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野生花卉紫景天快繁技术研究



全 文 :张海洋 ,徐秀芳.野生花卉紫景天快繁技术研究 [ J] .江苏农业科学, 2010(2):55-57.
野生花卉紫景天快繁技术研究
张海洋 , 徐秀芳
(湖州师范学院生命科学学院 ,浙江湖州 313000)
  摘要:以紫景天(Sedumpurpureum)的茎尖 、嫩茎和叶片为外植体 , 研究了影响愈伤组织诱导 、芽和根分化的激素
浓度配比。结果表明 , 最佳外植体是茎尖;最佳愈伤组织诱导培养基为 MS+6-BA2.0 mg/L+IAA0.25 mg/L;最佳
不定芽诱导培养基为 MS+6-BA2.0 mg/L+IAA0.25mg/L;最佳生根培养基为 1/2MS+IBA0.05 mg/L。
  关键词:紫景天;快繁技术;激素浓度;培养基
  中图分类号:S682.1+90.4 +3  文献标志码:A  文章编号:1002-1302(2010)02-0055-03
收稿日期:2009-07-30
基金项目:浙江省湖州市科技计划资助项目(编号:2006YN16)。
作者简介:张海洋(1954—),男 , 吉林怀德人 ,教授 ,主要从事野生植
物资源与开发利用研究。 Tel:(0572)2322550;E-mail:haiyangzh
@hutc.zj.cn。
  紫景天(Sedumpurpureum)为景天科景天属 ,多年生草本
野生花卉。株高 40 ~ 60 cm,块根多数 ,胡萝卜状 ,茎直立 ,多
丛生 ,叶肥厚多汁 ,倒卵形 ,无柄 ,多对生或轮生 ,伞房状聚伞
花序 ,花紫红色 ,花期 7— 8月 。生长在山地林下 、林缘草地 ,
分布在东北 、内蒙等地 [ 1] 。笔者于 2003年由黑龙江引种到浙
江省湖州市栽培 ,经过几年的栽培观察发现 ,紫景天具有抗旱
性强 、适应范围广 、易栽培 、生长期长等优点 ,是一种有很高开
发价值的野生花卉资源 ,适合在南方和干旱地区栽培 。紫景
天不能产生种子 ,无法进行有性繁殖 ,扦插和分株繁殖系数
低 ,无法满足市场需求 ,组织快繁技术是快速扩大紫景天繁殖
系数的有效途径 。
1 材料与方法
1.1 外植体选择与消毒处理
选用湖州市引种驯化 5年的紫景天健壮植株 ,以茎尖 、嫩
茎和叶片作为外植体 。处理时 ,茎尖和去掉叶片茎段剪成长
约 2cm的小段 ,叶片剪成 2 cm2小块 。在超净工作台上 ,先
用 70%乙醇消毒 20 s,再用 0.1% HgCl2浸泡 6 min,无菌水
冲洗 3次 ,用无菌滤纸将外植体表面的水吸干 ,将茎尖和茎段
剪成长 0.5 ~ 0.8 cm的小段 ,叶片切成 0.5 cm×0.5 cm小
块 ,接种到不同浓度激素配比的培养基上进行培养 。
1.2 培养基配制
整个试验采用 MS基本培养基 ,附加蔗糖 30 g/L,琼脂
6.5 g/L,各种培养基的 pH值均为 5.6[ 2] 。
1.2.1 愈伤组织诱导 在愈伤组织诱导试验中选用 2种激
素 ,设计 3种培养基配方:(1)MS+6 -BA2.0 mg/L+IAA
0.25mg/L;(2)MS+6-BA1.0 mg/L+IAA0.25 mg/L;(3)
MS+6-BA0.5 mg/L+IAA0.25 mg/L[ 3] ,将处理好的外植
体剪成适宜大小的小块 ,接到上述 3种培养基中 。
1.2.2 生芽培养  将由外植体诱导生成的愈伤组织切成
2mm×3 mm小块 ,接到含有不同浓度的 6-BA、IAA、Kt和 ZT
的 18种培养基上 。生芽培养基分 2类 18种 ,第 1类是 MS+6
-BA(0.5、1.0、2.0 mg/L)+IAA(0.1、0.25、0.5 mg/L)9种;
第 2类是在前 9种的基础上分别添加 KT和 ZT的培养基 ,即
MS+6-BA(0.5、1.0、2.0mg/L)+IAA(0.1、0.25、0.5mg/L)
+KT0.5mg/L+ZT0.5mg/L9种 ,共 18种 [4 ] 。
1.2.3 生根培养 将由愈伤组织通过培养诱导生成的芽转
接到不同生根培养基中进行生根培养 ,分别在培养 10 d和
30d时进行观察 ,并做好记录 。生根培养基为:1 /2MS+NAA
(0.1、0.2、0.3、0.4mg/L)4种 , 1 /2MS+IBA(0.05、0.1、0.2、
0.5 mg/L)4种 ,总共8种 [ 5 ] 。
1.3 培养条件
上述试验每处理接种 20瓶 , 每瓶接种 3 ~ 4个外植体 。
培养室温度(25±1)℃,光照时间 12 h/d,光强 25 000 lx。
1.4 炼苗和移栽
开盖炼苗时需要向培养瓶中加水 ,炼苗环境室温为 25 ~
28℃。炼苗 5d后 ,从培养瓶中移栽至装有全元素营养土(pH
值 7.0)(江苏镇江大宇生态肥厂生产)的育苗盘中栽培。早期
1 ~ 2周内注意勤喷水和遮阳 ,成活后进行常规管理。
2 结果与分析
2.1 愈伤组织诱导
在愈伤组织诱导试验中 ,设计 3种培养基 ,将 3种外植体
分别接到培养基中 ,诱导结果见表 1。从 3种外植体诱导效
果来看 ,茎尖效果最好 ,诱导率均在 67%以上 ,嫩茎次之 ,叶
片效果最差 ,由此可见 ,茎尖和嫩茎均可用作外植体 。在 3种
培养基中 , 1号培养基最为理想 , 3种外植体都有愈伤组织形
成 ,茎尖效果最好 ,诱导率高达 91.3%;2号培养基也比较好
(图 1),茎尖和嫩茎的诱导率均在 60%以上 。
表 1  3种不同外植体诱导形成愈伤组织结果(接种 30d)
培养基 外植体诱导率(%)
茎尖 嫩叶 嫩茎
(1)MS+6-BA2.0mg/L+IAA 0.25mg/L 91.3 7.5 72.5
(2)MS+6-BA1.0mg/L+IAA 0.25mg/L 75.3 0 61.3
(3)MS+6-BA0.5mg/L+IAA 0.25mg/L 67.5 0 46.3
  在 1号培养基中 ,以茎尖作为外植体培养大约 2周之后
开始产生黄绿色的愈伤组织 ,愈伤组织渐渐由浅绿色转变为
绿色 ,愈伤组织的表层有许多致密的瘤状突起;以嫩茎作为外
植体诱导愈伤组织时 , 15d左右开始产生浅绿色或绿色愈伤
—55—江苏农业科学 2010年第 2期
DOI :10.15889/j.issn.1002-1302.2010.02.094
组织 ,并且随着时间延长 ,愈伤组织颜色慢慢变绿 ,愈伤组织
诱导率较高;用叶片作为外植体进行诱导培养 ,不能形成愈伤
组织 。故可以选择茎尖和嫩茎作为诱导形成愈伤组织的外植
体 , 1号培养基为愈伤组织诱导最佳培养基(图 2)。
2.2 生芽诱导试验
将诱导成的愈伤组织接种到配制好的 2类 18种培养基
中进行芽诱导试验 ,来筛选最佳的诱导生芽培养基配方 。
从表 2可以看出 ,在第 1类 9种培养基中培养时都能诱
导出不定芽 , 1至 9号培养基中的外植体平均分化出 6个以
上的不定芽 ,最多的高达 15个 。 IAA(0.1、0.25、0.5 mg/L)3
种浓度中 , 在含有 IAA0.25 mg/L的 2、5、8号 3种培养基
中芽的分化率比较高 ,平均分别是 11、13和 15个 ,可见IAA
0.25 mg/L是理想的浓度 。在含有 6 -BA(0.5、 1.0、
2.0 mg/L)培养基中 ,不定芽的数量随着浓度升高而增加 ,在
与 IAA0.25 mg/L组合的 3种培养基中 ,表现更为明显 ,同样
表现出随着 6-BA浓度增加 ,分化的芽数呈递增趋势 。该结
果与尹文兵等的试验结果一致 [ 6] ,表明景天科植物在芽诱导
表 2 不同 6-BA、IAA浓度组合培养基配方
对诱导紫景天生芽的影响(接种 35d)
培养基序号 培养基配方(mg/L) 出芽个数(个)
1 MS+6-BA0.5+IAA0.1 7
2 MS+6-BA0.5+IAA0.25 11
3 MS+6-BA0.5+IAA0.5 6
4 MS+6-BA1.0+IAA0.1 6
5 MS+6-BA1.0+IAA0.25 13
6 MS+6-BA1.0+IAA0.5 8
7 MS+6-BA2.0+IAA0.1 8
8 MS+6-BA2.0+IAA0.25 15
9 MS+6-BA2.0+IAA0.5 8
  注:出芽个数是指每块愈伤组织出芽个数的平均数。
过程中需要较高的 6-BA浓度和较低的 IAA浓度 , 6-BA在
诱导芽分化过程中起主导作用 。
在第 2类培养基中均添加有 KT0.5 mg/L和 ZT
0.5 mg/L。由表 3可知 ,每块愈伤组织能产生不定芽 ,但芽的
个数比较少 ,平均为 2 ~ 5个 。由此可知 , 在本试验中 KT
0.5 mg/L和 ZT0.5 mg/L激素 ,对芽的诱导不但没有促进作
用 ,而且还有一定的抑制作用 。
表 3 不同 6-BA、IAA浓度组合附加 Kt、ZT培养基配方
对诱导紫景天生芽的影响(接种 35d)
培养基
序号
培养基配方
(mg/L)
出芽个数
(个)
10 MS+6-BA0.5+IAA 0.1+KT0.5+ZT0.5 2
11 MS+6-BA 0.5+IAA 0.25+KT0.5+ZT0.5 4
12 MS+6-BA0.5+IAA 0.5+KT0.5+ZT0.5 3
13 MS+6-BA1.0+IAA 0.1+KT0.5+ZT0.5 4
14 MS+6-BA 1.0+IAA 0.25+KT0.5+ZT0.5 5
15 MS+6-BA1.0+IAA 0.5+KT0.5+ZT0.5 3
16 MS+6-BA2.0+IAA 0.1+KT0.5+ZT0.5 2
17 MS+6-BA 2.0+IAA 0.25+KT0.5+ZT0.5 5
18 MS+6-BA2.0+IAA 0.5+KT0.5+ZT0.5 3
  试验结果表明 ,紫景天芽诱导的理想培养基配方为 MS+
6-BA2.0 mg/L+IAA0.25 mg/L(图 3)。培养基 MS+
6-BA1.0mg/L+IAA0.25 mg/L也比较好 ,诱导芽数平均
达 13个(图 4)。
2.3 生根诱导试验
将生长健壮 、增殖苗长至 1.5 ~ 2 cm的有效苗分别接入
1至 8号生根培养基中进行生根培养 , 分别在培养 10 d和
30d时对试验结果进行统计分析(表 4、表 5)。由表 4、表 5可
—56— 江苏农业科学 2010年第 2期
知 ,不同激素浓度对紫景天的生根率影响不显著 ,对生根时间
及根生长速度影响较显著 。培养 1周后 ,各种培养基中的芽
苗均开始生根;10 d时 , 5号培养基上生根 12条 , 生根率最
高 ,达 68%,根的平均长度也最长 ,达 1.0 cm;6号培养基效
果也比较好 , 生根 10条 , 生根率达 52%,根的平均长度达
0.5 cm。培养到 30d时 ,各种培养基上的生根率接近 100%, 5
号培养基中不仅生根率达 100%,且根的平均长度最长 ,达
5.0 cm(图 5);6号培养基效果比较理想 ,生根率达 99.2%,
且根的平均长度达 3.8 cm(图 6)。
表 4 生根培养 10d时不同激素浓度对生根结果的影响
生根培养
基序号
培养基配方
(mg/L)
生根数
(条)
生根率
(%)
根的平均长
度(cm)
1 1/2MS+NAA 0.1 10 20 0.8
2 1/2MS+NAA 0.2 6 12 0.4
3 1/2MS+NAA 0.3 7 18 0.5
4 1/2MS+NAA 0.4 9 15 0.6
5 1 /2MS+IBA0.05 12 68 1.0
6 1/2MS+IBA0.1 10 52 0.5
7 1/2MS+IBA0.2 9 50 0.5
8 1/2MS+IBA0.5 7 38 0.4
表 5 生根培养 30d时不同激素浓度对生根结果的影响
生根培养
基序号
培养基配方
(mg/L)
生根率
(%)
根的平均长度
(cm)
(1 1/2MS+NAA 0.1 100 4.0
(2 1/2MS+NAA 0.2 98.7 2.1
(3 1/2MS+NAA 0.3 96.3 1.9
(4 1/2MS+NAA 0.4 98.5 2.2
(5 1/2MS+IBA0.05 100 5.0
6 1/2MS+IBA0.1 99.2 3.8
7 1/2MS+IBA0.2 98.6 3.7
8 1/2MS+IBA0.5 98.3 3.2
  通过以上试验结果可知 ,各种不同配方的培养基均可诱
导紫景天生根 ,且生根率都在 96%以上 ,其中 5号培养基是
最理想的生根培养基 。
2.4 试管苗炼苗与移栽条件
2.4.1 炼苗 试管苗炼苗过程共 5 d,分 2个阶段 。前 2 d
在原组织培养室中打开培养瓶盖 ,每天向瓶内喷入适量蒸馏
水 ,保持瓶内湿润:后 3 d移入栽苗的实验室中继续炼苗 ,每
天向瓶内加入 15 ~ 20 mL存放 24 h后的自来水 ,满足试管苗
对水分需要 。
2.4.2 移栽 移栽容器为 72穴育苗盘 ,栽培基质为花卉市
场购买的全营养土 ,栽培试验室温度 25 ~ 28 ℃。移栽时小心
从培养瓶中取出试管苗 ,用自来水洗去培养基 ,移栽到栽培基
质中 。操作时注意栽培深度 ,茎尽量不要埋在栽培基质中 ,防
止烂苗 ,特别是要洗净培养基 ,防止烂根 ,提高成活率 。
3 结论
组织培养是实现紫景天快速繁殖的有效方法 ,此方法成
苗率高 ,受季节影响小 , 一年四季均可进行 [7 ] 。茎尖是理想
的外植体 ,愈伤组织诱导率高达 91.3%;嫩茎作为外植体诱
导率也较高 ,最高达到 72.5%。
诱导愈伤组织最佳培养基是 MS+6 -BA2.0 mg/L+
IAA0.25 mg/L, 对茎尖和嫩茎愈伤组织诱导率分别达到
91.3%和 72.5%;诱导芽分化比较好的培养基是 MS+6-BA
2.0 mg/L+IAA0.25 mg/L和 MS+6-BA1.0 mg/L+IAA
0.25mg/L,诱导出的芽数均在 13个以上;诱导生芽最佳培养
基组合是 MS+6-BA2.0 mg/L+IAA0.25 mg/L,诱导出的
芽数高达 15个 , 6-BA在紫景天的芽诱导过程中起主导作
用 ,在 0.5、1.0、2.0 mg/L范围内随着 6-BA浓度增高诱导
率也提高;IBA、NAA2种激素对紫景天最终生根影响效果不
是特别明显;30 d调查 8种培养基配方 ,生根率均在 96%以
上;不同的激素种类和浓度影响生根的时间 ,从生根试验结果
看 , 1/2MS+IBA0.05mg/L的培养基配方最佳 ,生根早 ,生根
率 100%,根系发达 。
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