全 文 ：天然产物研究与开发 Nat Prod Res Dev 2011，23:850-852
文章编号:1001-6880(2011)05-0850-03
收稿日期:2009-12-11 接受日期:2010-01-11
基金项目:国家自然科学基金(20772105;21062027) ;云南省应用
基础研究基金(2010CD009) ;云南省中青年学术技术带
头人后备人才基金(2008PY028) ;云南省教育厅科学研
究基金(2010Z054)
* 通讯作者 Tel:86-871-5032423;E-mail:shwu123@ 126． com
滇牡丹内生真菌 Alternaria sp． PR-14 的代谢产物研究
吴少华* ，陈有为，李治滢，杨丽源，李绍兰
云南大学云南省微生物研究所，昆明 650091
摘 要:从滇牡丹内生真菌交链孢霉属(Alternaria sp．)菌株 PR-14 的发酵液提取物中分离得到 6 个化合物，通
过波谱技术分别鉴定为交链孢酚(1)、djalonensone(2)、脑苷酯 B(3)、脑苷酯 C(4)、(2S，3S，4R，2 R)-2-(2-
hydroxytetracosanoylamino)octadecane-1，3，4-triol(5)和甘露糖醇(6) ，以上化合物均为首次从滇牡丹内生真菌中
分离得到。
关键词:滇牡丹;内生真菌;交链孢霉属
中图分类号:O629 文献标识码:A
Metabolites of the Endophytic Fungus Alternaria sp． PR-14 of Paeonia delavayi
WU Shao-hua* ，CHEN You-wei，LI Zhi-ying，YANG Li-yuan，LI Shao-lan
Yunnan Institute of Microbiology，Yunnan University，Kunming 650091，China
Abstract:Six compounds were obtained from the fermentation broth extract of the endophytic fungus Alternaria sp． PR-
14 of Paeonia delavayi． Their structures were identified to be alternariol (1) ，djalonensone (2) ，cerebroside B (3) ，cer-
ebroside C (4) ，(2S，3S，4R，2R)-2-(2-hydroxytetracosanoylamino)octadecane-1，3，4-triol (5) ，and mannitol (6)
by spectral methods． All the compounds were isolated from the endophytic fungus of P． delavayi for the first time．
Key words:Paeonia delavayi;endophytic fungus;Alternaria sp．
滇牡丹(Paeonia delavayi Franch．)为芍药科芍
药属植物，分布于云南西北部、四川西南部及西藏东
南部。其性寒，味酸辛，根皮用于清热凉血，治吐血、
尿血、血痢、痛经等，也被用作丹皮药用，具有抑制中
枢神经系统，扩张冠状血管，降压、抑菌、抗炎、抗凝
血等功能［1］，其根皮富含单萜苷类化合物［2，3］。国
内外尚未见关于滇牡丹内生真菌代谢产物化学的研
究报道，本文首次对滇牡丹内生真菌的发酵产物进
行了化学成分的研究，从一株交链孢霉属(Alternaria
sp．)菌株 PR-14 的发酵液提取物中分离得到 6 个化
合物，根据波谱数据分析分别鉴定为交链孢酚(1)、
djalonensone(2)、脑苷酯 B(3)、脑苷酯 C(4)、(2S，
3S，4R，2R)-2-(2-hydroxytetracosanoylamino)octade-
cane-1，3，4-triol(5)和甘露糖醇(6) ，这些化合物均
为首次从滇牡丹内生真菌中分离得到。
1 实验部分
1． 1 仪器与材料
XRC-1 型显微熔点仪(四川大学科仪厂) ，温度
计未校准;Bruker DRX-500 型超导核磁共振仪，TMS
为内标;Agilent G3250AA LC /MSD TOF 型质谱仪。
薄层层析硅胶和柱层析硅胶均为青岛海洋化工厂产
品;Sephadex LH-20 为 Amersham Biosciences公司产
品;反相 RP-18 柱填料为 Merck 公司产品。乙醇为
国产一级食用酒精，其余试剂均为国产分析纯。
1． 2 菌种培养
菌种:编号为 PR-14 的菌株分离自滇牡丹根部，
植物样品于 2007 年 9 月采集于云南省嵩明县，菌株
由本研究组鉴定为交链孢霉属(Alternaria sp．) ，保
存在云南大学云南省微生物研究所。
培养基:PDA培养基(马铃薯 200 g，葡萄糖 20
g，琼脂 20 g，水 1000 mL，pH 值自然) ;PDB 培养基
(马铃薯 200 g，葡萄糖 20 g，水 1000 mL，pH 值自
然) ，1． 25 × 105 Pa灭菌 20 min。
菌种培养:菌株 PR-14 经 PDA培养基斜面活化
后，接种于 PDB 种子培养基中，于 28 ℃、200 r /min
振荡培养 4 d，按 5%接种量 (种子发酵液与发酵培
养基的体积比)于无菌条件下接种到装有 100 mL
PDB 发酵培养基的 500 mL 三角瓶内，28 ℃、200
rpm振荡培养 6 d，共发酵 50 L。
1． 3 提取与分离
发酵产物经过滤得发酵液和菌丝体，发酵液减
压浓缩后用乙酸乙酯萃取 4 次，合并萃取液，减压浓
缩得粗提物 18． 6 g。乙酸乙酯粗提物经 200 ～ 300
目的硅胶柱层析，以氯仿-甲醇梯度洗脱，得到 9 个
组分。组分 2 经硅胶柱层析，用石油醚-乙酸乙酯
(85∶ 15)洗脱，得化合物 2(47 mg)。组分 3 经反相
RP-18 柱层析，用甲醇-水(1∶ 1)洗脱，得 1(16 mg)。
组分 4 经硅胶柱层析，用石油醚-丙酮(4∶ 1)洗脱，再
经 Sephadex LH-20 柱层析，用甲醇洗脱，得 5(32
mg)。组分 5 经硅胶柱层析，用氯仿-甲醇(5 ∶ 1)洗
脱，再经 Sephadex LH-20 柱层析，用甲醇洗脱和反
相 RP-18 柱层析，用甲醇-水(4∶ 6)洗脱，得化合物 3
(21 mg)和 4(14 mg)。组分 8 有晶体析出，经甲醇-
水重结晶得 6(185 mg)。
2 结构鉴定
化合物 1 白色无定形粉末，mp. 341 ～ 343 ℃;
HR-ESI-MS m/z:259. 0593［M + H］+，281. 0408［M
+ Na］+，539. 0943［2M + Na］+。1H NMR(500 MHz，
CDCl3)δ:7. 46(1H，d，J = 1. 6 Hz，H-6) ，7. 01(1H，
d，J = 1. 3 Hz，H-5) ，6. 96(1H，d，J = 1. 3 Hz，H-3) ，
6. 91(1H，d，J = 1. 6 Hz，H-4) ，2. 55(3H，s，8-
CH3) ;
13C NMR(125 MHz，CDCl3)δ:169. 0(s，C-5) ，
167. 9(s，C-7) ，167. 6(s，C-3) ，162. 0(s，C-4) ，
155. 8(s，C-2) ，141. 3(s，C-6) ，140. 8(s，C-1) ，
120. 5(d，C-5) ，112. 1(s，C-1) ，107. 3(d，C-6) ，
104. 6(d，C-3) ，103. 9(d，C-4) ，100. 7(s，C-2) ，27. 3
(q，8-CH3)。以上数据与文献报道一致
［4］，故化合
物 1 确定为交链孢酚。
化合物 2 白色无定形粉末，mp. 260 ～ 262 ℃;
HR-ESI-MS m/z:273. 0741［M + H］+。1H NMR(500
MHz，CDCl3)δ:12. 49(1H，s，3-OH) ，7. 25(1H，d，J
= 1. 5 Hz，H-6) ，6. 98(1H，d，J = 1. 0 Hz，H-5) ，
6. 96(1H，d，J = 1. 0 Hz，H-3) ，6. 73(1H，d，J = 1. 5
Hz，H-4) ，3. 80(3H，s，5-OCH3) ，2. 68(3H，s，8-
CH3) ;
13C NMR(125 MHz，CDCl3)δ:167. 6(s，C-5) ，
166. 7(s，C-7) ，166. 4(s，C-3) ，161. 0(s，C-4) ，
154. 6(s，C-2) ，139. 7(s，C-6) ，139. 6(s，C-1) ，
119. 5(d，C-5) ，110. 7(s，C-1) ，104. 9(d，C-6) ，
103. 5(d，C-3) ，100. 5(s，C-2) ，100. 3(d，C-4) ，56. 5
(q，5-OCH3) ，26. 3(q，8-CH3)。以上数据与文献报
道一致［5］，故化合物 2 确定为 djalonensone。
化合物 3 白色无定形粉末，mp. 178 ～ 181 ℃;
HR-ESI-MS m/z:750. 5538 ［M + Na］+。1H NMR
(500 MHz，CD3OD)δ:5. 78(1H，m，H-5) ，5. 51(1H，
dd，J = 15. 3，7. 3 Hz，H-4) ，5. 17(1H，m，H-8) ，4. 29
(1H，d，J = 7. 8 Hz，H-1) ，4. 16(1H，m，H-1a) ，
4. 13(1H，m，H-3) ，4. 01(2H，m，H-2，2) ，3. 89(1H，
d，J = 11. 7 Hz，H-6 a) ，3. 72(1H，dd，J = 11. 7，5. 1
Hz，H-6 b) ，3. 68(1H，m，H-1b) ，3. 38(1H，m，H-
3) ，3. 36(1H，m，H-4) ，3. 29(1H，m，H-2) ，3. 22
(1H，t，J = 8. 6 Hz，H-5) ，2. 09(2H，m，H-6，7) ，
2. 01(2H，t，J = 7. 5 Hz，H-10) ，1. 62(3H，s，H-19) ，
0. 93(6H，t，J = 7. 0 Hz，H-18，16) ;13 C NMR(125
MHz，CD3OD)δ:70. 2(t，C-1) ，55. 3(d，C-2) ，73. 5
(d，C-3) ，131. 6(d，C-4) ，135. 4(d，C-5) ，34. 2(t，C-
6) ，33. 5(t，C-7) ，125. 2(d，C-8) ，137. 1(s，C-9) ，
41. 2(t，C-10) ，29. 5(C-11) ，31. 2-30. 8(t，C-12 to C-
15) ，33. 5(t，C-16) ，24. 1(t，C-17) ，14. 9(q，C-18) ，
16. 5(q，C-19) ，177. 6(s，C-1) ，73. 3(d，C-2) ，36. 3
(t，C-3) ，31. 2-30. 8(t，C-4 to C-13) ，29. 1(t，C-
14) ，24. 1(t，C-15) ，14. 9(q，C-16) ，105. 1(d，C-
1) ，75. 4(d，C-2) ，78. 4(d，C-3) ，72. 0(d，C-
4) ，78. 4(d，C-5) ，63. 1(t，C-6)。以上数据与
文献报道一致［6］，故化合物 3 确定为脑苷脂 B。
化合物 4 白色无定形粉末，mp. 162 ～ 165 ℃;
HRESI-MS m/z:754. 5560 ［M + H］+。1H NMR(500
MHz，CDCl3)δ:5. 81(1H，m，H-5) ，5. 70(1H，m，H-
4) ，5. 43(2H，m，H-4，3) ，5. 08(1H，m，H-8) ，4. 55
(1H，m，H-2) ，4. 38(1H，d，J = 7. 5 Hz，H-1) ，4. 03
(2H，m，H-1a，3) ，3. 84(2H，m，H-2，6 a) ，3. 51
(1H，m，H-1b) ，3. 36(1H，m，H-6b) ，2. 00(2H，m，
H-6，7) ，1. 93(2H，t，J = 7. 2 Hz，H-10) ，1. 56(3H，s，
H-19) ，0. 88(6H，t，J = 6. 8 Hz，H-18，18) ;13 C NMR
(125 MHz，CDCl3)δ:69. 4(t，C-1) ，53. 9(d，C-2) ，
72. 8(d，C-3) ，128. 9(d，C-4) ，134. 7(d，C-5) ，32. 9
(t，C-6) ，32. 3(t，C-7) ，123. 6(d，C-8) ，136. 4(s，C-
9) ，40. 2(t，C-10) ，28. 6(C-11) ，30. 2-29. 6(t，C-12
to C-15) ，32. 3(t，C-16) ，23. 1(t，C-17) ，14. 5(q，C-
18) ，16. 4(q，C-19) ，175. 0(s，C-1) ，73. 4(d，C-2) ，
127. 1(d，C-3) ，134. 6(d，C-4) ，30. 2-29. 6(t，C-5
158Vol. 23 吴少华等:滇牡丹内生真菌 Alternaria sp． PR-14 的代谢产物研究
to C-16) ，23. 1(t，C-17) ，14. 5(q，C-18) ，103. 4
(d，C-1) ，73. 7(d，C-2) ，76. 6(d，C-3) ，69. 9(d，
C-4) ，76. 6(d，C-5) ，61. 5(t，C-6)。以上数据
与文献报道一致［7］，故化合物 4 确定为脑苷脂 C。
化合物 5 白色无定形粉末，mp. 141 ～ 143 ℃;
HRESI-MS m/z:684. 6533 ［M + H］+。1H NMR(500
MHz，C5D5N)δ:8. 57(1H，d，J = 8. 9 Hz，NH) ，5. 09
(1H，m，H-2) ，4. 61(1H，dd，J = 7. 5，3. 9 Hz，H-2) ，
4. 50(1H，dd，J = 10. 6，4. 4 Hz，H-1a) ，4. 41(1H，dd，
J = 10. 6，4. 9 Hz，H-1b) ，4. 34(1H，dd，J = 6. 8，4. 9
Hz，H-3) ，4. 27(1H，m，H-4) ，2. 24，2. 03(2H，m，H-
3) ，1. 92(2H，m，H-5) ，1. 70(2H，m，H-6) ，1. 30 ～
1. 25(m，H-5 to H-23) ，0. 86(6H，t，J = 6. 5 Hz，H-
18，24) ;13 C NMR(125 MHz，C5D5N)δ:62. 9(t，C-
1) ，53. 9(d，C-2) ，77. 7(d，C-3) ，73. 9(d，C-4) ，35. 0
(t，C-5) ，27. 5(t，C-6) ，30. 5-33. 0(t，C-7 to C-17) ，
15. 1(q，C-18) ，176. 1(s，C-1) ，73. 3(d，C-2) ，36. 6
(t，C-3) ，26. 7(t，C-4) ，30. 5-33. 0(t，C-5 to C-
23) ，15. 1(q，C-24)。以上数据与文献报道一
致［8］，故化合物 5 确定为(2S，3S，4R，2 R)-2-(2-
hydroxytetracosanoylamino)octadecane-1，3，4- triol。
化合物 6 无色针状结晶(甲醇) ，mp. 163 ～
165 ℃;ESI-MS m/z:183 ［M + H］+。1H NMR(500
MHz，C5D5N)δ:5. 04 ～ 4. 34(8H，m) ;
13 C NMR(125
MHz，C5D5N)δ:74. 2(d，C-3，C-4) ，73. 0(d，C-2，C-
5) ，66. 4(t，C-1，C-6)。以上数据与文献报道一
致［9］，故化合物 6 确定为甘露糖醇。
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