全 文 ：HPLC测定小花黄堇中延胡索乙素的含量＊
蒋遐芝1　叶锦霞 1　林珊 1　吴云丹 1　邹秀红2　吴锦忠1#
　蒋遐芝 ,女 ,副主任药师
#通信作者:吴锦忠 , 男 ,教授 , E-mail:jinzhongfj@126.com
＊陈可冀中西医结合发展基金资助项目(No.CKJ2009008),福建省重点高校服务海西资助项目(No.5),福建省中西医结合老年性疾病重
点实验室开放课题资助项目(No.2008J1004-42)
(1福建中医药大学中西医结合研究院　福建 350108;2福建省永春县林业局)
摘要:目的　建立用高效液相色谱法(HPLC)测定小花黄堇中主要有效成分延胡索乙素含量的方
法 。方法　色谱条件为色谱柱 GeminiC18柱(250mm×4.6 mm, 5μm);流动相为甲醇 -0.1%磷酸
溶液(75∶25);流速 1.0mL/min;检测波长 280nm;柱温 25℃。结果　小花黄堇中延胡索乙素的平
均含量为 0.160%, 延胡索乙素在 0.193 ～ 2.128 μg范围内线性关系良好 。平均回收率为
98.55%, RSD为 1.67%(n=6)。结论　该方法操作简便 ,重复性较好 ,测定结果较为可靠 ,可用于
测定小花黄堇中延胡索乙素的含量。
关键词:小花黄堇;延胡索乙素;含量测定;高效液相色谱法
中图分类号:R284.2
QuantitativedeterminationoftetrahydropalmatineinXiaohuahuangjin
(Corydalisracemosa)byHPLC＊
JIANGXia-zhi1 , YEJin-xia1 , LINShan1 , WUYun-dan1 , ZOUXiu-hong2 , WUJin-zhong1#
(1 InstituteofIntegrationofChineseandWesternMedicine, FujianUniversityofTraditionalChinese
Medicine, Fujian　350108;2 ForestryBureauofYongchunCountyofFujian)
Abstract:Objective　Toestablishamethodforquantitativedeterminationoftetrahydropalmatinein
Xiaohuahuangjin(Corydalisracemosa)byHPLC.Methods　TheHPLCprocedurewasperformedonthe
chromatographiccolumnofGeminiC18 (250 mm×4.6 mm, 5 μm)at25 ℃, themobilephasewas
methanol-0.1%phosphoricacidwatersolution(75∶25).Theflowvelocitywas1.0mL/minandthede-
tectionwavelengthwas280nm.Results　TheaveragecontentoftetrahydropalmatineinXiaohuahuangjin
was0.160%.Tetrahydropalmatineshowedagoodlinearrelationshipatarangefrom0.193 μgto2.128
μg.Theaveragerecoverywas98.55% (RSD=1.67%, n=6).Conclusion　Themethodwassimple
andreliablewithagoodrepeatability, whichcanbeusedforthequantitativedeterminationoftetrahydro-
palmatineinXiaohuahuangjin.
Keywords:Xiaohuahuangjin(Corydalisracemosa);tetrahydropalmatine;quantitativedetermination;
HPLC　
小花黄堇系罂粟科紫堇属植物小花黄堇 Co-
rydalisracemosa(Thunb.)Pers.的全草或根 , 别
名黄花鱼灯草 、断肠草 ,在浙江 、福建 、江苏等地
区均有分布 [ 1] , 其全草含原阿片碱和延胡索乙
素 ,具有清热解毒 、利尿止利的功效 [ 2] 。福建闽
南地区蕴藏丰富资源 ,迄今尚未见到对其资源综
合开发利用的研究报道 。本文采用高效液相色
谱法测定小花黄堇中主要有效成分延胡索乙素
的含量 ,为小花黄堇的资源开发和质量标准制订
提供依据 。
·673·
第 33卷第 10期 2010年 10月
Vol.33 No.10 Oct.2010 　 　
北京中医药大学学报
JournalofBeijingUniversityofTraditionalChineseMedicine
1　仪器与试药
1.1　仪器
Aiglent1200高效液相色谱仪 , CP2245D电子天
平(德国 Sartorius公司), PHS-3C精密酸度计(上海
精密科学仪器有限公司)。
1.2　试药
延胡索乙素对照品(批号:110726-200610)购自
中国药品生物制品检定所;小花黄堇药材于 2009年
6月采自福建省泉州市永春县 ,经福建中医药大学
药学系杨成梓副教授鉴定为罂粟科紫堇属植物小花
黄堇 Corydalisracemosa(Thunb.)Pers.的全草。甲
醇为色谱纯 ,其他试剂均为分析纯 ,高纯水由本实验
室制备 。
2　方法与结果
2.1　色谱条件
色谱柱为 GeminiC18柱 (250 mm×4.6 mm,
5 μm);流动相为甲醇 -0.1%磷酸溶液(三乙胺调
pH值至 6.0)(75∶25);检测波长为 280 nm;流速:
1.0mL/min;柱温为 25 ℃;进样量 10 μL。在此色
谱条件下 ,分离度大于 2.0,理论板数按延胡索乙素
峰计不低于 10 000 ,供试品中延胡索乙素与其他组
分能达到很好分离。色谱图见图 1。
A对照品;B供试品;1延胡素乙素。
Areferencesample;Btestsample;1tetrahydropalmatine.
图 1　对照品和样品的 HPLC色谱图
Fig.1　HPLCchromatogramsofreference
sampleandsample
2.2　对照品溶液制备
精密称取延胡索乙素对照品 12.09 mg, 置
25 mL量瓶中 ,加甲醇溶解 ,稀释至刻度 ,摇匀 。再
精密量取 2mL,置 10 mL量瓶中 ,加甲醇稀释至刻
度 ,摇匀(96.72 mg/L),经 0.45 μm微孔滤膜滤过 ,
取续滤液 ,即得 。
2.3　供试品溶液制备
取小花黄堇药材(过 3号筛)约 1 g,精密称定 ,
置具塞锥形瓶中 ,精密加入甲醇 50 mL,称定重量 ,
冷浸 1 h后加热回流 1 h,放冷 ,再称定重量 ,用甲醇
补足减失的重量 , 摇匀 , 滤过 。精密吸取续滤液
25 mL,蒸干 ,残渣加甲醇溶解 ,转移至 10 mL量瓶
中 ,并稀释至刻度 ,摇匀 ,经 0.45 μm微孔滤膜滤
过 ,取续滤液 ,即得 。
2.4　线性关系考察
精 密 吸 取 延 胡 索 乙 素 对 照 品 溶 液
(96.72mg/L)2, 6, 10, 14, 18, 22 μL,注入液相色谱
仪 ,按上述色谱条件测定峰面积 ,以峰面积 Y为纵
坐标 ,以进样量 X(μg)为横坐标 ,绘制标准曲线 ,进
行线性回归 ,得回归方程 , Y=979X+10.137, r=
0.999 9,结果表明延胡索乙素在 0.193 ～ 2.128 μg
范围内线性关系良好。
2.5　精密度试验
精密吸取同一浓度的供试品溶液 10 μL,重复
进样 6次 ,记录色谱峰面积 ,测得延胡索乙素峰面积
平均值为 749.5, RSD为 0.46%。说明仪器精密度
良好 。
2.6　稳定性试验
取同一份供试品溶液 ,在上述色谱条件下 ,分别
于 0、4、6、8、10、12、14h进行分析 ,测得延胡索乙素
的峰面积分别为 805.2、805.9、809.7、794.6、797.7、
771.6、800.9,表明供试品溶液在 14 h内稳定 , RSD
为 1.59%。
2.7　重复性试验
取同一批药材按供试品溶液制备项下的方法重
复制备 6份 ,进行测定 ,计算延胡索乙素的含量及
RSD,结果延胡索乙素的平均含量为 0.156%, RSD
为 2.22%。
2.8　回收率试验
取同一批号已知含量的小花黄堇药材约 0.5g,
精密称定 ,加入对照品溶液(483.6 mg/L)2 mL,按
供试品制备方法制备 ,重复制备 6份 ,测定含量 ,计
算回收率及 RSD,结果见表 1。
2.9　样品测定
取小花黄堇药材 3批 ,分别按 2.3项下的方法
制备样品溶液 ,精密吸取 10 μL,注入色谱仪 ,在上
述色谱条件下进行测定 ,根据回归方程计算延胡索
乙素的含量。小花黄堇中延胡索乙素的平均含量为
·674· 北京中医药大学学报　 　 　 　　　　　　　　　　　　　　第 33卷
0.160%,结果见表 2。
表 1　回收率试验结果
Table1　Resultsofrecoverytest
样品称样量
Samplequantity
(g)
样品含量
Originalcontent
(mg)
添加对照品量
Addedquantity
ofreferences
(mg)
测出对照品总量
Totalfoundcontent
ofreferences
(mg)
回收率
Recovery
(%)
平均回收率
Averagerecovery
(%)
RSD
(%)
0.504 0.759 0 0.967 2 1.700 97.31
0.505 0.760 5 0.967 2 1.704 97.53
0.506 0.762 0 0.967 2 1.722 99.22
98.55 1.67
0.500 0.753 0 0.967 2 1.710 98.93
0.503 0.757 5 0.967 2 1.695 96.94
0.504 0.759 0 0.967 2 1.739 101.33
表 2　样品测定结果(n=3)
Table2　Resultesofsampledetermination(n=3)
批次 Batches 含量 Content(%) RSD(%)
1 0.153 1.26
2 0.163 1.33
3 0.164 0.50
3　讨论
《中华人民共和国药典 》2005年版一部延胡索
(CorydalisyanhusuoW.T.Wang)项下已收载高效液
相色谱法测定延胡索乙素的方法 [ 3] 。作者参照药
典方法采用甲醇 -0.1%磷酸溶液(三乙胺调 pH值
至 6.0)(55∶45)流动相进行测定 ,延胡索乙素的保
留时间长达 35 min,通过梯度洗脱的方法 ,发现流动
相比例为 75∶25时效果最佳 ,保留时间可缩短至 7
min左右 ,分离度大于 2,理论板数按延胡索乙素峰
计不低于 10 000。
作者分别用甲醇和浓氨 -甲醇(1∶20)按 2.3
项下的方法制备供试品溶液 ,精密吸取 10 μL,在上
述色谱条件下进行测定 ,注入色谱仪 。结果表明 , 2
种方法的色谱峰都能得到很好的分离效果 ,峰面积
也相近 ,因此提取溶剂选择更简单的甲醇。
致谢:本实验在福建中医药大学国家中医药管
理局中药生药学三级实验室中完成。
参考文献:
[ 1] 张渝华 ,庄无忠.浙江及其邻近地区的紫堇属植物 [ J] .
云南植物研究 , 1990, 12(1):39-41.
[ 2] 江苏新医学院.中药大辞典:下册 [ M] .上海:上海科学
技术出版社 , 1986:2041.
[ 3] 中华人民共和国药典委员会.中华人民共和国药典:一
部 [ M] .2005版.北京:化学工业出版社 , 2005:94.
(收稿日期:2010-04-11)
(上接第 672页)
　　大黄具有多种药理作用 ,临床应用广泛 ,这与其
物质基础密切相关 ,仅以泻下的主要成分(蒽醌类)
作为药材质量评价指标不足以客观 、全面地反映药
材的质量。因此 ,在化学成分研究的基础上 ,逐渐增
加多种成分定量 ,不仅可以丰富大黄药材的质量标
准 ,而且对于科学诠释不同基源大黄药理作用的异
同具有重要的意义。
参考文献:
[ 1] 匡海学.中药化学 [ M] .北京:中国中医药出版社 ,
2003:94.
[ 2] 中华人民共和国药典委员会.中华人民共和国药典:一
部 [ M] .2005版.北京:化学工业出版社 , 2005:17.
(收稿日期:2010-02-17)
·675·第 10期 蒋遐芝等　HPLC测定小花黄堇中延胡索乙素的含量