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不同产地玄参饮片哈巴苷与哈巴俄苷含量比较研究



全 文 :紫癜圣愈散由仙鹤草、三七、黄柏、白及、大黄、补骨脂 6 味基
本药物组成,仙鹤草具有收敛止血,活血止血的功效,而且有着强
壮补虚的作用。三七有止血和活血化瘀双向调节功能。大黄能
泻热毒,行瘀血。黄柏有清热燥湿、泻火解毒的功效,而现代药理
研究表明黄柏能抑制血小板破坏。现代药理研究表明,白及收敛
止血,能增强 PF3 活性,缩短凝血酶生成时间,可以抑制纤维蛋白
酶的活性,还能促进血细胞的凝集,形成人工血栓而止血[10]。补
骨脂补肾助阳。诸药相合,共奏止血、消瘀、宁血、补虚之功。本
研究结果显示,治疗后 ITP患者骨髓巨核细胞成熟度及外周血血
小板计数均有不同程度的升高,FOXP3 表达比例较疗前也有一定
的升高,说明紫癜圣愈散和激素可能在 ITP的免疫机制中起到了
一定作用。而紫癜圣愈散的作用机理可能是通过上调 FOXP3 的
表达而使其免疫抑制作用得以发挥,具体上调机制还需进一步的
实验验证和理论的支持。总之,本研究通过治疗前后的检测发
现,确实存在 FOXP3 的异常表达,表明 CITP 发病与免疫抑制功
能异常相关。紫癜圣愈散可能通过升高外周血 CD4
+ CD25
+淋巴
细胞 FOXP3 水平,抑制自身反应性 T 细胞活化和抗体生成从而
减少对血小板及巨核细胞的破坏,而起到对 ITP的治疗作用。我
们将继续沿着以上思路探讨 ITP 的发病机制及有效的治疗作用
靶点,为中医药特色治疗本病发挥作用。
参考文献:
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收稿日期:2013-05-25; 修订日期:2013-11-18
基金项目:国家中医药行业科研专项( No. 201007012 - 2 - 3)
作者简介:刘 宾( 1967-) ,女( 汉族) ,湖北恩施人,湖北中医药大学药学
院实验师,学士学位,主要从事中药学科研与教学工作.
* 通讯作者简介:聂诗明( 1962-) ,男( 汉族) ,湖北松滋人,湖北中医药大
学药学院教授,硕士研究生导师,学士学位,主要从事中药学科研与教学
工作.
不同产地玄参饮片哈巴苷与哈巴俄苷含量比较研究
刘 宾,梁 晨,徐思思,聂诗明*
(湖北中医药大学药学院,湖北 武汉 430065)
摘要:目的 对采自不同产地的 14 批玄参饮片中哈巴苷与哈巴俄苷进行含量测定,为评价玄参饮片的质量提供可靠依
据。方法 采用 HPLC分析法。色谱条件为 Themorn C18色谱柱( 250mm ×4. 6mm,5μm) ; 流动相: A 乙腈,B 0. 03%磷酸,
梯度洗脱; 检测波长为 210nm和 276nm;流速: 1ml /min;柱温: 30℃,流速为 1. 0ml /min。结果 不同产地的 14 批玄参饮片
中哈巴苷与哈巴俄苷的含量为 0. 88% ~ 4. 37%,存在较大差异。结论 玄参饮片中哈巴苷和哈巴俄苷的含量,对于评价
玄参饮片的质量等级具有重要意义。
关键词:玄参; 高效液相色谱; 哈巴苷 ; 哈巴俄苷
DOI标识:doi: 10. 3969 / j. issn. 1008-0805. 2014. 03. 015
中图分类号:R284. 1 文献标识码:A 文章编号:1008-0805( 2014) 03-0555-02
Content Determination of Harpagide and Hapagoside in the Radix Scrophulariae pieces
from Different Areas by HPLC
LIU Bin,LIANG Chen,XU Si-si,NIE Shi-ming*
( Pharmaceutical College of Hubei University of Chinese Medicine,Wuhan Hubei,430065,China)
Abstract: Objective To determine the lever of 14 total harpagide and harpagoside in the Radix Scrophulariae pieces from differ-
ent areas,providing a reliable method for evaluating the quality of it. Methods Adopting HPLC analytic method. The experimen-
tal conditions were as follows: Themorn C18 ( 250mm × 4. 6mm,5μm) ; the mobile phase was consisted of acetonitrile - 0. 03%
H3PO4,gradient elution,the detection wavelength was 210nm,276nm,the column temperature was 30℃ and the flow rate was 1.
0mL /min. Results The contents of total harpagide and harpagoside in the Radix Scrophulariae pieces from different areas were
from 0. 88% to 4. 37%,they were different from one another. Conclusion The contents of total harpagide and harpagoside in the
Radix Scrophulariae pieces were very important to evaluate the quality of it.
Key words: Radix Scrophulariae; HPLC; Harpagide; Hapagoside
玄参为玄参科植物玄参 Scrophularia ningpoensis Hemsl 的干
燥根,具有凉血滋阴、泻火解毒的功效,临床上用于热病伤阴、舌
绛烦渴、温毒发斑、津伤便秘、骨蒸劳嗽、目赤、咽痛、瘰疬、白喉和
痈肿疮毒[1]。玄参主要含环烯醚萜苷类、苯丙素苷类、芳香糖苷
类等[2],其中环烯迷萜苷类和苯丙素苷类成分的含量较高,如哈
巴苷(C13H24O10)、哈巴俄苷(C24H30O11)、肉桂酸、麦角甾苷、安格
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LISHIZHEN MEDICINE AND MATERIA MEDICA RESEARCH 2014 VOL. 25 NO. 3 时珍国医国药 2014 年第 25 卷第 3 期
洛苷等,药理研究表明这些成分具有镇痛、抗炎、抗菌、保肝、抗氧
化、增强免疫等作用[3],与滋阴功效密切相关。哈巴苷(C13 H24
O10)与哈巴俄苷(C24H30O11)被认为是抗炎的主要成分
[4]。本文
以哈巴苷(C13H24O10)及哈巴俄苷(C24H30 O11)为指标成分,对来
自不同产地的 14 批玄参饮片进行含量测定,为制定玄参饮片的
质量等级标准提供依据。
1 仪器、试剂与药材
1. 1 仪器 Dionex P680 高效液相色谱仪,色谱柱为 Themorn C18
色谱柱(250mm ×4. 6mm,5μm),SK7200HP型超声器,电子天平
(北京赛多利斯科学仪器有限公司)。
1. 2 试剂 甲醇为分析纯(国药集团化学试剂有限公司)、乙腈
为色谱纯(USA)、0. 03%磷酸溶液等试剂均为分析纯,纯水为重
蒸馏水(自制)。哈巴苷对照品(批号:111730 - 200605)、哈巴俄
苷对照品(批号:11729 - 200602)均由中国药品生物制品检定
所提供。
1. 3 药材 玄参样品采自浙江磐安、湖北十堰、贵州道真、重庆南
川、湖北恩施等地,共 14 批玄参饮片。经本院生药室鉴定为玄参
科植物玄参 Scrophularia ningpoensis Hemsl的干燥根。
2 方法及结果
2. 1 色谱条件[5] 色谱柱为 Themorn C18 色谱柱(250mm ×
4. 6mm,5μm);流动相为 A乙腈,B 0. 03%磷酸溶液,按表 1 进行
梯度洗脱,流速 1ml /min;柱温 30℃;检测波长 210nm 和 276nm。
理论板数按哈巴苷与哈巴俄苷(C24 H30 O11)峰计算均应不低于 5
000。
表 1 流动相梯度条件
时间 /min 流动相 A(%) 流动相 B(%)
0 ~ 10 3→10 97→90
10 ~ 20 10→33 90→67
20 ~ 25 33→50 67→50
25 ~ 30 50→80 50→20
30 ~ 35 80 20
35 ~ 37 80→3 20→97
2. 2 对照品溶液的制备 取哈巴苷对照品、哈巴俄苷对照品精密
称定,加 30%甲醇制成每毫升含哈巴苷 60μg,每毫升含哈巴俄苷
20μg的混合溶液,即得。
2. 3 供试品溶液的制备 将 14 批玄参饮片分别粉碎,过 3 号筛,
精密称取 0. 5g,置具塞锥形瓶中,精密加入 50%甲醇溶液 50ml,
密塞,浸泡 1 h后,超声处理(功率 500W,频率 40kHz)45 min,放
冷,用 50%甲醇溶液补足减失的重量,摇匀,滤过,取续滤液,即
得。
2. 4 测定方法 分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各
10μl,注入高效液相色谱仪,测定,记录色谱图,根据色谱峰面积,
外标法计算含量。
3 结果
3. 1 高效液相色谱图 对照品及供试品 HPLC色谱见图 1。
3. 2 玄参饮片中哈巴苷与哈巴俄苷的含量 14 批玄参饮片中哈
巴苷与哈巴俄苷的含量见表 2。结果显示,不同批次的玄参饮片
中哈巴苷含量 0. 76% ~ 4. 29%,哈巴俄苷含量 0. 07% ~ 0. 19%,
哈巴苷与哈巴俄苷的总量为 0. 88% ~ 4. 37%。
4 结论与讨论
4. 1 玄参饮片的质量差异性《中国药典》2010版一部规定:玄参
药材按干燥品计算,含哈巴苷(C13H24O10)和哈巴俄苷(C24H30O11)
的含量不得少于 0. 45%。14 批不同产地的玄参饮片中哈巴苷与
哈巴俄苷的含量均符合《中国药典》要求。以上不同产地 14 批的
玄参饮片中,哈巴苷含量与哈巴俄苷含量以及哈巴苷与哈巴俄苷
的总量有较大的差异,显示玄参饮片的质量存在较大的差异性。
A -哈巴苷(210nm)B -哈巴俄苷(276nm)C -供试品
图 1 对照品及供试品 HPLC色谱
表 2 14 批玄参饮片中哈巴苷与哈巴俄苷的含量
序号 样品
哈巴苷
含量(%)
哈巴俄苷
含量(%)
二者总量
(%)
1 道真 a 1. 64 0. 16 1. 80
2 道真 b 1. 72 0. 17 1. 89
3 南川 a 4. 29 0. 08 4. 37
4 南川 b 2. 82 0. 13 2. 95
5 南川 c 2. 77 0. 10 2. 87
6 天济 0. 86 0. 07 0. 98
7 磐安 a 2. 47 0. 17 2. 64
8 磐安 b 2. 81 0. 16 2. 97
9 磐安 c 2. 68 0. 19 2. 87
10 十堰 a 1. 15 0. 11 1. 26
11 十堰 b 1. 26 0. 11 1. 37
12 恩施 a 3. 09 0. 11 3. 20
13 恩施 b 1. 99 0. 12 2. 11
14 恩施 c 0. 76 0. 12 0. 88
4. 2 质量差异分析
4. 2. 1 产地因素 14 批玄参饮片中,因产地不同,显示一定的含
量差异,如产于南川、磐安和恩施的玄参,其饮片有较高的含量。
4. 2. 2 药材等级因素 相同产地玄参,因药材质量等级不同,导
致玄参饮片的质量差异,如恩施 a、恩施 b、恩施 c 系药材分为三
级后,分别制成的饮片,其哈巴苷含量 0. 76% ~ 3. 09%,说明药
材质量等级的重要影响。
4. 2. 3 药材存放时间影响 14 批玄参饮片中,来源于天济公司
和十堰的药材较陈,其饮片含量低,其他为新产药材,其饮片含量
高。
4. 2. 4 其他 各地气候差异、药材采收时间不同、加工方法差异
及饮片生产等因素均导致玄参饮片的质量影响。
4. 3 玄参饮片的质量控制 笔者认为,应进一步加强玄参药材
GAP建设和管理,从源头控制,提高药材质量;实施药材质量分
级制度,使质量的优劣肯定认可;加强中药饮片 GMP 建设和管
理,提高饮片质量;加强药材及饮片的质量研究,建立科学可控的
质量标准。
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时珍国医国药 2014 年第 25 卷第 3 期 LISHIZHEN MEDICINE AND MATERIA MEDICA RESEARCH 2014 VOL. 25 NO. 3