全 文 ：·鉴别·
不同产地吉祥草药材 HPLC- ELSD指纹图谱的研究
金兆磊，赵 超，陈华国，赵 杨，周 欣* ，杨世林
(贵州师范大学天然药物质量控制研究中心 /贵州省山地环境信息系统与生态环境保护重点实验室，贵州
贵阳 550001)
摘要 目的:利用 HPLC-ELSD技术建立不同产地吉祥草药材的指纹图谱，为评价其质量品质提供理论依据。
方法:采用 Diamonsil(R)C18色谱柱(4. 6 mm × 250 mm，5 μm) ，流动相为乙腈-水，梯度洗脱;流速 0. 8 mL /min;柱温
25 ℃;ELSD检测器:漂移管温度 85 ℃，氮气压力 350 kPa，增益值为 6。结果:建立不同产地吉祥草药材的 HPLC-
ELSD的指纹图谱，共找到 6 个共有峰。结论:该方法具有良好的重复性和稳定性，为有效控制吉祥草药材的质量
提供了依据。
关键词 吉祥草;高效液相色谱法-蒸发光散色检测器(HPLC-ELSD) ;指纹图谱
中图分类号:R282. 5 文献标识码:A 文章编号:1001-4454(2013)01-0042-04
Study on the Chromatographic Fingerprints of Reineckia carnea
from Different Habitats by HPLC-ELSD
JIN Zhao-lei，ZHAO Chao，CHEN Hua-guo，ZHAO Yang，ZHOU Xin，YANG Shi-lin
(The Research Center for Quality Control of Nature Medicine，Guizhou Normal University /Key Laboratory for Information System of
Mountainous Areas and Protection of Ecological Environment，Guiyang 550001，China)
Abstract Objective:To investigate the HPLC-ELSD fingerprints of Reineckia carnea from different habitats and provide a theoret-
ical evidence to evaluate its quality. Methods:The chromatographic conditions were Diamonsil(R)C18 column (4. 6 mm × 250 mm，
5μm)by linear gradient elution using water and acetonitrile as mobile phase at a flow rate of 0. 8 mL /min，column temperature at 25 ℃
and sample injection 30μL. An Agilent 1260 infintiy ELSD operated at 85 ℃，gain 6 and 3. 5 bar nitrogen. Results:The HPLC-ELSD
fingerprints were established with 6 common peaks and methodology reached the required standard. Conclusion:The method is simple，
rapid，accurate，and can be used for quality evaluation of Reineckia carnea from different habituts.
Key words Reineckia carnea(Andr.)Kunth;HPLC-ELSD;Fingerprint
收稿日期:2012-09-05
基金项目:贵州省社发攻关项目(黔科合 SY字［2011］3014 号) ;贵州省科技创新人才团队建设项目(黔科合人才团队(2011)4008) ;贵阳
市科学技术计划项目( ［2010］筑科计合同字第 3-重-1 号) ;2012 年大学生科技创业计划项目(筑科合同［2012］5 号)
作者简介:金兆磊(1987-) ，男，在读硕士研究生，主要从事天然药物质量控制研究;E-mail:coffee57165@ 163. com。
* 通讯作者:周欣，Tel:0851-6700494，E-mail:alice9800@ sina. com。
吉祥草为百合科吉祥草属植物吉祥草 Reineckia
carnea (Andr. )Kunth 的干燥全草，收载于《贵州中
药材、民族药材质量标准》2003 年版。别名:观音
草、松寿草、小青胆、小叶万年青、瑞草等。以全草入
药，能润肺止咳、平喘、祛风、接骨、治肺结核咳嗽，可
用于补肾壮腰及治疗咯血、慢性支气管炎、哮喘、风
湿性关节炎，外用可治跌打等〔1〕。主要分布在华
东、中南、西南各省区，是贵州省苗族地区常用的传
统草药之一。
吉祥草在贵州省各地区均有分布，已经有多家
制药企业以吉祥草为主要原料生产中成药。研究表
明，吉祥草药材主要含有甾体化合物等化学成
分〔2〕，但是其质量控制方面的研究基础较薄弱，目前
文献报道的主要研究方法包括薄层色谱法对吉祥草
药材进行鉴别〔3〕，高效液相色谱法对吉祥草药材根茎
中芦丁进行含量测定〔4〕，HPLC-ELSD 对不同产地吉
祥草药材中凯提皂苷元进行含量测定〔5〕，以及利用紫
外分光光度法对吉祥草药材中总皂苷进行测定〔6〕。
本实验采用 HPLC-ELSD 建立吉祥草药材指纹
图谱的分析方法，通过聚类分析及相似度评价软件
对吉祥草药材进行分析，为完善吉祥草的质量评价
标准提供依据。
1 仪器与材料
Agilent 1260 型高效液相色谱仪(G1311B 泵，
G1329B 自动控温自动进样，G1316A 柱温箱，
G1315D DAD 检测器) ，Agilent ChemStation 色谱工
作站，1260 Infintiy 蒸发光散射检测器(G4218A) ，
XS105DU十万分之一电子分析天平(梅特勒-托利
多仪器(上海)有限公司) ，DFY-200 型高速万能粉
碎机(温岭市林大机械有限公司)。
24 Journal of Chinese Medicinal Materials 第 36 卷第 1 期 2013 年 1 月
DOI:10.13863/j.issn1001-4454.2013.01.019
对照品 1，6-二羟基-8-甲基- 酮及万年青 1-O-
α-L-吡喃鼠李糖-(1-2)-β-D-木吡喃糖皂苷均由本实
验室自制(经 NMR、MS 鉴定其结构，采用峰面积归
一化法计算，质量分数均大于 98%)。乙腈为色谱
纯(TEDIA COMPANY，INC) ，乙醇为分析纯，水为乐
百氏纯净水，其他试剂均为分析纯。
本实验室自采 14 批吉祥草药材，经贵州师范大
学天然药物质量控制中心陈华国副研究员鉴定为百
合科吉祥草 Reineckia carnea (Andr. )Kunth。药材
来源见表 1。
表 1 吉祥草药材来源
样品号 采集地 采集时间 样品号 采集地 采集时间
S1 贵州昌明镇 2011. 08 S8 贵州龙里 2011. 07
S2 贵州都匀 2011. 08 S9 贵州麻江 2011. 08
S3 广西玉林 2008. 08 S10 贵州思南 2012. 05
S4 贵阳孟关 2008. 08 S11 四川成都① 2008. 01
S5 贵阳牛郎关 2008. 08 S12 四川成都② 2008. 01
S6 贵阳小河区 2011. 07 S13 贵州黎平 2008. 08
S7 贵阳云雾山 2011. 07 S14 贵州水城 2012. 05
2 方法与结果
2. 1 色谱条件 Diamonsil(R)C18色谱柱(4. 6 mm
× 250 mm，5 μm) ，ELSD 检测器:漂移管温度
85 ℃，氮气压力 350 kPa，gain 值为 6。流动相为乙
腈(B)-水(A)溶液梯度洗脱:0 ～ 5 min，10% B;5 ～
8 min，10% ～ 25% B;8 ～ 15 min，25% B;15 ～ 25
min，25% ～27% B;25 ～ 27 min，27% ～ 30% B;27
～ 35 min，30% ～ 37% B;35 ～ 55 min，37% ～ 42%
B;55 ～ 60 min，42% ～ 65% B;60 ～ 70 min，65% ～
95% B。流速 0. 8 mL /min;柱温 25 ℃;进样量 30
μL。
2. 2 对照品溶液的制备 精密称取 1，6-二羟基-8-
甲基- 酮及万年青 1-O-α-L-吡喃鼠李糖-(1-2)-β-
D-木吡喃糖皂苷适量，用甲醇溶解，分别制成浓度为
2 mg /mL、1 mg /mL的对照品溶液。
2. 3 供试品溶液的制备 取吉祥草药材粗粉 1 g，
精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入 90%乙醇 60
mL，加热回流 2 h(80℃) ，放冷，摇匀，滤过，回收溶
剂至干，残渣加水 20 mL分散，加入水饱和的正丁醇
萃取 3 次，每次 15 mL，合并上层溶液，回收溶剂至
干，残渣用甲醇溶解，转移至 10 mL 量瓶中，加甲醇
至刻度，摇匀，过 0. 45 μm 微孔滤膜，即得。
2. 4 方法学考察
2. 4. 1 精密度试验:取 S5 样品 1 份，按“2. 3”项下
方法制备供试品溶液，按“2. 1”项色谱条件进行分
析，连续进样 5 次，色谱峰的相对保留时间 RSD 均
小于 2%，相对峰面积 RSD均小于 5%，说明仪器精
密度良好，符合指纹图谱要求。
2. 4. 2 稳定性试验:取 S5 样品 1 份，按“2. 3”项下
方法制备供试品溶液，按“2. 1”项色谱条件进行分
析，分别在 0、4、8、12、24、36 h 进样。结果表明，各
主要色谱峰的相对保留时间 RSD 均小于 2%，相对
峰面积 RSD均小于 5%，表明供试品溶液在常温下
36 h内稳定，符合指纹图谱要求。
2. 4. 3 重复性试验:精密称取 S5 样品 5 份，按
“2. 3”项下方法制备供试品溶液，按“2. 1”项色谱条
件进行分析。结果表明，各色谱峰的相对保留时间
RSD均小于 2%，相对峰面积 RSD 均小于 5%，表明
该方法重复性较好，符合指纹图谱要求。
图 1 14 批吉祥草药材 HPLC-ELSD特征指纹图谱
34Journal of Chinese Medicinal Materials 第 36 卷第 1 期 2013 年 1 月
图 2 吉祥草药材 HPLC-ELSD对照图谱
2. 5 指纹图谱的建立
2. 5. 1 共有峰的标定:取 14 批吉祥草药材样品，
按“2. 3”项下方法制备供试品溶液，“2. 1”项色谱条
件依次进样检测，记录 70 min 色谱图。运用国家药
典委员会“中药色谱相似度评价系统(2004A 版)”
对所有批次药材的色谱峰进行匹配并生成对照图谱
R，见图 1。根据 14 批吉祥草药材的 HPLC-ELSD图
选择 6 个点校正 Mark 峰，自动匹配后生成对照图
谱(见图 2) ，通过与对照品图谱比较，指认 11 号峰
为对 1，6-二羟基-8-甲基- 酮，15 号峰为万年青 1-
O-α-L-吡喃鼠李糖-(1-2)-β-D-木吡喃糖皂苷。
2. 5. 2 指纹图谱相似度分析:利用国家药典委员
会相似度评价软件以 5 号样品的指纹图谱为参照图
谱，中位数生成法，选取“时间窗宽度”为 0. 1 min，
采用多点校正后进行自动匹配，生成对照图谱。得到
各产地药材 HPLC-ELSD图谱相似度，见表 2。
表 2 14 批吉祥草药材与对照图谱的相似度
样品号 相似度 样品编号 相似度
S1 0. 916 S8 0. 817
S2 0. 957 S9 0. 899
S3 0. 766 S10 0. 898
S4 0. 906 S11 0. 834
S5 0. 888 S12 0. 854
S6 0. 954 S13 0. 914
S7 0. 968 S14 0. 606
2. 5. 3 系统聚类分析:以共有峰的峰面积作为指
标，利用 SPSS18. 0 软件对 14 个不同产地吉祥草药
材进行聚类分析，利用欧氏距离(Eucildean Dis-
tance)作为样品的测度对其进行系统聚类分析，得
到聚类树状图见图 3，共有峰峰号及峰面积见表 3。
图 3 14 批吉祥草药材聚类分析树状图
结果显示:14 批吉祥草药材分为 A、B 两大类，
其中 A类分为 A1 和 A2 类，在 A1 类中 S13、S14 聚
为一类，S2、S7、S9 聚为一类，在 A2 类中 S1 自成一
类，S5、S6、S8 聚为一类。在 B 类中 S3、S10、S11 聚
为一类，S4、S12 聚为一类。
3 讨论
3. 1 色谱条件的选择 实验过程中，对甲醇-水、
甲醇-水(甲酸)、乙腈-水和乙腈-水(甲酸)四组流动
相系统进行筛选，并对洗脱程序进行优化。结果表
明，乙腈-水洗脱系统所得色谱峰峰形最好，分离度
良好，基线分离，峰形对称，所有组分 70 min 内被洗
脱。实验中还比较了色谱柱柱温在 25、30、35 ℃时
的分离效果，实验结果表明，25 ℃柱温下色谱峰分
离度及峰形最佳。
3. 2 ELSD的参数优化 漂移管温度和氮气流速
是影响 ELSD 信号的 2 个重要因素，在实验过程中
反复比较，确定 ELSD 检测器漂移管的温度为
85 ℃，氮气压力为 350 kPa。
44 Journal of Chinese Medicinal Materials 第 36 卷第 1 期 2013 年 1 月
表 3 14 批吉祥草药材共有峰峰面积
样品号
共有峰峰号
1 2 6 10 11 13
S1 135. 26 269. 07 1820. 75 809. 48 341. 56 372. 02
S2 157. 69 168. 22 3196. 26 875. 19 1184. 21 147. 97
S3 49. 58 29. 56 379. 74 596. 43 769. 41 95. 47
S4 17. 19 155. 17 836. 00 111. 64 136. 88 588. 17
S5 36. 12 625. 64 2719. 89 609. 29 175. 29 963. 93
S6 58. 86 748. 32 2336. 53 99. 09 380. 59 1014. 01
S7 55. 08 109. 11 3278. 80 147. 51 189. 43 730. 75
S8 21. 28 260. 16 2098. 54 317. 93 254. 99 1244. 02
S9 53. 58 107. 77 4159. 93 637. 88 327. 50 138. 78
S10 43. 31 22. 55 605. 89 28. 94 925. 76 142. 59
S11 106. 51 48. 57 41. 57 220. 08 921. 96 472. 10
S12 151. 23 69. 49 210. 66 341. 31 52. 30 730. 73
S13 138. 37 96. 40 4416. 52 40. 02 6. 96 1029. 97
S14 36. 78 186. 71 4819. 00 43. 09 99. 51 1321. 46
3. 3 色谱柱的选择 考察 Agilent SB-C18(4. 6 mm
× 150 mm，5 μm)、Agilent SB-C18(4. 6 mm × 250
mm，5 μm)、依利特 ODS-C18(4. 6 mm × 250 mm，5
μm)和 Diamonsil(R)C18(4. 6 mm × 250 mm，5 μm)
三种品牌色谱柱，结果显示 Diamonsil(R)C18色谱柱
对吉祥草药材中色谱峰分离效果最好。
4 结论
吉祥草药材主要含有甾体及皂苷类化合物，在
紫外区末端吸收或不吸收，目前还没有较完善的质
量控制评价体系，本实验利用“中药指纹图谱相似
度评价系统”(国家药典委员会 2004A)软件，获得
吉祥草药材 HPLC-ELSD指纹图谱，建立了控制吉祥
草药材质量的 HPLC-ELSD 指纹图谱分析方法。以
14 批药材共有峰面积作为指标，利用 SPSS 18. 0 统
计软件聚类分析，聚类分析树状图显示，产地相近的
药材并未聚为一类，这表明吉祥草药材质量除跟地
理环境有关外，还受到其他因素影响(气候、土壤环
境、采收时间等) ，因此为保证吉祥草药材质量的稳
定、可靠，建议适宜的区域化种植。
参 考 文 献
［1］邱德文，杜江，田振华，等 . 中华本草苗药卷［M］. 贵
阳:贵州科技出版社，2005:254.
［2］周欣，刘海，赵超，等 . 吉祥草化学成分研究［J］. 中国
中药杂志，2008，23(33) :2793-2796.
［3］周婵媛，赵超，陈华国，等 . 吉祥草药材薄层色谱检测方
法研究［J］.贵州师范大学(自然科学版) ，2009，4(27) :
105-108.
［4］王倩，邹坤 . 高效液相色谱法测定吉祥草根茎中芦丁的
含量［J］. 三峡大学学报(自然科学版) ，2011，4(33) :
89-91.
［5］周婵媛，陈华国，周欣，等 . HPLC-ELSD测定不同产地吉
祥草中凯提皂苷元的含量［J］. 中国药学杂志，2010，13
(45) :1029-1031.
［6］周婵媛，陈华国，周欣，等 . 紫外分光光度法测定吉祥草
中得总皂苷［J］.华西药学杂志，2010，25(3) :
欇欇欇欇欇欇欇欇欇欇欇欇欇欇欇欇欇欇欇欇欇欇欇欇欇欇欇欇欇欇欇欇欇欇欇欇欇欇欇欇欇欇欇欇欇
欇
欇欇欇欇欇欇欇欇欇欇欇欇欇欇欇欇欇欇欇欇欇欇欇欇欇欇欇欇欇欇欇欇欇欇欇欇欇欇欇欇欇欇欇欇欇
欇
気
気気
気
344-346.
2011 年《中药材》杂志精装本已装订完毕，分上、中、下册，400 元一套(包含邮资)。
54Journal of Chinese Medicinal Materials 第 36 卷第 1 期 2013 年 1 月