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紫景天中熊果苷的含量测定



全 文 :中国药物警戒第 8卷第 6期 2011年 6月 June, 2011, Vol.8, No.6
紫景天为景天科景天属紫景天 Sedum Purpureum
(L.)Schult 的干燥全草,具有收敛止血、清热解毒及调
节免疫功能等功效[1]。紫景天为多年生野生草本植物,株
高 40~60 cm,块根多数,胡萝卜状,茎直立,单一或少数
丛生,叶肥厚多汁,多对生或轮生,伞房状聚伞花序,花
紫红色,花期 7~8月,生长在山地林下、林缘草地,在我
国分布在东北、内蒙等地[2]。
熊果苷(对 - 羟基苯 -β- D- 吡喃葡萄糖苷)是源
于绿色植物的天然活性物质,又名熊果甙、熊果素、熊果
叶甙、熊果酚甙或杨梅甙,能有效地抑制皮肤中的生物
酪氨酸酶活性,阻断黑色素的形成,通过自身与酪氨酶
直接结合,加速黑色素的分解与排泄,从而减少皮肤色
素沉积,祛除色斑和雀斑,有很好的皮肤增白作用[3- 5]。熊
果苷还具有利尿、抗菌、镇咳、抗氧化等药理作用[6- 8],传
统用于治疗咳嗽、尿路感染等效果显著,但没有关于紫
景天中熊果苷含量分析的报道,本实验采用 HPLC法测
定紫景天中熊果苷的含量,方法简便,专属性好,为紫景
天的质量控制提供参考。
1 仪器与试药
Agilent高效液相色谱仪(美国安捷伦科技公司),可
变波长检测器(VWD),四元梯度泵,Agilent 1100化学工
作站,7725i手动进样器。紫景天,购于辽宁省台安县雅
化村玉民花卉苗木基地,经鉴定为 Sedum Purpureum(L.)
Schult的干燥全草;熊果苷对照品(湖北阿泰克化学有限
公司 20100923A,含量测定用);甲醇为色谱纯;水为纯
净水;其他试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2.1 色谱条件[9]
色谱柱:AgilentXDB- C18柱(4.6mm×150mm,5 m);
流动相:甲醇 - 水(20:80);检测波长:282nm;柱温:室
温;流速:0.8mL·min-1。
2.2 供试品溶液的制备
精密称取紫景天药材粉末 5g,置具塞锥形瓶中,加
入乙醇 50mL超声提取 30min,过滤,滤渣用乙醇洗涤 2
次,合并滤液,蒸干,转移到 25mL容量瓶中,甲醇定容
至刻度。滤液用微孔滤膜(0.22 m)过滤,取续滤液作为
样品溶液,备用。
2.3 熊果苷对照品的配制
精密称取熊果苷对照品 50.40 mg,置 50 mL量瓶中,
中图分类号:R927.2 文献标识码:A 文章编号:1672- 8629(2011)06- 0321- 02
基金项目:紫景天抗肿瘤活性成分研究,吉教科合字[2009]第攻 14号
作者简介:张海丰,男,博士,中药化学与新药基础研究。
E- mail:dragon1976999@163.com。
紫景天中熊果苷的含量测定
张海丰 1 孙健 2 滕坤 1 (1通化师范学院,吉林通化 134000;2中国中医科学院医学实验中心,北京 100700)
摘要:目的建立 HPLC测定紫景天中熊果苷含量的方法。方法采用 Agilent XDB- C18色谱柱(4.6mm×150mm,5 m),
以甲醇 - 水(20 80)为流动相,流速:0.8mL·min-1,柱温为室温,检测波长为 282nm。结果 熊果苷进样量在 5~
160μg范围内线性关系良好,r=0.9998,平均加样回收率为 101.67%,RSD为 3.06%(n=6)。结论该方法结果准确、灵
敏快速、重现性好,可用于紫景天中熊果苷含量的测定。
关键词:紫景天;熊果苷;高效液相色谱
Determination of Arbutin in Sedum Purpureum by HPLC
ZHANG Hai-feng1 SUN Jian2 TENG Kun1 (1Tonghua Normal University, Jilin Tonghua 134000, China; 2Experimental
Research Center, China Academy of Chinese Medical Sciences, Beijing 100700, China)
Abstract: Objective To establish a HPLC method for the determination of arbutin in Sedum Purpureum. Methods
Agilent XDB C18(4.6mm×150mm, 5μm) column was applied, using methanol-water(20 80) as mobile phase
with the rate of 0.8mL·min-1. The column temperature was room temperature and the detective wavelength was
282 nm. Results A good linearity was obtained over the range of 5~160μg for arbutin(r=0.9998). The average recovery
(n=6) was 101.67%(RSD=3.06%). Conclus ion The method is practical, convenient, accurate, and can be used as
the determination of arbutin in Sedum Purpureum.
Key words : Sedum purpureum; Arbutin; HPLC
μ
μ
·基础研究·
μ


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中国药物警戒第 8卷第 6期 2011年 6月 June, 2011, Vol.8, No.6
加甲醇溶解并稀释至刻度,摇匀,0.22 m滤膜过滤,制
成浓度为 1mg·mL-1的对照品贮备液,备用。
2.4 样品测定
参照“2.1”项下色谱条件,分别精密吸取熊果苷对照
品溶液和样品溶液各 10 L进样。在对照品溶液和样品
溶液色谱图相应位置上,有相同的保留时间(图 1)。按外
标法以峰面积计算,即得(表 1)。
2.5 线性关系考察
分别精密吸取熊果苷对照品溶液适量于 25 mL 量
瓶中,用甲醇稀释至刻度,配制成熊果苷浓度分别为 5、
10、20、40、80、160 g·mL-1溶液。取上述不同浓度的对照
品溶液各 10 L注入高效液相色谱仪,记录色谱图并计
算熊果苷不同浓度的峰面积比。以熊果苷的质量浓度 C
对 Y进行线性回归,结果表明 5~160 g·mL-1范围内,
质量浓度 C与峰面积比 Y呈线性关系,回归方程如下:
C=10.77Y+0.053,r=0.9998
2.6 精密度实验
精密吸取上述对照品溶液,参照“2.1”项下色谱条
件,重复进样 5次,每次进样 10 L,熊果苷峰面积积分
值的相对标准偏差 RSD为 0.43%,说明精密度良好。
2.7 稳定性实验
参照“2.1”项下色谱条件,取同一份样品溶液分别于
0,2,4,6,8,10,12,14,18,24h进样测定,结果熊果苷与
熊果苷色谱峰面积均无明显改变,RSD为 1.07%,表明
样品溶液稳定性良好。
2.8 加样回收率实验
精密吸取熊果苷对照品溶液(含熊果苷 20 g/mL)
1.5mL,置于 150mL具塞三角锥瓶中,共 6份,置水浴上
挥去溶剂后,精密加入 6份已知含量的紫景天 0.5g(熊
果苷含量为 58.9 g/g),按上述方法提取、测定,计算回
收率,RSD为 3.06%。
3 讨论
3.1 提取方法的选择
熊果苷易溶于水、乙醇,可溶于甲醇、丙酮,较难溶
于乙酸乙酯,不溶于乙醚、石油醚和氯仿,故选用乙醇为
提取溶剂,采用超声、回流、连续回流方法及不同超声时
间进行提取条件考察,结果表明,供试品用乙醇超声提
取 30 min为宜。
3.2 波长选择
取熊果苷对照品适量,加甲醇制成浓度约 10 g·mL-1
的溶液,在 180~350 nm波长范围扫描,测得熊果苷的
最大吸收波长为 282nm。
3.3 色谱方法的建立
因熊果苷极性大,出峰较快,故选用AgilentXDB- C18
色谱柱,并选用二元体系流动相甲醇 - 水(20 80),并将
表 2 加样回收率实验结果(n=6)
组分 样品量(mg) 样品中含量(mg) 对照品加入量(mg) 测得总量(mg) 回收率(%) 平均回收率(%) RSD(%)
熊果苷
502.37 0.0296 0.03 0.0602 102.03
101.67 3.06
501.86 0.0296 0.03 0.0613 105.80
499.23 0.0294 0.03 0.0591 98.98
501.42 0.0295 0.03 0.0589 97.89
499.54 0.0294 0.03 0.0597 100.92
502.15 0.0296 0.03 0.0609 104.41
图 1 熊果苷 HPLC色谱图
20
40
60
80
100
120
140
1 2 3 5 6 7 min40
1
A
0
mAU
20
40
60
80
100
120
140
1 2 3 5 6 7 min40
B
0
mAU
1
μ
μ
A:对照品色谱图;B:样品色谱图;1为熊果苷
表 1 样品含量测定结果(n=3)
组分 含量( g/g) 平均含量( g/g) RSD(%)
熊果苷
58.2
58.9 0.857.9
59.6
μμ
μ
μ
μ
μ
μ
μ

μ
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中国药物警戒第 8卷第 6期 2011年 6月 June, 2011, Vol.8, No.6
流速从 1mL·min-1降为 0.8mL·min-1,基线平稳,使熊果
苷得到了良好的分离,HPLC法操作简便,结果准确,适
于紫景天中熊果苷的含量测定与质量控制。
参考文献:
[1] 张继有.长白山植物药志[M].长春:吉林人民出版社,1982:502.
[2] 周以良.黑龙江草本植物志[M].哈尔滨:东北林业大学出版社,
1998:6.
[3] 丁国斌,陈璧,汤朝武.熊果苷对体外培养的人黑素细胞的作用[J].
第四军医大学学报,2001, 22(20):1846- 1848.
[4] Sugimoto K,Nishimura T, Nomura K, et al. Inhibitory effects of
alpha- arbutin on melanin Synthesis in cultured human melanomn
cells and a three- dimensional human skinmodel[J]. Biol PharmBull,
2004, 27(4):510- 514.
[5] Halder R M, Richards G M.Topical, agents used in the management
of hyperpigmentati on[J]. Skin Therapy Lett, 2004,9 (6):1- 3.
[6] 王伟,张天夫,牛志多,等.紫景天药膜治疗复发性口疮[J].口腔
医学纵横杂志,1994,10 (3):177- 178.
[7] 董钦,张春晶,周宏博,等.熊果苷拮抗 H2O2损伤的研究[J].哈尔
滨医科大学学报,2005,8(2):241.
[8] 雷铁池,朱文元,夏明玉.甘草酸、熊果苷及氢醌对小鼠黑素瘤
细胞黑素生成影响的比较研究[J].临床皮肤科杂志,2000,29(2):
69- 71.
[9] 姜洪君,郭凤根,张丽梅,等.滇产岩白菜中熊果酸含量的比较[J].
中国中药杂志,2010,35(14):1812- 1814.
(收稿日期:2010- 12- 07 编辑:温庆辉)
西归乙醇提取物抗疲劳作用的实验研究
董寿堂 1 王成军 2 刘家成 2 杜一民 2* (1保山中医药高等专科学校,云南保山 678000;2大理学院药学院,云南大理
671000)
中图分类号:R282 文献标识码:A 文章编号:1672- 8629(2011)06- 0323- 04
基金项目:大理学院应用开发基金资助项目(项目编号:KY421740)
作者简介:董寿堂,男,医学硕士,中药药理研究及药理学教学。
*通讯作者:杜一民,男,教授,临床及药物治疗研究。
duyimin1021@yahoo.com.cn
摘要:目的初步研究西归乙醇提取物抗疲劳的作用。方法通过负重游泳实验、急性脑缺血缺氧实验、亚硝酸钠中毒
存活实验、耐低温实验及自主活动实验,观察西归乙醇提取物对小鼠的抗疲劳作用。结果与生理盐水及溶剂组比
较,西归能明显延长小鼠负重游泳、NaNO2中毒、急性断头张口喘气的时间,提高小鼠低温存活率,降低小鼠在末次
给药后 30min、60min、120min的自主活动(P<0.05或 P<0.01)。结论西归乙醇提取物具有抗疲劳作用。
关键词:西归;小鼠;抗疲劳
Study on the Effect of Ethanol Extract of Xigui on Anti- fatigue
DONG Shou-tang1 WANG Cheng-jun2 LIU Jia-cheng2 DU Yi-min2* (1Baoshan College of Traditional Chinese
Medicine, Yunnan Baoshan 678000, China; 2Faculty of Pharmacy, Dali University, Yunnan Dali 671000, China)
Abstract: Objective To study the action of anti-fatigue of Xigui in mice. Methods Using the methods of the
weight loading swimming test, the acute cerebral ischemia irritable/hypoxic test, the sodium nitrite intoxation test,
the low-temperature test and theautonomic activities test, which to research the function of anti-fatigue of Xigui in
mice. Results Xigui could significantly prolong the time of loaded-swimming, delay the survival time of sodium nitrite
poisoning and prolong the breathing time of the mice cut heads. It could increase the survival rate of low-temperature
in mice, and shorten the time of spontaneous motion at 30min、60min、120min after the last administration(P<0.05 or
P<0.01). Conclus ion Xigui has the obvious function of anti-fatigue.
Key words : Xigui; mice; anti-fatigue
西归为伞形科属植物西藏凹乳芹 Vicatia thieticade
Boiss.的根,又称独脚当归,主要分布于云南西北部、四
川西部及西藏等地。西归在民间已有百余年的使用历
史,在云南大理有人工栽培,当地人用其作为滋补蔬菜
食用,鲜品也可生吃,风味独特[1- 4]。西归具有补血、补气、
调经等功效;主要用于面色萎黄,眩晕心悸,血虚所致的
月经不调,痛经等症[3]。现代药理学研究表明,西归具有
抗疲劳、抗缺氧及耐高温作用,其可能是西归增强血乳
酸脱氢酶活力、降低血乳酸水平、提高肝糖原的储存量
有关[5,6]。本实验将从负重游泳、急性亚硝酸钠中毒、急性
!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!
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