全 文 ：中用氯仿脱脂 , 然后再用超声提取 ,避免了油脂对色谱柱的损伤。
实验表明 , 采用 HPLC测定抗衰老软胶囊中二苯乙烯苷的含量 ,
操作较为简单 , 重现性好 ,灵敏可靠 ,可用于该制剂的质量控制。
参考文献:
[ 1] 　国家药典委员会.中国药典 , Ⅰ 部 [ S] .北京:化学工业出版
社 , 2000.
[ 2 ] 　刘小平 ,李　惠 ,徐海星 ,等.高效液相色谱法测定安神益脑丸中二
苯乙烯苷的含量研究 [ J] .中医药学刊 , 2004, 22(4):746.
[ 3 ] 　鲁　静 ,粟晓黎 ,董海荣 ,等.高效液相色谱法测定何首乌及制首乌
中羟芪衍生物的含量 [ J] .药物分析杂志 , 2000, 20(2):104.
收稿日期:2006-08-18;　修订日期:2006-12-10
作者简介:龙晓燕(1974-),女(汉族),四川广安人 ,现任西南科技大学生
命科学与工程学院讲师 ,硕士学位 ,主要从事中草药开发研究工作及教学
工作.
灰绿黄堇总生物碱的抗炎镇痛作用及毒性观察
龙晓燕
(西南科技大学生命科学与工程学院 ,四川 绵阳　621000)
摘要:目的 探讨灰绿黄堇总生物碱的抗炎镇痛作用及其动物毒性反应情况。方法 小鼠热板法镇痛实验 、小鼠扭体法
镇痛实验 、小鼠耳廓肿胀实验 、小鼠毛细血管通透性实验和小鼠急性毒性实验。结果 灰绿黄堇总生物碱能明显延长热
板所致小鼠舔后足时间(P<0.05), 明显减少醋酸所致小鼠扭体反应次数(P<0.05)、减轻二甲苯所致小鼠耳廓肿胀(P
<0.05), 但对组胺所致小鼠毛细血管通透性增高无降低作用(P>0.05);小鼠口服半数致死量 LD
50
为 1.87 g· kg-1。
结论 灰绿黄堇总生物碱有较好的镇痛作用及部分抗炎作用 , 但也具有一定毒性。
关键词:灰绿黄堇;　总生物碱;　抗炎;　镇痛;　毒性
中图分类号:R285.5　　文献标识码:B　　文章编号:1008-0805(2007)03-0599-02
Anti-inflammatoryandAnalgesicEffectofTotalAlkaloidfromCorydalisaduncamaxim
anditsToxicity
LONGXiao-yan
(ColegeofLifeScienceandEngineeringofSouthwestUniversityofScienceandTechnology, Mianyang,
621000, China)
Abstract:ObjectiveTostudyanti-inflammatoryandanalgesiceffectsoftotalalkaloidfromCorydalisaduncamaximandtoob-
serveitstoxicity.MethodsHotplateexperiment, mouseacetic-acid-inducedtwistingexperiment, mouseear-swellingexper-
iment, mousecapilarypermeabilityexperimentandmouseacutetoxicityexperimentwerecarriedoutinthisstudy.ResultsThe
resultsshowedthattotalalkaloidfromCorydalisaduncamaximcouldremarkablyprolongthetimeofmicelickitsbackfoot, reduce
thetwistingtimesinmice(P<0.05)andrelievemouseear-swellinginducedbydimethylbenzene(P<0.05), butithadno
effectontheincreaseofratcapilarypermeabilityinducedbyhistamine(P>0.05).TheLD50 oforaldoseinmicewas1.87(g/kg).ConclusionTotalalkaloidfromCorydalisaduncamaximhasgoodanti-inflammationandanalgesicactions, butitalsohas
sometoxicity.
Keywords:Corydalisaduncamaxim;　Totalalkaloid;　Anti-inflammatory;　Analgesic;　Toxicity
　　灰绿黄堇 CorydalisaduncaMaxim.是罂粟科 Papaveraceae紫
堇属 Corydalis植物的干燥块根。味苦 , 性凉 , 有清热解毒止血的
功能 , 在民族医药方面被广泛用于消炎 , 利胆 ,排石 , 止痛 ,但其药
理活性及毒性研究较少且局限 。为全面研究其药理活性及毒性 ,
我们对其总生物碱进行了抗炎镇痛实验及毒性实验。
1　材料
1.1　动物 昆明种小鼠 , 18～ 22 g, 雌雄兼用;SD大鼠 , 体重 180
～ 200g,雄性 ,四川大学实验动物中心提供。
1.2　药物 灰绿黄堇为市售药材干品 , 经绵阳市药品检验所聂
盛贤主任药师鉴定。实验前根据剂量要求 , 称取灰绿黄堇 2.5
kg, 用 10倍体积 1%盐酸浸泡 , 滤过后的提取液经阳离子交换
树脂提取 , 用 pH 10的 95%氨性乙醇洗脱 , 洗脱液用氯仿萃取
纯化 , 蒸干后得到总生物碱 108g。总生物碱含量约占生药量的
4.3%。实验时用 0.5% 羧甲基纤维素钠(CMC)制成混悬液。
阿司匹林肠溶片(南京白敬宇制药有限责任公司 , 批号 050507);
芬必得片(中美天津史克制药有限公司生产 , 批号 050304743 );
地塞米松片(浙江仙琚制药股份有限公司 , 批号 20050425)。
1.3　仪器 GJ28402型热板测痛仪(浙江宁海白石电子医药仪器
厂 , 温度(55 ±0.2)℃;LP2001A型电子天平﹙常熟市衡器厂
﹚;双光束紫外分光光度仪(北京普析通用仪器有限公司 , 型号
TU-1900)。
2　方法与结果
2.1　镇痛作用
2.1.1　热板法致痛实验 [ 1] 将雌性小鼠随机分 5组:空白对照组
(CMC)、阳性对照组 (阿司匹林 200 mg· kg-1)、灰绿黄堇总生
物碱低 、中 、高剂量组(100, 200, 400 mg· kg-1), 每组 10只 , 置
于(55.0±0.5)℃热板仪上 , 以小鼠舔后足为疼痛反应 , 以疼
痛反应潜伏期为痛阈指标 , 给药前测 3次 , 取均值作为基础痛
阈 , 剔除基础痛阈 < 5s或 >30 s的动物。各组都灌胃给药 , 给
药后 1 h再次置于热板上 , 记录疼痛反应潜伏期。结果见表 1。
表 1　灰绿黄堇总生物碱对小鼠热板致痛的影响的镇痛作用 ( x±s)
组别 剂量C/mg· kg-1
疼痛反应潜伏期 t/s
给药前 给药后 1h
空白对照 - 14.41±5.90 14.64±4.16
阿司匹林 200 13.69±6.26 39.18±5.20＊＊
灰绿黄堇总生物碱 100 14.30±4.53 17.81±5.12
200 14.57±4.65 20.46±6.83＊
400 13.79±4.35 36.27±7.86＊＊
　　与对照组比较 , ＊P<0.05, ＊＊P<0.01;n=10
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LISHIZHENMEDICINEANDMATERIAMEDICARESEARCH 2007VOL.18NO.3 时珍国医国药 2007年第 18卷第 3期
结果表明灰绿黄堇总生物碱大剂量组与阿司匹林组与对照
组比较 P<0.01;中剂量组与对照组比较 P< 0.05 , 表明灰绿
黄堇总生物碱有显著提高痛阈值的作用。
2.1.2　醋酸致扭体反应实验 [ 1] 取小鼠 50只 , 雌雄各半 , 分组 、
给药方法及剂量同 2.1.1项。给药后 1 h各组动物均予腹腔注
射 0.6%醋酸 0.2ml, 记录 15 min内扭体次数。结果见表 2。
表 2　灰绿黄堇总生物碱对小鼠扭体反应的影响( x±s)
组别 剂量C/mg· kg-1 扭体次数
抑制率
(%)
空白对照 - 47.43±16.47 -
阿司匹林 200 30.22±13.40＊ 36.2
灰绿黄堇总生物碱(低) 100 37.56±20.05 20.8
灰绿黄堇总生物碱(中) 200 33.90±13.76＊ 28.5
灰绿黄堇总生物碱(高) 400 29.92±14.65＊ 36.9
　　与对照组比较 , ＊P<0.05, ＊＊P<0.01;n=10
结果表明灰绿黄堇总生物碱高 、中剂量组及阳性药阿司匹林
组与对照组比较分别为 P<0.05,显示较好的镇痛作用。
2.2　抗炎作用
2.2.1　二甲苯致小鼠耳廓肿胀实验 [ 2] 取小鼠 50只 , 雌雄各半
随机分 5组:空白对照组(CMC)、阳性对照 1组 (地塞米松 30mg
· kg-1)、灰绿黄堇总生物碱低 、中 、高剂量组(100, 200, 400 mg
· kg-1), 每组 10只 ,分别灌胃给药 , 灌胃容积 0.2ml/10g(下
同), 1次 /d, 连续 3d。末次药后 1h, 将 0.1 ml二甲苯均匀涂于
小鼠右耳两面致炎 , 左耳不涂作对照 , 致肿 1h脱颈椎处死小
鼠 , 用直径 8mm打孔器冲下左耳及右耳同一部位的圆片 , 于分
析天平上称重。右耳重量减去左耳重量为肿胀度。结果见表 3。
表 3　灰绿黄堇总生物碱对小鼠二甲苯致耳廓肿胀的影响( x±s)
组别 剂量C/mg· kg-1
肿胀度
m/mg
抑制率
(%)
空白对照 - 3.09±1.65 -
地塞米松 30 1.35±0.92＊＊ 56.3
灰绿黄堇总生物碱(低) 100 2.44±1.92 21.0
灰绿黄堇总生物碱(中) 200 1.62±1.46＊ 47.6
灰绿黄堇总生物碱(高) 400 1.93±1.65 37.5
　　与对照组比较 , ＊P<0.05, ＊＊P<0.01;n=10
结果表明 , 灰绿黄堇总生物碱中剂量组可显著抑制鼠耳
肿胀。
2.2.2　大鼠毛细血管通透性实验(皮内色素渗透法)[ 2] 取健康
SD大鼠 32只 , 随机分为空白对照组 、芬必得组(50 mg· kg-1)、
灰绿黄堇总生物碱高 、中剂量组(200, 400 mg· kg-1)、每组 8只 ,
各组大鼠分别预给药 7 d,灌胃给药 1次 /d。末次给药后麻醉大
鼠(3%戊巴比妥钠 , 40mg/kg体重 , 腹腔注射),腹部剃毛 , 皮内
注射 1 mg/ml组胺 0.1ml(生理盐水配制),立即静脉注射 1%伊
文氏蓝生理盐水液 4 ml/kg。 20min后断头处死动物 , 将着色皮
肤剥离 , 把蓝斑剪下 ,剪碎 , 放入 5ml生理盐水-丙酮液(3∶7)内
浸泡 24h, 3 000 r/min离心 15min,上清液于 590 nm处测吸光度
(OD值)。结果见表 4。
表 4　灰绿黄堇总生物碱对大鼠毛细血管通透性的影响( x±s)
组别 给药剂量 C/mg· kg-1 OD值
空白对照 - 0.407±0.093
芬必得　 50 0.297±0.092＊
灰绿黄堇总生物碱(中) 200 0.389±0.105
灰绿黄堇总生物碱(高) 400 0.378±0.099
　　与对照组比较 , ＊P<0.05, ＊＊P<0.01;n=8
结果表明灰绿黄堇总生物碱对毛细血管通透性无降低作用 ,
而对照药芬必得作用较显著(P<0.05)。
2.3　急性毒性实验 根据预实验的结果 , 取昆明种健康小鼠 50
只 , 雌雄各半 ,体重 20 ～ 22g, 为以全数致死量(Dm)和全不致死
量(Dn)的浓度作为实验的最高和最低浓度组 ,高低剂量比值﹙ 1
∶K﹚为 0.85[ 2] , 随机分设定 5个剂量组 , 给药量分别见下表验
前 24h,小鼠禁食不禁水 ,分别按组给以不同浓度的灰绿黄堇总
生物碱溶液(0.2 ml/10g), 给药后连续观察 7 d, 并详细记录其
死亡数目 、死亡时间及活动情况。动物在给药 1 d内死亡。给药
后出现呼吸困难 、全身抽搐 、舌头外伸的异常表现 ,死亡动物剖检
未见异常表现。结果见表 5。
表 5灰绿黄堇总生物碱小鼠灌胃 LD50计算表
组
别
剂量
C/g· kg-1
对数剂量
lgd(x)
逐日死亡数
2h 1d 2d 3d 4d 5d 6d 7d
死亡
总数
死亡率
(%) P2
1 2.64 0.421 6 10 　 　 　 　 　 　 　 10 100 1.00
2 2.24 0.350 2 5 3 　 　 　 　 　 　 8 80 0.64
3 1.90 0.278 8 4 2 　 　 　 　 　 　 6 60 0.36
4 1.62 0.209 5 1 1 　 　 　 　 　 　 2 20 0.04
5 1.38 0.139 9 　 　 　 　 　 　 　 　 0 0 0
　 　用改 良寇氏 法计算 灰绿黄 堇总 生物碱 的 LD50 =
1.87 g· kg-1 , 95%的可信限为(1.87±0.03)g· kg-1。
3　讨论
灰绿黄堇作为资源丰富的民族药 , 广泛用于黄疸 、痢疾 、石
淋 、水肿等。从现有研究资料看 , 对灰绿黄堇的报道较少 , 主要
有两方面:一是灰绿黄堇生物碱和挥发油化学成分的研究 [ 3 ～ 5] ,
二是对灰绿黄堇水煎剂的药理作用的研究 [ 6] , 而灰绿黄堇相关
化学成分的药理研究似尚未见报道。
实验证实 , 灰绿黄堇总生物碱能有效减轻二甲苯引起的耳
廓肿胀 , 但对组胺所致大鼠毛细血管通透性增高无降低作用 , 表
明灰绿黄堇总生物碱有部分抗炎功效。同时 , 本实验结果表明 ,
灰绿黄堇总生物碱能明显减少醋酸所致小鼠扭体反应次数 ,明显
延长小鼠热板疼痛反应潜伏期 , 说明它有良好的镇痛作用;灰
绿黄堇总生物碱的抗炎镇痛作用无明显剂量依赖关系 ,对炎症模
型 , 中剂量具有较好药理活性 , 应予关注。
在毒理实验中 , 我们发现灰绿黄堇总生物碱存在较大的毒
性。小鼠灌胃后 , 半数致死量 LD50为 1.87 g· kg-1。小鼠死亡
主要发生在给药后的 3h以内 , 主要毒性表现为呼吸困难 、全身
抽搐 , 而且其安全范围窄。初步分析灰绿黄堇总生物碱的主要毒
性反应可能发生在呼吸系统 , 这也提示我们在临床用药过程中 ,
应充分重视药物的给药剂量 ,以免中毒发生。其详细作用机制有
待进一步研究。
参考文献:
[ 1 ] 　徐叔云 , 卞如濂 , 陈　修.药理实验方法学 , 第 2版 [ M] .北京:人
民卫生出版社 , 2003:524.
[ 2 ] 　陈　奇.中药药理研究方法学 [ M] .北京:人民卫生出版社 ,
1993:303.
[ 3 ] 　唐艳丽 , 杨爱梅 , 张樱山 ,等.灰绿黄堇生物碱化学成分的研究(Ⅰ
)[ J] .中国中药杂志 , 2005, 30(3):196.
[ 4 ] 　赵东保 , 唐艳丽 , 汪汉卿 ,等.灰绿黄堇生物碱化学成分的研究(
Ⅱ)[ J] .中国中药杂志 , 2005, 30(22):1756.
[ 5 ] 　张　继 , 马君义 , 杨永利 ,等.灰绿黄堇挥发性成分的分析研究
[ J] .兰州大学学报(自然科学版), 2003, 39(6):68.
[ 6 ] 　王继生 ,张　莉 ,邱宗荫 ,等.灰绿黄堇镇痛抗炎作用研究 [ J].中药
药理与临床 , 2005, 21(5):33.
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时珍国医国药 2007年第 18卷第 3期 LISHIZHENMEDICINEANDMATERIAMEDICARESEARCH 2007VOL.18NO.3