全 文 ：4　讨论
上述研究结果表明 ,湖北贝母总生物碱对乙酰胆碱 -组胺引
喘的豚鼠具有显著的平喘作用 , 由离体实验的结果来看 , 其作用
机理可能与竞争性拮抗气管平滑肌上的 M受体相关。
哮喘是一种以气道炎症和气道高反应性为特征的疾病 ,其发
病机理相当复杂 , 往往是多种介质或细胞因子共同作用的结果。
目前对于哮喘的治疗主要集中在扩张支气管和抗炎两个方
面 [ 5] , 其中扩张支气管的药物主要有 M-受体拮抗剂和 β 2 -受
体激动剂两大类药物 [ 6] , 由于在气道的全部平滑肌上均有胆碱
能神经纤维和胆碱能受体分布 ,各种刺激引起的内源性乙酰胆碱
释放在诱发哮喘中有重要作用 [ 7] , 且对于老年哮喘特别是合并
慢性支气管炎 、肺气肿者 , 应用胆碱能 M-受体阻滞剂 , 其效果
优于 β2 -受体激动剂 , 这是由于老年支气管哮喘患者气管平滑
肌 β 2 -肾上腺素能受体数量减少 , 敏感性降低所致 , 所以 , 对于
使用 β2 -受体激动剂类药物疗效欠佳的老年支气管哮喘患者 ,
在临床上较为主张应用 M-受体拮抗剂进行治疗 [ 8] 。湖北贝母
总生物碱能够竞争性拮抗乙酰胆碱引起的气管痉挛 ,而且相对于
哮喘治疗中常用的 M受体拮抗剂来说 , 它具有镇咳和祛痰的效
应 [ 3] , 这对于合并有咳嗽和痰多的老年支气管哮喘患者尤为适
宜。本研究为湖北贝母总生物碱在治疗咳 、痰 、喘等疾病提供了
良好的理论依据。
参考文献:
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收稿日期:2008-09-22;　修订日期:2008-12-30
基金项目:国家 “十一五 ”科技支撑计划子课题(No.2006BAI06A01-01)
作者简介:陈新菊(1960-),女(汉族),江西南昌人 ,现为江西省药物研究
所研究员 ,学士学位 ,主要从事新药开发和质量标准的研究工作.
高效液相色谱 -蒸发光散射检测法
测定毛冬青药材中 IlexgeninA的含量
陈新菊 ,利家平 ,袁海铭 ,吴　迪 ,曾宪仪
(江西省药物研究所 ,江西 南昌　330029)
摘要:目的 建立毛冬青药材中 IlexgeninA的高效液相色谱 -蒸发光散射检测(HPLC-ELSD)的含量测定方法。方法
采用 Lichrospher-C
18
色谱柱(4.6mm×250 mm, 5μm), 流动相为乙腈 -0.1%醋酸溶液(60∶40), 流速 1 ml/min,蒸发光
散射检测器:漂移管温度 96℃,气体流速 2.1 L/min。结果 IlexgeninA在 0.7 ～ 14.5μg浓度范围内线性关系良好 , r=
0.999 7(n=6)。平均回收率为 100.32 %, RSD= 1.38 %(n=6)。结论 本法操作快速 、准确 ,可作为毛冬青药材中
IlexgeninA的质量控制方法。
关键词:毛冬青;　IlexgeninA;　高效液相色谱 -蒸发夹散射检测
中图分类号:R284.2　　文献标识码:A　　文章编号:1008-0805(2009)06-1337-02
DeterminationofContentofIlexgeninAinIlexPubescensbyHPLC-ELSD
CHENGXin-ju, LIJia-ping, YUANHai-ming, WUDi,ZENGXian-yi
(JiangxiMedicinalResearchInstitute, Nanchang330029, China)
Abstract:ObjectiveToestablishanHPLC-ELSDmethodforthedeterminationofcontentofIlexgeninAinIlexPubescens.
MethodsLichroshper-C
18
(4.6 mm×250 mm, 5μm)columnwasusedinHPLCwithmobilephaseAcetonitrite-0.1%Acetic
acid(60∶40).Theflowratewas1ml/min, anevaporativelight-scateringdetectorwasusedandtheparametersweresetas
folows:drifttubetemperaturewas96℃ andgasflowratewas2.1L/min.ResultsThelinearrangeofIlexgeninAisfrom0.7
～ 14.5μg, r=0.9997(n=6).Theaveragerecoveryis100.23%, RSD= 1.38%(n= 6).ConclusionThismethodisrapid
andaccurate.ItcanbeusedforqualitycontrolonIlexgeninAofIlexPubescens.
Keywords:IlexPubescens;　IlexgeninA;　HPLC-ELSD;　Determinationofcontent
　　毛冬青药材为冬青科冬青属植物毛冬青 IlexpubescensHook
etArm的干燥根。功能清热解毒 , 活血通脉 , 消肿止痛。用于治
疗风热感冒 、肺热咳喘 、冠心病 、血栓闭塞性脉管炎。其生长在南
方地区 , 为江西省道地中药材的一种 ,含有大量皂苷活性成分物
质 [ 1, 2] 。在毛冬青药材的质量标准研究中 , 我们首次用高效液相
色谱 -蒸发光散射检测器的分析方法对其中的一个成分(Ilexge-
ninA)进行了含量测定 [ 3, 4] 。
1　仪器和试药
岛津 LC-10AD泵 , Alltech500 ELSD检测器 , Sepu3000色谱
工作站;IlexgeninA对照品(批号:050804, 含量 100% HPLC法)
自制;毛冬青药材:江西省各地采挖;乙腈为色谱纯 , 水为重蒸水 ,
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LISHIZHENMEDICINEANDMATERIAMEDICARESEARCH2009VOL.20NO.6 时珍国医国药 2009年第 20卷第 6期
其它试剂均为分析纯 。
2 　方法与结果
2.1　 色谱条件 色谱柱为 Lichrospher-C18(4.6mm×250 mm,
5μm);流动相为乙腈 -0.1%醋酸溶液(60∶40);流速 1ml/min;
蒸发光散射检测器飘移管温度为 96℃,气体流速为 2.1 L/min。
2.2　测定方法
2.2.1　对照品溶液的制备 取 IlexgeninA对照品适量 , 精密称
定 , 加甲醇制成每毫升含 65μg的溶液 , 即得。
2.2.2　供试品溶液的制备 取毛冬青药材粉末(过 4号筛),约
1.5g, 精密称定 , 置 250ml回流瓶中 , 加 100ml的乙醇 , 回流 1h,
取下 , 滤过 , 然后用乙醇洗涤数次 ,滤液蒸干 , 残渣用甲醇溶解到
10 ml量瓶中 , 摇匀 ,即得。
2.2.3　测定法 分别精密吸取对照品溶液 5 μl和 10 μl及供试
品溶液 5 ～ 10 μl注入液相色谱仪 ,测定 ,用外标两点法对数方程
计算 , 即得。
2.3　专属性实验 取对照品和供试品溶液按上述方法进行测定 ,
结果在 IlexgeninA对照品相应的保留时间处有一相同的峰 ,周边
无其它杂质峰干扰。保留时间在 8 min左右 ,理论板数以 Ilexge-
ninA峰计大于 8 000。结果见图 1～ 2。
图 1　毛冬青 IlexgeninA对照品的 HPLC色谱图
图 2　毛冬青药材的 HPLC色谱图
2.4　 蒸发光散射检测器的条件考察
2.4.1　漂移管温度的选择 在上述色谱条件下 , 固定漂移管的
气流量为 2.1L/min, 改变漂移管温度 ,用 IlexgeninA对照品溶液
进样 , 测定其峰面积及信噪比(S/N), 选择峰面积和信噪比两者
均为最大值时的温度 ,得到最优化的漂移管温度为 96℃。
2.4.2　漂移管中气流量的选择 在上述色谱条件下 , 固定漂移
管的温度为 96℃, 改变漂移管的气流量 , 用 IlexgeninA对照品溶
液进样 , 测定其峰面积及信噪比(S/N), 选择峰面积和信噪比两
者均为最大值时的气流量 ,得到最优化的漂移管气流量为 2.1L/
min。
2.5　标准曲线的制备 取 IlexgeninA对照品约 15 mg置 10ml量
瓶中 , 用甲醇溶解并稀释到刻度 , 从中吸取 0.5, 1, 2.5, 5, 7.5和
10μl注入色谱仪中进行测定 , 结果在 0.7 ～ 14.5 μg的范围内 ,
浓度与峰面积的对数值成一直线 ,回归方程为 lgA=1.481 1lgC
+6.174 7 , 相关系数 r=0.999 7(n=6 )。
2.6　 溶液的稳定性实验 取样品溶液一份 , 在不同的时间点测
定 , 结果在 24 h内稳定性好。
2.7 　重复性实验 取同一批毛冬青药材 , 分别制配 6份相同
浓度的供试品溶液进行测定 , 计算平均含量为 0.217%, RSD
为 1.23%。
2.8　回收率实验 分别称取同一批已知含量的毛冬青药材(含
量:0.217%)适量 , 加入一定量的 IlexgeninA对照品 , 共 6份 , 制
成供试品溶液 ,进行测定 , 计算平均回收率为 100.32%, RSD为
1.38%。结果见表 1。
表 1　回收率实验结果
编号 称样量m/g
样品中量
m/mg
加入对照品
量m/mg
实测量
m/mg
回收率
(%)
平均值
(%)
RSD
(%)
1 0.752 4 1.632 7 1.707 7 3.335 9 99.74
2 0.753 0 1.634 0 1.707 7 3.310 4 98.17
3 0.754 9 1.638 1 1.707 7 3.343 9 99.89 100.32 1.38
4 0.752 1 1.632 1 1.707 7 3.377 9 102.23
5 0.750 9 1.629 5 1.707 7 3.350 4 100.78
6 0.751 3 1.630 3 1.707 7 3.356 9 101.11
2.9　药材的测定 对从不同地方 、不同时间采集的毛冬青药材 ,
经干燥粉碎 , 过 4号筛 , 分别取 1.5 g, 精密称定 , 按上述方法操
作 , 测定。结果见表 2。
表 2　毛冬青药材中 IlexgeninA的测定结果
编号 采集地点 采集时间
平均含
量(%)
RSD
(%)
1 江西德兴大茅山 1998-08 0.516 0.09
2 江西德兴大茅山 1998-10 0.418 1.10
3 江西德兴大茅山 1999-08 1.054 0.41
4 江西德兴大茅山 1999-011 0.997 1.30
5 江西德兴大茅山 2000-12 0.684 0.36
6 江西德兴大茅山 2007-10 0.524 0.17
7 江西安远镇岗仙会山 2007-10 0.399 0.78
8 江西安远镇岗杉树排景上 2007-10 0.436 1.22
9 江西安远鹤子老郭坑 2007-10 0.647 0.14
10 江西遂川左安红裕棚下前山 2007-11 0.540 1.12
11 江西遂川左安红裕棚下后山 2007-11 0.219 0.65
12 江西安福太平谷口里木杭江 2007-11 0.275 1.06
13 西安福太平谷口外柏山 2007-11 0.370 1.26
3　讨论
毛冬青药材中的大部分皂苷类物质没有紫外吸收 , 我们
采用蒸发光散射检测器对其中的皂苷类物质进行检测 , 得到
满意的结果 。
本实验采用不同浓度的乙醇进行不同时间的超声和回流提
取试验 , 结果表明 ,毛冬青药材采用 95%乙醇 100ml,回流 1 h, 其
中的 IlexgeninA提取比较完全 , 含量最高。
在实验过程中 ,使用过甲醇 -水 , 乙腈 -水和乙腈 -0.1%醋
酸水溶液作流动相 ,乙腈 -水作流动相较好 ,在水中加少许冰醋
酸 , 对峰形能得到更好的改善 , 因此 , 本法选用了乙腈 -0.1%醋
酸溶液(60∶40)作为流动相。
本法中浓度和峰面积的对数值曲线为一良好的直线 ,此直线
未过原点 , 因此在本方法中应采用外标两点对数方程来进行计
算。
本方法经实验证明 ,准确性高 , 重复性好 , 简便快速 , 可对毛
冬青药材的质量进行有效的控制。
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时珍国医国药 2009年第 20卷第 6期 LISHIZHENMEDICINEANDMATERIAMEDICARESEARCH2009VOL.20NO.6