全 文 ：华西药学杂志
W C J P S　2007, 22(2):199 ～ 201 　　
*药品检验*
作者简介:施菁 ,女 ,浙江杭州 ,硕士 ,副教授 ,从事药物分析教学与研究工作。
*通讯作者(Correspondent author)
白花土元胡药材中延胡索甲素和乙素的含量测定
施　菁 1 ,王　玮 1 ,陈柳蓉2* ,上官盈盈 1
(1.浙江医学高等专科学校 , 浙江 杭州 310053;2. 浙江大学药学院 , 浙江 杭州 310003)
摘要:目的　建立测定白花土元胡药材中延胡索甲素和乙素含量的方法。方法　采用 RP -HPLC外标法 , Symm etry C18色谱
柱(150 mm ×4. 6 mm , 5μm);乙腈为流动相 A, 0. 1%磷酸溶液(三乙胺调 pH 6)为流动相 B, 梯度洗脱;检测波长 282 nm。结果
　延胡索甲素在 10. 40 ～ 208. 00 μg m l- 1范围内线性关系良好 , 平均回收率为 98. 5%, RSD =3. 1%;延胡索乙素在 10. 10 ～
505.00μg m l- 1范围内线性关系良好 ,平均回收率为 101. 9%, RSD =2. 3%。结论　所建方法结果准确可靠 ,适用于白花土元
胡中延胡索甲素和乙素含量的同时测定。
关键词:白花土元胡;梯度洗脱;延胡索甲素;延胡索乙素;高效液相色谱法
中图分类号:R917　 　文献标识码:A　 　文章编号:1006 -0103(2007)02 - 0199 - 03
Determ ination of corydaline and tetrahydropalm atine inCorydalis humosaM igo.
SH I Jing
1 , WANG Wei1 , CHEN Liu - rong2* , SHANGGUAN Y in - y in1
(1. ZhejiangM ed ical College, Hangzhou 310053, Ch ina;2. College of Pharm acy, Zhejiang Un iversity,Hangzhou 310031, China)
Abstrac t:OBJECTIVE　 To de te rm ine co ryda line and tetrahydropalm a tine in Coryda lis hum osa M igo. METHODS　An RP -
HPLC me thod w as e stablished w ith grad ient e lu tion on a Symm e try C18 co lum n (150 mm ×4. 6mm , 5 μm). The m obile phase A w as
ace tonitrile, and them obile phase B w as 0. 1% phospho ric ac id(adjusted to pH6 w ith trie thy lam ine). The de tective wave length w as a t
282 nm. RESULTS　Coryda line had a good linearity in the range o f 10. 40 - 208. 00μg m l- 1 , and the recovery ra te w as 98. 5% w ith
RSD o f 3. 1%. T e trahydropa lm atine had a good linearity in the range o f 10. 10 - 505. 00μg m l- 1 , and the recove ry ra te wa s 101. 9%
w ith RSD of 2. 3%. CONCLUSION　Thism e thod is rapid, precise and su itable for the quantitative ana ly sis o f co ryda line and tetrahy-
dropa lm atine inCoryda lis hum osa M igo.
K ey words:Coryda lis hum osa M igo. ;Grad ient e lu tion;Co ryda line;Tetrahydropalm a tine;HPLC
CLC num ber:R917　 D ocum ent code:A Artic le ID:1006 - 0103(2007)02 -0199 - 03
　　白花土元胡 Corydalis humosa M igo.属于紫堇属
延胡索类药材 ,产于浙江 ,为延胡索类中药材的宝贵
种质资源[ 1] 。 1993年版的《浙江植物志》建议将白
花土元胡列为国家级或省级保护的珍稀濒危植物 。
白花土元胡是浙江省特有分布种 ,至今对其研究报
道较少 ,主要含延胡索甲素 、乙素等有效成分 [ 2] 。
为考察白花土元胡与同属不同品种 、不同产地延胡
索中的有效成分 ,现参照文献[ 3, 4] ,采用 HPLC法 ,通
过梯度洗脱 ,同时测定其中的延胡索甲素 、乙素 。
1　实验部分
1. 1　仪器与试药
2695液相色谱仪包括梯度泵 、自动进样器 、996
二极管阵列检测器 、M illennium工作站 (美国W ate rs
公司);Mettle rAE 240电子天平 (梅特勒公司 );超
声波震荡器 (上海金利仪器公司 )。延胡索乙素对
照品(中国药品生物制品检定所 );延胡索甲素对照
品(自制 , UVλM eOHmax nm:283;ESI -M S m /z:370[M +
H] +;IR(KB r)cm - 1:2965、2904、1612、1494、 1232、
855、 799;13 CNMR (CDC l3 ):151.2、 148.9、 148.4、
146.3、 136.4、 129.5、 129.4、 125.3、 112.8、 112.4、
110.1、 64.2、 61.2、 57.3、 57.0、 56.9、 55.6、 52.6、
39.6、30.5、19.6;经 HPLC检测 ,归一化法计算纯度
度大于 98.5%);白花土元胡 、延胡索药材由浙江省
医学科学院张渝华教授采集并鉴定;乙腈为色谱纯;
三乙胺 、磷酸为分析纯;水为超纯水。
1. 2　方法与结果
1. 2. 1　色谱条件及系统适用性试验　Symme try C18
色谱柱(150mm ×4. 6 mm , 5 μm);流动相 A为乙
腈 , B为 0. 1%磷酸溶液 (三乙胺调 pH6),梯度洗脱
见表 1;检测波长 282 nm;柱温 30℃。在选定的色
谱条件下 ,样品中延胡索甲素和乙素与相邻色谱峰
的分离度均大于 2. 0(图 1)。
DOI牶牨牥牣牨牫牫牱牭牤j牣cnki牣wcjps牣牪牥牥牱牣牥牪牣牥牫牪
表 1　梯度洗脱时间表(m l)
Table 1　The tim e table of gradient elution(m l)
T /m in M ob ile ph ase A M ob ile phase B Flow rate /m l m in -1
0 10 90 1. 0
25 40 60 1. 0
35 40 60 1. 0
36 10 90 1. 0
55 10 90 1. 0
图 1　对照品(A)、白花土元胡样品 (B)和延胡索样品 (C)溶液的
HPLC色谱图
F ig 1　HPLC chrom a togram s o f reference substances so lution (A),
Coryda lis humosa M igo. (B) and Rhizoma Coryda lis solution
(C)
1. 2. 2　溶液的制备　精密称取两份延胡索甲素及
延胡索乙素对照品适量 ,甲醇制成含延胡索甲素 1、
10、20、50、100 μg L- 1和延胡索乙素 10、20、50、100、
500μg L -1的混合溶液 (含量测定用 )及延胡索甲
素 50 μg L -1和延胡索乙素 100μg L- 1的混合溶液
作为对照品溶液 。精密称取药材 1 g,置 5 m l量瓶
中 ,加入约 5m l的 50%乙醇 ,冷浸过夜后 ,超声提取
1 h ,提取液 1. 4×104 r m in -1离心 20 m in。取上清
液用 0. 45 μm微孔滤膜过滤 ,即得样品溶液。
1. 2. 3　线性关系的考察　精密称取延胡索甲素和
乙素的对照品适量 ,分别置 10 m l量瓶中 ,加甲醇并
定容 ,摇匀 ,分别制成 1 mg m l-1的对照品溶液 。精
密吸取含延胡索甲素 10. 4、 20. 8、 52.0、 104.0、
208.0 μg L - 1和含延胡索乙素 10. 1、 20.2、 50.5、
101.0、505.0μg L -1的混合对照溶液 ,进样 20 μl,
记录色谱图 。以进样量为横坐标 ,峰面积为纵坐标
进行线性回归 ,回归方程为:Y延胡索甲素 =2.011×104X -
1.645×104(r=0. 9997);Y延胡索乙素 =2.029×104X +
1.627×104(r=0. 9999)。结果表明 ,延胡索甲素在
10. 40 ～ 208. 00 μg m l- 1、延胡索乙素在 10. 10 ～
505. 00 μg m l-1范围内的线性关系良好 。
1. 2. 4　稳定性试验　取样品溶液在 0、2、4、8 h分
别进样分析 ,记录峰面积比值 ,结果延胡索甲素和延
胡索乙素的 RSD分别为 2. 85%和 1. 53%。
1. 2. 5　精密度试验　取样品溶液重复进样 5次 ,记
录峰面积比值 ,结果延胡索甲素和延胡索乙素的
RSD分别为 0. 49%和 0. 58%。
1. 2. 6　重复性试验　取同一批白花土元胡药材样
品 6份 ,冷浸过夜 ,超声提取 1 h ,按 “1. 2. 2”项下方
法制备样品溶液并测定。延胡索甲素含量为
0.202%, RSD =3.43%;延 胡 索乙 素 含 量 为
0.026%, RSD =3.72%(n =6),表明方法的重复性
较好 。
1. 2. 7　回收率试验　采用加样回收法 ,取已知含量
的样品加入一定量对照品 ,制备样品溶液并测定。
延胡索甲素的平均回收率为 101.46%, RSD =
2.50%;延胡索乙素则为 98.93%, RSD =3.30%。
1. 2. 8　样品的测定　分别取不同产地的延胡索和
白花土元胡药材 ,按 “1. 2. 2”项下方法提取 、制备样
品溶液并测定 。重复进样 3次取平均值 (表 2)。
表 2　白花土元胡和延胡索药材中延胡索甲素和乙素的含量(%)
Tab le 2　The content of coryda line and tetrahydropa lm atine in Co-
ryda lis humosaM igo. and Rhizoma Coryda lis(%)
S amp les Source and parts T im e C orydaline
Tetrahydro-
palm atine
Coryda lis 浙江西天目 ,块茎 200004 0. 0293 0. 0627
humosa 浙江西天目 ,块茎 200604 0. 0205 0. 0505
M igo. 浙江西天目 ,块茎 200606 0. 0281 0. 0570
浙江西天目 ,地上部分 200504 0. 0371 0. 2870
浙江西天目 ,地上部分 200604 0. 0284 0. 3678
浙江西天目 ,地上部分 200606 0. 0367 0. 4325
R hizoma 余杭超山 ,块茎 199904 0. 0161 0. 0756
Coryda lis 余杭超山 ,块茎 200004 0. 0182 0. 1459
余杭超山 ,块茎 200104 0. 0181 0. 0428
安徽大蜀山 ,块茎 199904 0. 0302 0. 0939
浙江磐安 ,块茎(小叶型) 198605 0. 0407 0. 0518
浙江磐安 ,块茎(大叶型) 198605 0. 0386 0. 0506
浙江磐安 ,块茎(混合型) 199805 0. 0214 0. 0670
2　讨论
　　采用 DAD检测器 ,延胡索甲素 、乙素对照品在
282 nm均有较强吸收 ,故检测波长选择 282 nm。
　　曾比较乙腈 -水 、甲醇 -水 、乙腈 -醋酸 、乙腈 -
0.1%磷酸等多种溶剂系统。乙腈 - 0.1%磷酸比其
他溶剂系统对白花土元胡药材的分离效果好 ,柱效
高;在未调节 pH下 ,延胡索甲素和乙素有明显的拖
尾现象。加入三乙胺调节 pH 6 ～ 7后 ,峰形明显改
善。采用等梯度洗脱时 ,延胡索甲素与其他生物碱
难以分离 ,采用梯度洗脱后 ,可完全分离 。
分别采用甲醇冷浸后超声 、50%乙醇冷浸后超
声 、索氏 、热回流等方法提取。结果表明 ,采用冷浸
后超声提取 、热回流提取比索氏提取法效率高 ,前两
者提取效率接近;乙醇提取比甲醇提取好;考虑到冷
浸后超声提取比热回流提取方法更简便 ,故采用
50%乙醇冷浸后超声提取 。
200 　 华 西 药 学 杂 志　　　 第 22卷
华西药学杂志
W C J P S　2007, 22(2):201 ～ 203 　　
从样品测定结果可看出 ,不同品种 、不同产地延
胡索药材中延胡索甲素和乙素的含量有一定的差
异 。 3批白花土元胡药材中 ,延胡索乙素含量高于
甲素 ,且地上部分的乙素含量明显高于块茎 。由于
白花土元胡是延胡索类中药的一新资源 ,值得进一
步研究 、开发和利用。
参考文献:
[ 1] 　 奚镜清,金联城 ,忻纳新.中药材延胡索的品种整理及文献考
证 [ J] .现代应用药学 , 1995, 12(4):12 - 15.
[ 2] 　 张渝华 ,李军 ,徐克学 , 等.浙江紫堇属植物药源开发的初步
研究 II数量化学分类＆药用种质资源探索 [ J] .现代应用药
学 , 1990, 7(5):4 - 8.
[ 3] 　 廖建春 ,屈蓉 ,田静 ,等. H PLC测定胃舒宁颗粒剂中延胡索乙
素的含量 [ J] .华西药学杂志 , 2006, 21(6):594 - 595.
[ 4] 　 黄家宇 ,李莉 ,饶光玲. H PLC测定痛经软膏中延胡索乙素的
含量 [ J] .华西药学杂志 , 2006, 21(5):478 - 479.
收稿日期:2006 - 06
作者简介:孙丽丽(1976 -),女 ,硕士 ,主管药师 ,从事医院药学工作。
*通讯作者(Correspondent author)
HPLC测定银杏叶片中总黄酮醇苷和萜类内酯的含量
孙丽丽 ,周　沫*
(北京大学第六医院药剂科 , 北京 100083)
摘要:目的　测定银杏叶片中总黄酮醇苷和银杏萜类内酯的含量。方法　采用 HPLC法 ,色谱柱为 YMC -Pack ODS -A(150
mm ×6. 0 mm含量 , 5 μm);流动相分别为甲醇 -0. 4%磷酸溶液(55：45)、水 -甲醇 -四氢呋喃(75：25：12);流速 1. 0 m l
m in- 1;检测波长 360 nm;进样量 10 μl。结果　槲皮素 、山柰素和异鼠李素等 3种黄酮苷元 、白果内酯及银杏内酯 A、B、C等 4
种银杏萜类内酯均能得到良好分离 ,标准曲线线性关系良好。 结论　所建方法准确 、灵敏 、稳定 、可靠 , 可满足定量分析的需
要。
关键词:银杏叶片;银杏总黄酮醇苷;银杏萜类内酯;高效液相色谱法
中图分类号:R917　 　文献标识码:A　 　文章编号:1006 -0103(2007)02 - 0201 - 03
Determ ination of tota l flavonol glycosides and terpene lactones in G inkgo leaf tab lets
SUN Li- li, ZHOU M o*
(Departmen t of Pharmacy, Pek ing Un iversity S ixth Hospital, B eijing 100083, Ch ina)
Abstrac t:OBJECTIVE　To detec t the to ta l flavono l g ly co sides and te rpene lac tones in G inkgo lea f tablets . METHODS　An
HPLC me thods was adpo ted, the analysis o f to tal flavono l g ly co side s w as ca rried out on YMC - Pack ODS -A co lum n S(150 mm ×
6 mm, 5μm) w ith m e thano l- 0. 4%pho sphate(55：45) as a mobile phase, so lu tion flow ra te of 1. 0 m l m in- 1 and UV de tection a t
360 nm. The analy sis o f terpene lactone s was carried out on YMC -Pack ODS -A co lum n S(150 mm ×6 mm , 5 μm), w ith w a te r-
m ethanol - tetrahydro furan(75：25：12) as a mobile phase. RESULTS　The g inkge tins and the gingko terpene lac tone s could be
comp le tely separated from each o ther, and had good linerarity. CONCLUSION　 It is convenient, rap id and accura te. This me thod
could be used for qua lity con tro l o f G inkgo lea f table ts.
K ey words:G inkgo leaf tab lets;Tota l flavono l g lycosides;Terpene lactone s;HPLC
CLC num ber:R917　 D ocum ent code:A Artic le ID:1006 - 0103(2007)02 -0201 - 03
　　银杏叶片中有效成分为银杏黄酮和银杏内酯 ,
其中 ,银杏黄酮类成分具有清除体内自由基 、扩张脑
膜动脉 、改善脑血循环功能 、改善心肌缺血等作用;
银杏内酯是一种血小板活化因子拮抗剂。银杏叶制
剂在精神专科医院广泛用于治疗老年性痴呆 、脑缺
血和记忆力减退等疾病。现有的银杏叶制剂的质量
分析方法较为烦复或不够稳定 ,现参照文献 [ 1, 2] ,研
究片剂中银杏总黄酮醇苷和萜类内酯的测定方法 ,
为评价制剂质量提供更好的测定手段。
1　试验部分
1. 1　仪器和试药
HP1100高效液相色谱仪包括 ChemS tation化学
工作站 、VWD紫外检测器 、SEDEX75 ELSD蒸发光