全 文 ：* 通讯作者 Tel: (010)82805957;E － mail:nanyin． han@ pku． edu． cn
第一作者 Tel:13691275962;E － mail:zhangping8521@ 163． com
HPLC法测定 2 种不同颜色拳参饮片中绿原酸及没食子酸含量
张萍1，朱尘琪2，晁冲2，于飞2，木合他拜尔2，郭爽2，韩南银2*
(1．首都医科大学附属北京友谊医院中药剂科，北京 100050;2．北京大学药学院，北京 100191)
摘要 目的:商品拳参饮片有紫红色和棕红色 2 种不同颜色，测定紫红色与棕红色的拳参饮片中绿原酸和没食子酸的含量，以
了解 2 种不同颜色的拳参饮片中绿原酸及没食子酸的含量是否有差异。方法:高效液相色谱法，色谱柱:Diamonsil C18(250
mm ×4. 6 mm，5 μm) ，流动相为甲醇 － 0. 4% 醋酸溶液(25∶ 75) ，流速 0. 8 mL· min －1，检测波长 290 nm，柱温 25. 0 ℃。结果:
湖北、山东、河北 3 个产地 7 个批次的拳参饮片中，紫红色拳参饮片绿原酸的含量:湖北 1. 59%，山东 4. 49%、5. 47%，河北
1. 77%、2. 54%、2. 56%、2. 49%;没食子酸含量:湖北 0. 83%，山东 0. 29%、1. 09%、河北 0. 39%、0. 30%、0. 55%、0. 93%。棕红
色拳参饮片中绿原酸的含量:湖北 0. 35%，山东 0. 26%、1. 91%，河北 0. 46%、0. 56%、1. 43%、1. 18%;没食子酸含量:湖北
0. 19%，山东 0. 16%、0. 72%%、河北 0. 21%、0. 17%、0. 43%、0. 87%。结论:紫红色拳参饮片中绿原酸和没食子酸的含量均高
于棕红色饮片。
关键词:拳参;紫红色拳参饮片;棕红色拳参饮片;绿原酸;没食子酸;高效液相色谱法
中图分类号:Ｒ917 文献标识码:A 文章编号:0254 － 1793(2014)07 － 1305 － 05
HPLC determination of chlorogenic acid and gallic acid
in Quanshen pieces with two different colors
ZHANG Ping1，ZHU Chen － qi2，CHAO Chong2，YU Fei2，MUHETABAIEＲ2，
GUO Shuang2，HAN Nan － yin2*
(1． Beijing Friendship Hospital Affiliated to Capital University of Medical Sciences，Beijing 100050，China;
2． School of Pharmaceutical Sciences，Peking University，Beijing 100191，China)
Abstract Objective:The commercial Quanshen pieces have two different colors，amaranth and brownish red． The
aim of this study was to determine the contents of chlorogenic acid and gallic acid in these two kinds of Quanshen
pieces (which were from the same batch)and to check whether there was difference in the contents of chlorogenic
acid and gallic acid between the Quanshen pieces with two different colors．Methods:HPLC method was applied．
The column was Diamonsil C18 column (250 mm ×4. 6 mm，5 μm) ，the mobile phase was methanol － 0. 4% acetic
acid solution (25∶ 75) ，the flow rate was 0. 8 mL·min －1，the column temperature was 25. 0 ℃ and the detection
wavelength was 290 nm． Ｒesults:For the 7 batches of Quanshen pieces from Hubei，Shandong and Hebei，the con-
tents of chlorogenic acid in amaranth colored Quanshen pieces were:Hubei 1. 59%，Shandong 4. 49%，5. 47%，He-
bei 1. 77%，2. 54%，2. 56%，2. 49%，and the corresponding contents of gallic acid were:Hubei 0. 83%，Shandong
0. 29%，1. 09%，Hebei 0. 39%，0. 30%，0. 55%，0. 93% ． The contents of chlorogenic acid in brownish red colored
Quanshen pieces were:Hubei 0. 35%，Shandong 0. 26%，1. 91%，Hebei 0. 46%，0. 56%，1. 43%，1. 18%，and the
corresponding gallic acid contents were:Hubei 0. 19%，Shandong 0. 16%，0. 72%，Hebei 0. 21%，0. 17%，
0. 43%，0. 87% ． Conclusion:The contents of both chlorogenic acid and gallic acid in the amaranth colored Quan-
shen pieces were higher than those in the brownish red colored pieces．
Key words:Quanshen;amaranth colored Quanshen pieces;brownish red colored Quanshen pieces;chlorogenic
acid;gallic acid;HPLC
—5031—药物分析杂志 Chin J Pharm Anal 2014，34(7)
DOI:10.16155/j.0254-1793.2014.07.025
拳参为蓼科植物拳参 Polygonum bistorta L． 的
干燥根茎，始载于《本草图经》。具有清热解毒、消
肿、止血之功效，主治赤痢热泻、肺热咳嗽、痈肿瘰
疬、口舌生疮、血热吐衄、痔疮出血、蛇虫咬伤［1］。
中国药典 2010 年版对拳参饮片性状描述为“本
品……切面棕红色或浅棕红色。平坦，近边缘有
一圈黄白色小点(维管束) ，气微，味苦涩［1］。”但在
工作中发现，同一批次商品拳参饮片中，除上述棕
红色或浅棕红色(以下简称棕红色)饮片外，还常
见淡紫红色至紫红色(以下简称紫红色)饮片，此
特征在各版中国药典及文献［2］中均未加以描述。
拳参中含有绿原酸、没食子酸、鞣质、槲皮素等多
种化学成分［3 － 5］，高效液相色谱法用于拳参中绿原
酸和没食子酸含量测定已有报道［4 － 5］，但分别对紫
红色与棕红色 2 种拳参饮片中绿原酸和没食子酸
含量测定，目前尚未见相关研究报道。本文参考
文献［5］的方法对湖北、山东、河北 3 个产地 7 个
批次的拳参饮片中紫红色与棕红色饮片分别进行
绿原酸和没食子酸成分的含量测定，以比较同一
批次拳参中紫红色与棕红色饮片上述 2 个成分的
含量差异。
1 仪器与试药
日本岛津公司 LC － 20AT 液相色谱仪，SPD
－ 20A 检测器，LC solution 工作站，Diamonsil C18
色谱柱。HANGPING FA2104 天平，KQ － 500DE
型数控超声波清洗器(昆山市超声仪器有限
公司)。
甲醇(色谱纯，美国塞默飞世尔科技有限公
司) ，醋酸(分析纯，北京化工厂) ，水为娃哈哈纯净
水(Ω = 18. 2)。
对照品没食子酸(批号 110831 － 200803)、绿原
酸(批号:110753 － 201314) ，由中国食品药品检定
研究院提供。
拳参饮片产地来自湖北(批号 109812101)、山
东(批号 209061、1212032)、河北(批号 1090636、
130429、13041403、130510001) ，均经本文第一作者
鉴定为蓼科植物拳参 Polygonum bistorta L． 的干燥
根茎。紫红色和棕红色饮片来自同一批号。
2 方法与结果
2. 1 色谱条件 色谱柱:Diamonsil C18(250 mm ×
4. 6 mm，5 μm) ;流动相:甲醇 － 0. 4%醋酸(25∶ 75) ;
流速:0. 8 mL·min －1;柱温:25. 0 ℃;进样量:20 μL;
检测波长:290 nm。在此条件下色谱峰峰形对称，分
离度大于 1. 5，分离效果良好，理论塔板数按没食子
酸计不低于 6550。
2. 2 溶液制备
2. 2. 1 对照品储备液 分别精密称取没食子酸对
照品约 10 mg，置 50 mL 量瓶中，绿原酸对照品 30
mg置 25 mL 量瓶中，加纯净水溶解并定容至刻度，
摇匀，得浓度为 0. 222 mg·mL －1的没食子酸和浓度
为 1. 31 mg·mL －1的绿原酸的单一成分的对照品储
备液。
2. 2. 2 混合对照品溶液 精密量取没食子酸对
照品储备液 2. 5 mL 和绿原酸对照品储备液 1. 2
mL，置 10 mL 量瓶中，加纯净水至刻度，摇匀，
备用。
2. 2. 3 供试品溶液 分别取从同批中得到的各批
紫红色和棕红色拳参饮片粉末(过 40 目筛)约 0. 2
g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入 20% 乙醇
25 mL，放置过夜，超声(频率 40 kHz，功率 100 W)
提取 40 min，抽滤并过 0. 45 μm 微孔滤膜，取续滤
液备用。
3 方法学考察
3. 1 线性关系
分别精密量取没食子酸对照品储备液 0. 25、
0. 5、1. 0、1. 5、2. 0、2. 5 mL 和绿原酸对照品储备
溶液 0. 2、0. 4、0. 6、0. 8、1. 0、1. 2 mL，置 10 mL
量瓶中，加纯净水至刻度，摇匀，备用。分别精密
吸取上述混合溶液各 20 μL 注入液相色谱仪，在
上述色谱条件下测定其峰面积，以对照品的浓度
X(μg·mL － 1)为横坐标，峰面积 Y 为纵坐标，进
行线性回归，得到没食子酸、绿原酸回归方程分
别为:
Y = 1. 566 × 103X + 7. 129 × 103 r = 0. 9997
Y = 1. 721 × 103X － 2. 250 × 103 r = 0. 9992
没食子酸和绿原酸浓度分别在 5. 55 ～ 55. 5 μg·
mL －1和 26. 2 ～ 157. 2 μg·mL －1范围内线性关系
良好。
3. 2 精密度
取混合对照品溶液，按前述色谱条件，进样量
20 μL，重复进样 5 次，测定峰面积，计算绿原酸峰
面积的 ＲSD(n = 5)为 1. 4%，没食子酸峰面积的
ＲSD(n = 5)为 1. 6%，结果表明该仪器的精密度
良好。
3. 3 重复性
称取紫红色和棕红色拳参饮片粉末(批号:
1090636)各 5 份，每份约 0. 2 g，按“2. 2. 3”项下方
法，制备 10 份供试品溶液，在上述液相色谱条件下
—6031— 药物分析杂志 Chin J Pharm Anal 2014，34(7)
进行测定，结果紫红色拳参饮片中没食子酸平均
含量为 0. 48%，ＲSD 为 1. 0%，绿原酸平均含量为
1. 87%，ＲSD为 1. 6%;棕红色拳参饮片中没食子
酸平均含量为 0. 23%，ＲSD 为 1. 3%，绿原酸平均
含量为 0. 61%，ＲSD 为 1. 8%，表明方法的重复性
良好。
3. 4 准确度
精密称取已知没食子酸和绿原酸含量的紫红色
拳参饮片(没食子酸和绿原酸含量分别为 0. 48%、
1. 87%)粉末 9 份，每份 0. 1 g，平均分成 3 组，每组
分别加入没食子酸标准储备液(0. 222 mg·mL －1)
和绿原酸标准储备液(1. 31 mg·mL －1)各 1. 6、
1. 2;2. 0、1. 5;2. 4、1. 8 mL。取已知含量的棕红色
拳参饮片(没食子酸和绿原酸含量分别为 0. 23%、
0. 61%)粉末 9 份，每份 0. 2g，平均分成 3 组，每组
分别加入没食子酸标准储备液(0. 222 mg·mL －1)
和绿原酸标准储备液(1. 31 mg·mL －1)各 1. 6、
0. 8;2. 0、1. 0;2. 4、1. 2 mL。照“2. 2. 3”项下方法
制备溶液，在上述色谱条件下进行测定，回收率结
果见表 1。
表 1 拳参饮片中没食子酸和绿原酸加样回收率实验结果(n =9)
Tab 1 Ｒecovery test results of gallic acid and chlorogenic acid in Quanshen pieces
批号
(Lot No．)
颜色
(color)
成分
(composition)
加入量
(addition amount)/μg
实测量
(measured amount)/μg
平均回收率
(average recovery)/%
ＲSD
/%
1090636 紫红色
(amaranth)
没食子酸
(gallic acid)
355. 0
444. 0
356. 8
439. 6
100. 0 0. 3
533. 0 535. 7
绿原酸
(chlorogenic acid)
1572
1965
1567
1947
99. 9 0. 6
2358 2386
棕红色
(brownish red)
没食子酸
(gallic acid)
355. 0
444. 0
354. 3
448. 9
100. 0 1. 2
533. 0 527. 8
绿原酸
(chlorogenic acid)
1048
1310
1068
1297
100. 0 1. 2
1572 1556
3. 5 稳定性
取同一批号中分得的紫红色和棕红色拳参饮
片供试品溶液(批号 1090636) ，分别在 0、2、4、6、
8、10、12 h测定，紫红色拳参饮片中没食子酸含量
的 ＲSD = 1. 1%，绿原酸含量的 ＲSD = 1. 8%;棕红
色拳参饮片中没食子酸含量的 ＲSD = 2. 3%，绿原
酸含量的 ＲSD = 1. 8%，表明样品溶液在 12 h 内
稳定。
4 样品含量测定
取“2. 2”项下的混合对照品及供试品溶液各
20 μL，进样测定，按外标法计算没食子酸和绿原
酸的含量。同一样品平行测定 3 次，结果见图 1 和
表 2。
对表 2 中 2 种颜色的拳参饮片没食子酸和绿原
酸的含量数据进行统计学分析，结果见表 3。
5 讨论
从表 2 可以看出，同一批次商品拳参饮片中，紫
红色饮片的绿原酸和没食子酸含量均高于棕红色饮
片的含量。湖北、山东、河北 3 个产地 7 个批次的紫
红色拳参饮片中，绿原酸含量均高于没食子酸含量，
此结果与棕红色饮片中的绿原酸含量高于没食子酸
含量一致。
付杰超等［6］对拳参饮片炮制工艺研究表明:拳
参饮片 3 种干燥方法即烘干、晒干、阴干，其绿原酸
和没食子酸含量均以阴干最高。而本文的研究结
果，紫红色拳参饮片中绿原酸和没食子酸含量高于
棕红色拳参饮片。从以上结果分析，拳参饮片中的
绿原酸和没食子酸含量可能与干燥方法有关。据本
文第一作者了解，紫红色拳参饮片的干燥方法是阴
干，此结果有待进一步证明。
据笔者观察，商品拳参饮片中，有时还可见同一
饮片由淡紫红色渐呈紫红色，或由紫红色渐呈棕红
色，此现象可能因干燥方法、贮藏时间、贮藏温度等
原因而逐渐发生颜色变化。
—7031—药物分析杂志 Chin J Pharm Anal 2014，34(7)
图 1 对照品与拳参饮片的 HPLC色谱图
Fig 1 HPLC chromatograms of reference substances and Quanshen pieces
A．对照品(reference substances) B．山东紫红色拳参饮片，批号 1212032(amaranth colored Quanshen pieces from Shandong，Lot No． 1212032) C．山
东棕红色拳参饮片，批号 1212032(brownish red colored Quanshen pieces from Shandong，Lot No． 1212032)
1．没食子酸(gallic acid) 2．绿原酸(chlorogenic acid)
表 2 紫红色和棕红色拳参饮片中没食子酸和绿原酸的含量(n =3)
Tab 2 Determination of gallic acid and chlorogenic acid in amaranth and brownish red Quanshen pieces
样品序号
(No．)
产地
(habitat)
批号
(lot No．)
颜色
(color)
没食子酸
(gallic acid)/%
平均含量
(average content)/%
绿原酸
(chlorogenic acid)/%
平均含量
(average content)/%
1 湖北
(Hubei)
109812101 紫红色
(amaranth)
0. 69 0. 83 1. 20
0. 97 1. 87
0. 84 1. 69
1. 59
2 棕红色
(brownish red)
0. 22 0. 19 0. 35
0. 20 0. 38
0. 17 0. 32
0. 35
3 山东
(Shandong)
209061 紫红色
(amaranth)
0. 31 0. 29 5. 23
0. 31 4. 43
0. 27 3. 76
4. 49
4 棕红色
(brownish red)
0. 17 0. 16 0. 24
0. 16 0. 28
0. 14 0. 25
0. 26
5 山东
(Shandong)
1212032 紫红色
(amaranth)
1. 13 1. 09 5. 50
1. 14 6. 02
1. 01 4. 88
5. 47
6 棕红色
(brownish red)
0. 67 0. 72 1. 76
0. 74 1. 96
0. 76 2. 02
1. 91
7 河北
(Hebei)
1090636 紫红色
(amaranth)
0. 40 0. 39 1. 68
0. 39 1. 73
0. 39 1. 90
1. 77
8 棕红色
(brownish red)
0. 18 0. 21 0. 51
0. 23 0. 32
0. 22 0. 55
0. 46
—8031— 药物分析杂志 Chin J Pharm Anal 2014，34(7)
续表 2
样品序号
(No．)
产地
(habitat)
批号
(lot No．)
颜色
(color)
没食子酸
(gallic acid)/%
平均含量
(average content)/%
绿原酸
(chlorogenic acid)/%
平均含量
(average content)/%
9 河北
(Hebei)
130429 紫红色
(amaranth)
0. 28 0. 30 2. 45
0. 31 2. 53
0. 32 2. 65
2. 54
10 棕红色
(brownish red )
0. 18 0. 17 0. 61
0. 16 0. 54
0. 16 0. 53
0. 56
11 河北
(Hebei)
13041403 紫红色
(amaranth)
0. 60 0. 55 2. 83
0. 49 2. 67
0. 56 2. 60
2. 56
12 棕红色
(brownish red)
0. 45 0. 43 1. 50
0. 42 1. 40
0. 43 1. 41
1. 43
13 河北
(Hebei)
130510001 紫红色
(amaranth)
0. 91 0. 93 2. 44
0. 94 2. 53
0. 93 2. 50
2. 49
14 棕红色
(brownish red)
0. 90 0. 87 1. 21
0. 83 1. 11
0. 90 1. 21
1. 18
表 3 统计学结果及结论
Tab 3 The statistical results and conclusions
成分(composition) F检验(ANOVA) 结论(conclusion) t检验(t test) 结论(conclusion)
没食子酸
(gallic acid)
F =5. 21 ＞ F临界
(F =5. 21 ＞ Fcritical value)
方差有显著性差异
(variance has significant difference)
t =3. 52 ＞ t临界
(t =3. 52 ＞ tcritical value)
均值有显著性差异
(the mean value has significant difference)
绿原酸
(chlorogenic acid)
F =1. 22 ＜ F临界
(F =1. 22 ＜ Fcritical value)
方差无显著性差异
(variance has no significant difference)
t =2. 55 ＞ t临界
(t =2. 55 ＞ tcritical value)
均值有显著性差异
(the mean value has significant difference)
6 结论
商品拳参中紫红色饮片所含绿原酸和没食子酸
含量均高于棕红色饮片，且绿原酸含量高于没食子酸
含量，据记载［7］绿原酸具有利胆、抗菌、止血、增高白
血球作用。鉴于紫红色拳参饮片在临床应用的实际
情况及本文研究结果，若按中国药典规定拳参饮片切
面为棕红色或浅棕红色，则淡紫红色至紫红色饮片就
不能用于临床，势必造成拳参资源的浪费，因此，建议
中国药典委员会考虑组织有关部门进一步研究后，如
结果与本文一致，是否可在中国药典拳参的性状项下
增加断面(或切面)呈淡紫红色至紫红色描述。
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(本文于 2014 年 5 月 24 日修改回)
—9031—药物分析杂志 Chin J Pharm Anal 2014，34(7)