全 文 ：收稿日期:2008-04-28
作者简介:杨昊(1979-), 男(汉族), 辽宁沈阳人 , 硕士研究生 , Tel.13478351149, E-mailygf321@sina.com;唐星
(1964-), 男(汉族),陕西商县人 , 教授 ,主要从事缓控释制剂和中药药剂学的研究 , Tel.024-23911736, E-mailtangp-
harm@sina.com。
文章编号:1006-2858(2009)03-0214-04
HPLC法测定参芪扶正粉针剂及其药材中
紫丁香苷的含量
杨　昊 1 , 李　真2 , 唐　星 1
(1.沈阳药科大学 药学院 ,辽宁 沈阳 110016;2.辽宁正鑫药物研究有限公司 , 辽宁 沈阳 110179)
摘要:目的 测定参芪扶正粉针剂及其党参药材中紫丁香苷的含量。 方法 紫丁香苷流动相:水和
乙腈 ,梯度洗脱 , 流速:1 mL·min-1 ,检测波长:270nm。结果 紫丁香苷线性回归方程为 A=2.684×
104 ρ-2.986×103 ,相关系数 r=0.999 9(n=5), 线性为 6.0 ～ 27.0 mg·L-1 , 平均回收率为 101.1%,
RSD为 1.7%。结论 方法适合参芪扶正粉针剂和党参药材中紫丁香苷含量的测定。
关键词:黄芪;党参;紫丁香苷;高效液相色谱法
中图分类号:R914　　　文献标志码:A
　　参芪扶正粉针是根据中华人民共和国部颁标
准收载品种参芪扶正注射液 [ 1]改进工艺和剂型
得到的注射用粉针剂 ,是由党参 、黄芪 2味药材组
成 ,具有扶正固本 ,补脾益气的功效。主要用于气
虚证肺癌 、胃癌等的辅助治疗 ,与化疗药物合用有
增效减毒作用 ,可提高化疗药物疗效;保护患者的
造血功能 ,改善虚损证候 ,增强患者的免疫功能 ,
提高患者的生存质量和延长生存期。在以前的参
芪扶正注射液剂型中仅以黄芪药材中的指标性成
分黄芪甲苷来检测制剂中的黄芪甲苷和总皂苷 ,
没有检测党参中的有效成分 。 2005年版 《中华人
民共和国药典 》[ 2]党参仅对定性鉴别 ,定量上仅
规定了浸出物含量 ,没有明确确定以何种物质为
党参的指标性成分 ,不能有效控制其质量 ,据文献
[ 3-4]报道紫丁香苷是党参中的有效成分之一 ,
但有关成分含量测定未见文献报道 。本文采用
HPLC法测定了参芪扶正粉针剂中紫丁香苷含
量 ,可为进一步完善该制剂质量控制标准提供了
实验依据。
1　仪器与试药
日立D-7000高效液相色谱 、HITACHI-高效液
相色谱仪 、HSM色谱工作站 、KromasilC18色谱柱
(4.6 mm×200 mm, 5 μm)(日本 Hitachi公司),
FA1104电子天平(上海民桥精密科学仪器有限公
司)。
紫丁香苷(批号 0754-200217,中国药品生物
制品检定所),参芪扶正粉针剂(自制),党参(辽
宁省医药公司 ,按照 2005年版 《中华人民共和国
药典》一部进行鉴定 ,符合规定),其他试剂均为
色谱纯 、分析纯。
2　方法与结果
2.1　色谱条件
色谱柱:KromasilC18 (4.6 mm×200 mm,
5 μm),流速:1.0 mL·min-1 ,检测波长:270 nm,
流动相:乙腈(A)-水(B),按表 1进行二元梯度洗
脱 [ 5] 。
Table1　Conditionofgradientelutionforsyringoside
t/min w(A)/% w(B)/%
0-10 10 90
10-20 15 85
20-30 10 90
2.2　对照品溶液的配制
取在 60 ℃减压干燥 2 h的紫丁香苷对照品
适量 ,精密称定 ,加甲醇制成每 1 mL含 15 μg的
溶液 ,作为紫丁香苷对照品溶液 。
2.3　供试品溶液的制备
2.3.1　药材供试品溶液的制备
取党参粗粉约 10g,加水 80mL煎煮 3次 ,每
第 26卷 第 3期
2 0 0 9 年 3 月
沈　阳　药　科　大　学　学　报
JournalofShenyangPharmaceuticalUniversity
Vol.26 　No.3
Mar.2009 p.214
DOI :10.14066/j.cnki.cn21-1349/r.2009.03.010
次 1 h,合并提取液 ,减压浓缩至约 20 mL,加体积
分数为 80%的乙醇溶液沉淀 ,滤过 ,滤液回收乙
醇至无醇味 ,浓缩液用水饱和的正丁醇溶液萃取
3次(每次 25mL),合并正丁醇萃取液 ,再用氨试
液萃取 2次 (每次 15 mL),取正丁醇层 , 水浴蒸
干 ,残渣溶于 5 mL甲醇 ,摇均 ,过 0.22 μm微孔
滤膜 ,取续滤液作为党参药材供试品溶液 。
2.3.2　参芪扶正粉针剂供试品制备
取参芪扶正粉针剂 20支 ,用 20 mL水完全转
移至 50mL量瓶中并用水稀释至刻度 ,摇匀 ,精密
量取 20mL置分液漏斗中 。用水饱和的正丁醇振
摇萃取 3次 ,每次 20 mL,合并正丁醇提取液 ,用
正丁醇饱和的水 20 mL洗涤 2次 ,弃去水液 ,正丁
醇液水浴蒸干 ,残渣用甲醇转移至 5 mL量瓶中并
稀释至刻度 ,摇匀 , 0.22 μm微孔滤膜滤过 ,取续
滤液作为党参制剂供试品溶液 [ 6 -8] 。紫丁香苷对
照品 、药材和制剂色谱图见图 1。
Fig.1　Chromatogramsofsyringoside(A), RadixCodonopsis(B), andfreeze-dryingpreparationforinjection(C)
2.4　标准曲线
精密称取紫丁香苷对照品 15.0mg置 10 mL
量瓶中 ,用甲醇溶解并稀释至刻度 ,摇匀 ,精密量
取 1.0mL置 10mL量瓶中 ,用甲醇溶解并稀释至
刻度 ,摇匀 ,作为对照品储备液 。精密量取储备液
0.4、0.8、1.0、1.4、1.8mL,置 10mL量瓶中 ,用甲
醇稀释至刻度 ,摇匀 。分别精密吸取 20 μL注入
液相色谱仪 ,记录色谱图 ,读取峰面积 ,以进样量
(X)对峰面积(Y)回归得标准曲线 , A=2.684×
10
4ρ-2.986×103 , r=0.999 9(n=5),当紫丁香
苷的质量浓度在 6.0 ～ 27.0 mg·L-1时 ,紫丁香苷
峰面积与进样的质量浓度呈良好的线性关系。
2.5　精密度测定
精密吸取 “2.2”条紫丁香苷对照品溶液 ,连
续重复进样 5次 ,每次 20μL,紫丁香苷峰面积的
RSD为1.1%。
2.6　重复性试验
按 “2.3.1”条制备 5份党参药材供试品并按
上述色谱条件测定 ,结果药材中紫丁香苷含量的
RSD为 0.8%。
取同一 批号 参芪 扶正 粉针 剂 (批 号:
20060212),按 “ 2.3.2”条制备 5份党参制剂供试
品并测定 ,结果制剂中紫丁香苷的 RSD为1.2%。
2.7　稳定性试验
取 “2.3.1”条供试品 ,分别在 0、2、4、8、12 h
进行测定 ,结果党参药材供试品 RSD为 0.9%。
取 “2.3.2”条供试品同上法测定 ,党参制剂供试
品 RSD为 1.3%。
2.8　回收率试验
取参芪扶正粉针剂 10支(含量 8.3μg/支),
用 20mL水完全转移至 50 mL量瓶中并用水稀释
至刻度 ,摇匀 ,精密量取 20 mL置分液漏斗中 ,另加
入紫丁香苷对照品溶液(质量浓度为15mg·L-1)1.
8 mL和 7 mL水 ,混匀 ,制备 3份供试品溶液。同
法操作 “取参芪扶正粉针剂 10支 ,精密量取 20mL
置分液漏斗中 ”另加入紫丁香苷对照品溶液 2.2
mL(质量浓度为15mg·L-1)和 4mL水 ,混匀 ,制备
3份供试品溶液。同法操作 “取参芪扶正粉针剂 10
支 ,精密量取 20mL置分液漏斗中”另加入紫丁香
苷对照品溶液 2.7mL(浓度为 15mg·L-1)和 1mL
水 ,混匀 , 制备 3份供试品溶液。按 “ 2.3.2”条
“用水饱和的正丁醇振摇萃取 3次”起操作至 “微
孔滤膜滤过 ,取续滤液作为供试品溶液。”同法平行
操作 ,制备 6份供试品溶液。
215第 3期 杨　昊等:HPLC法测定参芪扶正粉针剂及其药材中紫丁香苷的含量
供试品照 “2.1.2”条方法测定含量 ,以加入 量和测得量计算回收率 ,结果见表 2。
Table2　Recoverytestsofsyringoside(n=9)
No mweighted/mg madded/mg mfound/mg Recover/% x/% RSD/%
1 33.2 27 27.4 101.48
2 33.2 27 27.1 100.37
3 33.2 27 27.7 102.59
4 33.2 33 34.3 103.94
5 33.2 33 32.8 99.39 101.1 1.7
6 33.2 33 33.4 101.21
7 33.2 40.5 41.5 102.47
8 33.2 40.5 40.4 99.75
9 33.2 40.5 40.0 98.77
2.9　含量测定
2.9.1　药材含量测定
取 5批药材 ,精密称定 ,按 “ 2.3.1”条制备药
材供试品溶液 ,并取 20 μL测定 ,结果见表 3。
Table3　ContentofastragalosideIVandsyringosideinmedicineherb
No. 1 2 3 4 5
w(RadixCodonopsis)/% 5.6×10 -5 5.9×10-5 5.6×10-5 5.7×10-5 5.6×10-5
2.9.2　制剂含量测定
取 5批参芪扶正粉针剂 ,按 “2.3.2”条制备 ,
并取 20 μL测定 ,结果见表 4。
Table4　Contentofsyringosideinfreeze-dryingpreparationforinjection
No. 1 2 3 4 5
Syringoside(μg/botle) 8.1 8.3 8.4 8.2 8.2
3　讨论
a.参芪扶正粉针是根据中华人民共和国部颁
标准收载品种参芪扶正注射液[ 1]改进工艺和制
剂型而得到的注射用粉针剂。参芪扶正注射液的
组方为经典的 2味补气用中成药:党参 、黄芪。原
标准中仅对黄芪药材中的指标成分黄芪甲苷进行
了测定 ,以黄芪甲苷来测定两味药材中的总皂苷。
对党参没有进行测定 。本文作者对党参进行了测
定 ,建立了一种新的方法 ,测定党参中的紫丁香
苷 ,为党参药材的检测和含有党参的制剂完善了
质量标准。
b.紫丁香苷检测波长和洗脱方式的选择:曾
选择 203、270nm2种波长 ,在 270 nm波长下 ,供
试品色谱峰较 203 nm多 ,且峰面积大。因而确定
270nm为测定波长。因植物药中的成分较多 ,若
采用等度条件洗脱 ,紫丁香苷峰与其他峰色谱峰
不能分离开 ,且分析时间较长。而采用梯度条件
洗脱 ,不但紫丁香苷峰与其他色谱峰分离良好 ,也
可以保证基线分离 ,而且分析时间较短 ,故采用梯
度条件洗脱 。
c.紫丁香苷流动相的选择 在试验过程中选
用了多种流动相:甲醇-水不同梯度条件洗脱;甲
醇 -乙腈-水不同梯度条件洗脱;乙腈 -水不同梯度
条件洗脱。由于甲醇-水系统的热力学和可压缩
性因素 ,在梯度洗脱时容易产生气泡和导致基线
漂移。而乙腈-水系统相对较好 ,故选择乙腈-水
系统为流动相。
参考文献:
[ 1] 部颁标准 WS3-387(Z-50)-2003(Z)参芪扶正注射
液.
[ 2] 国家药典委员会.中华人民共和国药典:一部 [ M] .
北京:化学工业出版社 , 2005:199.
[ 3] 朱焰 ,魏均娴.党参属药用植物研究状况 [ J] .天然产
物研究与开发.1994, 6(1):70-75.
[ 4] 房方 ,张广强 , 谢新年 ,等.用分光光度法进行黄酮类
化合物含量测定的研究 [ J] .河南中医药学刊.1992,
12(2):17-19.
216 沈　阳　药　科　大　学　学　报 第 26卷　
[ 5] 张勇慧 ,张锦文.参芪扶正注射液中党参药材 HPLC
指纹图谱研究 [ J] .中药材.2006, 29(12):1 355 -
1 358.
[ 6] 邹静恂 , 席宏伟 , 王桥.超声提取对党参皂甙成分提
出率的影响 [ J] .首都医科大学学报.1997, 18(2):
168-169.
[ 7] 徐韧柳 ,韩桂茹 , 贾新生 , 等.党参中党参甙 Ⅰ提取工
艺的探讨 [ J] .中医药信息.2000, 3:23.
[ 8] 孙琴 ,代勇.克忧颗粒提取工艺的研究 [ J] .泸州医学
院 , 2003, 26(3):131-132.
Determinationofsyringosideinmedicalherbsand
Shenqifuzhengfreeze-dryingpreparationforinjec-
tion
YANGHao1 , LIZhen2 , TANGXing1
(1.SchoolofPharmacy, ShenyangPharmaceuticalUniversity, Shenyang　 110016, China;2.Liaoning
ZhengxinPharmaceuticalResearchCo., Ltd., Shenyang　110179, China)
Abstract:ObjectiveTodeterminesyringosideinmedicalherbsandShenqifuzheng(traditionalChinese
medicine)freeze-dryingpreparationforinjection.MethodsThegradientelutionwasthemixtureofacetoni-
trile-waterwiththeflowrateof1.0 mL·min-1 , UVdetectionwassetat270 nm.ResultsThelinearrange
was3.3-19.8μg, theaveragerecoverywas100.02% withRSDof1.2%.Thecalibrationcurveofsyrin-
gosidewaslinearintherangeof6.0 -27.0 mg·L-1.TheregressionequationwasA=2.684 ×104 ρ-
2.986×103 , thecorelationcoeficientwas0.999 9(n=5), theaveragerecoverywas101.1% withRSD
being1.7%.ConclusionsThemethodisreliable, accurateandverysuitableforthedeterminationofsyrin-
gosideinmedicalherbsandShenqifuzhengfreeze-dryingpreparationforinjection.
Keywords:RadixAstragali;RadixCodonopsis;syringoside;HPLC
217第 3期 杨　昊等:HPLC法测定参芪扶正粉针剂及其药材中紫丁香苷的含量