全 文 ： 2008, Vol. 29, No. 07 食品科学 ※分析检测322
芦荟干粉中芦荟甙的测定
王明月1， 桂卫星2， 邹冬梅3
(1.中国热带农业科学院分析测试中心，海南 海口 571101；2. 南昌市蔬菜科学研究所，江西 南昌 330001；
3. 中国热带农业科学院热带作物品质资源所，海南 儋州 571737)
摘 要： 建立了用甲醇提取，并用Waters HBL固相萃取小柱进行净化，高效液相色谱(HPLC)法测定芦荟干粉中
芦荟甙的含量。使用C18柱，以甲醇：1%醋酸水溶液(体积比为1:1)为流动相，采用紫外检测器在359nm处对样
品中的芦荟甙进行测定，外标法进行定性定量分析。测定结果表明，芦荟甙在0～100mg/L时其峰面积与进样质量
的线性相关系数达到0.9999，测定的相对标准偏差(RSD)为2.5%～3.2%(n=6)。试样加标回收率为98.1%～ 01%。
该方法的最小检测浓度为0.02mg/kg。测定结果显示：该方法快速、灵敏、可靠，具有简便，重现性好的特点。
关键词：芦荟干粉；芦荟甙；固相萃取；高效液相色谱法
Determination of Aloin in Dry Aloe Powder
WANG Ming-yue1，GUI W i-xing2，ZOU Dong-mei3
(1.Center of Analysis and Test，Chinese Ac demy of Tropical Agricultural Sciences , Haikou 571101, China；
2. Vegetable Sciences Institute of Nanchang City, Nanchang 330001, China；
3.Tropical Crops Genetic Resources Institute，Chinese Academy of Tropical Agricultural Sciences, Danzhou 571737, China)
Abstract ：Aloin was extracted from dry aloe powder with methanol, further purified by solid phase extraction column, and
then determined by high performance liquid chromatograph (HPLC). The HPLC operation conditions were as follows: C18 olu n
(4.6 mm×150 mm, 5μ ) methnaol-1% acetic acid water (1:1, V/V) as mobile phase, and UV detector wavelength 359 nm. The
quantitative and qualitative analyses were performed with external standard method. The results of determination showed that
there is a good linear calibration curve in the range from 0 to 100 mg/L (r=0.9999) with relative standard deviations of 2.5% to
3.2% (n=6). The recovery rates of spiked aloin range from 98.1% to 101%, and the detection limit is 0.02 mg/kg. This method
is rapid, sensitive, simple, accurate and repeatable.
Key words：dry aloe powder；aloin；s lid phase extraction；high performance liquid chromatography
中图分类号：O657.31 文献标识码：A 文章编号：1002-6630(2008)07-0322-03
收稿日期：2007-09-25
作者简介：王明月(1970-)，女，高级工程师，研究方向为天然产物生物活性成分。E-mail：guihongxing@263.net
芦荟甙(brassinolide)别名芦荟素。英文名称aloin，
又名barbaloin，分子式C12H22O9。性质稳定，但不能
与碱、强氧化剂接触，具有杀菌、消炎、健胃缓泻、
美容、增强机体等药理作用[1]。芦荟甙纯品为淡黄色粉
末，易溶于甲醇、乙醇等有机溶剂，在水中的溶解性
较小[2]。芦荟的成分十分复杂，主要有机活性成分为蒽
醌类衍生物，芦荟甙是主要成分[3-4]。因此，芦荟甙是
评价芦荟甙品质优劣的重要依据。当前，测定芦荟甙
的方法多为薄层色谱[5-6]、分光光度法[7-9]等，这些方法
灵敏度不够，而且测得的是总蒽醌含量。而本实验采
用甲醇提取，固相萃取小柱净化，高效液相色谱法测
定，能测定到纯的芦荟甙。本研究以甲醇-1%醋酸水溶
液为流动相，选用紫外检测器，采用外标法进行定性
定量测定。
1 材料与方法
1.1材料、试剂与仪器
样品为冷冻干燥的芦荟干粉和普通干燥的芦荟干粉。
甲醇、冰醋酸为分析纯试剂；高效液相色谱中使
用的甲醇为色谱纯、水为超纯水，流动相经0.45μm微
孔滤膜减压过滤；Waters HBL固相萃取小柱；芦荟甙
对照品(纯度＞97%) 美国Sigma公司。
Waters高效液相色谱仪，配有1525泵、717＋自动
进样器、2487紫外检测器、温度控制器、柱温箱及
Empower色谱工作站。
1.2色谱条件
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色谱柱：Nucle C18柱(150mm×4.6mm，5μ )；
流动相：甲醇-1%醋酸水溶液水(体积比为50:50)，用前
经Millipore溶剂过滤系统(0.45μm滤膜)过滤。流速1.0ml/min；
紫外波长359nm；柱温40℃；进样量10.00μl。
1.3标准溶液的配制
精确称取芦荟甙对照品10mg，用甲醇定容到10ml
容量瓶中，此标准储备液浓度为1g/L。
1.4样品处理
准确称取芦荟干粉1.0000g于25ml容量瓶中，加入
15ml甲醇，超声30min 后加入去离子水定容摇匀。取
0.5ml提取液用水稀释定容至10ml。
将Waters HLB固相萃取小柱，用甲醇活化，用水
平衡后，加1ml上述溶液上柱，待没有溶液滴下，用
5ml水淋洗，抽干。再用10ml甲醇洗脱，经旋转蒸发
仪浓缩至干，用流动相定容至1.0ml，过0.45μm滤膜供
液相色谱测定。上述色谱条件下芦荟甙标样和芦荟干粉
样品的色谱分离图见图1。
A.芦荟甙标准品；B.芦荟干粉样品。
图1 芦荟甙标准品色谱图和芦荟干粉样品色谱图
Fig.1 Chromatograms of aloin standard and dry aloe powder
sa mp le
0.008
0.006
0.004
0.002
0
－0.002
1
2
.
0
0
1
1
.
0
0
1
0
.
0
0
9
.
0
0
8
.
0
0
7
.
0
0
6
.
0
0
5
.
0
0
4
.
0
0
3
.
0
0
2
.
0
0
1
.
0
0
芦荟甙－5.635
A
U
B
时间(min)
时间(min)
0.008
0.006
0.004
0.002
0
－0.002
1
2
.
0
0
1
1
.
0
0
1
0
.
0
0
9
.
0
0
8
.
0
0
7
.
0
0
6
.
0
0
5
.
0
0
4
.
0
0
3
.
0
0
2
.
0
0
1
.
0
0
芦荟甙－5.637
A
U
A
2 结果与分析
2.1提取溶剂的选择
根据芦荟甙的理化性质，芦荟甙易溶于甲醇、乙
醇中，在冷水中的溶解度较小，几乎不溶于苯、乙醚、
氯仿等非极性溶剂。选择甲醇为提取溶剂。
2.2固相萃取条件的选择
芦荟干粉样品中杂质较多，如果不净化，对色谱
柱的影响很大。采用Waters HLB固相萃取小柱对其净
化，结果见表1。
测定值(mg/g)
净化方式 样品过柱
水洗液
洗脱
流出液
柱子柱子不
液
抽干 抽干
取1ml提取液，水洗，流动相洗脱 2.50 0.512.0
取1ml提取液，水洗，甲醇洗脱 2.50 0.512.5
取1ml提取液，流动相水洗脱 2.50 0 13.0
取1ml提取液，甲醇洗脱 2.50 0 13.2
取1ml提取液加1ml水，水洗，流动相洗脱0 0 0 14.5
取1ml提取液加1ml水，水洗，甲醇洗脱 0 0 0 15.0
取2ml提取液，水洗，甲醇洗脱 5.70 1.38.0
不净化 15.0
表1 芦荟干粉提取溶液的净化试验
Table 1 Purification of extract of dry aloe powder
由表1可以知道：(1)由于芦荟甙易溶于甲醇，不易
溶于水，样品提取液的溶剂中甲醇含量超过50%，样品
直接流过柱子时会有一部分的芦荟甙流出，如果用1:1的
水稀释样品再净化，则不会有损失；(2)上样以后，柱
子不抽干，用水洗会有少量的芦荟甙流出；而柱子抽干
后，用水洗则没有芦荟甙流出。这跟柱子中残余的甲
醇有关；(3)柱子对于样品的负载有一定限度，本方法适
合0～1ml提取液的净化；(4)甲醇作为洗脱溶剂比流动相
更好，因为较大体积的甲醇可以浓缩至干，便于定容
至1ml；而流动相因含水量达50%，不便于浓缩，容
易造成损失；(5)样品若不净化杂质相当多，净化后的样
品对柱子的污染少。
2.3色谱条件的优化
色谱条件对于样品的分离有着至关重要的作用。故
我们对流动相的组成及比例、柱温进行了优化实验，结
果见表2。
流动相组成流动相比例柱温采集时间(min)效果
甲醇-水 线性洗脱室温 35 峰形较宽
甲醇-水 60:40室温 20与杂质没有完全分离，峰形较宽
甲醇-水 40:60室温 35 出峰时间25min，峰形较宽
甲醇-水 50:5040℃ 15 峰形较宽
甲醇-1%醋酸水60:40室温 20 与杂质没有完全分离
甲醇-1%醋酸水40:60室温 35 出峰时间较晚25min
甲醇-1%醋酸水50:50室温 25 出峰时间较晚18min
甲醇-1%醋酸水50:5040℃ 12
出峰时间6min，与杂质完全
分离，峰形尖锐
表2 色谱条件优化实验
Table 2 Optimal HPLC conditions
由表2可知：(1)不同的流动相组成对样品的分离影
响相当大，因为芦荟甙是一种蒽醌甙，含有酚羟基，
具有一定的酸性。所以流动相中配适量乙酸有助于芦荟
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甙的洗脱，这样峰形尖锐，而且出峰时间较快；(2)流
动相的配比对于芦荟甙与杂质的分离度影响很大，随着
甲醇含量的增加，分离度降低；但是甲醇含量太低，
出峰时间越久；(3)温度对分析也有一定的影响。室温
时，由于样品采集时间比较长，有可能造成保留时间
不能重复。而柱温控制到40℃时，改善了分离度，缩
短了芦荟甙的出峰时间。
2.4标准工作曲线的绘制及检出限
分别移取1g/L芦荟甙标准储备液0、0.02、0.10、
0.30、0.50、1.00ml于10ml容量瓶中，分别加入流动相
定容至刻度，得浓度为0、2.00、10.00、3 .0、50.00、
100.μg/ml的芦荟甙标准工作溶液。
在本法所确定的实验条件下，配置不同浓度的芦荟
甙标准溶液进行色谱测定，以标准溶液质量浓度X(μg/ml)
为横坐标，以峰面积(A)为纵坐标作工作曲线，得回归方
程Y=2.89×104X－1.52×104，相关系数r=0.9996。芦荟
甙在0～10μg/ml范围内与峰面积呈良好的线性关系。
2.5方法的精密度
精密吸取10μl芦荟甙标准溶液(10.0μg/ml)，重复
进样6次，测得芦荟甙峰面积，结果见表3。
次数 1 2 3 4 5 6平均值RSD(%)
峰面积(mAU)325673321885327923331368272783244153264231.0
表3 芦荟甙精密度实验结果
Table 3 Precision of aloin determination
2.6方法的回收率实验
准确称取相同芦荟干粉样品两份，其中一份加入已
知量芦荟甙标样，另一份不加。在相同条件下测定6
次，根据加标样品测出量减去未加标样品测出量再除以
标准加入量回收率，并用6次平行测定结果计算相对标
准偏差，结果见表4。以3倍于噪声的样品量计，最
小检出浓度为0.02mg/kg。实验结果证明，本方法有很
好的回收率，可以满足定量分析要求。
2.7样品中芦荟甙含量的测定
样品 添加量(mg)测定值(mg)回收率(%) RSD(%)
1# 1.00 1.01 101 3.2
2# 5.00 4.96 99.2 2.5
3# 10.0 9.81 98.1 3.0
表4 方法回收率测定结果
Table 4 Determination results of recovery rate
精密吸取1.4制备好的样液，按上述色谱条件，每
个试样测定3次，取平均值。按标准曲线计算试样中的
芦荟甙含量，测定结果见表5。
样品
样品中芦荟甙的含量(mg/g)
RSD(%)
1 2 3 X
冷冻干燥芦荟干粉 15.014.815.15.0 1.0
普通干燥的芦荟干粉 8.48.68.58.5 1.0
表5 试样测定结果(n=3)
Table 5 Determination results of different samples (n=3)
3 结 论
3.1本方法利用甲醇-1%醋酸水为流动相，在高效液
相色谱仪上进行等度分离。
3.2本法采用固相萃取小柱对芦荟干粉样品中提取出
来的芦荟甙进行了净化，净化效率高，而且回收率在
98.1%～ 01%之间。
3.3本法芦荟甙的最低检出浓度为0.02mg/kg，说明该
法灵敏度高。
3.4本法对冷冻干燥和普通干燥的的芦荟干粉的芦荟甙
含量作了分析比较，发现冷冻干燥芦荟干粉中芦荟甙的
含量较高。
3.5由实验结果可知，该法重现性高，回收率好，样
品测定准确，技术参数指标符合食品理化分析的要求。
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