全 文 ：76.5 (C-5 ofglc), 77.2 (C-3ofglc), 102.6(C-1ofglc), 104.5
(C-2, 6), 128.4 (C-7), 130.1(C-8), 132.6 (C-1), 133.7 (C-
4), 152.7(C-3, 5)。以上数据与文献报道的丁香苷 [ 7 ]一致 ,鉴
定化合物 8为丁香苷(syningin)。
2.2.9　化合物 9 白色无定形粉末(甲醇), ESI-MSm/z393 [ M
+Na] +;1H-NMR(400 MHz, DMSO-d6)δ:3.04 ～ 3.19 (5H,m, H-2 ～ 5 ofglc), 3.38 (1H, dd, J= 11.9, 5.4 Hz, H-6aof
glc), 3.58(1H, dd, J=5.5, 11.6Hz, H-6bofglc), 3.81(6H,
s, 2×OCH3), 4.90 (1H, d, J= 4.7 Hz, H-1 ofglc), 6.88(1H, dd, J=7.7, 15.8Hz, H-8), 7.09 (2H, s, H-2, 6), 7.63
(1H, d, J= 15.8 Hz, H-7), 9.64 (1H, d, J= 7.8 Hz, H-9);
13C-NMR(100MHz, DMSO-d6)δ:56.5(OCH3-3, 5), 60.8(C-6ofglc), 69.9(C-4ofglc), 74.1(C-2 ofglc), 76.6(C-5ofglc),
77.3 (C-3 ofglc), 102.0 (C-1 ofglc), 107.2 (C-2, 6), 127.9
(C-7), 129.3(C-1), 136.9 (C-4), 152.7(C-3, 5), 153.3 (C-
7), 194.1(C-9)。以上数据与文献报道的 sinapicaldehyde4-O-
β -D-glucopyranoside[ 7 ]一致 , 鉴定化合物 9为 sinapicaldehyde4-
O-β -D-glucopyranoside。
2.2.10　化合物 10 白色无定形粉末(甲醇), ESI-MSm/z515[
M-H ] -;UV(MeOH)λmax:246, 300, 330 nm;1H-NMR(400MHz, DMSO-d6)δ:1.77-2.13 (4H, m, H-2, 6), 4.92 (1H,dd, J=2.9, 8.8Hz, H-4), 5.43(1H, ddd, J=5.0, 9.1, 11.7
Hz, H-5), 6.15, 6.22 (1Heach, d, J= 15.9 Hz, H-8′, 8″),
6.72, 6.74 (1Heach, d, J= 8.0 Hz, H-5′, 5″), 6.94, 6.96
(1Heach, dd, J= 2.0, 8.0 Hz, H-6′, 6″), 7.00, 7.01 (1H
each, d, J= 2.0Hz, H-2′, 2″), 7.42, 7.46 (1Heach, d, J=
15.9 Hz, H-7′, 7″);13C-NMR(100MHz, DMSO-d6)δ:37.7 (C-
2), 38.4 (C-6), 67.5 (C-5), 67.4 (C-3), 74.2 (C-4), 74.6
(C-1), 113.7, 113.8 (C-8′, 8″), 114.8 (C-2′, 2″), 115.7 (C-
5′, 5″), 121.2, 121.3 (C-6′, 6″), 125.4 (C-1′, 1″), 145.3 (C-
3′, 3″), 145.5(C-7′, 7″), 148.4(C-4′, 4″), 165.7, 166.0 (C-
9′, 9″), 175.1 (C-7)。 以上数据与文献报道的 4, 5-di-O-caf-
feoylquinicacid[ 9 ]一致 , 鉴定化合物 10为 4, 5-di-O-caffeoylquinic
acid。
2.2.11　化合物 11 无色片状结晶(甲醇), mp141 ～ 142 ℃ (石
油醚)。溶于石油醚 、氯仿 、醋酸乙酯。 Liebermann-Burchard反应
呈阳性 ,薄层色谱 Rf值与 β-谷甾醇对照品一致 , 且与 β -谷甾醇
对照品混合后熔点不下降 , 因此鉴定化合物 11为 β -谷甾醇(β -
sitosterol)。
2.2.12　化合物 12 白色无定形粉末(甲醇), mp280 ～ 281 ℃
(甲醇), 溶于 DMSO、吡啶 、难溶于 CHCl3 、 CH3OH等 , Lieber-mann-Burchard反应和 Molish反应均呈阳性 , 薄层色谱的 Rf值与
β -胡萝卜苷对照品一致 , 且与 β -胡萝卜苷对照品混合后熔点不
下降 , 因此鉴定化合物 12为 β-胡萝卜苷(β-daucosterol)。
参考文献:
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:7272.
收稿日期:2009-03-08;　修订日期:2009-07-06
基金项目:国家自然科学基金(No.39560089)
作者简介:彭　红(1964-),女(汉族),江西丰城人 ,现任江西中医学院教授 ,学士学位 ,主要从事药物新剂型及质量控制研究工作.
复方当归注射液中羟基红花黄色素 A和阿魏酸的含量测定
彭　红 ,付建武 , 余日跃
(江西中医学院 ,江西 南昌　330004)
摘要:目的 运用高效液相色谱法测定复方当归注射液中的羟基红花黄色素 A和阿魏酸的含量。方法 色谱柱为依利特
HypersicODS2(4.6mm×200mm, 5μm), 测定阿魏酸的流动相为甲醇 -0.4%醋酸水(30∶70), 其检测波长 322nm;测定
羟基红花黄色素 A所用流动相为甲醇 -0.6%醋酸水(15∶85), 其检测波长 403nm。柱温 25℃, 流速 1 ml/min。结果 阿
魏酸在 4.44 ～ 266.4 μg/ml之间与峰面积呈线性关系;羟基红花黄色素 A在 4.508 ～ 360.64 μg/ml之间与峰面积呈线
性关系;测得阿魏酸平均回收率为 104.34%, RSD为 2.77%;羟基红花黄色素 A平均回收率为 99.26%, RSD为 2.20%。
结论 该方法简便快捷 ,重复性好 ,可用于复方当归注射液中羟基红花黄色素 A和阿魏酸的含量测定。
关键词:复方当归注射液;　羟基红花黄色素 A;　阿魏酸;　高效液相色谱法
中图分类号:R284.2　　文献标识码:A　　文章编号:1008-0805(2009)12-2925-02
DeterminationofCompoundAngelicaInjection
PENGHong, FUJian-wu, YURi-yue
(DepartmentofPharmacology, JiangxiUniversityofTCM, Nanchang330004, China)
Abstract:ObjectiveTomakethedeterminationofcompoundangelicainjectioninthequalitystandardmoreperfectly.Methods
UsingHPLCwithHypersicODS2Column, themobilephaseofferulicwascomposedofamixtureofmethanol-waterwithacetic
·2925·
LISHIZHENMEDICINEANDMATERIAMEDICARESEARCH 2009VOL.20NO.12 时珍国医国药 2009年第 20卷第 12期
acid, whichtheconcentrationwas0.4%, andtheoxhydryl-safloweryellowElementAwascomposedofamixtureofmethanol
-waterwithaceticacid, whichtheconcentrationwas0.6%.Theflowratewas1ml/min, theUVdetectionwavelengthwassetat
322nmand403nm, andthetempetaturewasat25℃.ResultsFerulicandtheoxhydryl-safloweryelowElementAshowedlinear
relationshipwithpeakareasintherangeof4.44 ～ 266.4 μg/mland4.508 ～ 360.64 μg/mlrespectively.Theaveragerecovery
were104.34% and99.26% andtheRSDwere2.77% and2.20% respectively.ConclusionThemethodissimple, convinent
andrepeatable, andcanbeappliedtothequalificationcontroloftheoxhydryl-saffloweryellowElementAandFerulic.
Keywords:Compoundangelicainjection;　Oxhydryl-safloweryelowElementA;　Ferulic
　　复方当归注射液系以当归 、川芎 、红花 3味中药为原料。临
床上主要用于治疗痛经 、经闭 、跌扑损伤等。 《中国药典》 2005版
规定采用高效液相色谱法测定阿魏酸的含量 ,本文通过高效液相
法不仅对《中国药典》规定成分阿魏酸进行了含量测定 , 同时还
对红花当中的羟基红花黄色素 A也进行了定量研究和方法学考
察 , 便于更全面地控制复方当归注射液的质量。现报道如下。
1　仪器与材料
Agilent1200色谱系统(DAD检测器), 阿魏酸对照品(中国药
品生物制品检定所 , 批号:110773-200611), 羟基红花黄色素 A
(中国药品生物制品检定所 ,批号:111637-200503),复方当归注
射液(桔都制药厂), 甲醇为色谱纯 ,其他试剂均为分析纯。
2　方法与结果 [ 1 ～ 3]
2.1　色谱条件的选择
2.1.1　流动相的选择 分别考察了甲醇 -水 、乙腈 -水和甲醇 -
醋酸水几种系统 , 发现阿魏酸和羟基红花黄色素 A未加酸梯度
洗脱时 , 分离效果都不理想 , 峰形拖尾严重 ,无法达到基线分离;
使用甲醇 -醋酸水体系梯度洗脱 , 可使各色谱峰达到较好的分
离 , 峰形较好。
2.1.2　检测波长的选择 结合相关文献及 DAD图谱 , 选择 322
nm为阿魏酸 , 403 nm为羟基红花黄色素 A的检测波长。
2.1.3　色谱条件的确定 阿魏酸选定的色谱条件:色谱柱为依利
特 HypersicODS2(4.6 mm×200 mm, 5 μm), 流动相为甲醇 -
0.4%醋酸水(30∶70),检测波长 322 nm, 柱温 25℃, 流速 1 ml/
min,进样量 10 μl。
羟基红花黄色素 A选定的色谱条件:色谱柱为依利特 Hy-
persicODS2(4.6mm×200mm, 5 μm),流动相为甲醇 -0.6%醋
酸水(15∶85),检测波长 403nm, 柱温 25℃, 流速 1ml/min,进样
量 10μl。
2.2　溶液的制备
2.2.1　对照品溶液的配制 称取阿魏酸对照品适量 , 精密称定 ,
用甲醇制成每毫升含栀子苷 44 μg的溶液 , 得阿魏酸对照品溶
液 , 同样条件下制成每毫升含羟基红花黄色素 A45 μg的溶液 ,
得羟基红花黄色素 A对照品溶液。
2.2.2　供试品溶液的制备 取复方当归注射液 , 过 0.45 μm微孔
滤膜后 , 即得。
2.3　方法学考察
2.3.1　线性关系 分别精密吸取上述对照品储备液适量, 加甲醇
适量 ,配制成不同浓度的对照品溶液。阿魏酸:0.004 44, 0.022 2,
0.044 4 , 0.088 8, 0.177 76 , 0.266 4 mg/ml, 羟基红花黄色素 A:
0.004 508, 0.022 54, 0.090 16, 0.180 32, 0.027 048, 0.360 64 mg/
ml。结果表明 ,阿魏酸在 4.44 ～ 266.4 μg/ml之间与峰面积线形
关系良好 , 回归方程为:A=54 715C+17.739, r2 =0.999 9;羟基红
花黄色素 A在 4.508 ～ 360.64 μg/ml之间与峰面积线形关系良
好 ,回归方程为:A=21 500C+64.812, r=0.999 9。
2.3.2　精密度实验 精密吸取混合对照品溶液 10μl,重复进样 6
次 , 记录峰面积 ,分别计算阿魏酸和羟基红花黄色素 A的 RSD为
0.46%和 0.12%。结果表明仪器精密度良好。
2.3.3　重复性实验 取复方当归注射液 10倍浓缩液 , 按照供试
品溶液制备的方法平行制备 6份 , 精密吸取 10 μl注入色谱仪 ,
记录峰面积 , 分别计算阿魏酸和羟基红花黄色素 A的 RSD为
0.62%和 0.35%。结果表明方法重复性良好。
2.3.4　稳定性实验 精密吸取同一供试品溶液 10 μl,分别于 0,
1, 2, 6, 12, 24 h注入色谱仪 ,记录峰面积 , 分别计算阿魏酸和羟基
红花黄色素 A的 RSD为 0.51%和 0.22%。表明供试品溶液在
24 h内稳定。
2.3.5　回收率实验
阿魏酸加样回收:准确量取已知浓度的复方当归注射液 9
份 , 分别加入高 、中 、低 3个浓度的阿魏酸对照品溶液 , 每个 3份 ,
按含量测定项下方法测定阿魏酸含量 , 测得平均回收率为
104.34%, RSD为 2.77%。
羟基红花黄色素 A加样回收:同上法测得羟 A平均回收率
为 99.26%, RSD为 2.20 %。
2.4　样品含量测定 按照供试品溶液制备的方法制备复方当归
注射液供试品溶液 , 对样品中阿魏酸和羟基红花黄色素 A进行
含量测定。结果见表 1 ～ 2, 阿魏酸对照品和羟基红花黄色素 A
对照见图 1, 图 3, 样品图谱见图 2, 图 4。
表 1　阿魏酸含量测定
批号 阿魏酸浓度 C/mg· L-1 平均值 C/mg· L-1 RSD(%)
20070723 82.8
20070725 78.1 79.5 0.94
20070804 7.6
图 1　阿魏酸对照品色谱　　　　图 2　复方当归注射液色谱
表 2　羟基红花黄色素 A含量测定结果
批号 羟基红花黄色素 A浓度 C/mg· L-1
平均值
C/mg· L-1 RSD(%)
20070723 749.9
20070725 761.4 749.8 0.93
20070804 738.1
图 3　羟基红花黄色素 A对照品色谱　　　图 4　复方当归注射液色谱
3　讨论
通过对色谱条件多方面的摸索 ,本实验建立了复方当归注射
液质量标准的 HPLC含量测定的方法 ,并对该方法进行了方法学
考察 , 确定了 HPLC色谱条件。该方法在药典的基础上 , 改进了
阿魏酸含量测定方法 , 使之更简便。由于注射液工艺差异 , 当归
川芎与红花分别操作 ,因部颁标准中仅通过薄层扫描控制阿魏酸
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时珍国医国药 2009年第 20卷第 12期 LISHIZHENMEDICINEANDMATERIAMEDICARESEARCH 2009VOL.20NO.12
含量不够严谨 , 因此确立了对阿魏酸和羟基红花黄色素 A进行
HPLC控制的复方当归注射液的含量检测方法。该方法简单易
行 , 分析时间短 ,并有良好的重现性 , 应用此条件也可对当归和红
花原药材进行含量测定项质量控制。
试验初期欲摸索同一条件同时测定阿魏酸和羟基红花黄色
素 A, 结果发现在短时间内 , 样品中二者分离度都难以达到要求 ,
考虑到含量测定方法应快速简单易行 ,最后采用分别测量。
参考文献:
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收稿日期:2009-02-25;　修订日期:2009-07-06
基金项目:国家自然科学基金(No.30701086)
作者简介:邢朝斌(1975-),男(汉族),河北定州人 ,现任华北煤炭医学院
讲师 ,硕士学位 ,主要从事药用植物细胞工程方面的研究工作.
体外培养刺五加生产刺五加苷 B、E的研究
邢朝斌 , 王明艳 , 吴　鹏 , 劳凤云
(华北煤炭医学院 ,河北 唐山　063000)
摘要:目的 探讨 2, 4-D和培养基对刺五加愈伤组织和体细胞胚胎生产刺五加苷 B、E的影响 , 建立有利于刺五加苷 B、
E积累的刺五加体外培养体系。方法 将来自同一外植体的刺五加愈伤组织和体细胞胚胎分别诱导增殖或产生次级体
胚 , HPLC法测定培养物中刺五加苷 B、E含量和培养物质量 , 考察培养物类型 、培养基种类和激素对刺五加苷 B、E生产
的影响。结果 体细胞胚胎的质量虽略低于愈伤组织的质量 , 但体细胞胚胎生产刺五加苷 B、E的能力优于愈伤组织。 2,
4-D对刺五加苷 B、E含量影响较小 , 仅改变了培养物的质量。 MS培养基处理中培养物的刺五加苷 B、E产量优于 1/
2MS培养基。结论 刺五加体外培养物可以生产刺五加苷 B、E,其产量取决于培养物类型 、培养基种类和 2, 4-D浓度。
关键词:刺五加;　刺五加苷 B;　刺五加苷 E;　愈伤组织;　体细胞胚胎
中图分类号:R284　　文献标识码:A　　文章编号:1008-0805(2009)12-2927-02
ProductionofEleutherosidesB, EbyRaisinginvitroofEleutherococcussenticosusHarms
XINGZhao-bin, WANGMing-yan, WUPeng, LAOFeng-yun
(NorthChinaCoalMedicalColege, Tangshan063000, China)
Abstract:ObjectiveTodiscusstheefectof2, 4-DandculturemediumtothecalusandsomaticembryosfortheproductionofeleutherosidesB, E, establishinvitroraisesystemofEleutherococcussenticosusHarms.MethodsUsingCalusandsomaticembryos
whichcamefromthesameexplanttoinducemultiplicationortoproducesecondarysomaticembryos.Determinedthecontentofeleuth-
erosidesB, EandtheweightofculturemediumbyHPLC.TheefectofeleutherosidesB, Ebytheculturestype, theculturemedium
kindandthehormonewerestudied.ResultsEventhoughtheweightofsomaticembryoswasslightlylowerthanthatofthecallus, thea-
bilityofsomaticembryostoproduceeleutherosidesB, Ewasbeterthanthecallus.2, 4-DhadlittleefectoneleutherosidesB, E,
andonlychangedtheweightofcultures.TheproductionofeleutherosidesB, EcamefromthecultureswhichwasdealtwithMSmedium
washigherthanthatin1/2 MSmedium.ConclusionInvitroculturesofEleutherococcussenticosusHarmscanproduceeleutherosides
B, E, whoseproductionisdecidedbytheculturestype, theculturemediumkindandtheconcentrationof2, 4-D.
Keywords:EleutherococcussenticosusHarms;　EleutherosideB;　EleutherosideE;　Callus;　Somaticembryos
　　刺五加 EleutherococcussenticosusHarms是我国医药珍品 , 根 、
茎 、叶均可入药 [ 1] 。历代本草医药记载 , 其有益气健脾 、补肾安
神之功效 , 已载入《中国药典》(1977年版)。自 20世纪 70年代
末以来以刺五加为原料生产的各种片剂 、冲剂 、针剂和刺五加参
茶等产品远销国外 , 因而使刺五加资源消耗与日俱增 [ 1 , 2] 。经过
几十年掠夺式的采挖 ,严重地破坏了野生刺五加资源;在自然状
态下刺五加结实的株丛少 , 种子产量低 、质量差 、传播力弱 、休眠
程度深 [ 2] , 并且扦插成活率低 、插穗来源少 、管理程序繁琐 [ 3] ,
1992年出版的《中国植物红皮书》已把刺五加列为了渐危物种。
植物组织 、细胞培养具有快速 、高效 、低成本的优点 , 因而近
年来利用植物组织 、细胞培养快速繁殖刺五加的研究成为热点。
目前多数研究集中于刺五加体细胞胚胎发生 [ 4]和人工种子包
埋 [ 5]方面 , 并取得了可喜成果 , 对茎尖的快速繁殖 、遗传转化也
有初步探索 [ 4] 。但关于刺五加的体外培养物生产刺五加主要药
用成分———刺五加苷 B、E的研究尚未见报道。本文以刺五加的
体外培养物为试材 , 探讨了培养物类型 、培养基种类 、激素对刺五
加苷 B、E生产的影响。
1　材料与方法
1.1　愈伤组织和体细胞胚胎的获得 刺五加野生植株和种子采
自吉林省伊通满族自治县西苇镇。种子经层积处理后 ,将种子的
胚剖出 ,切取胚轴和野生植株萌发 15 d以内的幼叶 、叶柄作为外
植体 , 接种在包含 2, 4-D1.0 mg/L+NAA1.0或 2.0 mg/LMS
培养基上 ,分别诱导产生愈伤组织或体细胞胚胎 [ 4, 6] 。
1.2　愈伤组织和体细胞胚胎质量的测定 将上述产自同一外植
体的愈伤组织和体细胞胚胎分别继代入添加了 0 ～ 1.0 mg/L2, 4
-D的 MS和 1/2MS培养基中诱导愈伤组织增殖 、体细胞胚胎产
生次级体胚。培养 60, 120, 180, 240 d时分别取出增殖产生的全
部愈伤组织和体细胞胚胎。用重蒸水洗净粘附的培养基后 ,置于
滤纸上吸干表面水珠 ,称取质量。
1.3　刺五加苷 B、E含量的测定 HP-1100高效液相色谱仪为
安捷伦科技有限公司生产 ,乙腈为色谱纯 , 水为重蒸水 ,其余试剂
为分析纯。对照品购自中国药品生物制品检定所 , 刺五加苷 B
编号为 111574 -200201, 刺五加苷 E编号为 111713 -200501。
色谱条件:色谱柱:KromasilODS柱(4.6 mm×250 mm, 5μm);流
动相:0.1%磷酸水溶液 -乙腈(0※25min, 90∶10※ 80∶20), 流
速为 0.8 ml· min-1;柱温:室温。刺五加苷 B、苷 E的检测波长
分别是 220 nm及 206nm。
取刺五加的体外培养物置于干燥箱中 70℃烘干后 , 粉碎。
精密称取 0.5 g,置于 100 ml圆底烧瓶中。参照文献 [ 7]的方法 ,
·2927·
LISHIZHENMEDICINEANDMATERIAMEDICARESEARCH 2009VOL.20NO.12 时珍国医国药 2009年第 20卷第 12期