全 文 ：Ｂ２和Ｂ３两种强度要比Ｂ１更容易维持贫血，其原
因可能是Ｂ１组的运动强度下可减小机体的过氧
化反应及抗氧化物质的消耗，抗氧化酶活性的适
应性增加，大量的自由基得到清除．Ｂ２和Ｂ３两组
出现的情况很可能是在该运动强度下，大量的红
细胞易受自由基攻击发生脂质过氧化反应，导致
膜结构改变膜脂流动性降低，抗氧化酶的活性下
降，导致红细胞膜破裂ＲＢＣ下降．
杨建昌［８］等认为，红细胞膜脂的流动性是决
定红细胞变形性的一个重要因素，是保持微循环
有效灌注的必要条件，因而红细胞膜脂流动性的
下降可能参与运动性疲劳的发生过程．运动对红
细胞膜脂流动性的影响依运动负荷、运动时间及
营养状况、休息时间长短的不同，其变化趋势也不
一样，长时间力竭运动［９］、短时间的极限强度运
动［１０］均可引起红细胞膜脂流动性降低，导致红细
胞的变形性降低．从实验结果来看，Ｂ１与 Ａ１在
第１１～３０ｄ几乎没有差异，可能就是因为Ｂ１的
运动能够清除体内的自由基，提高膜脂的流动性，
ＨＣＴ得到升高．Ｂ２与Ａ１差异显著可能是Ｂ２的
运动强度，产生了大量的自由基使得红细胞产生
脂质过氧化，出现了红细胞膜的流动性降低．Ｂ３
与Ａ１相比较第３０ｄ差异不显著，其原因可能是
实验过程中运动时间没有控制好，还可能是机体
对运动的一种适应现象．
三种运动强度产生的 ＨＢ，ＲＢＣ和 ＨＣＴ，Ｂ２
的运动强度要比Ｂ１和Ｂ３两种强度更容易维持
贫血．Ｂ２的运动强度是三种方案中使大鼠处于贫
血状态最好的方案．
４　结论
（１）Ｂ２的运动强度能使ＨＢ，ＲＢＣ和ＨＣＴ降
低，该运动方案实验的可操作性强 ，可以作为建
立运动性贫血动物模型首选方案．
（２）Ｂ１的运动强度不能维持贫血状态，说明
该运动方案不适合建立贫血动物模型．
（３）Ｂ３的运动方案建立贫血模型过程操作困
难，ＨＢ，ＲＢＣ和 ＨＣＴ不能维持在贫血状态，该方
案不是建立运动性贫血动物模型的理想选择．
参考文献
［１］贲长恩．“血虚”动物模型的创建及实验研究［Ｊ］．北京实验动物科学与管理，１９９４，１１（３）：５－１０．
［２］王建青．血虚证与贫血的关系研究［Ｊ］．中国中医药杂志，１９９７，４（１７）：２４－２５．
［３］Ａｎｎｅ　Ｍ．Ｍｏｒｔｅｎｓｅｎ，Ｒａｙｍｏｎｄ　Ｆ．Ｎｏｖａｋ．Ｅｎｈａｎｃｅｄ　Ｐｒｏｔｅｏｌｙｓｉｓ　ａｎｄ　Ｃｈａｎｇｅｓ　ｉｎ　Ｍｅｍｂｒａｎｅ－ＡｓｓｏｃｉａｔｅｄＣａｌｐａｉｎ　ｆｏｌｏｗｉｎｇ　Ｐｈｅｎｙｌ－
ｈｙｄｒａｚｉｎｅ　ｉｎｓｕｌｔ　ｔｏ　Ｈｕｍａｎ　Ｒｅｄ　Ｃｅｌｓ［Ｊ］．Ｔｏｘｉｃｏｌｏｇｙ　ａｎｄ　Ａｐｐｌｉｅｄ　Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ，１９９１，１１０：４３５４－４９．
［４］廖清奎．溶血性贫血的诊断［Ｊ］．实用儿科杂志，１９８９，４（５）：２２７－２２９．
［５］浦均宗．优秀运动员机能评定手册［Ｍ］．北京：人民卫生出版社，１９８９：６７－６９．
［６］崔玉玲．不同强度低氧训练对大鼠血象指标的影响［Ｄ］．南京：南京师范大学，２００７．
［７］李翠珍，贾静．力竭游泳对大鼠红细胞膜脂质过氧化及红细胞变形性的影响［Ｊ］．中国临床康复，２００５，９（２８）：１９８－１９９．
［８］杨建昌．运动与红细胞膜特性的研究［Ｊ］．西安体育学院学报，２００４，２１（４）：４７－４９．
［９］Ｃａｌｅａ．Ｇ．ｅｔ　ａｌ．Ｈａｅｒｎｏｒｈｅｏｇｌｏｇｙ　ｏｆ　Ｍａｒａｔｈｏｎ　ｒｕｎｎｉｎｇ　Ｉｎｔ［Ｊ］．Ｓｐｏｔ　Ｍｅｄ．１９８５（６）：１３５．
［１０］李可基．运动负荷中红细胞流变特性初步研究［Ｊ］．中国运动医学杂志，１９８９，８（１）：１－３．
编辑：琳莉
　　收稿日期：２０１３－０３－２０
基金项目：黑龙江省教育厅科技面上项目（１２５４１８３４）；牡丹江师范学院省级重点创新预研项目（ＳＹ２０１２２７）
圆叶椒草叶片组织培养研究
周　欣，宗宪春
（牡丹江师范学院 生命科学与技术学院，黑龙江 牡丹江 １５７０１１）
摘　要：以圆叶椒草的叶片为外植体，研究不同激素浓度组合对圆叶椒草愈伤组织的诱导、不定芽分化、丛
生芽生长及生根的影响．实验结果表明，愈伤组织诱导和芽分化的最适培养基为 ＭＳ＋６－ＢＡ　２．０
ｍｇ·Ｌ－１＋ＮＡＡ　０．２ｍｇ·Ｌ－１，丛生芽生长的最适培养基为 ＭＳ＋６－ＢＡ　２．５ｍｇ·Ｌ－１＋ＮＡＡ　０．
２５ｍｇ·Ｌ－１；生根的最适培养基为 ＭＳ＋ ＮＡＡ　０．１ｍｇ·Ｌ－１，试管苗移栽后成活率为１００％．
关键词：圆叶椒草；激素；组织培养
［中图分类号］Ｏ７３１．１　　　［文献标志码］Ａ　　　　［文章编号］１００３－６１８０（２０１５）０１－００２９－０３
　　圆叶椒草（Ｐｅｐｅｒｏｍｉａ　ｏｂｔｕｓｉｆｏｌｉａ）为胡椒科 椒草属多年生草本植物，原产委内瑞拉、热带美洲
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２０１５年第１期 牡丹江师范学院学报（自然科学版） Ｎｏ．１，２０１５
（总第９０期） Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｍｕｄａｎｊｉａｎｇ　Ｎｏｒｍａｌ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｔｏｔａｌ　Ｎｏ　９０
DOI:10.13815/j.cnki.jmtc(ns).2015.01.013
及西印度群岛．圆叶椒草传统的繁殖方式以扦插
或分株法繁殖为主，繁殖系数低，很难形成规模化
的生产．本文以圆叶椒草的叶片为外植体，建立组
培快繁体系，为在短期内得到大量试管苗及种质
资源保存提供新方法．
１　实验材料与方法
１．１　实验材料
圆叶椒草（Ｐｅｐｅｒｏｍｉａ　ｏｂｔｕｓｉｆｏｌｉａ），牡丹江
师范学院生命科学与技术学院提供．
１．２　培养基的配制及培养条件
愈伤组织诱导和分化培养基：
（１）ＭＳ＋６－ＢＡ２．０ｍｇ·Ｌ－１（单位下同）＋
ＮＡＡ０．２；
（２）ＭＳ＋６－ＢＡ　２．０＋ＮＡＡ　０．２５；
（３）ＭＳ＋６－ＢＡ　２．５＋ＮＡＡ　０．２；
（４）ＭＳ＋６－ＢＡ　２．５＋ＮＡＡ　０．２５．生根培养基：
（５）ＭＳ＋ＮＡＡ　０．１；
（６）ＭＳ＋ＮＡＡ　０．２；
（７）ＭＳ基本培养基．
培养基均附加０．６％琼脂粉和３％蔗糖，ｐＨ　５．
８，培养温度为（２５±２）℃，光照时间１２ｈ·ｄ－１，光
照强度为３０～４０μｍｏｌ·ｍ
－２·ｓ－１．
１．３　实验方法
外植体的选择和消毒　从圆叶椒草成熟的植
株上剪取幼嫩和成熟的叶片，用流水冲洗３０ｍｉｎ，
在超净工作台上用７０％无水乙醇浸泡３０ｓ，无菌
水冲洗４次，用０．２％ ＨｇＣｌ２ 消毒５～８ｍｉｎ，无菌
水冲洗４～５次，用无菌滤纸吸干表面的水分．将
叶片切成０．５ｃｍ×０．５ｃｍ的小块，备用．
愈伤组织的诱导与分化　将已处理好的叶片
小块，接种于培养基（１）－（４）上，每瓶培养基中接
种４～５块叶片小块，暗培养３ｄ后转入光照培
养．每种培养基上接种外植体１０块，设３次重复，
２０ｄ继代１次．
生根培养与移栽　将生长健壮的２～３ｃｍ长
的不定芽从基部切下，接种到生根培养基的 （５）－
（７）上，８ｄ后观察根生长状况，１５ｄ统计生根率．在
培养室打开已经生根的培养瓶口炼苗２ｄ后，取出
小植株，用清水洗净根部，尽可能避免伤害幼根，然
后移栽到装有疏松肥沃、保水透气的沙壤土中．
２　结果与分析
２．１　最佳外植体
将灭菌消毒过的幼叶和老叶（成熟的叶）分别
接种于（１）－（４）愈伤组织诱导培养基中，２０ｄ后统
计诱导出愈伤组织的外植体数及褐化的外植体个
数，具体结果见表１．
表１　不同培养基对外植体愈伤组织形成的影响
培养基
编号
外植体类型
接种外
植体的个数
形成愈伤
组织外植体数
褐化的
外植体个数
（１） 幼嫩叶片 ３０　 ３０　 ０
（２） 幼嫩叶片 ３０　 ２６　 ４
（３） 幼嫩叶片 ３０　 ２５　 ５
（４） 幼嫩叶片 ３０　 ２４　 ６
（１） 成熟叶片 ３０　 １４　 １６
（２） 成熟叶片 ３０　 １２　 １８
（３） 成熟叶片 ３０　 １０　 ２０
（４） 成熟叶片 ３０　 ８　 ２２
　　从表１可以看出，在选择圆叶椒草叶片为外
植体时，接种后出现了不同程度的褐化现象．成熟
老叶接种后褐化率很高，褐化程度严重，甚至导致
外植体变黑死亡，幼嫩的叶容易诱导形成愈伤组
织，因而外植体的选择以嫩叶为佳．
２．２　激素对圆叶椒草愈伤组织分化的影响
将幼嫩叶片的外植体分别接种在（１）－（４）培
养基上，３ｄ后小叶块外植体开始膨大弯曲，培养
７ｄ，培养基中外植体陆续产生愈伤组织，１５ｄ时，
４种培养基的外植体上均产生愈伤组织，３０ｄ时
对愈伤组织的分化情况进行统计，结果见表２．
表２　激素对愈伤组织分化的影响
培养基
编号
接种外
植体的个数
形成愈伤组织并
分化出芽的外植体个数
分化率／％
（１） ３０　 ３０　 １００
（２） ３０　 ２６　 ８６．７
（３） ３０　 ２５　 ８３．３
（４） ３０　 ２４　 ８０
　　从表２可以看出，６－ＢＡ和ＮＡＡ组合均能使
嫩叶外植体的愈伤组织分化出芽，不同浓度激素
配比对愈伤组织分化出芽有一定的影响，见表２．
诱导圆叶椒草产生愈伤组织并分化出芽的最佳培
养基为（１）号培养基，见图１．
２．３　激素对圆叶椒草丛生芽生长的影响
将由愈伤组织分化出的丛生芽用解剖刀切割
成小丛，分别接种于不同浓度６－ＢＡ和ＮＡＡ组合
的培养基中，１５ｄ后统计丛生芽生长情况．结果
见表３．
表３　激素对丛生芽生长的影响
培养基编号 丛生芽生长状况
（１） 植株细弱，叶柄细
（２） 植株长势弱，叶黄绿色
（３） 植株长势弱，叶黄绿色
（４） 植株健壮，叶柄粗壮，叶绿色
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２０１５年第１期 牡丹江师范学院学报（自然科学版） Ｎｏ．１，２０１５
（总第９０期） Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｍｕｄａｎｊｉａｎｇ　Ｎｏｒｍａｌ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｔｏｔａｌ　Ｎｏ　９０
　　从表３可以看出，不同浓度６－ＢＡ与ＮＡＡ组
合对圆叶椒草丛生芽的生长有很大影响，随着
ＮＡＡ和６－ＢＡ浓度的升高，丛生芽的生长表现出
较好的上升趋势．圆叶椒草丛生芽生长的最佳培
养基为（４）号培养基，见图２．
图１　圆叶椒草愈伤组织分化
图２　圆叶椒草丛生芽生长
２．４　培养基对圆叶椒草生根的影响
选取生长健壮具有３－４片叶的组培苗从基部
切下转移到生根培养基中进行诱导生根，２０ｄ后
统计生根结果，见表４．
由表４可以看出，ＮＡＡ生长素对于圆叶椒草
组培苗的生根培养有一定的影响，随着其浓度的
不同根的生长状况也不同．（６）号培养基为圆叶椒
草的最佳生根培养基．
表４　ＮＡＡ对圆叶椒草生根率的影响
培养基编号 激素 生根率／％ 根生长状况
（５） ＭＳ　 ８０ 根少，细且较短
（６） ＭＳ＋ＮＡＡ　０．１　 １００ 根多，健壮
（７） ＭＳ＋ＮＡＡ　０．２　 ９０ 根较多，健壮
图３　圆叶椒草的生根培养
打开已经生根的培养瓶口炼苗２ｄ，取出小植
株，用清水洗净根部，然后移栽到装有疏松肥沃、
保水透气的沙壤土中，圆叶椒草组培苗成活率可
达１００％．
３　结论
以圆叶椒草的叶片为外植体，研究激素对圆叶
椒草愈伤组织诱导、不定芽分化、丛生芽生长及生
根的影响．结果表明，愈伤组织诱导和芽分化最适
培养基为ＭＳ＋６－ＢＡ　２０＋ＮＡＡ　０．２，丛生芽生长的
最适培养基为 ＭＳ＋６－ＢＡ　２．５＋ＮＡＡ　０．２５；生根
的最适培养基为 ＭＳ＋ ＮＡＡ　０．１，试管苗移栽后成
活率为１００％．
参考文献
［１］蒋雄辉，陈春满，何蜜丽，等．荷叶椒草组织培养与植株再生［Ｊ］．植物生理学报，２０９８（３）：５１８．
［２］宗宪春，许向阳，张贺，等．潘那利番茄叶片组织培养及植株再生研究［Ｊ］．东北农业大学学报，２０１１，４２（４）：６２－６５．
［３］张永乐，司徒琳莉，张雪松．瓜叶菊离体组织培养再生系统的建立及快速繁殖［Ｊ］．牡丹江师范学院学报：自然科学版，１９９９（２）：１３－１４．
［４］宗宪春．珊瑚豆的组织培养［Ｊ］．牡丹江师范学院学报：自然科学版，１９９９（２）：１７．
编辑：琳莉
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２０１５年第１期 牡丹江师范学院学报（自然科学版） Ｎｏ．１，２０１５
（总第９０期） Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｍｕｄａｎｊｉａｎｇ　Ｎｏｒｍａｌ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｔｏｔａｌ　Ｎｏ　９０