ｓｅｅｄｌｉｎｇｓ
苗龄
Ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｉｃａｌ
ａｇｅｓ ｏｆ ａｓｅｐｔｉｃ
ｓｅｅｄｌｉｎｇｓ／ｄ
子叶外植体数
Ｎｕｍｂｅｒ ｏｆ
ｃｏｔｙｌｅｄｏｎ
ｅｘｐｌａｎｔ／个
分化外植体数
Ｎｕｍｂｅｒ ｏｆ
ｄｉｆｅｒｅｎｔｉａｔｅｄ
ｅｘｐｌａｎｔ／个
是否需经过愈伤阶段
Ｗｈｅｔｈｅｒ ｏｒ ｎｏｔ ｔｏ ｂｅ
ｐａｓｓｅｄ ｔｈｒｏｕｇｈ ｔｈｅ
ｓｔａｇｅ ｏｆ ｃａｌｕｓ ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ
不定芽分化率
Ｐｅｒｃｅｎｔ ｏｆ
ａｄｖｅｎｔｉｔｉｏｕｓ ｂｕｄｓ
ｄｉｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ／％
４ ３０ ０ 是 ０．０
６ ３０ ２ 是 ６．７
８ ３０ ６ 是 ２０．０
１０ ３０ ９ 是 ３０．０
１２ ３０ ２３ 否 ７６．７
１４ ３０ ２４ 否 ８０．０
１６ ３０ ２２ 否 ７３．３
１８ ３０ １６ 是 ５３．３
２０ ３０ １０ 是 ３３．３
２．６ 子叶不同部位对芽分化的影响
从表６可以看出，子叶不同部位外植体的芽分化率
存在差异。子叶中部的芽分化率最高，其次是带柄子
叶，而子叶边缘最低。
表６ 子叶不同部位外植体的芽分化率差异
Ｔａｂｌｅ ６ Ｄｉｆｅｒｅｎｃｅｓ ｏｎ ｐｅｒｃｅｎｔａｇｅ ｏｆ ａｄｖｅｎｔｉｔｉｏｕｓ ｂｕｄ
ｄｉｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ ａｎｄ ｅｌｏｎｇａｔｉｏｎ ｂｙ ｄｉｆｅｒｅｎｔ ｐａｒｔｓ ｏｆ ｃｏｔｙｌｅｄｏｎ
子叶部位（１２ｄ苗龄）
Ｐａｒｔｓ ｏｆ ｃｏｔｙｌｅｄｏｎ
（１２ｄａｙｓ ａｇｅｓ ｏｆ
ａｓｅｐｔｉｃ ｓｅｅｄｌｉｎｇｓ）
子叶外植体数
Ｎｕｍｂｅｒ ｏｆ
ｃｏｔｙｌｅｄｏｎ
ｅｘｐｌａｎｔ／个
分化外植体数
Ｎｕｍｂｅｒ ｏｆ
ｄｉｆｅｒｅｎｔｉａｔｅｄ
ｅｘｐｌａｎｔ／个
不定芽分化率
Ｐｅｒｃｅｎｔ ｏｆ
ａｄｖｅｎｔｉｔｉｏｕｓ ｂｕｄｓ
ｄｉｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ／％
边缘 ６０ ３８ ６３．９
中部 ６０ ４７ ７７．６
带柄子叶 ６０ ４３ ７１．６
３ 讨论
３．１ 不同培养基与植株再生
ＮＡＡ、ＩＡＡ都为人工合成的具有较低浓度促进生
长，较高浓度抑制生长的两重性。前者为生长素类似
物，后者为外源生长素。６－ＢＡ为人工合成的细胞分裂
素。该研究子叶愈伤组织一般最先在外植体两端切口
或一端切口处形成，这与赵天红等［３４］研究结果相似。该
试验发现ＩＡＡ与６－ＢＡ相配合可协同促进不定芽分化，
这与辣椒品系１２０［３］、印度辣椒品种Ｕｍｏｒｏｋ［３６］的研究结
４９
北方园艺２０１４（２１）：９１～９７ ·生物技术·
果类似。试验中以６－ＢＡ／ＩＡＡ为２０∶１时，芽诱导分化
频率最高（１００％），这与６－ＢＡ／ＩＡＡ为１０∶１高比值配比
下利于辣椒外植体分化再生的现象［３７］类似。含较高浓
度细胞分裂素６－ＢＡ芽分化培养基有利于子叶外植体芽
的分化，这与彩色辣椒［１２］、羊角椒［１３］子叶外植体不同芽
分化培养基的研究结果类似。过高浓度生长素会抑制
不定芽的形成，可能与生长素使愈伤组织细胞液泡化，
组织进而衰老有关［５］。同样，６－ＢＡ／ＮＡＡ比值越大，越
有利于芽的分化，这与６－ＢＡ／ＮＡＡ为１４∶１高比值下５
个辣椒品种平均芽分化率最高（７５％）的研究［１１］结果相
似。６－ＢＡ对子叶外植体不定芽的产生具有强烈的诱导
作用，其诱导效果好于ＺＴ、ＫＴ［３８－３９］。当６－ＢＡ浓度降低
时，子叶外植体产生大量愈伤组织，虽然这种愈伤组织
也可在以后的培养过程中再度出现芽的分化，但分化频
率降低。
９号培养基因添加５ｍｇ／Ｌ ＡｇＮＯ３，使其芽分化率高
于８号，这与培养基中添加４ｍｇ／Ｌ ＡｇＮＯ３使８个辣椒品
种子叶平均芽分化率提高４１．３％［２９］、同样浓度ＡｇＮＯ３使
９个辣椒品种芽分化率平均提高２０％～３０％［３０］研究结
果类似。培养基中添加适量ＡｇＮＯ３ 可明显促进外植体
的分化［４０］，Ｂａｔｉｓｔａ等［４１］认为愈伤组织的分化受到乙烯
阻碍。ＡｇＮＯ３是一种乙烯抑制剂，加入后可提高多胺类
合成，来间接消减乙烯，促进芽分化［４２］。
辣椒组培过程中，短缩不定芽的伸长成为一项难
题。该研究处理２（ＭＳ＋ＫＴ ２ｍｇ／Ｌ）的丛生芽切块芽伸
长率最高（５０％），高于子叶外植体在ＭＳ＋６－ＢＡ ３ｍｇ／Ｌ＋
ＧＡ３３ｍｇ／Ｌ下最高不定芽伸长率（２７．８％）［２２］。辣椒不
定芽难以诱导伸长，主要原因是由于其内源生长素水平
较低，如离体培养时无外源生长素补充就会出现丛芽
等，以致成苗率较低［４３］。辣椒外植体不经愈伤组织而直
接诱导成芽是目前辣椒离体再生的最好途径［４４］。在之
前有的研究中已得到证实，如辣椒子叶在培养基 ＭＳ＋
ＢＡ ８ｍｇ／Ｌ＋ＩＡＡ ０．５ｍｇ／Ｌ＋３％蔗糖上培养１０～２０ｄ
后，直接从子叶切口处出现许多绿色芽点，继而长成绿
色小芽［２５］。
３．２ 不同外植体类型与诱导分化
多数辣（甜）椒组培试验表明，子叶作外植体时，可
获得较高的芽诱导频率［９，４５］，再经芽伸长、生根、驯化，移
栽获得完整再生植株［６，１２］。赵天红等［３４］以“湘研１号”
无菌苗子叶、茎尖、上胚轴和根段为外植体，研究不同培
养基配方对组培的影响，结果表明４种外植体中，仅子叶、
茎尖能经愈伤组织产生不定芽，并在ＭＳ＋ＢＡ ２ｍｇ／Ｌ＋
ＩＢＡ １．５ｍｇ／Ｌ培养基配方下形成完整植株。瓦·古巴
诺娃等［３３］、周俊等［２３］的研究也表明，以辣椒茎尖生长点
为外植体进行组培，可获得脱毒再生苗。
一般认为辣椒子叶、茎尖、下胚轴产生不定芽的能
力强于上胚轴、真叶、根段，子叶的出芽诱导分化率高于
下胚轴［１６，１９，２９－３０，４６］、带柄子叶［２２］。郝峥嵘等［２５］研究认为，
新疆辣椒主栽品种“四平头”茎尖外植体分化能力最强，
子叶、下胚轴次其二、三，而真叶只能形成愈伤组织而无
分化能力。但何晓明等［３］以叶片为外植体，获得了低频
再生植株。唐亮等［１］研究也认为，茎尖外植体培养再生
能力优于子叶。崔群香等［９］研究发现，苗尖（去子叶带
少许下胚轴）作外植体较带柄子叶、下胚轴更利于芽分
化与成苗。但茎尖外植体不如子叶外植体那样易于界
定、取样，难以确定剥离部位，剥离生长点的大小、带叶
原基数对生长点的诱导、分化成活有密切关系［３３］，茎尖
长度与成活率成正比，而与脱毒效果成反比［２３］，云南小
米椒以１～１．５ｍｍ长的茎尖成苗脱毒率达９６．３％、再生
成活率达８５．４％为宜［２４］。
３．３ 不同苗龄、子叶部位等与诱导分化
苗龄是辣椒子叶外植体形成不定芽的一个很重要
的因素。新疆辣椒主栽品种“四平头”以其１０～１４ｄ的
苗龄子叶出芽率最高［２５］。沈火林等［１６］研究认为辣椒
１０～１２ｄ的苗龄子叶分化效果最好。姚明华等［７］研究
表明苗龄１２ｄ的辣椒子叶芽分化率最高。龙凤等［３０］研
究发现，苗龄１２～１６ｄ的子叶外植体不定芽分化频率最
高。该研究表明朝天椒以１２～１６ｄ的苗龄子叶分化率
高，尤以１４ｄ的为最高，也证实了前人的研究结论。
陈静娴等［５］的研究表明，子叶中部的再生频率高于
子叶叶缘。该试验的研究结果与此相同。姚明华等［７］
研究发现，子叶中部组织的芽分化率高于带柄子叶。该
试验从子叶外植体接种至再生苗出瓶需５０～５５ｄ，较保
加利亚尖椒子叶离体培养体系［１４］获得再生植株的天数
还短５～１０ｄ。
参考文献
［１］ 唐亮，陈沁，邓志瑞，等．辣椒茎尖离体培养及植株再生［Ｊ］．上海大学
学报（自然科学版），２００４，１０（５）：４９７－５０２．
［２］ 曾华，胡宗利，陈国平，等．辣椒离体再生及遗传转化研究进展［Ｊ］．生
命科学研究，２０１１，１５（６）：５４２－５４９．
［３］ 何晓明，王鸣，王喆之．辣椒叶片离体培养与植株再生［Ｊ］．西北农业
大学学报，１９９６，２４（１）：９３－９６．
［４］ Ｅｌｗａｎ Ｍ Ｗ Ｍ．Ｉｎ ｖｉｔｒｏ ｓｈｏｏｔ ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ，ｅｌｏｎｇａｔｉｏｎ ａｎｄ ｒｏｏｔｉｎｇ ｏｆ
ｐｅｐｐｅｒ（Ｃａｐｓｉｃｕｍ ａｎｎｕｕｍｌ．）Ｉ：Ｓｈｏｏｔ ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ ａｓ ａｆｅｃｔｅｄ ｂｙ ＰＧＲ ａｎｄ
ｅｘｐｌａｎｔ ｔｙｐｅ［Ｃ］．４ｔｈ Ｃｏｎｆｅｒｅｎｃｅ ｏｎ Ｒｅｃｅｎｔ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ ｉｎ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒｅ，２００９：
５６４－５７６．
［５］ 陈静娴，聂凡．辣椒子叶培养及其植株再生的研究［Ｊ］．安徽农业科
学，１９９０，３０（３）：２５５－２５７．
［６］ 张子君，徐矿红，田云．辣椒子叶离体培养及植株再生［Ｊ］．辽宁农业
科学，２００１，４２（６）：４４－４５．
［７］ 姚明华，王飞，陆秀英．辣椒子叶离体培养及植株再生体系建立［Ｊ］．
华中农业大学学报，２００７，２６（６）：８５０－８５３．
［８］ 曹亚从，张正海，王立浩，等．辣椒不同外植体处理方法对组织培养
再生的影响［Ｊ］．中国蔬菜，２０１２，３２（８）：３２－３９．
［９］ 崔群香，朱士农，刘卫东．彩色辣椒离体培养外植体及诱导培养基的
５９
·生物技术· 北方园艺２０１４（２１）：９１～９７
筛选［Ｊ］．金陵科技学院学报，２００５，２１（１）：７８－８１．
［１０］Ｇｕｎａｙ Ａ Ｌ，Ｒａｏ Ｐ Ｓ．Ｉｎ ｖｉｔｒｏ ｐｌａｎｔ ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ ｆｒｏｍ ｈｙｐｏｃｏｔｙｌ ａｎｄ
ｃｏｔｙｌｅｄｏｎ ｅｘｐｌａｎｔｓ ｏｆ ｒｅｄ ｐｅｐｐｅｒ（ｃａｐｓｉｃｕｍ）［Ｊ］．Ｐｌａｎｔ Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｌｅｔｔｅｒｓ，１９７８，
１１：３６５－３７２．
［１１］周雪飞，刘春松，唐茂菊，等．辣椒子叶组织培养［Ｊ］．长江蔬菜，２００１，
１８（７）：３２－３３．
［１２］刘卫东，崔群香，夏维东，等．彩色辣椒子叶离体培养技术的研究［Ｊ］．
扬州大学学报（农业与生命科学版），２００３，２４（１）：６３－６６．
［１３］杨梁，崔德才，樊治成．辣椒子叶培养及植株再生［Ｊ］．当代生态农业，
２００５，１５（Ｚ１）：１０２－１０４．
［１４］王倩芳．保加利亚尖辣椒子叶离体组织培养与植株再生的研究［Ｊ］．
现代农业科技，２００９，３８（１１）：２３，２５．
［１５］Ｂｏｒｙｃｈｏｗｓｋｉ Ａ，Ｎｉｅｍｉｒｏｗｉｃｚ－Ｓｚｃｚｙｔｔ Ｋ，Ｊｃｄｒａｓｚｋｏ Ｍ．Ｐｌａｎｔ ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ
ｆｒｏｍ ｓｗｅｅｔ ｐｅｐｐｅｒ（Ｃａｐｓｉｃｕｍ ａｎｎｕｕｍＬ．）ｈｙｐｏｃｏｔｙｌ ｅｘｐｌａｎｔｓ［Ｊ］．Ｐｈｙｓｉｏｌｏ－
ｇｉａｅ Ｐｌａｎｔａｒｕｍ，２００２，２４（３）：２５７－２６４．
［１６］沈火林，王志源，蒋健箴，等．辣椒的组织培养与植株再生［Ｊ］．北京农
业大学学报，１９９３，１９（２）：７３．
［１７］何晓明，王鸣，王喆之．辣椒子叶原生质体培养和植株再生［Ｊ］．园艺
学报，１９９７，２４（３）：２９８－３００．
［１８］文锦芬，邓明华．灌木辣椒———涮辣的组织培养［Ｊ］．植物生理学通
讯，２００８，４４（３）：５１１．
［１９］王达新，王健华，刘志昕．黄灯笼辣椒组织培养研究［Ｊ］．广西热带农
业，２００９，２２（６）：４－７．
［２０］Ｇｏｇｏｉ Ｓ，Ａｃｈａｒｊｅｅ Ｓ，Ｄｅｖｉ Ｊ．Ｉｎ ｖｉｔｒｏ ｐｌａｎｔｌｅｔ ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ ｏｆ Ｃａｐｓｉｃｕｍ
ｃｈｉｎｅｎｓｅ Ｊａｃｑ．ｃｖ．‘Ｂｈｕｔ ｊａｌａｋｉａ’：ｈｏｔｔｅｓｔ ｃｈｉｌｉ ｏｆ ｎｏｒｔｈｅａｓｔｅｒｎ Ｉｎｄｉａ［Ｊ］．Ｉｎ
Ｖｉｔｒｏ Ｃｅｌｕｌａｒ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔａｌ Ｂｉｏｌｏｇｙ－Ｐｌａｎｔ，２０１４，５０：２３５－２４１．
［２１］柳建军，于洪欣，于彦丽．辣椒离体培养及植株再生的研究［Ｊ］．山东
农业科学，２００１，３９（２）：２５－２６．
［２２］谢立波，郭亚华，李景富，等．辣椒离体培养和植株再生体系建立［Ｊ］．
黑龙江农业科学，２００６，２９（１）：４８－５２．
［２３］周俊，肖英，程秉铨，等．辣椒茎尖培养脱毒研究［Ｊ］．西北农业学报，
１９９６，５（３）：２３－２６．
［２４］文锦芬，邓明华．辣椒茎尖培养脱毒研究［Ｊ］．中国辣椒，２００２（３）：１７－
１９．
［２５］郝峥嵘，戚家华，王子霞，等．辣椒子叶的离体再生培养［Ｊ］．新疆农业
科学，１９９３，３６（３）：１２１－１２２．
［２６］吴鹤鸣，赵华侖．辣椒茎、叶离体培养中生长调节剂的作用［Ｊ］．江苏
农业学报，１９９２，８（４）：４８．
［２７］Ａｇｒａｗａｌ Ｓ，Ｃｈａｎｄｒａ Ｎ，Ｋｏｔｈａｒｉ Ｓ Ｌ．Ｐｌａｎｔ ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ ｉｎ ｔｉｓｓｕｅ ｃｕｌ－
ｔｕｒｅｓ ｏｆ ｐｅｐｐｅｒ（Ｃａｐｓｉｃｕｍ ａｎｎｕｕｍＬ．ｃｖ．ｍａｔｈａｎｉａ）［Ｊ］．Ｐｌａｎｔ Ｃｅｌ，Ｔｉｓｓｕｅ
ａｎｄ Ｏｒｇａｎ Ｃｕｌｔｕｒｅ，１９８９，１６：４７－５５．
［２８］李明军，焦浈，刘颖，等．朝天椒的组织培养和植株再生［Ｊ］．植物生理
学通讯，２０００，３６（２）：１３４－１３５．
［２９］董兆龙，陈沁，刘文轩，等．辣椒子叶和下胚轴离体培养再生［Ｊ］．上海
大学学报（自然科学版），２００３，９（２）：１４８－１５２．
［３０］龙凤，张金文．辣椒子叶和下胚轴的离体培养及高效再生体系的建
立［Ｊ］．甘肃农业大学学报，２００５，４０（１）：３１－３７．
［３１］Ｒａｍíｒｅｚ－Ｍａｌａｇóｎ Ｒ，Ｏｃｈｏａ－Ａｌｅｊｏ Ｎ．Ａｎ ｉｍｐｒｏｖｅｄ ａｎｄ ｒｅｌｉａｂｌｅ ｃｈｉｌｉ ｐｅｐ－
ｐｅｒ（Ｃａｐｓｉｃｕｍ ａｎｎｕｕｍ Ｌ．）ｐｌａｎｔ ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ ｍｅｔｈｏｄ［Ｊ］．Ｐｌａｎｔ Ｃｅｌ
Ｒｅｐｏｒｔｓ，１９９６，１６：２２６－２３１．
［３２］胡能兵，隋益虎，张子学，等．紫色辣椒腋芽增殖离体培养体系的建
立［Ｊ］．激光生物学报，２００８，１７（２）：２５１－２５５．
［３３］瓦·古巴诺娃，蒋平，李攻，等．辣椒的组织培养及其植株再生［Ｊ］．新
疆师范大学学报，１９９０，９（２）：６５－７０．
［３４］赵天红，李淘涛，张继仁．辣椒子叶、茎尖、上胚轴和根段外植体组织
培养简报［Ｊ］．湖南农业科学，１９８９，１９（６）：２８－３０．
［３５］Ｏｔｒｏｓｈｙ Ｍ，Ｍｏｒａｄｉ Ｋ，Ｎｅｋｏｕｅｉ Ｍ Ｋ，ｅｔ ａｌ．Ｍｉｃｒｏｐｒｏｐａｇｅａｔｉｏｎ ｏｆ ｐｅｐｐｅｒ
（ＣａｐｓｉｃｕｍａｎｎｕｕｍＬ．）ｔｈｒｏｕｇｈｉｎｖｉｔｒｏ ｄｉｒｅｃｔ ｏｒｇａｎｏｇｅｎｅｓｉｓ［Ｊ］．Ａｓｉａｎ Ｊｏｕｒ－
ｎａｌ ｏｆ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，２０１１，３（１）：３８－４５．
［３６］Ｓａｎａｔｏｍｂｉ Ｋ，Ｓｈａｒｍａ Ｇ Ｊ．Ｉｎ ｖｉｔｒｏ ｐｒｏｐａｇａｔｉｏｎ ｏｆ Ｃａｐｓｉｃｕｍ ｃｈｉｎｅｎｓｅ
Ｊａｃｑ．［Ｊ］．Ｂｉｏｌｏｇｉａ Ｐｌａｎｔａｒｕｍ，２００８，５２（３）：５１７－５２０．
［３７］张金文，范兴中，王莹，等．辣椒离体培养及再生体系的研究［Ｊ］．西北
植物学报，２００６，２６（９）：１８９３－１８９９．
［３８］曹冬孙，贾士荣．青椒子叶培养及植株再生［Ｊ］．园艺学报，１９９３，２０
（２）：１７１－１７５．
［３９］李英慧，李艳，杭晓明，等．细胞分裂素对辣椒子叶再生的影响［Ｊ］．园
艺学报，２００１，２８（３）：２７０－２７２．
［４０］黄真池，李飞凤，曾骥，等．辣椒子叶高效再生体系的建立［Ｊ］．仲恺农
业技术学院学报，２００７，２０（１）：１３－１８．
［４１］Ｂａｔｉｓｔａ Ｄ Ｓ，Ｄｉａｓ Ｌ Ｌ Ｃ，Ｍａｃｅｄｏ Ａ Ｆ，ｅｔ ａｌ．Ｓｕｐｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｅｔｈｙｌｅｎｅ ｌｅｖ－
ｅｌｓ ｐｒｏｍｏｔｅｓ ｍｏｒｐｈｏｇｅｎｅｓｉｓ ｉｎ ｐｅｐｐｅｒ（Ｃａｐｓｉｃｕｍ ａｎｎｕｕｍＬ．）［Ｊ］．Ｉｎ Ｖｉｔｒｏ
Ｃｅｌｕｌａｒ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔａｌ Ｂｉｏｌｏｇｙ－Ｐｌａｎｔ，２０１３，４９：７５９－７６４．
［４２］Ｋｕｍａｒ Ｖ，Ｓｈａｒｍａ Ａ，Ｐｒａｓａｄ Ｂ Ｃ Ｎ，ｅｔ ａｌ．Ｄｉｒｅｃｔ ｓｈｏｏｔ ｂｕｄ ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ
ａｎｄ ｐｌａｎｔ ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ ｉｎ Ｃａｐｓｉｃｕｍ ｆｒｕｔｅｓｃｅｎｓ Ｍｉｌ．：ｉｎｆｌｕｅｎｃｅ ｏｆ ｐｏｌｙａｍｉｎｅｓ
ａｎｄ ｐｏｌａｒｉｔｙ［Ｊ］．Ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｉａｅ Ｐｌａｎｔａｒｕｍ，２００７，２９：１１－１８．
［４３］黄海波，淡明，郭安平，等．黄灯笼辣椒子叶离体培养与植株再生［Ｊ］．
热带农业科学，２００６，２６（３）：１８－２１，４２．
［４４］Ａｂｏｓｈａｍａ Ｈ Ｍ Ｓ．Ｄｉｒｅｃｔ ｓｏｍａｔｉｃ ｅｍｂｒｙｏｇｅｎｅｓｉｓ ｏｆ ｐｅｐｐｅｒ（Ｃａｐｓｉｃｕｍ
ａｎｎｕｕｍＬ．）［Ｊ］．Ｗｏｒｌｄ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，２０１１，７（６）：７５５－７６２．
［４５］Ｓａｎａｔｏｍｂｉ Ｋ，Ｓｈａｒｍａ Ｇ Ｊ．Ｉｎ ｖｉｔｒｏ ｐｌａｎｔ ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ ｉｎ ｓｉｘ ｃｕｌｔｉｖａｒｓ ｏｆ
Ｃａｐｓｉｃｕｍｓｐｐ．ｕｓｉｎｇ ｄｉｆｅｒｅｎｔ ｅｘｐｌａｎｔｓ［Ｊ］．Ｂｉｏｌｏｇｉａ Ｐｌａｎｔａｒｕｍ，２００８，５２（１）：
１４１－１４５．
［４６］Ｇｒｏｚｅｖａ Ｓ，Ｒｏｄｅｖａ Ｖ，Ｔｏｄｏｒｏｖａ Ｖ．Ｉｎ ｖｉｔｒｏ ｓｈｏｏｔ ｏｒｇａｎｏｇｅｎｅｓｉｓ ｉｎ Ｂｕｌ－
ｇａｒｉａｎ ｓｗｅｅｔ ｐｅｐｐｅｒ（Ｃａｐｓｉｃｕｍ ａｎｎｕｕｍＬ．）ｖａｒｉｅｔｉｅｓ［Ｊ］．Ｅｌｅｃｔｒｏｎｉｃ Ｊｏｕｒｎａｌ
ｏｆ Ｂｉｏｌｏｇｙ，２０１２，８（３）：３９－４４．
Ｅｓｔａｂｌｉｓｈｍｅｎｔ ｏｆ Ｃｏｔｙｌｅｄｏｎｉｎ ｖｉｔｒｏ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｓｙｓｔｅｍ ａｎｄ Ｐｌａｎｔ Ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ ｏｆ
Ｐｏｄ Ｐｅｐｐｅｒ
ＬＩ Ｗｅｉ １，ＡＯ Ｙａｎ－ｆｅｉ １，ＨＥ Ｗｅｎ－ｃｈａｏ２，ＹＡＮＧ Ｚｅｎｇ－ｊｉｅ１，ＺＨＡＯ Ｌｉ－ｐｉｎｇ１
（１．Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｃｏｌｅｇｅ，Ｇｕｉｚｈｏｕ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｇｕｉｙａｎｇ，Ｇｕｉｚｈｏｕ ５５００２５；２．Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒｅ ａｎｄ Ａｎｉｍａｌ Ｈｕｓｂａｎｄｒｙ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｂｕｒｅａｕ ｏｆ Ｙｕｐｉｎｇ
Ｃｏｕｎｔｙ，Ｙｕｐｉｎｇ，Ｇｕｉｚｈｏｕ ５５４０００）
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｔａｋｉｎｇ ｎａｔｉｖｅ ｓｐｅｃｉｅｓ ｏｆ ｐｏｄ ｐｅｐｐｅｒ ｆｒｏｍ Ｌｉｐｉｎ ｃｏｕｎｔｙ ｏｆ Ｇｕｉｚｈｏｕ ｐｒｏｖｉｎｃｅ ａｓ ｍａｔｅｒｉａｌｓ，ｃｏｔｙｌｅｄｏｎｓ ｏｆ
ｇｅｒｍｉｎａｔｅｄ ａｓｅｐｔｉｃ ｓｅｅｄｌｉｎｇｓ ｗｅｒｅ ｃｕｔ ａｓ ｅｘｐｌａｎｔｓ．Ａｄｏｐｔｉｎｇ ｔｈｅ ｐｌａｎｔ ｔｉｓｓｕｅ ｃｕｌｔｕｒｅ ｍｅｔｈｏｄ ｗｉｔｈ ｓｏｌｉｄ ｍｅｄｉｕｍ，ｅｆｅｃｔｓ ｏｆ
６９
北方园艺２０１４（２１）：９７～１００ ·生物技术·
第一作者简介：石开明（１９８０－），男，博士，讲师，现主要从事林学园
艺植物遗传育种等研究工作。Ｅ－ｍａｉｌ：ｓｋｍ３３１＠１６３．ｃｏｍ．
基金项目：湖北省教育厅资助项目（Ｑ２０１２２９０２）；国家自然科学基
金青年科学基金资助项目（８１３０３１６９）。
收稿日期：２０１４－０５－１９
贡水白柚基因组ＤＮＡ提取方法研究
石 开 明，邓 志 军，方 响 亮
（湖北民族学院 林学园艺学院，湖北 恩施４４５０００）
摘 要：以“贡水白柚”为试材，采用盐乙醚处理法、苯酚氯仿处理法、基本ＣＴＡＢ处理法３种
ＤＮＡ提取方法来处理“贡水白柚”基因组ＤＮＡ，研究不同提取方法对ＤＮＡ样品的产率、外观、酶
切电泳等方面的影响。结果表明：用盐乙醚法所提ＤＮＡ外观呈纯白色，冷冻沉淀为纤维状，效果
最好；用苯酚氯仿法处理幼穗期柚叶片基因组提取ＤＮＡ产率最高，ＤＮＡ浓度达１１８ｎｇ／μＬ；
ＥｃｏＲⅠ酶切图谱用ＣＴＡＢ处理法和盐乙醚处理法效果均较好，苯酚氯仿处理法则拖尾严重，效果
差；ＲＡＰＤ引物ＰＣＲ扩增效果图表明，３种方法均能扩增出清晰条带，均适合于有关“贡水白柚”
基因组的相关研究。
关键词：贡水白柚；ＤＮＡ；提取
中图分类号：Ｓ ６０２ 文献标识码：Ａ 文章编号：１００１－０００９（２０１４）２１－００９７－０４
柚（Ｃｉｔｒｕｓ ｇｒａｎｄｉｓ（Ｌ．）Ｏｓｂｅｃｋ）是柑橘类果树的一
个主要栽培种类，有着丰富的种质资源。柚果实色香味
俱全，加上外形美观、营养丰富，而且耐贮藏，深受消费
者的喜爱，经济价值高。现已成为我国柑橘类品种中相
当重要的一个种类［１］。“贡水白柚”原产鄂西恩施土家
族苗族自治州，属酸甜型中熟柚类良种，是湖北地方特
色优良柚类品种，与同类品种相比，具有皮薄肉厚，易剥
皮，无苦涩口感等优势，深受大众喜爱。
随着国内柑橘产业结构的调整，近年来针对各种柚
的研究也逐渐增多。目前有关柚种质资源的遗传多样
性基础研究中，涉及到柚基因组ＤＮＡ提取方面是个难
题，特别是从柚成熟的老叶中提取高质量的基因组
ＤＮＡ，一般方法难以实现。老叶中酚类化合物、色素、多
糖和其它次生代谢物质含量较高，这给柚老叶基因组
ＤＮＡ提取带来了极大困难。而在研究柚基因组学时首
先需要得到高纯度、结构完整的ＤＮＡ。同时为了便于研
究的进行，还要保证ＤＮＡ提取量充足，所以很有必要摸
索一套适合提取柚基因组ＤＮＡ，特别是从老叶中快速有
效提取ＤＮＡ的方法，该方法应尽可能具备操作简便、省
ｄｉｆｅｒｅｎｔ ｍｅｄｉａ ｏｆ ａ ｂａｓａｌ ｎｕｔｒｉｅｎｔ ｍｅｄｉｕｍ ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔｅｄ ｗｉｔｈ ｄｉｆｅｒｅｎｔ ａｕｘｉｎｓ，ｃｙｔｏｋｉｎｉｎｓ ａｎｄ ａｕｘｉｎ－ｃｙｔｏｋｉｎｉｎ
ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎｓ，ｄｉｆｅｒｅｎｔ ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｉｃａｌ ａｇｅｓ ｏｆ ａｓｅｐｔｉｃ ｓｅｅｄｌｉｎｇｓ ａｎｄ ｄｉｆｅｒｅｎｔ ｐａｒｔｓ ｏｆ ｃｏｔｙｌｅｄｏｎ ｏｎ ｃｏｔｙｌｅｄｏｎｉｎ ｖｉｔｒｏｃｕｌｔｕｒｅ
ｓｙｓｔｅｍ ａｎｄ ｐｌａｎｔ ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ，ｓｕｃｈ ａｓ ｉｎ ｖｉｔｒｏ ｃｏｔｙｌｅｄｏｎ ｉｎｏｃｕｌａｔｉｏｎ，ｃａｌｕｓ ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ，ａｄｖｅｎｔｉｔｉｏｕｓ ｂｕｄ ｄｉｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ，ｂｕｄ
ｅｌｏｎｇａｔｉｏｎ，ｒｏｏｔ ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ，ｄｏｍｅｓｔｉｃａｔｉｏｎ，ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ ａｎｄ ｇｒｏｗｉｎｇ ａｄｕｌｔ ｐｌａｎｔ ｗｅｒｅ ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅｄ．Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｓｈｏｗｅｄ
ｔｈａｔ ｔｈｅ ｏｐｔｉｍａｌ ｍｅｄｉｕｍ ｆｏｒ ａｄｖｅｎｔｉｔｉｏｕｓ ｂｕｄ ｄｉｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ ｗａｓ ＭＳ＋６－ＢＡ ２ｍｇ／Ｌ＋ＮＡＡ ０．１ｍｇ／Ｌ，ｗｉｔｈ １００％ｂｕｄ
ｄｉｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ ｐｅｒｃｅｎｔａｇｅ．Ｔｈｅ ｏｐｔｉｍａｌ ｍｅｄｉｕｍ ｆｏｒ ｂｕｄ ｅｌｏｎｇａｔｉｏｎ ｗａｓ ＭＳ＋ＫＴ ２ｍｇ／Ｌ，ｗｉｔｈ ５０％ｂｕｄ ｅｌｏｎｇａｔｉｏｎ
ｐｅｒｃｅｎｔａｇｅ．Ａｎｄ ｔｈｅ ｒｏｏｔｉｎｇ ｍｅｄｉｕｍ ｗａｓ ＭＳ ｗｉｔｈｏｕｔ ｏｔｈｅｒ ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔｓ，ｗｉｔｈ ４４％ｔａｋｉｎｇ ｒｏｏｔ ｐｅｒｃｅｎｔａｇｅ．Ｔｈｅ ａｖｅｒａｇｅ
ｏｆ １５－１８ａｄｖｅｎｔｉｔｉｏｕｓ ｃｌｕｓｔｅｒｅｄ ｂｕｄｓ ｗｅｒｅ ｄｉｆｅｒｅｎｔｉａｔｅｄ ｂｙ ｏｎｅ ｅｘｐｌａｎｔ．Ａｍｏｎｇ ｔｈｅｓｅ ａｄｖｅｎｔｉｔｉｏｕｓ ｂｕｄｓ ｄｉｆｅｒｅｎｔｉａｔｅｄ
ｐｅｒ ｅｘｐｌａｎｔ，１４－１６ｂｕｄｓ ｗｅｒｅ ｅｌｏｎｇａｔｅｄ，ａｎｄ ６－７ｓｅｅｄｌｉｎｇｓ ｗｅｒｅ ｏｂｔａｉｎｅｄ ａｔ ｌａｓｔ．Ｔｈｉｓ ｐｅｒｉｏｄ ｗａｓ ５０－５５ｄａｙｓ ｆｒｏｍ
ｃｏｔｙｌｅｄｏｎ ｅｘｐｌａｎｔ ｉｎｏｃｕｌａｔｉｏｎ ｔｏ ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ ｓｅｅｄｌｉｎｇｓ．Ｔｈｅ ｓｕｒｖｉｖａｌ ｐｅｒｃｅｎｔａｇｅ ｏｆ ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ ｓｅｅｄｌｉｎｇｓ ａｆｔｅｒ
ｔｒａｎｓｐｌａｎｔｉｎｇ ｗａｓ ９８％．Ｔｈｅ ｅｆｉｃｉｅｎｔ ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ ｓｙｓｔｅｍ ｂｙ ｉｎ ｖｉｔｒｏ ｃｕｌｔｕｒｅ ｗａｓ ｐｒｅｌｉｍｉｎａｒｉｌｙ ｅｓｔａｂｌｉｓｈｅｄ ｏｎ ｐｏｄ ｐｅｐｐｅｒ
ｏｆ Ｇｕｉｚｈｏｕ ｐｒｏｖｉｎｃｅ，ｗｈｉｃｈ ｌａｉｄ ｉｍｐｏｒｔａｎｔ ｆｏｕｎｄａｔｉｏｎ ｆｏｒ ｔｉｓｓｕｅ ｃｕｌｔｕｒｅ ｉｎ ｒａｐｉｄ ｐｒｏｐａｇａｔｉｏｎ ａｎｄ ｇｅｎｅｔｉｃ ｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎ ｏｆ
ｐｏｄ ｐｅｐｐｅｒ ｉｎ ｔｈｉｓ ｓｔｕｄｙ．
Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：ｐｏｄ ｐｅｐｐｅｒ；ｃｏｔｙｌｅｄｏｎ；ａｕｘｉｎ－ｃｙｔｏｋｉｎｉｎ ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ；ｃｕｌｔｕｒｅ ｉｎ ｖｉｔｒｏ；ｐｌａｎｔ ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ
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