全 文 ：— 13 —现代中药研究与实践2013年第27卷第6期Chin Med J Res Prac,2013 Nov.Vol.27 No.6
·资源与鉴定·
HPLC-ELSD同时测定走马胎中 3种三萜皂苷含量
穆丽华 1，刘　屏 1*，姚成东 2，谷永杰 3
(1. 中国人民解放军总医院临床药理研究室，北京 100853；2. 蚌埠医学院，安徽 蚌埠 233003；3. 河北北
方学院，河北 张家口 075000）
摘　要：目的　建立同时测定走马胎中 3 种三萜皂苷类成分的RP-HPLC-ELSD 方法。方法　选用
HPLC Kromasil C18 色谱柱（4.6mm×250mm, 5μm），流动相：甲醇 55% CH3OH～ 90%CH3OH梯度洗脱
40 min ，流速 0.8 mL·min-1 。Althche 2000ES ELSD 检测器，漂移管温度：100。C，空气流速 2.8 L·min-1。
结果　结果表明 3 -O-{ -L- 吡喃鼠李糖基 -(1 → 3)-[ -D- 吡喃木糖基 -(1 → 2)]- -D- 吡喃葡萄糖
基 -(1 → 4)-[ -D- 吡喃葡萄糖基 -(1 → 2)]- -L- 吡喃阿拉伯糖基 }- 西克拉敏 A (a)，3 -O-{ -L- 吡喃
鼠李糖基 -(1 → 3)-[ -D- 吡喃木糖基 -(1 → 2)]- -D- 吡喃葡萄糖基 -(1 → 4)-[ -D-6-O-乙酰基吡喃葡
萄糖基 -(1 → 2)]- -L- 吡喃阿拉伯糖基 }-西克拉敏 A （b），3 -O-{ -L- 吡喃鼠李糖基 -(1 → 3)-[ -D-
吡喃葡萄糖基 -(1 → 3)- -D- 吡喃木糖基 -(1 → 2)]- -D- 吡喃葡萄糖基 -(1 → 4)-[ -D- 吡喃葡萄糖
基-(1→2)]- -L-吡喃阿拉伯糖基}-16 -羟基-13，28-环氧-齐墩果烷(c)的检测分别在3.000～9.000μg，
8.685 ～ 37.635μg，3.300 ～ 10.450μg 线性关系良好。药材中三种成分的平均回收率（n = 9）为 99.64 %(
RSD 0.78 %) , 99.93 % ( RSD 0.65%), 100.07 %( RSD 1.37%)。结论　该方法操做简单、结果准确具有较好的
重复性和稳定性，为走马胎药材质量控制提供了一个很好的依据。
关键词：走马胎；三萜皂苷；HPLC-ELSD
中图分类号：R972.2 文献标识码：A 文章编号：1673-6427(2013)06-0013-04
Determination of Three Triterpenoid Saponins in Ardisia gigantifolia Stapf by HPLC-ELSD
MU Li-hua1, LIU Ping1* ,YAO Cheng-dong2, GU Yong-jie3
(1.Department of Clinical Pharmacology , General Hospital of PLA, Beijing 100853, China;.2.Department of Pharmacy,
Bengbu Medical College, Bengbu 233030, China ;3Hebei north university, Zhangjiakou 075000, China)
Abstract: Objective To establish the quantitative method of three triterpenoid saponins in Ardisia
gigantifolia Stapf by HPLC-ELSD. Methods The column was packed with 5 μm Kromasil C18 stationary phase.
The mobile phase consisted of methanol-water, eluted in gradient mode of 55% CH3OH-90%CH3OH, fl ow rate
was 0.8 mL•min-1.The temperature of drift tube was 100℃and the air flow rate was 2.8 L•min-1. Results The
linear ranges of the three components were 3.000~9.000 μg, 8.685~37.635μg and 3.300~10.450μg ,respectively.
The average recoveries of the three components in Ardisia gigantifolia Stapf were 99.64 %( RSD=0.78 %) , 99.93
% ( RSD=0.65%), 100.07 %( RSD=1.37%) ,respectively. Conclusion It was proved that the method was reliable,
simple, and precise, that could be used for quality control.
Key words: Ardisia gigantifolia Stapf; triterpenoid saponin; HPLC-ELSD
收稿日期：2013-09-04
基金项目：国家自然科学基金（编号：31370006）
作者简介：穆丽华（1976年-）， 女， 硕士， 副主任药师， 主要从事
中药化学研究， Tel: (010) 66936678, E-mail:mulihua@sohu.
com
*通讯作者：刘屏（1 9 5 6年 -）， 女，博士，研究员， 主要从
事中药化学和中药药理研究，T e l : ( 0 1 0 ) 6 6 9 3 6 6 7 6 ,
E-mail:liuping301@126.com
DOI:10.13728/j.1673-6427.2013.06.013
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走马胎又名大叶紫金牛 [1]、走马风 [2] 、豆收 [3] ,
学名Ardisia gigantifolia Stapf, 为紫金牛科紫金牛属植
物 , 全株具有活血化淤、祛风湿壮筋骨、止血生肌等
功效 [4], 为民间常用的跌打伤科药。目前从紫金牛属
植物中已经分离得到苯酚、苯醌、香豆素、黄酮、皂
苷、环肽和甾体等类化合物 [5,6]。走马胎中的三萜皂
苷类成分主要为齐墩果烷型 , 根据文献报道 , 这类成
分具有抗肿瘤、抗 HIV 等方面的活性 [7]。3-O-{α-L-
吡喃鼠李糖基-(1→ 3)-[β-D-吡喃木糖基-(1→ 2)]-
β-D- 吡喃葡萄糖基 -(1 → 4)-[β-D- 吡喃葡萄糖
基 -(1 → 2)]-α-L- 吡喃阿拉伯糖基 }- 西克拉敏
A(a)，3β-O-{α-L- 吡喃鼠李糖基 -(1 → 3)-[β-D-
吡喃木糖基 -(1 → 2)]-β-D- 吡喃葡萄糖基 -(1 → 4)-
[β-D-6-O- 乙酰基吡喃葡萄糖基 -(1 → 2)]-α-L- 吡
喃阿拉伯糖基 }- 西克拉敏 A（b），3β-O-{α-L- 吡
喃鼠李糖基 -(1 → 3)-[β-D- 吡喃葡萄糖基 -(1 → 3)-
β-D- 吡 喃 木 糖 基 -(1 → 2)]-β-D- 吡 喃 葡 萄 糖
基 -(1 → 4)-[β-D- 吡喃葡萄糖基 -(1 → 2)]-α-L-
吡喃阿拉伯糖基 }-16- 羟基 -13，28- 环氧 - 齐墩果
烷 (c) 是走马胎中含量较高的三萜皂苷类成分，但对
这 3 种成分的含量测定还未见报道。本研究首次建立
了同时测定走马胎 3 种三萜皂苷的反相高效液相方
法，并对 5 批次走马胎中三萜皂苷 a、b 和 c 进行了
含量分析，为走马胎药材的质量控制提供依据。
1. 仪器与试药
Hitach 高效液相色谱仪，Alltech2000ES 蒸发光散
射检测器、AG285 型电子天平［METTLERTOLEDO( 德
国 ) 有限公司］，KQ-250E 型超声波清洗器 ( 昆山市
超声波仪器厂 )。3-O-{α-L-吡喃鼠李糖基-(1→ 3)-
[β-D- 吡喃木糖基 -(1 → 2)]-β-D- 吡喃葡萄糖
基 -(1 → 4)-[β-D- 吡喃葡萄糖基 -(1 → 2)]-β-L-
吡喃阿拉伯糖基}-西克拉敏A对照品(a)，3-O-{α-L-
吡喃鼠李糖基-(1→ 3)-[β-D-吡喃木糖基-(1→ 2)]-
β-D- 吡喃葡萄糖基 -(1 → 4)-[β-D-6-O- 乙酰基吡
喃葡萄糖基 -(1 → 2)]-β-L- 吡喃阿拉伯糖基 }- 西
克拉敏 A（b），3-O-{α-L- 吡喃鼠李糖基 -(1 → 3)-
[β-D- 吡 喃 葡 萄 糖 基 -(1 → 3)-β-D- 吡 喃 木 糖
基 -(1 → 2)]-β-D- 吡喃葡萄糖基 -(1 → 4)-[β-D-
吡喃葡萄糖基-(1→ 2)]-β-L-吡喃阿拉伯糖基}-16-
羟基 -13，28- 环氧 - 齐墩果烷对照品（c），自制，
经 HPLC 检测纯度＞ 98%)，试剂甲醇为色谱纯，水
为超纯水 ; 其他均为分析纯。5 批走马胎药材均购自
北京三和药业有限公司 , 经解放军总医院中药房刘萍
主任药师鉴定为走马胎Ardisia gigantifolia Stapf 的根
茎 , 标本保留在解放军总医院中药房。
2　方法与结果
2.1　色谱条件
HPLC Kromasil C18 色 谱 柱（4.6mm×250mm,
5μm），甲醇 55% CH3OH ～ 90%CH3OH 梯度洗脱 ,
0 ～ 40 min ， 流 速 0.8 mL·min-1, Althche 2000ES
ELSD 检测器，漂移管温度 ：100℃，空气流速 2.8
L·min-1，进样量10μL。按照上述色谱条件进行测定，
结果显示三萜皂苷 a, b 和 c 峰得到很好的分离，待测
组分与相邻组分分离度均大于 1.5，各成分理论塔板
数不低于 3000，分离度良好，高效液相色谱图见图 1。




图 1 样品以及对照品三萜皂苷 a, b 和 c 的 HPLC图
Fig.1 HPLC Chromatograms of reference substance and the sample
2.2 对照品溶液的制备
分 别 精 密 称 取 3β-O-{α-L- 吡 喃 鼠 李 糖
基 -(1 → 3)-[β-D- 吡喃木糖基 -(1 → 2)]-β-D- 吡
喃葡萄糖基-(1→ 4)-[β-D-吡喃葡萄糖基-(1→ 2)]-
α-L- 吡喃阿拉伯糖基 }- 西克拉敏 A 对照品 10.00
mg、3β-O-{α-L- 吡喃鼠李糖基 -(1 → 3)-[β-D-
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吡喃木糖基 -(1 → 2)]-β-D- 吡喃葡萄糖基 -(1 → 4)-
[β-D-6-O- 乙酰基吡喃葡萄糖基 -(1 → 2)]-α-L-
吡喃阿拉伯糖基 }- 西克拉敏 A 9.65 mg，3β-O-
{α-L- 吡喃鼠李糖基 -(1 → 3)-[β-D- 吡喃葡萄糖
基 -(1 → 3)-α-D- 吡喃木糖基 -(1 → 2)]-β-D- 吡
喃葡萄糖基-(1→ 4)-[β-D-吡喃葡萄糖基-(1→ 2)]-
β-L- 吡喃阿拉伯糖基 }-16β- 羟基 -13，28- 环氧 -
齐墩果烷对照品11.00 mg分别溶解于10 mL 量瓶中，
用甲醇溶解，配制成皂苷 a 1.000 g·L-1、皂苷 b 0.965
g·L-1、皂苷 c 1.100 g·L-1。
2.3　供试品溶液的制备
取走马胎粉末 ( 40 目 ) 10 g，置 250 mL 具塞锥
形瓶中，加入 100 mL 60% 乙醇 超声提取 40 min，
过滤，用少量提取溶剂洗涤滤渣，洗涤液与滤液合
并，减压浓缩干燥后用水溶解，过滤，水溶液上 10
mL D101 大孔吸附树脂，水洗，水洗液弃去，100
mL95% 乙醇洗脱 , 蒸干，甲醇溶解，定容至 25 mL，
经 0.45 μm 滤膜过滤，即得供试品溶液。
2.4　线性关系考察
在上述色谱条件下，分别精密吸取对照品 a 溶
液 3, 4.5，6, 7.5，9， 9.5μL， 对 照 品 b 溶 液 9，
15，21，27，33，39 μL， 对 照 品 c 溶 液 3, 4.5，
6, 7.5，9， 9.5μL 注入高效液相色谱仪，测定峰面
积。以峰面积的常用对数为纵坐标，以进样量的
常用对数为横坐标，计算皂苷 a, b 和 c 的回归方程
分 别 为 lgY =1.0112lgX + 6.269，R2 = 0.9998; lgY =
1.11688lgX + 5.4676，R2 = 0.9991;lgY = 1.2828lgX
+ 6.1597，R2 = 0.9995。结果表明，a、b 和 c 的检
测 分 别 在 3.000 ～ 9.000μg，8.685 ～ 37.635μg，
3.300 ～ 10.450μg 线性关系良好。
2.5　精密度试验
精密吸取同一浓度的对照品溶液 10μL，按 2.1
项下色谱条件，重复进样 6 次，记录峰面积。结果显
示，a、b 和 c 峰面积的RSD 分别为 0.87%，0.93%，
0.96%, 表明仪器精密度良好。
2.6　稳定性试验
按 2.3 项下制备供试品溶液，在上述色谱条件
下，分别在 0，2，8，12，24 h 进样 10μL，记录峰面积。
结果显示，a、b 和c 峰面积的RSD 分别为1.8%，1.2%，
1.4%，表明供试品溶液在 24 h 内稳定性良好。
2.7　重复性试验
精密称取走马胎粉末 6 份，按 2.3 项下制备供
试品溶液 6 份，分别在上述色谱条件下，分别进样
10μL，记录峰面积，计算含量。结果显示，a、b 和
c 平均含量分别为 6.197,0.916, 1.539 mg·g-1，RSD 分
别为 1.2%，0.81%，1.56%，表明该方法重复性良好。
2.8　加样回收率试验
精密称取 6 份已知含量的同一批走马胎药材粉
末，分别加入适量 a、b、c 对照品溶液，按 2.3 项下
制备供试液，进样 10μL，记录峰面积，计算各对照
品的加样回收率，结果见表 1。
表 1 走马胎加样回收率 (n = 9)
Tab. 1 Recoveries rate of the method (n = 9)
成分 样品中量/mg
加入量 /
mg
测得量 /
mg 回收率/%
平均回收
率 /% RSD/%
a 0.82 0.65 1.4542 98.93 99.64 0.78
0.817 0.65 1.462 99.66
0.821 0.65 1.4749 100.27
0.818 0.82 1.6412 100.20
0.829 0.82 1.637 99.27
0.824 0.82 1.6547 100.65
0.822 0.984 1.8086 100.14
0.821 0.984 1.7851 98.90
0.823 0.984 1.785 98.78
b 0.0916 0.0772 0.1702 100.83 99.93 0.65
0.0931 0.0772 0.1698 99.71
0.0925 0.0772 0.1701 100.24
0.0918 0.0965 0.1873 99.47
0.0921 0.0965 0.1889 100.16
0.0912 0.0965 0.1894 100.91
0.0918 0.1158 0.2071 99.76
0.092 0.1158 0.2075 99.86
0.0914 0.1158 0.2041 98.50
c 0.1538 0.121 0.2747 99.96 100.07 1.37
0.1533 0.121 0.271 98.80
0.1524 0.121 0.2684 98.17
0.1532 0.154 0.3082 100.33
0.1539 0.154 0.3089 100.32
0.1541 0.154 0.3059 99.29
0.1529 0.187 0.3484 102.50
0.1538 0.187 0.3483 102.20
0.1542 0.187 0.338 99.06
2.9 样品含量测定
按 2.3 项下制备供试品溶液，分别对 5 批次走马
胎中 a、b、c 的含量进行分析，记录色谱峰面积，根
据回归方程计算各组分含量，结果见表 2。
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表 2 走马胎样品测定结果
Tab. 2 Saponins content of Ardisia gigantifolia Stapf ( mg·g-1)
药材批次 三萜皂苷 a 三萜皂苷 b 三萜皂苷 c
28620401 6.197 0.916 1.539
28620501 6.012 0.905 1.542
28620601 5.892 0.891 1.493
28620701 6.125 0.924 1.538
28620801 6.189 0.912 1.541
3　讨论
3.1　走马胎中的三萜皂苷 a、b 和 c 为齐墩果烷型三
萜皂苷，紫外吸收均为末端吸收，使用紫外低波长检
测时 , 往往灵敏度低 , 基线易漂移，而蒸发光散射检
测器 , 由于流动相在检测前即已蒸发 , 因此提高了其
基线的稳定性。曾经尝试过采用等度洗脱，但分离效
果不够理想，筛选了多个梯度流动相之后确定甲醇
55% CH3OH ～ 90%CH3OH 梯度洗脱 , 0 ～ 40 min ，
各组份分离度大于 1.5，分离度良好。
3.2　提取方法的选择对比了超声和回流提取方法，
结果显示超声提取法的效果更佳，并且耗时短、操作
方便。溶媒的选择考察了甲醇、95%乙醇、60%乙醇、
水，结果显示 60% 乙醇提取效果最好。随后考察了
溶剂用量 ( 1 ∶ 10，1 ∶ 15，1 ∶ 20) 和提取次数，
结果表明， 10 倍量的 60% 乙醇 ，超声 40 min，即可
提取完全。
3.3　雾化气体流速和漂移管温度是蒸发光散射检测
器的两个重要可调节参数。实验中经过反复、仔细调
节参数 , 得到了最优信噪比及平稳基线。
3.4　含量测定结果，不同批次之间相同指标成分含
量差异不明显，表明提取工艺稳定、可靠。本研究
论文首次建立了同时测定走马胎中 3β-O-{α-L- 吡
喃鼠李糖基 -(1 → 3)-[β-D- 吡喃木糖基 -(1 → 2)]-
β-D- 吡喃葡萄糖基 -(1 → 4)-[β-D- 吡喃葡萄糖
基 -(1 → 2)]-α-L- 吡喃阿拉伯糖基 }- 西克拉敏 A
(a)，3β-O-{α-L- 吡喃鼠李糖基 -(1 → 3)-[β-D-
吡喃木糖基 -(1 → 2)]-β-D- 吡喃葡萄糖基 -(1 → 4)-
[β-D-6-O- 乙酰基吡喃葡萄糖基 -(1 → 2)]-α-L- 吡
喃阿拉伯糖基 }- 西克拉敏 A （b），3β-O-{α-L- 吡
喃鼠李糖基 -(1 → 3)-[β-D- 吡喃葡萄糖基 -(1 → 3)-
α-D- 吡 喃 木 糖 基 -(1 → 2)]-β-D- 吡 喃 葡 萄 糖
基 -(1 → 4)-[β-D- 吡喃葡萄糖基 -(1 → 2)]-β-L-
吡喃阿拉伯糖基 }-16β- 羟基 -13，28- 环氧 - 齐墩
果烷 (c) 的反相高效液相色谱测定方法，为走马胎药
材的质量控制提供了科学依据。
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