全 文 ：药学学报 c At a Ph an l r a e e ut i a e Sin i a e1 90 9 :2 5 (1 2 ) :9 32一 9 5 3
白头翁中毛莫贰及合成毛莫贰的高效液相色谱测定法
张秀琴 · 刘爱茹 徐礼桌
(中国医学科学院药物研究所 , 北京 10 0 050 )
白头翁为毛蓑科属植物 尸u ls al il la c hi ne n3’ is , 以根人药 , 其煎剂能抑制阿米巴原虫的生
长 、 杀 灭阴道滴虫等作用 , 用于细菌性痢疾和阿米巴痢疾的治疗 ( ’ ) 。
白头翁中主要成分有原白头翁素 [ p r ot o a n em o in n ,系由毛蓖试 ( r an un cu lin )酶解而得 ] 、
白头翁素( a n e m o n in )等 (2 ) , 其结构如下 :
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据报道 (3) 某些有抗菌、 抗病毒及抗癌活性的化合物均含有 : , 月不饱和的 下一 内醋结构 ,
毛食贰即属此类结构 。 本所合成室已进行了毛食贰的合成 (’) , 因此研究其含量测定具有一定
的意义 。
本文研究并建立了白头翁中毛蓖贰及合成毛蓖试的反相 H P L C 含量测定方法 . 实验表
明生药中毛食贰以甲醇提取 , 无需进行净化即可测定 , 本法操作简便 、 快速 、 重现性好 。
实 验 部 分
一 仪器与试剂
高效液相色谱仪 由 51 0 型恒流 泵 ( W at er s ) 、 可变波长紫外检测器 S P D 一 ZA 型
(hS im ad uz )
、
7 125 型进样阀 (hR eo d y en ) 、 台式自动平衡记录器 (上海自动化仪表二厂 )与数
据处理机 (C h ar m a t o p a e ) C 一 R IB 型 ( Sh im a d uz )等组成 。 毛蓖试对照品 m p 138 一 140 ℃ ,
本所合成室提供 , 用薄层色谱法 , 多种展开剂作色谱检查仅出现一个斑点。 倍他米松 m p
2 38
.
5 ℃ , 天津中央药厂 。 其它试剂均为分析纯 。 白头翁生药样品由本所宋万志同志鉴定 。
内标液 精密称取倍他米松约 50 m g 置 50 m l量瓶中, ·加甲醇 40 m l , 溶解后用蒸馏次稀
释至刻度 、 摇匀 , 备用 。
对照品溶液 精密称取毛食试对照品约 25 m g , 置 25 m l量瓶中, 用 M e O H 一 H ZO (4 : l)
i容解并调至刻度 , 摇匀 , 备用 。
二 . 色谱条件
色谱柱 · 4 m m x 2 50 m m 不锈钢柱 , ,填充以 L IC h r o s o r b P R 18 ( 1 0 # m , M e r c k 万`峭绷洽
本文 一 f 1989 年 9 月 23 日收到 。
DOI : 10. 16438 /j . 0513 -4870. 1990. 12. 011
药学学报 cA t a P h a r m a e e u t ie a S ir z ie : , 卜9 9 0 ; 2 5 ( 12 ): 9 3
固定相 。 . 流动相 `M e O H 一 H ZO (40 : 10) , 流量 : l . o m l加 in
2 一 9 3 5
检测波长 2 25 n m ; 检测
器灵敏度 0 . O4 A U F S 。
三 . 线性关系
精密量取对照品溶液 0 . 5 , 1 . 0 ,
一~ ~ 丫- 气尸 -「 - , - -丁 - — 一一〕一飞一「 「一「一一j 3 2 ] 0 1 3 2 t 0tR ( x l l in )
5 和 2 . O m l ,分别置于 s m ! 具塞试管中 ,用流动相稀释至
`
3
.
0 m l
, 在上述色谱条件下进行测定 , 毛食贰量在
0
.
68 一 2 . 72 拼g 间与峰高呈一通过原点的直线 。
`四 . 色谱分离
` . 在上述色谱条件下 ,毛莫贰对照品或生药提取
样品与内标物的色谱分离图如图 1 。
五 .校正因子的测定
精密量取对照 品溶液 0 . 5 , 1 . 0 , 1 . 5及 2 . 0 m l
分别置于 s m l 具塞磨 口试管中各精确加入内标液
1
.
0 m l 后 ,加M eO H 一 H 20 ( 4 0 : 10 )至 3 . 0 m l ,摇匀 ,
· 取 仰1注人色谱柱 ,结果女曦1 。校正因子 8次平均值
夕 为 1 . 91 ,标准差为 0 . 64% 。
六 .分析方法 `
生药的提取 准咖屯取白头翁生药细粉 (40 目)
lg
。 置改良式提取器中 ,加入 25 m l 甲醇 , 在沸水浴
中回流提取Z h ,浓缩提取液并定容为 10 . O m l ,取 s m l
置离心管中, 离心后取上清液备用 。
合成毛蓖贰样品溶液 精密称取毛草武样品约
10 m g
,置 10 m l 量瓶中 ,用M e O H 一 H ZO ( 40 : 10 )
F 19 一 H P L C e h r o m : , t o g r a rl l o 「r a 一, u n c 。 [in ( I ) ,
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.
溶解并调节至刻度 。
拟定方法 准确吸取生药提取液 (或毛蔑贰样品
T a b 1
.
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溶液 ) 1 . 0 m l ,内标溶液 .l o m l 及M eO H 一 H ZO ( 4 : 1 ) l . o m l ,混匀后 , 在上述色谱条件下 , 量取
4 川注入色谱柱中 ,分离后由色谱图上测量毛蓖试及内标物的峰高 ,按下式计算含量 :
* 。 。 , f · h s · M i吝更 vo/ 二 一一下 , 一一一一下 1尸一- 又 I U Uou/n l . 川 1 5
9 3 4药学学报 c A t ah Par m a e et一 ti e aS il l i eo 1 9 9 0:( 1 25 2) :9 2 3一 9 5 3
f =校正因子 ;s h二 样品峰高 ;i h =内标物峰高 ; Ms =样品量 ( l g) ; Mi =内标物量
(月 g)
方法精密度 以合成毛食贰样品测定 6次 , 其变异系数为 1% 。
七 . 样品分析
按上述色谱条件及拟定方法 , 测定合成毛蓖试样品及白头翁生药样品 , 其结果如表 2及表3 。
T a b 2
.
R e s u It s o f d e t e r m in a t i o n fo r s y n th e t ic r a n u n e u ! i n
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. 儿 n o u n t o f A n l o u n t o f P e a k h e ig h t P e a k h e ig h t C o n t e n t
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J气. 回收率试验
称取一定量对照品加入生药样品中 , 按拟定方法操作后进行测量 , 其回收率见表 4 。
T a b 4
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结 果 与 讨 论
一 曾用硅胶柱及十`八烷基化学键合相色谱柱比较了各种流动相的分离效果 , 实验表明在
化学键合柱上以 M e O H 一 H ZO ( 4 0 : 10 )或 ( 30 : 10 )为流动相 ,
分离效果较好 ,故选用 4 0 : 10 作流动相 。
二 . 毛食试样品溶液不稳定 , 随着放置时间的增加 , 在色谱
图上出现的杂质峰的峰高随之增大 , 结果如图 2 。 因此样品配成
溶液后不要放置过夜 . ,应立即进行色谱分析 ,出现之杂峥可能是毛
蓑贰的水解产物 ,但有待进 卜一步探索 。
三 . 生药中毛食贰的提取 , 比较了冷浸后超声法和热回流提
取法 ,超声法提取结果偏低 ,故采用热回流法提取 ,其结果如表 5 。
T a b 5
.
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关键词 毛蔑贰 ; 白头翁 ; 高效液相色谱
参考文献
1
.《全国中草药汇编》编写组 .全国中草药汇编 (上册 ) .北京 :人民卫生出版社 , 四75 : 2邻 .
2
.沙世炎 ,等编 . 中草药有效成份分析法 .上册 .北京 :人民卫生出版社 , 19 8 2 : 67 .
3
·
P a t t e n d e
l、
G
.
N a t u r a 一 4 一 y lid e n e b u t e n o lid e s a n d 4 一 y lid e n e t e t r o n ic a c id s
.
OF
rl 万e h 一 lC e
, 2 O gr Na
t“ sr t 19 7 8: 3 5: 133
·
4
.方政 ,等 .毛食玻全合成的研究 、药学学报 19 89 ; 24 : 182 .
D E T E R M I N A T I O N O F R A N U N C U L I N
一
IN 尸U L S A T I L L A
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