全 文 ：·论著·
荜拔酰胺通过调控ＰＩ３Ｋ／Ａｋｔ信号通路促进
胃癌ＢＧＣ－８２３细胞ｐ５３表达的实验研究＊
温桂海１　王涛１　朱涛２
（１．邯郸市中心医院普外一科，河北 邯郸０５６００１；２．四川大学华西医院，四川 成都６１００４１）
　　【摘要】　目的　研究荜拔酰胺对胃癌ＢＧＣ－８２３细胞的抑制作用和对ｐ５３表达的调节作用及相关的分子机制。
方法　采用不同浓度的荜拔酰胺（０μＭ、２μＭ和２０μＭ）对胃癌ＢＧＣ－８２３细胞进行干预。在不同时间点（０ｈ、２４ｈ和４８ｈ）
采用 ＭＴＴ法对ＢＧＣ－８２３细胞活性进行检测。干预４８ｈ后，采用ｑＰＣＲ对荜拔酰胺干预的ＢＧＣ－８２３细胞ｐ５３ｍＲＮＡ表
达水平进行检测。采用ｗｅｓｔｅｒｎ　ｂｌｏｔ对荜拔酰胺干预的ＢＧＣ－８２３细胞ｐ５３蛋白表达水平以及ＰＩ３Ｋ和Ａｋｔ活化水平进
行检测。结果　采用不同浓度荜拔酰胺（０μＭ、２μＭ和２０μＭ）对胃癌ＢＧＣ－８２３细胞进行干预后，细胞活性呈时间依赖性
和浓度依赖性下降，差异均有统计学意义（Ｐ＜０．０５）。荜拔酰胺干预４８ｈ后，胃癌ＢＧＣ－８２３细胞ｐ５３ｍＲＮＡ和蛋白的
表达水平呈浓度依赖性增加而ＰＩ３Ｋ和Ａｋｔ活化水平呈浓度依赖性降低，差异均存在统计学意义（Ｐ＜０．０５）。结论　研
究结果表明，荜拔酰胺可以通过下调ＰＩ３Ｋ／Ａｋｔ信号通路的活化水平对胃癌ＢＧＣ－８２３细胞的增殖产生显著抑制作用，并
发现该机制与促进抑癌基因ｐ５３的表达密切相关。
【关键词】　荜拔酰胺；胃癌；ＢＧＣ－８２３细胞；ｐ５３；ＰＩ３Ｋ；Ａｋｔ
【中图分类号】　Ｒ　７３５．２　　【文献标志码】　Ａ　　　ｄｏｉ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１６７２－３５１１．２０１６．１０．００３
Ｐｉｐｅｒｌｏｎｇｕｍｉｎｅ　ｐｒｏｍｏｔｅｓ　ｐ５３ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｖｉａ　ｉｎａｃｔｉｖａｔｉｏｎ　ｏｆ　ＰＩ３Ｋ／Ａｋｔ　ｓｉｇｎａｌ
ｐａｔｈｗａｙ　ｉｎ　ｇａｓｔｒｉｃ　ｃａｎｃｅｒ　ＢＧＣ－８２３ｃｅｌｓ
ＷＥＮ　Ｇｕｉｈａｉ　１，ＷＡＮＧ　Ｔａｏ１，ＺＨＵ　Ｔａｏ２
（１．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ　ｏｆ　Ｔｈｅ　Ｆｉｒｓｔ　Ｇｅｎｅｒａｌ　Ｓｕｒｇｅｒｙ，Ｈａｎｄａｎ　Ｃｅｎｔｒａｌ　Ｈｏｓｐｉｔａｌ，Ｈａｎｄａｎ０５６００１，Ｈｅｂｅｉ，Ｃｈｉｎａ；
２．Ｗｅｓｔ　Ｃｈｉｎａ　Ｈｏｓｐｉｔａｌ，Ｓｉｃｈｕａｎ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｃｈｅｎｇｄｕ６１００００，Ｃｈｉｎａ）
　　【Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ】　Ｔｏ　ｅｘｐｌｏｒｅ　ｔｈｅ　ａｎｔｉ－ｃａｎｃｅｒ　ｐｒｏｐｅｒｔｙ　ｏｆ　ｐｉｐｅｒｌｏｎｇｕｍｉｎｅ（ＰＬ）ｉｎ　ｇａｓｔｒｉｃ　ｃａｎｃｅｒ　ＢＧＣ－８２３ｃｅｌｓ　ａｎｄ　ｉｔｓ
ｕｎｄｅｒｌｙｉｎｇ　ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　ｍｅｃｈａｎｉｓｍ．Ｍｅｔｈｏｄｓ　Ｔｈｒｅｅ　ｓｐｅｃｉｆｉｃ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ（０μＭ，２μＭ　ａｎｄ　２０μＭ）ｏｆ　ＰＬ　ｗｅｒｅ　ｉｎｃｌｕｄｅｄ　ｉｎ
ｃｕｒｒｅｎｔ　ｓｔｕｄｙ．Ａｔ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ｔｉｍｅ　ｐｏｉｎｔｓ（０ｈ，２４ｈａｎｄ　４８ｈ），ｔｈｅ　ｃｅｌ　ｖｉａｂｉｌｉｔｉｅｓ　ｏｆ　ｇａｓｔｒｉｃ　ｃａｎｃｅｒ　ＢＧＣ－８２３ｃｅｌｓ　ｗｅｒｅ　ｃａｌｃｕ－
ｌａｔｅｄ　ｂｙ　ＭＴＴ　ａｓｓａｙ．Ｍｅａｎｗｈｉｌｅ，ｔｈｅ　ｍＲＮＡ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｏｆ　ｐ５３ｗａｓ　ｍｅａｓｕｒｅｄ　ｂｙ　ｑＰＣＲ．Ｔｈｅｎ，Ｗｅｓｔｅｒｎ　ｂｌｏｔ　ｗａｓ　ｐｅｒ－
ｆｏｒｍｅｄ　ｔｏ　ａｎａｌｙｚｅ　ｔｈｅ　ｐｒｏｔｅｉｎ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｏｆ　ｐ５３ａｎｄ　ｔｈｅ　ｐｈｏｓｐｈｏｒｙｌａｔｉｏｎ　ｏｆ　ＰＩ３Ｋａｎｄ　Ａｋｔ．Ｒｅｓｕｌｔｓ　Ｇａｓｔｒｉｃ　ｃａｎｃｅｒ　ＢＧＣ－
８２３ｃｅｌｓ　ｖｉａｂｉｌｉｔｉｅｓ　ｗｅｒｅ　ｄｏｓａｇｅ－ｄｅｐｅｎｄｅｎｔｌｙ　ａｎｄ　ｔｉｍｅ－ｄｅｐｅｎｄｅｎｔｌｙ　ｉｎｈｉｂｉｔｅｄ　ｂｙ　ＰＬ．Ｍｅａｎｗｈｉｌｅ，ａｆｔｅｒ　４８ｈｏｕｒｓ　ｏｆ　ａｄｍｉｎ－
ｉｓｔｒａｔｉｏｎｓ，ｏｕｒ　ｄａｔａ　ｆｉｇｕｒｅｄ　ｏｕｔ　ｔｈａｔ　ｐ５３ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｗａｓ　ｄｏｓａｇｅ－ｄｅｐｅｎｄｅｎｔｌｙ　ｕｐ－ｒｅｇｕｌａｔｅｄ　ａｎｄ　ｔｈｅ　ｐｈｏｓｐｈｏｒｙｌａｔｉｏｎ　ｏｆ　ＰＩ３Ｋ
ａｎｄ　Ａｋｔ　ｗｅｒｅ　ｄｏｓａｇｅ－ｄｅｐｅｎｄｅｎｔｌｙ　ｒｅｄｕｃｅｄ　ｂｙ　ＰＬ　ｉｎ　ｇａｓｔｒｉｃ　ｃａｎｃｅｒ　ＢＧＣ－８２３ｃｅｌｓ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ　Ｔｈｅ　ａｎｔｉ－ｔｕｍｏｒ　ｐｒｏｐｅｒｔｙ　ｏｆ
ｐｉｐｅｒｌｏｎｇｕｍｉｎｅ（ＰＬ）ｖｅｒｙ　ｌｉｋｅｌｙ　ｒｅｓｕｌｔｓ　ｆｒｏｍ　ｕｐ－ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｐ５３ｔｈｒｏｕｇｈ　ｔｈｅ　ｉｎａｃｔｉｖａｔｉｏｎ　ｏｆ　ＰＩ３Ｋ／Ａｋｔ　ｓｉｇｎａｌ　ｐａｔｈｗａｙ　ｉｎ
ｇａｓｔｒｉｃ　ｃａｎｃｅｒ　ＢＧＣ－８２３ｃｅｌｓ，ｐｒｏｖｉｄｅｓ　ｔｈｅ　ｐｒｏｍｉｓｉｎｇ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｃｌｉｎｉｃ　ｕｓｅ　ｏｆ　ｐｉｐｅｒｌｏｎｇｕｍｉｎｅ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｔｒｅａｔｍｅｎｔ　ｏｆ　ｇａｓｔｒｉｃ　ｃａｎｃｅｒ
ａｎｄ　ｏｔｈｅｒ　ｍａｌｉｇｎａｎｔ　ｔｕｍｏｒｓ　ｉｎ　ｆｕｔｕｒｅ．
【Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ】　Ｐｉｐｅｒｌｏｎｇｕｍｉｎｅ；Ｇａｓｔｒｉｃ　ｃａｎｃｅｒ；ＢＧＣ－８２３ｃｅｌｓ；ｐ５３；ＰＩ３Ｋ；Ａｋｔ
　　基金项目：中国博士后科研基金（２０１４Ｍ５５２３６９）
　　流行病学调查显示，近年来胃癌（ｇａｓｔｒｉｃ　ｃａｎｃｅｒ）
的发病率虽有所降低，但其仍然是人类最常见的恶性
肿瘤之一，目前仍位居全球恶性肿瘤发病率的第４位
和肿瘤死亡人数的第２位［１－４］。国际癌症研究机构
（ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ　ａｇｅｎｃｙ　ｆｏｒ　ｒｅｓｅａｒｃｈ　ｏｎ　ｃａｎｃｅｒ，ＩＡＲＣ）
２００８年的调查发现胃癌的发病有明显的地域性，其中
东亚地区的韩国（６２．２／１０万人）、蒙古共和国（４８．２／
１０万人）、日本（４６．８／１０万人）和中国（４１．３／１０万人）
是胃癌发病率最高的区域［１－４］。临床研究显示胃癌的
病理类型以腺癌（ａｄｅｎｏｃａｒｃｉｎｏｍａｓ）更为常见［１－４］。荜
·５４３１·西部医学２０１６年１０月 第２８卷第１０期　Ｍｅｄ　Ｊ　Ｗｅｓｔ　Ｃｈｉｎａ，Ｏｃｔｏｂｅｒ　２０１６，Ｖｏｌ．２８，Ｎｏ．１０
拔酰胺（ｐｉｐｅｒｌｏｎｇｕｍｉｎｅ，ＰＬ）是胡椒科植物荜茇
（Ｐｉｐｅｒ　ｌｏｎｇｕｍ　Ｌｉｎｎ．）、长 柄 胡 椒 （Ｐ．ｓｙｌｖａｔｉｃｕｍ
Ｒｏｘｂ）和瘤突胡椒（Ｐ．ｔｕｂｅｒｃｕｌａｔｕｍ　Ｊａｃｑ．）等的有效
药理成分，其主要在植物的根部含量较高［５－７］。目前多
个研究发现荜拔酰胺具有抑制炎症反应、抑制肿瘤细
胞增殖和分化等多种药理作用［５－７］。同时在对非小细
胞肺癌和白血病细胞的研究中证实荜拔酰胺的抗肿
瘤活性与调控ＰＩ３Ｋ／Ａｋｔ信号通路密切相关［８，９］。本
文研究荜拔酰胺对胃癌ＢＧＣ－８２３细胞的抑制作用和
对ｐ５３表达的调节作用及相关的分子机制。
１　材料和方法
１．１　主要试剂和材料　ＰＣＲ试剂盒购自北京百泰克
生物技术有限公司；ＭＴＴ 试剂盒购买于美国 Ｐｒｏ－
ｍｅｇａ公司；鼠抗人ｐ５３抗体、鼠抗人ｐｈｏｓｐｈｏ－ＰＩ３Ｋ
抗体、鼠抗人ＰＩ３Ｋ抗体、鼠抗人ｐｈｏｓｐｈｏ－Ａｋｔ抗体、
鼠抗人Ａｋｔ抗体和鼠抗人β－ａｃｔｉｎ抗体购于美国Ｓａｎ－
ｔａ　Ｃｒｕｚ公司；小牛血清购买于美国Ｂｏｖｏｇｅｎ公司；荜
拔酰胺购买于美国Ｓｉｇｍａ公司；ＲＰＭＩ－１６４０培养基购
买于美国Ｇｉｂｃｏ公司。
１．２　方法
１．２．１　细胞培养　胃癌ＢＧＣ－８２３细胞常规接种在含
１０％ＦＢＳ、１００ｇ／Ｌ 青霉素、１００ｇ／Ｌ链霉素的 ＲＰＭＩ
１６４０培养液中，置于３７℃、９５％空气、５％ ＣＯ２ 孵箱内
培养。每４８ｈ换液、传代１次，取对数生长期细胞用
于实验。
１．２．２　细胞活性检测　取对数生长期细胞消化制成
单细胞悬液，接种于９６孔培养板中，每孔接种１００μＬ
约含５×１０３ 个细胞。贴壁后无血清培养细胞１６ｈ至
２４ｈ，使细胞同步化。加入不同浓度（０μＭ、２μＭ 和
２０μＭ）的荜拔酰胺，在３７℃，５％ ＣＯ２ 条件下培养细
胞，未干预组作为对照组。使用 ＭＴＴ比色试验对不
同时间点（０ｈ、２４ｈ和４８ｈ）的细胞生长状态进行测定，
实验重复４次。对应时间点的细胞活性（％）＝ （ＯＤ
干预组／ＯＤ对照组）×１００（％）［１０］。
１．２．３　细胞ＧＬＵＴ１ｍＲＮＡ表达检测　按照试剂盒
说明书提取细胞总ＲＮＡ，反转录为ｃＤＮＡ，以ｃＤＮＡ
为模板进行ｑＰＣＲ反应。ｐ５３正义５′－ＧＡＧＧＧＡＴＧ
ＴＴＴＧＧＧＡ　ＧＡＴＧＴＡＡ－３′，反义５′－ＣＣＣＴＧＧＴＴＡ
ＧＴＡＣＧＧ　ＴＧＡＡＧＴＧ－３′；β－ａｃｔｉｎ 正义：５′－ＴＧＧＣＡ
ＴＴＧＣＣＧ　ＡＣＡＧ　ＧＡＴ－３′，反义：５′－ＧＣＴＣＡＧＧＡＧＧ
ＡＧＣＡＡＴＧＡＴＣＴ－３′。使用β－ａｃｔｉｎ作为内参基因，
使用 ２－△△ＣＴ 公式计算目的基因相对表达量。
ΔΔＣｔ＝ （Ｃｔ，目标 －Ｃｔ，β－ａｃｔｉｎ）干预组 － （Ｃｔ，目标 －
Ｃｔ，β－ａｃｔｉｎ）对照组
［１１］。
１．２．４　Ｗｅｓｔｅｒｎ　ｂｌｏｔ法检测细胞ｐ５３蛋白表达水平
以及ＰＩ３Ｋ和 Ａｋｔ磷酸化水平　按照试剂盒操作要
求，首先提取细胞总蛋白，并进行聚丙烯酰胺凝胶电
泳（ＳＤＳ－ＰＡＧＥ），然后转移至硝酸纤维素滤膜上，用脱
脂奶粉封闭１ｈ，分别加入鼠抗人ｐ５３抗体、鼠抗人
ｐｈｏｓｐｈｏ－ＰＩ３Ｋ 抗 体、鼠 抗 人 ＰＩ３Ｋ 抗 体、鼠 抗 人
ｐｈｏｓｐｈｏ－Ａｋｔ抗体、鼠抗人 Ａｋｔ抗体和鼠抗人β－ａｃｔｉｎ
抗体，４℃孵育过夜，洗膜后加入相应的辣根过氧化物
酶标记的二抗（１∶２０００），用ＥＣＬ进行显色，用凝胶成
像分析系统进行扫描［１２］。
１．３　统计学分析　采用ＳＰＳＳ　２１．０进行单因素方差
分析，计量资料以均数±标准差表示。两样本均数多
重比较采用ＬＳＤ法，Ｐ＜０．０５为差异有统计学意义。
２　结果
２．１　ＭＴＴ法结果分析　在不同浓度（０μＭ、２μＭ 和
２０μＭ）荜拔酰胺（ＰＬ）干预后，采用 ＭＴＴ法对不同时
间点（０ｈ、２４ｈ和４８ｈ）胃癌ＢＧＣ－８２３细胞活性进行检
测。与对照组细胞相比较，荜拔酰胺干预的胃癌
ＢＧＣ－８２３细胞活性呈浓度依赖性和时间依赖性降低，
差异均有统计学意义（Ｐ＜０．０５），见表１。
表１　ＭＴＴ比色法测定胃癌ＢＧＣ－８２３细胞活性（ｎ＝４，珔ｘ±ｓ）
Ｆｉｇｕｒｅ　１　Ｃｅｌ　ｖｉａｂｉｌｉｔｉｅｓ　ｏｆ　ｇａｓｔｒｉｃ　ｃａｎｃｅｒ　ＢＧＣ－８２３ｃｅｌｓ　ａｔ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ｔｉｍｅ
ｐｏｉｎｔｓ
药物浓度
不同时间点
０ｈ ２４ｈ ４８ｈ
０μＭ　 １００％ １００％ １００％
２μＭ　 ９９．０７±４．１３　 ７１．８８±１３．０６① ５１．２９±７．１６①
２０μＭ　 １０１．１１±３．８９　 ４２．３２±９．２４①② ３０．０５±４．５２①②
注：对应时间点与０μＭ 相比较①Ｐ＜０．０５，对应时间点与２μＭ 相比较
②Ｐ＜０．０５。
２．２　ｐ５３ｍＲＮＡ和蛋白的表达　给予胃癌ＢＧＣ－８２３
细胞不同浓度（０μＭ、２μＭ 和２０μＭ）荜拔酰胺（ＰＬ）干
预４８ｈ后，采用ｑＰＣＲ和 ｗｅｓｔｅｒｎ　ｂｌｏｔ法对ＢＧＣ－８２３
细胞ｐ５３ｍＲＮＡ和蛋白的表达进行检测。与对照组
细胞相比较，给予荜拔酰胺干预的ＢＧＣ－８２３细胞ｐ５３
ｍＲＮＡ和蛋白表达水平呈浓度依赖性增加，差异均有
统计学意义（Ｐ＜０．０５），见表２和图１。
表２　胃癌ＢＧＣ－８２３细胞ｐ５３ｍＲＮＡ和蛋白表达水平以及ＰＩ３Ｋ和Ａｋｔ
磷酸化水平（ｎ＝４，珔ｘ±ｓ）
Ｔａｂｌｅ　２　Ｔｈｅ　ｍＲＮＡ　ａｎｄ　ｐｒｏｔｅｉｎ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｌｅｖｅｌｓ　ｏｆ　ｐ５３ａｎｄ　ｔｈｅ　ｐｈｏｓ－
ｐｈｏｒｙｌａｔｉｏｎ　ｏｆ　ＰＩ３Ｋａｎｄ　Ａｋｔ　ｉｎ　ｇａｓｔｒｉｃ　ｃａｎｃｅｒ　ＢＧＣ－８２３ｃｅｌｓ
药物
浓度 ｐ５３ｍＲＮＡ　 ｐ５３蛋白
ＰＩ３Ｋ磷酸化
水平
Ａｋｔ磷酸化
水平
０μＭ　 １　 ０．２５±０．０５　 ０．９６±０．０２　 ０．９８±０．０３
２μＭ　 ７．２２±２．１３①　 ０．４８±０．１５① ０．６１±０．２１①　 ０．５６±０．１８①
２０μＭ　１８．８９±６．１７①② ０．９４±０．０９①②０．３７±０．０４①② ０．４１±０．０９①②
注：与０μＭ相比较①Ｐ＜０．０５，②与２μＭ相比较Ｐ＜０．０５
·６４３１· 西部医学２０１６年１０月 第２８卷第１０期　Ｍｅｄ　Ｊ　Ｗｅｓｔ　Ｃｈｉｎａ，Ｏｃｔｏｂｅｒ　２０１６，Ｖｏｌ．２８，Ｎｏ．１０
图１　胃癌ＢＧＣ－８２３细胞ｐ５３蛋白表达的ｗｅｓｔｅｒｎ　ｂｌｏｔ结果
Ｆｉｇｕｒｅ　１　Ｗｅｓｔｅｒｎ　ｂｌｏｔ　ｒｅｓｕｌｔ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｐｒｏｔｅｉｎ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｏｆ　ｐ５３ｉｎ　ｇａｓｔｒｉｃ
ｃａｎｃｅｒ　ＢＧＣ－８２３ｃｅｌｓ
２．３　ＰＩ３Ｋ磷酸化水平　给予胃癌ＢＧＣ－８２３细胞不
同浓度（０μＭ、２μＭ和２０μＭ）荜拔酰胺（ＰＬ）干预４８ｈ
后，采用ｗｅｓｔｅｒｎ　ｂｌｏｔ法对ＢＧＣ－８２３细胞ＰＩ３Ｋ磷酸
化水平（ｐｈｏｓｐｈｏ－ＰＩ３Ｋ／ＰＩ３Ｋ）进行检测。与对照组细
胞相比较，荜拔酰胺干预的ＢＧＣ－８２３细胞ＰＩ３Ｋ磷酸
化水平呈剂量依赖性下降，差异均有统计学意义（Ｐ＜
０．０５），见图２和表２。
图２　胃癌ＢＧＣ－８２３细胞ＰＩ３Ｋ磷酸化的ｗｅｓｔｅｒｎ　ｂｌｏｔ结果
Ｆｉｇｕｒｅ　２　Ｗｅｓｔｅｒｎ　ｂｌｏｔ　ｒｅｓｕｌｔ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｐｈｏｓｐｈｏｒｙｌａｔｉｏｎ　ｏｆ　ＰＩ３Ｋｉｎ　ｇａｓｔｒｉｃ
ｃａｎｃｅｒ　ＢＧＣ－８２３ｃｅｌｓ
２．４　Ａｋｔ磷酸化水平　给予胃癌ＢＧＣ－８２３细胞不同
浓度（０μＭ、２μＭ 和２０μＭ）荜拔酰胺（ＰＬ）干预４８ｈ
后，采用ｗｅｓｔｅｒｎ　ｂｌｏｔ法对ＢＧＣ－８２３细胞Ａｋｔ磷酸化
水平（ｐｈｏｓｐｈｏ－Ａｋｔ／Ａｋｔ）进行检测。与对照组细胞相
比较，荜拔酰胺干预的ＢＧＣ－８２３细胞ＰＩ３Ｋ磷酸化水
平呈剂量依赖性下降，差异均有统计学意义（Ｐ＜
０．０５）。见图３和表２。
图３　胃癌ＢＧＣ－８２３细胞Ａｋｔ磷酸化的ｗｅｓｔｅｒｎ　ｂｌｏｔ结果
Ｆｉｇｕｒｅ　３　Ｗｅｓｔｅｒｎ　ｂｌｏｔ　ｒｅｓｕｌｔ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｐｈｏｓｐｈｏｒｙｌａｔｉｏｎ　ｏｆ　Ａｋｔ　ｉｎ　ｇａｓｔｒｉｃ
ｃａｎｃｅｒ　ＢＧＣ－８２３ｃｅｌｓ
３　讨论
胃癌（ｇａｓｔｒｉｃ　ｃａｎｃｅｒ）作为消化系统最常见的恶性
肿瘤之一，在我国具有高发病率、高致死率和低治愈
率的特征［１～４］。临床和基础研究均证实幽门螺旋杆菌
感染（Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ　ｐｙｌｏｒｉ　ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ）是最为重要的胃
癌发生的危险因素［２，１３－１４］。研究认为有幽门螺旋杆菌
感染与６５％～８０％的胃癌（即全球约６６００００例）发生
密切相关［２，１３－１４］。同时研究还发现使用抗菌素有效治
疗幽门螺旋杆菌感染可以显著降低胃癌的发病
率［２，１３－１４］。进一步研究显示幽门螺旋杆菌感染可以诱
导胃组织浅层的炎症反应和上皮细胞表型的改
变［２，１３－１４］。同时流行病学调查揭示吸烟、种族、饮食习
惯和经济状况以及地理环境等均与胃癌的发生有相
关性［２，１３－１４］。由于胃癌较高的发病率和较低的生存率
（大部分５年生存率均在２０％左右），寻求新的治疗方
式和方法将具有重要的价值和意义［２，１３－１４］。
中草药荜茇主要用于腹泻、呕吐和消化不良的临
床治疗。荜拔酰胺（ｐｉｐｅｒｌｏｎｇｕｍｉｎｅ，ＰＬ）是中药胡椒
科植物荜茇（Ｐｉｐｅｒ　ｌｏｎｇｕｍ　Ｌｉｎｎ．）、长柄胡椒（Ｐ．ｓｙｌ－
ｖａｔｉｃｕｍ　Ｒｏｘｂ）和瘤突胡椒（Ｐ．ｔｕｂｅｒｃｕｌａｔｕｍ　Ｊａｃｑ．）
等的有效药理成分［５－９］。近期的研究表明荜拔酰胺具
有抑制血小板凝集、抗细菌和真菌以及蠕虫、镇痛、抑
制炎症反应、抑制肿瘤细胞增殖、分化、浸润和转移等
多种生物学活性［１５－１８］。Ｓｕｎ　ＬＤ等的研究发现荜拔酰
胺及其衍生物对ＬＰＳ诱导小鼠巨噬细胞ＲＡＷ２６４．７
细胞表达的 ＮＯ、ＰＧＥ２、ｉＮＯＳ以及ＣＯＸ－２等炎症分
子均有显著的抑制作用［１５］。同时Ｓｏｎ　ＤＪ等的研究发
现荜拔酰胺对于小鼠冠状动脉粥样硬化斑块的形成
有显著的抑制作用［１６］。Ｊｉｎ　ＨＯ等的研究显示荜拔酰
胺可以有效的抑制乳腺癌细胞的增殖［１７］。Ｌｉｕ　ＱＲ等
的实验揭示荜拔酰胺对胶质母细胞瘤ＬＮ２２９细胞和
Ｕ８７ＭＧ细胞的增殖和侵袭有显著的抑制作用［１８］。在
本研究中我们的数据显示与对照组未干预细胞相比
较，荜拔酰胺干预的胃癌ＢＧＣ－８２３细胞活性呈浓度依
赖性和时间依赖性降低，差异均有统计学意义（Ｐ＜
０．０５）。该结果表明荜拔酰胺对胃癌ＢＧＣ－８２３细胞的
增殖有显著的抑制作用。
目前大量的研究证实ＰＩ３Ｋ／Ａｋｔ信号通路的过度
活化在包括非小细胞肺癌、胰腺癌、前列腺癌、胃癌和
肝癌等恶性肿瘤细胞的增殖、分化、浸润以及血管生
成过程均扮演着重要的角色［１９－２１］。Ｂｏｎｅｌｉ　ＭＡ等的
研究 显 示 ＰＩ３Ｋ 抑 制 剂 ＮＶＰ－ＢＫＭ１２０ 和 ＮＶＰ－
ＢＹＬ７１９均可有效的抑制肺鳞状细胞癌细胞上皮－间
质转化（ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ－ｔｏ－ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ　ｔｒａｎｓｉｔｉｏｎ，ＥＭＴ）
过程及肿瘤细胞体外和体内增殖过程［１９］。Ｙｉｎｇ　Ｊ等
·７４３１·西部医学２０１６年１０月 第２８卷第１０期　Ｍｅｄ　Ｊ　Ｗｅｓｔ　Ｃｈｉｎａ，Ｏｃｔｏｂｅｒ　２０１６，Ｖｏｌ．２８，Ｎｏ．１０
对胃癌患者病理组织分析后发现 ＰＩ３Ｋ 和磷酸化
ＡＫＴ的表达水平与患者肿瘤的神经和血管浸润、肿
瘤的大小以及淋巴结转移及其他组织器官转移等与
肿瘤分期和恶性程度相关的指标间具有正相关性［２０］。
Ｔｉａｎ　Ｆ等的实验也证实防己诺林碱可以通过下调
ＰＩ３Ｋ／Ａｋｔ信 号 通 路 的 活 化 水 平 有 效 抑 制 胃 癌
ＳＧＣ７９０１细胞的增殖过程［２１］。另一方面近期的研究
显示荜拔酰胺的生物活性与下调ＰＩ３Ｋ／Ａｋｔ信号通路
的活化密切相关［８－９］。Ｗａｎｇ　Ｆ等通过在体和离体实
验显示荜拔酰胺对于非小细胞肺癌Ａ５４９细胞的抑制
作用与下调ＰＩ３Ｋ／Ａｋｔ信号通路的活化密切相关［８］。
在本实验中我们发现与对照组未干预细胞相比较，荜
拔酰胺干预的胃癌ＢＧＣ－８２３细胞ＰＩ３Ｋ和 Ａｋｔ磷酸
化水平呈剂量依赖性下降，差异均有统计学意义（Ｐ
均＜０．０５）。该结果表明荜拔酰胺可以有效下调胃癌
ＢＧＣ－８２３细胞ＰＩ３Ｋ／Ａｋｔ信号通路的活化。
此外由于ＰＩ３Ｋ／Ａｋｔ信号通路对于重要抑癌基因
ｐ５３的表达具有关键调控作用［２２－２３］。本实验中我们对
ｐ５３的表达进行检测后发现与对照组未干预细胞相比
较，给予荜拔酰胺干预的ＢＧＣ－８２３细胞ｐ５３ｍＲＮＡ
和蛋白表达水平呈浓度依赖性增加，差异均有统计学
意义（Ｐ 均＜０．０５）。该结果表明荜拔酰胺对于胃癌
ＢＧＣ－８２３细胞ｐ５３的合成有促进作用。
４　结论
本研究表明，荜拔酰胺可以通过下调ＰＩ３Ｋ／Ａｋｔ
信号通路对胃癌ＢＧＣ－８２３细胞的增殖产生显著抑制
作用，并发现该机制与促进抑癌基因ｐ５３的表达密切
相关。
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ｏｓｃｌｅｒｏｔｉｃ　ｐｌａｑｕｅ　ｆｏｒｍａｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｖａｓｃｕｌａｒ　ｓｍｏｏｔｈ　ｍｕｓｃｌｅ　ｃｅｌ　ｐｒｏ－
ｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ　ｂｙ　ｓｕｐｐｒｅｓｓｉｎｇ　ＰＤＧＦ　ｒｅｃｅｐｔｏｒ　ｓｉｇｎａｌｉｎｇ［Ｊ］．Ｂｉｏｃｈｅｍ
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ｄｅａｔｈ　ｔｈｒｏｕｇｈ　ＲＯＳ－ｍｅｄｉａｔｅｄ　ＣＨＯＰ　ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｐｏｔｅｎｔｉａｔｅｓ
ＴＲＡＩＬ－ｉｎｄｕｃｅｄ　ｃｅｌ　ｄｅａｔｈ　ｉｎ　ｂｒｅａｓｔ　ｃａｎｃｅｒ　ｃｅｌｓ［Ｊ］．Ｊ　Ｃａｎｃｅｒ
Ｒｅｓ　Ｃｌｉｎ　Ｏｎｃｏｌ，２０１４，１４０（１２）：２０３９－２０４６．
［１８］ Ｌｉｕ　ＱＲ，Ｌｉｕ　ＪＭ，Ｃｈｅｎ　Ｙ，ｅｔ　ａｌ．Ｐｉｐｅｒｌｏｎｇｕｍｉｎｅ　ｉｎｈｉｂｉｔｓ　ｍｉｇｒａ－
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［１９］ Ｂｏｎｅｌｉ　ＭＡ，Ｃａｖａｚｚｏｎｉ　Ａ，Ｓａｃｃａｎｉ　Ｆ，ｅｔ　ａｌ．Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ　ｏｆ　ＰＩ３Ｋ
Ｐａｔｈｗａｙ　Ｒｅｄｕｃｅｓ　Ｉｎｖａｓｉｖｅｎｅｓｓ　ａｎｄ　Ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ－ｔｏ－Ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ
Ｔｒａｎｓｉｔｉｏｎ　ｉｎ　Ｓｑｕａｍｏｕｓ　Ｌｕｎｇ　Ｃａｎｃｅｒ　Ｃｅｌ　Ｌｉｎｅｓ　Ｈａｒｂｏｒｉｎｇ
ＰＩＫ３ＣＡ　Ｇｅｎｅ　Ａｌｔｅｒａｔｉｏｎｓ［Ｊ］．Ｍｏｌ　Ｃａｎｃｅｒ　Ｔｈｅｒ，２０１５，１４（８）：
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［２０］ Ｙｉｎｇ　Ｊ，Ｘｕ　Ｑ，Ｌｉｕ　Ｂ，ｅｔ　ａｌ．Ｔｈｅ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｏｆ　ｔｈｅ　ＰＩ３Ｋ／ＡＫＴ／
ｍＴＯＲ　ｐａｔｈｗａｙ　ｉｎ　ｇａｓｔｒｉｃ　ｃａｎｃｅｒ　ａｎｄ　ｉｔｓ　ｒｏｌｅ　ｉｎ　ｇａｓｔｒｉｃ　ｃａｎｃｅｒ
ｐｒｏｇｎｏｓｉｓ［Ｊ］．Ｏｎｃｏ　Ｔａｒｇｅｔｓ　Ｔｈｅｒ，２０１５，８：２４２７－２４３３．
［２１］ Ｔｉａｎ　Ｆ，Ｄｉｎｇ　Ｄ，Ｌｉ　Ｄ．Ｆａｎｇｃｈｉｎｏｌｉｎｅ　ｔａｒｇｅｔｓ　ＰＩ３Ｋａｎｄ　ｓｕｐｐｒｅｓ－
ｓｅｓ　ＰＩ３Ｋ／ＡＫＴ　ｓｉｇｎａｌｉｎｇ　ｐａｔｈｗａｙ　ｉｎ　ＳＧＣ７９０１ｃｅｌｓ［Ｊ］．Ｉｎｔ　Ｊ
Ｏｎｃｏｌ，２０１５，４６（６）：２３５５－２３６３．
［２２］ Ｌｅｅ　ＷＳ，Ｙｉ　ＳＭ，Ｙｕｎ　ＪＷ，ｅｔ　ａｌ．Ｐｏｌｙｐｈｅｎｏｌｓ　Ｉｓｏｌａｔｅｄ　ｆｒｏｍ　Ａｌ－
ｌｉｕｍ　ｃｅｐａ　Ｌ．Ｉｎｄｕｃｅｓ　Ａｐｏｐｔｏｓｉｓ　ｂｙ　Ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ　ｏｆ　ｐ５３ａｎｄ　Ｓｕｐ－
ｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｏｆ　Ｂｃｌ－２ｔｈｒｏｕｇｈ　Ｉｎｈｉｂｉｔｉｎｇ　ＰＩ３Ｋ／Ａｋｔ　Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ　Ｐａｔｈ－
ｗａｙ　ｉｎ　ＡＧＳ　Ｈｕｍａｎ　Ｃａｎｃｅｒ　Ｃｅｌｓ［Ｊ］．Ｊ　Ｃａｎｃｅｒ　Ｐｒｅｖ，２０１４，１９
（１）：１４－２２．
［２３］ Ａｂｒａｈａｍ　ＡＧ，Ｏ’Ｎｅｉｌ　Ｅ．ＰＩ３Ｋ／Ａｋｔ－ｍｅｄｉａｔｅｄ　ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｐ５３
ｉｎ　ｃａｎｃｅｒ［Ｊ］．Ｂｉｏｃｈｅｍ　Ｓｏｃ　Ｔｒａｎｓ，２０１４，４２（４）：７９８－８０３．
（收稿日期：２０１５－１０－０８；编辑：陈舟贵）
·８４３１· 西部医学２０１６年１０月 第２８卷第１０期　Ｍｅｄ　Ｊ　Ｗｅｓｔ　Ｃｈｉｎａ，Ｏｃｔｏｂｅｒ　２０１６，Ｖｏｌ．２８，Ｎｏ．１０