全 文 ：全球每年新发胃癌约百万，我国属胃癌发病率
和病亡率较高的国家之一，其发病率和病亡率均高
于世界平均水平的两倍[1-2]；另外，胰腺癌是 1种恶
性程度较高的肿瘤，多发生于中老年人，其发病率
发达国家高于发展中国家。随着我国生活水平的
提高和饮食结构的改变，胰腺癌的发病率呈上升趋
势，且有年轻化的倾向。目前，对胃癌和胰腺癌的治
疗方法，如化学治疗法、放射治疗法、生物治疗法等，
其治疗效果均不理想，治疗药物不良反应较大[1，3]。笔
者通过对传统中草药的筛选，发现毛茛等多种中草
【基金项目】：*1苏州市科技支撑计划项目（编号：SS201004）
【作者简介】：*2朱峰妍(1984－)，女，硕士
【通信作者】：*3顾振纶（1936－），男，教授，博士生导师 研究方向：心血管药理
【联系电话】：0512-65190599 E-mail:zhenlungu.2003@163.com
DOI：10.3969/j.issn.1672-7878.2013.01-006 网络出版时间：2013/3/1 12:53:04
网络出版地址：http://www.cnki.net/kcms/detail/32.1726.R.20130301.1253.201301.24_006.html
毛茛总苷对人胃癌细胞和胰腺癌细胞增殖作用的初步研究*1
朱峰妍 1*2，傅士龙 2，成旭东 1，曹志飞 2，蒋小岗 1，鲍美美 2，周泉生 2，顾振纶 1*3
1苏州大学，苏州中药研究所，江苏 苏州 215007；2苏州大学，唐仲英血液学研究中心，江苏 苏州 215123
【摘 要】 目的：研究毛茛总苷体外对人胃癌细胞MGC803和人胰腺癌 PATU898细胞增殖、细胞周期的影响。方
法：采用Alamar Blue和瑞-姬染色方法检测毛茛总苷对人胃癌细胞MGC803和人胰腺癌细胞 PATU8988增殖的作
用；PI染色法观察毛茛总苷对MGC803和 PATU8988细胞周期的影响；Annexin V/PI双染实验法检测毛茛总苷对
MGC803细胞凋亡的影响。结果：用Alamar Blue检测及瑞-姬染色法，其结果显示毛茛总苷对人胃癌细胞MGC803
和人胰腺癌细胞 PATU8988表现出具有较好地增殖和抑制作用，其 48 h的半数抑制浓度分别为 222.05 µg/mL，
341.23 µg/mL；用 PI单染法，其结果显示毛茛总苷对 2株肿瘤细胞的细胞周期无明显影响；用Annexin V/PI双染法，
其实验结果显示毛茛总苷可诱导MGC803细胞凋亡。结论：毛茛总苷在体外可以明显抑制MGC803和 PATU8988
的增殖，其作用机制可能与诱导细胞凋亡有关，而与细胞周期阻滞无关。
【关键词】 毛茛总苷；胃癌；胰腺癌；MGC803；PATU8988；细胞凋亡
【中图分类号】 R 965 【文献标志码】 A 【文章编号】 1672-7878(2013)01-024-005
Anti-proliferation Effect of Total Glycosides of Ranunculus Japonicus on
Gastric Cancer Cells and Pancreatic Cancer Cells of Human in Vitro*1
ZHU Feng-yan1*2，FU Shi-long2，CHENG Xu-dong1，CAO Zhi-fei2，
JIANG Xiao-gang1，BAO Mei-mei2，ZHOU Quan-sheng2，GU Zhen-lun1*3
1Suzhou Institute of TCM，Suzhou University，Suzhou Jiangsu 215007，China
2Cyrus Tang Hematology Center，Suzhou University，Suzhou Jiangsu 215123，China
ABSTRACT Objective: To observe and to detect the effect of total glycosides of Ranunculus japonicus on human gas-
tric cancer cell and pancreatic cancer cells proliferation and cell cycle in vitro. Methods: The effects of total glycosides
of Ranunculus japonicus on human gastric cancer cell and pancreatic cancer cells proliferation were observed by Alamar
Blue assay and Wright-Giemsa assay. PI assay was used to detect the effect of total glycosides of Ranunculus japonicus
on the cell cycle distribution of MGC803 and PATU8988. Annexin V/PI double staining assay was used to detect the cell
apoptosis of MGC803. Results: AlamarBlue and Wright-Giemsa staining results showed that that total glycosides of
Ranunculus japonicus could obviously inhibit MGC803 and PATU8988 proliferation and the IC50 at 48h was about
222.05 µg/mL and 341.23 µg/mL. The flow cytometry PI staining assay results showed that total glycosides of Ranuncu-
lus japonicus have little effect on the MGC803 and PATU8988 cell cycle arrest. The Annexin V/PI double staining assay
results tell us that the total glycosides of Ranunculus japonicus can induce MGC803 apoptosis. Conclusion: Total glyco-
sides of Ranunculus japonicus could effectively inhibite human gastric cancer cell MGC803 and pancreatic cancer cell
PATU8988 proliferation. The mechanism of it is associated with cell apoptosis, but not with cell cycle arrest.
KEY WORDS total glycosides of Ranunculus japonicus; human gastric cancer cell; pancreatic cancer cell; MGC803;
PATU8988; cell apoptosis
[Anti Infect Pharm，2013，10(1):024~028]
抗 感 染 药 学 Anti Infect Pharm 2013 March; 10(1)
朱峰妍，等.毛茛总苷对人胃癌细胞和胰腺癌细胞增殖作用的初步研究
·· 024
药均具有明显的抗肿瘤作用；为进一步分离、提取
毛茛中的抗肿瘤成分，研究发现毛茛中毛茛总苷具
有较好的抗癌作用，并对毛茛总苷的抗人胃癌细胞
MGC803 和人胰腺癌细胞 PATU8988 细胞增殖的
作用进行了体外研究。
1 材料与方法
1.1 细胞系
人胃癌细胞 MGC803，人胰腺癌细胞 PA-
TU8988(本实验室保存)，用 DMEM（高糖）培养基培
养。置培养箱内常规(5% CO2，37℃）培养，2 d换液
1次，3~4 d传代 1次。
1.2 实验药品与试剂
毛茛总苷 (本实验室自制)，用 PBS 溶解，用
DMEM(高糖)培养基稀释成所需浓度。
DMEM（高糖）培养基（HyClone公司）；胎牛血
清（GIBCO 公司）；胰酶（Trypsin，BIOSHARP 公
司）；瑞-姬染液（南京建成科技有限公司）；DAPI试
剂（罗氏公司）；RNase A（美国 Biomiga公司）；二甲
基亚枫（DMSO）、碘化丙锭(PI)（美国 Sigma公司）；
Alamarblue试剂、Trizol试剂（美国 Invitrogen公司；
逆转录试剂盒（#K1622）（Fermentas，美国）；PCR试
剂盒（DR001B）（中国大连宝生物工程有限公司）；
GelRed核酸凝胶染料（41003）（美国 Boitium）；引物
（中国上海生工生物工程技术服务有限公司）。
1.3 实验方法
1.3.1 毛茛总苷的提取 取干燥的毛茛全草剪碎，
分别用 10倍、8倍、6倍质量的 85%乙醇液回流提取
3次，每次 1.5 h，抽滤，合并提取液，减压浓缩回收溶
剂至无醇味。浓缩液分别用等体积的石油醚、氯仿、
乙酸乙酯萃取若干次至有机溶剂层为浅绿色。回收
溶剂，得上层为石油醚萃取物、氯仿萃取物、乙酸乙酯
萃取物及下层（水层）。水层部位用蒸馏水溶解，滤液
过滤，经D-101大孔树脂吸附，水洗，弃去，再用 95%
乙醇洗脱，收集此部位，蒸干乙醇得膏状物，即毛茛
G组分（主要是三萜皂苷类成分）。
1.3.2 Alamar Blue 法的检测 取 96孔板，每孔接
种合适数量的人胃癌细胞MGC803和人胰腺癌细
胞 PATU8988。经培养 24 h后，更换新鲜培养液，同
时分别加入不同浓度（100~600 µg/mL）的毛茛总苷，
对照组加入含 0.6% DMSO的培养基，放入 37℃，
5% CO2培养箱内培养。培养 46 h后，加入 10 µL/孔
Alamarblue试剂，继续培养 2 h后，将其在酶标仪上
测定荧光 OD560/OD590的比值，并按照文献报道[4-5]的
方法计算抑制率和半数抑制浓度（n＝3)。
1.3.3 瑞-姬染色法的测定 取对数生长期的人胃癌
细胞MGC803和胰腺癌细胞 PATU8988，调整细胞
浓度为 104/孔，接种于 24孔培养板内。24 h后分别加
入含不同浓度的毛茛总苷的完全培养基，对照组加入
含 0.6% DMSO的培养基；48 h后去除培养基，依次加
入瑞-姬染液A 50 µL/孔，静置 1 min，再加入 100 µL/
孔染液B，混匀后作用 5 min，吸弃染液，用 PBS洗脱
2次，用OLYMPUS FSX-100将其拍照（n＝3)。
1.3.4 流式细胞仪的检测 细胞周期的检测参照
相关文献报道[4-5]，用不同浓度的毛茛总苷处理胃癌
细胞 MGC803 和胰腺癌细胞 PATU8988，24 h 后，
收集细胞，用 PBS洗涤 2次，加入体积分数为 70%
乙醇液，将其置 4℃ 内固定，过夜。取出离心洗涤
后，加入 5 µL RNA 酶（RNAse），置 37 ℃ 温育
30 min后，再加入 10 mg/mL 2.5 µL PI染液混匀，置
4℃ 避光 30 min后，用流式细胞仪检测细胞周期的
分布（n＝3)。
1.3.5 Annexin V/PI双染法的检测 收集细胞包括
其上清液，置 1 000 r/min离心机内离心 5 min，弃去
上清液，用冰 PBS 重悬细胞，并转移入 1.5 mL的
EP管中，离心（2 000 r/min）5 min，弃去上清液，加入
300 µL AnnexinⅤ binding buffer重悬细胞后，再分
别加入 4.5 µL PI及 3 µL AnnexinⅤ 后，置 4℃ 避
光 10 min后，用流式细胞仪检测细胞凋亡（n＝3)。
1.3.6 统计学分析 采用 SPSS 16.0版统计软件中
Oneway ANOVA进行分析，其组间差异采用 LSD
检验，实验数据以平均值±标准差（x-±s)表示。
2 结果
2.1 毛茛总苷对人胃癌细胞 MGC803和人胰腺癌
细胞 PATU8988增殖作用的影响
毛茛总苷对胃癌细胞MGC803和胰腺癌细胞
PATU8988表现出具有较好的增殖与抑制作用，且随
着药物浓度的提高，其增殖抑制作用相应地增强，给
药 48 h 后，其对胃癌细胞 MGC803 和胰腺癌细
胞 PATU8988的半数抑制浓度分别为 222.05 µg/mL
和 341.23 µg/mL。毛茛总苷对胃癌细胞 MGC803
和胰腺癌细胞PATU8988增殖的影响情况，见图 1。
瑞-姬染色法的实验结果显示：毛茛总苷对胃癌
细胞MGC803和胰腺癌细胞 PATU8988表现出具有
较好的增殖与抑制作用，且随着药物浓度的提高，其
对肿瘤细胞增殖与抑制作用相应地增强，当药物浓
度达到 400 µg/mL时，细胞增殖得到抑制。毛茛总
苷对人胃癌细胞 MGC803 和胰腺癌细胞 PA-
TU8988增殖的影响情况，见图 2，3。
2.2 毛茛总苷对人胃癌细胞 MGC803和胰腺癌细
胞 PATU8988细胞周期的影响
流式细胞仪的检测结果显示：随着毛茛总苷浓
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度的增高，MGC803和 PATU8988细胞周期并无太 大变化。毛茛总苷对人胃癌细胞MGC803和胰腺癌
0 200 400 600 800 1 000 1 200 0 200 400 600 800 1 000 1 200
抑
制
率（
%）
抑
制
率（
%）
100
80
60
40
20
0
100
80
60
40
20
0
毛茛总苷浓度（ρB/µg·mL－1）
A. MGC803；B. PATU8988
图 1 毛茛总苷对人胃癌细胞MGC803和胰腺癌细胞 PATU8988增殖的影响（Alamar Blue法）


注：A.对照组；B. 100 µg/mL；C. 200 µg/mL；D. 400 µg/mL; E. 600 µg/mL; F. 800 µg/mL。
图 2 毛茛总苷对人胃癌细胞MGC803增殖作用的影响（瑞-姬染色法）示意图
A B C
E FD
注：A.对照组；B. 100 µg/mL；C. 200 µg/mL；D. 400 µg/mL; E. 600 µg/mL; F. 800 µg/mL。
图 3 毛茛总苷对人胰腺癌细胞 PATU8988增殖作用的影响（瑞-姬染色法）示意图
A B C
A B C
E FD


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一步研究解决。
毛茛(Ranunculus japonicus Thumb)，又名鱼疗
草、野芹菜等，是多年生草本毛茛科毛茛属植物，全
国各地都有分布，来源广泛。毛茛及其提取物毛茛
总苷具有镇痛、消炎、抗菌、增强记忆力、降低动脉
血压等多种活性[6-8]，但是毛茛总苷抗肿瘤作用迄今
为止尚未见报道。笔者通过前期的筛选，发现毛茛
总苷具有很好的抗肿瘤作用，特别是对人胃癌细胞
和胰腺癌细胞更为敏感。图 1，2，3显示：随着毛茛
总苷浓度的增高，人胃癌细胞MGC803和人胰腺癌
细胞 PATU8988的增殖受到明显抑制，其半数抑制
浓度分别为 222.05 µg/mL和 341.23 µg/mL。并作
了进一步研究显示，毛茛总苷对人胃癌细胞
MGC803 和人胰腺癌细胞 PATU8988 细胞周期无
明显阻滞作用（见图 4，5，6，7），但是，其可诱导
信
号
强
度（
I/
ρA
）
A.对照组 B. 100 µg/mL
C. 200 µg/mL D. 300 µg/mL
E. 400 µg/mL F. 600 µg/mL
PI(碘化丙啶）
波长（λ/nm）
图 4 毛茛总苷对人胃癌细胞MGC803细胞
周期影响的示意图
细
胞
数
A A A A A A
B C B C B C B C B C B C
70
60
50
40
30
20
10
0
百
分
比（
%
）
毛茛总苷浓度（ρB/µg·mL－1）
0 100 200 300 400 600
注：A. GO/G1期; B. S期; C. G2/M期。
图 5 毛茛总苷对人胃癌细胞MGC803细胞周期影响的
统计示意图
图 7 毛茛总苷对人胰腺癌细胞 PATU8988细胞
周期影响的示意图
信
号
强
度（
I/
ρA
）
A.对照组 B. 100 µg/mL
C. 200 µg/mL D. 300 µg/mL
E. 400 µg/mL F. 600 µg/mL
波长（λ/nm）
PI(碘化丙啶）
细
胞
数
毛茛总苷浓度（ρB/µg·mL－1）
注：A. GO/G1期; B. S期; C. G2/M期。
0 100 200 300 400 600
图 6 毛茛总苷对人胰腺癌细胞 PATU8988细胞周期影响的
统计示意图
百
分
比（
%
）
A A A A A A
B C B C B C B C B C B C
70
60
50
40
30
20
10
0
细胞 PATU8988细胞周期的影响情况，见图 4，5，6，7。
2.3 毛茛总苷对人胃癌细胞 MGC803细胞凋亡的
影响
用Annexin V/PI 双染法实验检测 MGC803 细
胞凋亡，其结果显示随着毛茛总苷浓度的增高，人胃
癌细胞MGC803细胞凋亡率逐渐增高。毛茛总苷对
人胃癌细胞MGC803细胞凋亡的影响情况，见图 8。
3 讨论
癌症是人类最难对付的顽症之一，而胃癌和胰
腺癌是人类常见的恶性肿瘤，我国是胃癌发病率和
病亡率最高的国家之一[2]，近年来，胰腺癌的发病率
也呈现逐年上升趋势。至今，还无治疗效果较好的
药物和治疗方法，现有的很多治疗方法以及治疗药
物，其不良反应大，且愈后易复发等问题还尚待进
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0
μ g /m l
0.15% 2.41% 1.22% 4.38% 1.24% 2.50%
91.77% 5.67% 88.70% 5.70% 88.15% 8.11%
11.43% 7.12% 20.71% 8.95% 26.18% 9.91%
77.90% 3.55% 68.04% 2.30% 61.69% 2.22%
200 µg/mL100 µg/mL对照组
300 µg/mL 400 µg/mL 600 µg/mL
P
1
Annexin V-FITC
图 8 毛茛总苷对人胰腺癌细胞 PATU8988细胞周期影响的示意图
MGC803细胞凋亡（图 8），提示：毛茛总苷对人胃癌
细胞 MGC803 和人胰腺癌细胞 PATU8988 的抑制
作用，可能是通过细胞周期阻滞和细胞凋亡等作用
而发挥其抗癌作用。
综上所述，毛茛总苷能抑制人胃癌细胞
MGC803和胰腺癌细胞 PATU8988的增殖，并且可
以诱导MGC803细胞凋亡。本研究结果显示：毛茛
总苷具有抗肿瘤的作用为今后的研究提供了依据，
但是，其抗肿瘤的作用机制以及主要活性成分的提
取尚待进一步研究。
参考文献
[1] Vita FD，Giuliani F，Silvestris N，et al. Current status of
targeted therapies in advanced gastric cancer[J].Expert
Opin Ther Targets，2012，16 Suppl 2: S29-34.
[2] 张 雯，王金万.胃癌的流行病学及其分型[J].中国全科医
学：医生读者版，2010，(11):16-17.
[3] Demetter P，Marechal R，Verset L，et al. Molecular chang-
es in pancreatic cancer: implications for molecular target-
ing therapy[J].Acta Gastroenterol Belg，2012，75(2): 210-
214.
[4] 夏 靖，陈宗元，吴 丽，等.新型组蛋白去乙酰化酶抑制
剂致U251细胞周期阻滞、凋亡及其机制的研究[J].中国
药理学通报，2012，28(8): 1120-1125.
[5] 董 杨，季 光，施建蓉，等.橘红素上调Cyclin B1和抑制
ERK磷酸化诱导人胃癌AGS细胞周期阻滞[J].中国药
理学通报，2012，28(6): 823-827.
[6] 秦汝兰，孟庆双.毛茛总皂苷对小鼠耐缺氧及记忆能力
的影响 [J]. 安徽农业科学，2011，39(22):13404-13404，
13406.
[7] 苏 波.毛茛皂苷的提取及其抑菌作用初步分析[J].怀化
学院学报，2011，30(2):53-56.
[8] 王榕乐，谭毓治，罗绍宝.毛茛总苷抗炎镇痛作用研究
[J].时珍国医国药，2009，20(2):290-292.
（收稿日期：2012-12-10 修回日期：2012-12-19）
（责任编辑：丁龙其）
【作者简介】：*1文庆怡（1988－），女，药师，硕士研究生
【通讯作者】：*2靳勇（1973－），男，副教授，硕士生导师
【联系电话】：0512-67784226 E-mail：jyct@163.com
DOI：10.3969/j.issn.1672-7878.2013.01-007 网络出版时间：2013/3/1 12:53:04
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阿霉素-N-乳糖酰壳聚糖-丝素蛋白微球的制备以其兔体
内药效学的研究
文庆怡 1*1，张光宇 2，陈红栓 3，靳 勇 1*2，张学农 2
1苏州大学附属第二医院,江苏 苏州 215004；2苏州大学药学院,江苏 苏州 215123
3扬州市第一人民医院,江苏 扬州 225001
【摘 要】 目的：制备阿霉素-N-乳糖酰壳聚糖-丝素蛋白微球(adriamycin-N-chitosan-silk fibroin-microspheres，
抗 感 染 药 学 Anti Infect Pharm 2013 March; 10(1)
文庆怡，等.阿霉素-N-乳糖酰壳聚糖-丝素蛋白微球的制备以其兔体内药效学的研究
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