全 文 ：成分同步测定是可行的。但校正因子在实际操作中
可能存在不确定性，如对照品质量分数、检测波长、
流动相配比变化、供试品制备方法、仪器和色谱柱等
不同都会对色谱峰面积产生影响，从而导致校正因
子发生相应的变化，且中药成分复杂，产地、生产工
艺等因素会使得药材含量发生变化，从而较难建立
统一使用的相对校正因子，因此采用一测多评法时
校正因子能否作为常数应用仍需进一步深入探讨和
研究。
本实验对 11 批穿心莲药材中 5 个内酯类成分
的含量测定结果表明，各批次的穿心莲药材中各组
分含量差异较大，其中穿心莲宁的含量偏低，有的药
材甚至检测不出。药材的产地、采收期、贮藏时间及
方法等的不同也会使得各成分含量差异较大〔3〕。
为保证药材的质量和疗效，建议规范化种植，且确定
其最佳采收期、贮藏时间及方法。
参 考 文 献
［1］国家药典委员会． 中华人民共和国药典［S］． 一部． 北
京:中国医药科技出版社，2010:251-252．
［2］王林丽．穿心莲及其制剂的药理作用及其临床应用研
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其制剂中 6 种内酯类成分［J］．华西药学杂志，2011，26
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HPLC-ELSD法同时测定毛冬青中 3 种五环三萜的含量
李 英，吕 晔，林丽萍*
(江苏省中国科学院植物研究所，江苏 南京 210014)
摘要 目的:首次建立同时测定毛冬青中 Ilexsaponin B1、Ilexsaponin B2 和 Ilexgenin A 含量的方法并将其运用
到同属植物三萜的检测中。方法:采用 Cemini C18色谱柱(4. 6 mm × 250 mm，5 μm)，流动相为乙腈-0. 5%醋酸水，
流速 1. 0 mL /min，蒸发光散射检测器:漂移管温度为 107 ℃，气体流速为 3. 0 L /min。结果:Ilexsaponin B1、Ilexsapo-
nin B2 和 Ilexgenin A线性范围分别为 0. 25 ～ 2. 50 μg(r1 = 0. 9992)、0. 03 ～ 0. 30 μg(r2 = 0. 9995)和 0. 07 ～ 0. 70 μg
(r3 = 0. 9998)，平均回收率(n = 6)分别为 101. 08%、100. 13%和 100. 16%。毛冬青及其同属植物中 3 种五环三萜
Ilexsaponin B1、Ilexsaponin B2 和 Ilexgenin A的含量差异较大，其中在毛冬青中的含量最高。结论:该方法操作准确、
有效，可为冬青属药材的来源和开发利用提供依据，同时测定 3 种五环三萜的方法可用于冬青属特别是毛冬青药
材的质量控制。
关键词 毛冬青;HPLC-ELSD;Ilexsaponin B1;Ilexsaponin B2;Ilexgenin A
中图分类号:Ｒ284. 1 文献标识码:A 文章编号:1001-4454(2014)03-0451-03
收稿日期:2013-10-11
基金项目:江苏省自然科学青年基金(BK2012378)
作者简介:李英(1987-)，女，在读硕士研究生，专业方向:药用植物学。
* 通讯作者:林丽萍，Tel:13814089035，E-mail:llp790720@ yeah. net。
毛冬青为冬青科冬青属植物毛冬青 Ilex pu-
bescens Hook. et Arn. 的干燥根，为我国南方常用中
药。已有研究表明毛冬青具有扩张血管及抗菌消炎
的作用，临床用于冠状动脉硬化性心脏病、血栓闭塞
性脉管炎的治疗，疗效显著〔1，2〕。毛冬青入药部位
主要为根，对资源而言是不可再生的。同时市面上
的药材质量鱼龙混杂，肉眼上难以辨认。虽然已经
有部分文献已经报道了毛冬青三萜的含量测定方
法，但都为单一〔3，4〕或同时测定 2 种成分〔5〕，因此毛
冬青药材的质量控制方面尚不完善。本课题组前期
药理研究表明:Ilexsaponin B1、Ilexsaponin B2 和 Ilex-
genin A表现出较好的抗血栓活性〔6〕，且为毛冬青药
材的主要成分。为建立一套行之有效的毛冬青质量
控制方法，本实验采用 HPLC-ELSD首次建立了同时
测定 Ilexsaponin B1、Ilexsaponin B2 和 Ilexgenin A 含
量的方法。
1 仪器与试药
Agilent 1100 Series HPLC，Alltech 2000 ELSD检
测器，Mettler AE240 电子天平。Ilexsaponin B1、Ilex-
saponin B2 和 Ilexgenin A 对照品为自制，UV、NMＲ、
MS、IＲ 鉴定结构，HPLC 归一化法测定质量分数大
于 98%，均符合定量要求。乙腈、冰醋酸为色谱纯，
其他试剂均为分析纯，水为双蒸水。毛冬青药材采
自广西南边山，经广西壮族自治区中国科学院植物
·154·Journal of Chinese Medicinal Materials 第 37 卷第 3 期 2014 年 3 月
DOI:10.13863/j.issn1001-4454.2014.03.032
研究所韦发南研究员鉴定为冬青科植物毛冬青 Ilex
pubescens Hook. et Arn. 的干燥根。其他冬青属各药
材均采自南京中山植物园内，经江苏省中国科学院
植物研究所姚淦教授鉴定分别为冬青科植物枸骨 I-
lex cornuta Lindl. et Paxt. 、大果冬青 Ilex macrocarpa
Oliv. 、大叶冬青 Ilex latifolia Thunb. 、铁冬青 Ilex ro-
tunda Thunb. 、冬青 Ilex chinensis Sims、秃毛冬青 Ilex
pubescens Hook. et Arn. var. glabra Chang和浙江冬青
Ilex zhejiangensis C. J. Tseng ex S. K. Chen et Y. X. Feng
的干燥茎。
2 方法与结果
2. 1 混合对照品溶液的制备 分别取对照品 Ilex-
saponin B1、Ilexsaponin B2 和 Ilexgenin A 适量，精密
称定，用甲醇配制成浓度分别为 0. 03、0. 25 和 0. 07
mg /mL的混合对照品溶液，0. 45 μm 微孔滤膜过
滤，即得。
2. 2 供试品溶液的制备 精密称定毛冬青药材粉
末 1. 5 g，置于 250 mL 回流瓶中，加入 100 mL 的甲
醇回流提取 2 h，滤过;残渣用甲醇洗涤数次。合并
滤液和洗涤液，蒸干，残留物加适量甲醇溶解并定容
至 25 mL，0. 45 μm 微孔滤膜过滤，取续滤液作为供
试品溶液。
2. 3 色谱条件 色谱柱 Cemini C18(4. 6 mm × 250
mm，5 μm);流动相:A 乙腈-B 0. 5%醋酸水(0 ～ 1
min，20% A;1 ～ 15 min，20% ～ 75% A);流速 1. 0
mL /min;进样量 20 μL。蒸发光散射检测器漂移管
温度为 107 ℃，气体流速为 3. 0 L /min。
2. 4 专属性试验 依上述色谱条件，分别精密吸
取混合对照品溶液和供试品溶液各 20 μL 进样，结
果对照品和样品在相同保留时间有相应的色谱峰，
结果见图 1。理论板数按 Ilexsaponin B1 峰计不低于
5 000。
2. 5 蒸发光散射检测器条件的优化
2. 5. 1 漂移管温度的优化:在上述色谱条件下，漂
移管的气流量固定为 3. 0 L /min，混合对照品溶液进
样，改变漂移管的温度，测定其峰面积及信噪比(S /
N)，当峰面积和信噪比均为最大值时，得到最优化
的漂移管温度为 107 ℃。
2. 5. 2 漂移管中气流量的优化:在上述色谱条件
下，漂移管的温度固定为 107 ℃，混合对照品溶液进
样，改变漂移管的气流量，测定其峰面积及信噪比
(S /N)，当峰面积和信噪比均为最大值时，得到最优
化的漂移管气流量为 3. 0 L /min. 。所以，蒸发光散
射检测器的条件是漂移管温度为 107 ℃，气体流速
为 3. 0 L /min。
图 1 混合对照品(A)和毛冬青药材(B)的 HPLC色谱图
1. Ilexsaponin B2 2. Ilexsaponin B1 3. Ilexgenin A
2. 6 标准曲线的制备 分别吸取混合对照品溶液
1、3、5、7、10 μL 注入液相色谱仪，测定峰面积。以
对照品的进样量 x(μg)为横坐标，峰面积 y 为纵坐
标，进行线性回归，结果 Ilexsaponin B1、Ilexsaponin
B2 和 Ilexgenin A回归方程分别为:y1 = 1199. 6x1 －
174. 02，r1 = 0. 9992;y2 = 760. 26x2 － 44. 846，r2 =
0. 9995;y3 = 2683. 5x3 － 589. 08，r3 = 0. 9998;线性范
围分别为 0. 25 ～ 2. 50 μg、0. 03 ～ 0. 30 μg 和 0. 07 ～
0. 70 μg。
2. 7 精密度试验 精密吸取混合对照品溶液 20
μL，在上述色谱条件下，重复注入液相色谱仪 6 次，
测得 Ilexsaponin B1、Ilexsaponin B2 和 Ilexgenin A 色
谱峰峰面积的 ＲSD 分别为 0. 11%、0. 05% 和
0. 74%。表明仪器精密度良好。
2. 8 稳定性试验 精密吸取供试品溶液各 20 μL，
分别在 0、2、4、6、8、12、24 h 进样并测定，结果表明
供试品溶液在 24 h 内稳定。
2. 9 重复性试验 取同一批毛冬青药材粉末 1. 5
g，6 份，精密称定，按“2. 2”项下方法操作，制备供试
品溶液，各精密吸取 20 μL 注入液相色谱仪。结果
Ilexsaponin B1、Ilexsaponin B2 和 Ilexgenin A平均含量
分别为 4. 12%、0. 16% 和 1. 82%，ＲSD 分别为
0. 11%、0. 01%和 0. 15%。表明该方法重复性良好。
2. 10 加样回收率试验 取同一批已知含量的毛
冬青药材粉末适量，加入一定量的混合对照品，共 6
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份，制成供试品溶液，进行测定，计算 Ilexsaponin B1、
Ilexsaponin B2 和 Ilexgenin A 平均回收率(n = 6)分
别为 101. 08%、100. 13%和 100. 16%，ＲSD 分别为
0. 07%、0. 01%和 0. 81%。
2. 11 药材的测定 取毛冬青及其余 7 种冬青属
药材的茎，经干燥粉碎，过四号筛，分别取 1. 5 g，精
密称定，按“2. 2”项下方法操作，测定。结果见表 1。
表 1 冬青属药材含量测定结果
样品
Ilexsaponin B1 Ilexsaponin B2 Ilexgenin A
含量 /% ＲSD /% 含量 /% ＲSD /% 含量 /% ＲSD /%
毛冬青 4. 12 0. 11 0. 16 0. 01 1. 82 0. 15
枸骨 0. 299 0. 196 0. 014 0. 001 0. 031 0. 005
大果冬青 0. 086 0. 053 0. 004 0. 001 0. 016 0. 002
大叶冬青 0. 098 0. 068 0. 024 0. 003 0. 011 0. 001
铁冬青 － － － － － －
冬青 0. 047 0. 042 － － 0. 092 0. 116
秃毛冬青 0. 001 0. 001 0. 005 0. 002 0. 004 0. 001
浙江冬青 0. 001 0. 013 0. 001 0. 026 0. 001 0. 007
注:“ －”表示含量 ＜ 0. 001%
3 讨论
笔者测定的 3 个五环三萜化合物，紫外吸收较
弱，而采用蒸发光检测器可得到较好的结果。
本实验对提取方式(超声、回流)、提取溶剂种
类(甲醇、不同浓度的乙醇)和提取时间(0. 5、1、2、3
h)进行考察。结果表明药材粉末甲醇回流提取 2
h，3 种化合物的提取比较完全，含量最高。
在实验过程中，尝试了甲醇-水、乙腈-水和乙腈-
0. 5%醋酸水作流动相，结果表明乙腈-水作流动相
较好，在水中加少许冰醋酸对峰形能到较好的改善。
因此，本实验选择乙腈-0. 5%醋酸水作流动相。
毛冬青与同属药材间 Ilexsaponin B1、Ilexsaponin
B2 和 Ilexgenin A含量的差异较大，所以冬青属药材
间不可混用。本方法经实验证明，可同时测定冬青
属药材中 Ilexsaponin B1、Ilexsaponin B2 和 Ilexgenin
A 3 种成分的含量，方法简便快捷、重复性好、准确
性高，可用于冬青属特别是毛冬青药材的鉴别和质
量控制。
参 考 文 献
［1］南京中医药大学． 中药大辞典［M］． 上海:上海科学技
术出版社，2006:617-618．
［2］郝巨祥，杨崇真．毛冬青的药理作用及临床应用研究进
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检测法测定毛冬青药材中 Ilexgenin A的含量［J］．时珍
国医国药，2009，20(6):1337-1338．
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723-726．
《中药材》杂志为中国中文核心期刊。
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